E花环实验报告

Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

E花环实验

一.实验原理

人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。已证实E 受体是人类T 细胞所特有的表面标志。当T 细胞与SRBC 混合后，SRBC 便粘附于T 细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T 细胞的方法，称为 E 花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T 细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。由于T细胞的异质性，其对SRBC的亲和力亦不同，因而T细胞可形成不同类型的E花环，其中在4℃放置1 h以上，所形成的花环数代表T 细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。

二.实验结果（用图示法表示）

三.讨论①.有的细胞能形成玫瑰花环的原因：人T细胞膜上具有CD2分子，能够与SRBC上的LFA-3结合，从而形成以人T细胞为中心，SRBC环绕四周，形状如玫瑰花环的细胞集团，即E玫瑰花环。此外，NK细胞膜上也有CD2分子，也能形成玫瑰花环，但是NK细胞的量非常少，形成玫瑰花环的数量也少。

②. 有的细胞不能形成玫瑰花环的原因：a.人血液中含有单核巨噬细胞，其表面没有CD2分子，不能与SRBC表面的LFA-3结合，因此不能形成玫瑰花环。b.实验中所用血液不够新鲜，也可能导致不能够形成玫瑰花环。c. 时间不够长，导致T细胞表面的CD2分子不能够与SRBC上的LFA-3充分结合，因此只有

一部分SRBC与人T细胞结合，其余SRBC没能够与人T细胞结合形成玫瑰花环。

与淋巴细胞混合后离心速度不能过高，在Et花环试验中，置4℃应至少1h以上或过夜。

3.绵羊红细胞以保存1周内最好，超过2周则与淋巴细胞结合力下降，超过5～6周则不能再用。实验室的绵羊红细胞保存的时间太长，导致其与淋巴细胞的结合能力下降，所以有的细胞可以形成E花环，而有的细胞不可以形成E花环。

花环试验SRBC与淋巴细胞混合比例以100∶1～200∶1为宜，Ea花环试验中以10∶1～20∶1为宜；淋巴细胞离体后不能超过6h，否则会影响花环形成率。

5.温度对实验结果影响较大，故实验温度条件应保持一致，从4℃取出后应立即计数。

6.计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免SRBC从淋巴细胞上脱落。