PMA、PHA

PMA、PHA
PMA、PHA

PMA 、PHA

1、PMA:佛波醇酯类多克隆刺激剂,是DAG(二酯酰甘油)的analog,脂溶性,自由通过细胞膜,直接作用于细胞活化信息传导通路上的PKC。

Ionomycin:钙离子载体,使细胞内Ca 2+浓度增加,激活calcineurin。来自PKC 和calcineurin的共同信号最终引起T细胞活化。PMA一般与离子酶素共用,一般用于进一步刺激活化的免疫细胞。

在体内活化的淋巴细胞到体外之后,由于环境的改变,体外缺少刺激因素,所以,这些活化的淋巴细胞在体外不能主动合成和分泌相关的细胞因子,此时就可以加入PMA和离子酶素,提供类似体内环境的刺激因素,使其继续合成和分泌相关的细胞因子,这样就可以通过收集上清用ELISA法检测其分泌的细胞因子,用胞内染色法检测合成的细胞因子。

所以,PMA和离子酶素只是刺激已经活化了的淋巴细胞,使其在体外环境下继续合成和分泌细胞因子而已,与体外实验中直接活化初始淋巴细胞完全是两个概念。

2、PHA:植物血凝素类多克隆刺激剂,作用于TCR-CD3复合体引起T细胞活化。PMA+Ion由于直接作用于T细胞活化信号传导通路的中游,细胞活化快,2h大部分细胞已活化,4h基本全部活化,作用强劲。PHA作用6h的效果大致相当于PMA+Ion活化2h的效果,作用温和一些。

PHA(或ConA)适合刺激人的T细胞增殖,ConA则对小鼠T细胞增殖作用更强一些。它们诱导细胞活化、增殖后都会在培养72 h后发生明显的AICD(活化诱导的细胞死亡)现象。

3、单独anti-CD3包被在板上能刺激纯化T细胞增殖,加入anti-CD28作用更强。

正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中,受到特异性抗原或有丝分裂原(植物血凝素或刀豆素等)刺激,细胞的代谢和形态可发生一系列变化。主要表现为电荷的改变,细胞内蛋白质和核酸合成增加,及以细胞形态可转化为淋巴母细胞。为此,在体外利用各种刺激剂激发淋巴细胞,根据其转化程度可测定T淋巴细胞的应答功能。这类方法称为淋巴细胞转化试验(lymphocyte leansformstoin test)简称淋转试验,在临床上现已作为测定人体细胞免疫功能的指标之一。细

胞免疫缺陷时,这种转化功能也降低。目前最常用植物血凝素(PHA)作为分裂原来检测淋巴细胞转化功能,称PHA刺激淋巴细胞转化试验。

体外引起T淋巴细胞转化的刺激物种类颇多,大致有以下几类:

1、非特异抗原刺激物,如从豆类中提了的植物血凝素(PHA)和刀豆素A(ConA)等,通称为促有丝分裂素(mitogen)。

2、特异性抗原刺激物,如结核菌纯化蛋白衍生物(purifeg protein derivative 简称PPD)等。

3、组织抗原和抗血清,如同种白细胞,抗淋巴细胞血清等。

然而,在上述各种刺激物中又以PHA应用最广。在体外淋巴细胞培养中,可使正常人外周血液中T淋巴细胞几乎均起转化,其所引起的淋巴细胞转化率大大超过特异性抗原的作用。PHA又有PHA-L、PHA-E、PHA-P、PHA-M,它们之间的差异又如何呢?对它们之间的一个比较:

1、PHA-E是红细胞凝集素,有强红细胞凝集活性,弱丝裂原活性。

2、PHA-L是白细胞凝集素,具有强丝裂原活性,弱红细胞凝集活性。

3、PHA-P是未分离纯化PHA-E和PHA-L之前的原PHA蛋白(含PHA-E及PHA-L 二种分子)。

4、PHA-M是粘蛋白形式的PHA(可能就是结合了粘多糖)。

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