实验一 培养基的制备和灭菌

实验一 培养基的制备和灭菌
实验一 培养基的制备和灭菌

实验一培养基的制备和灭菌

培养基的制备

一、实验目的

1. 了解配制培养基的原理和熟悉常用培养基的名称。

2. 通过对基础培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步骤。

二、实验原理

培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质,用以培养或分离各种微生物。因此,营养基质应当有微生物所能利用的营养成分(包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素)和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。

微生物的生长繁殖除需一定的营养物质以外,还要求适当的pH范围。不同微生物对pH 要求不一样,霉菌和酵母菌的培养基的pH是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基是中性或偏碱性的。所以配制培养基时,都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的pH调到合适的范围。但配制pH低的琼脂培养基时,如预先调好pH并在高压蒸气下灭菌,则琼脂因水解不能凝固,因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌后,在调整pH。

此外,由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物,此外,已配制好的培养基必须立即灭菌,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基的酸碱度而带来的不利影响。

以牛肉膏蛋白胨培养为例,牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基,由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏,蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养配方:

牛肉膏 3g

蛋白胨 10g

NaCl 5g

琼脂 15-20g

水 1000ml

pH 7.4-7.4

三、实验器材

1、溶液或试剂营养肉汤培养基,麦芽汁培养基

2、仪器或其他用具试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,天平,药匙,高

压蒸汽灭菌锅,胶塞,纱布,报纸,棉绳,记号笔,电炉等。

四、操作步骤

1. 称量:按照培养基配方,准确称取各成分放入烧杯中。有些原料用量少,不易称量,可

先配成高浓度溶液,再按比例换算后,取一定量加入烧杯中。

2. 溶化:加入所需要的水量搅匀,然后加热使其溶解。有些原料不易溶解,如蛋白胨、

牛肉膏等,可先在小容器中加水少许,加热溶解后倒入烧杯中。配制固体培养基时,在琼脂熔化过程中要不断搅拌,并控制火力,防止培养基溢出或烧焦。当培养基完全熔化

后要补足水分。

3. 分装:根据需要将培养基分装各种不同的容器中。固体培养基都要趁热分装,各容器的量如下:

三角瓶:一般不超过1/2;试管:视需要而定,若制斜面一般装管高的1/5或1/4;倒平板一般是用时再倒。分装时应避免培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞而引起污染。

4. 加塞:用合适的胶塞塞好

5. 包扎:加塞后,用报纸(或牛皮纸)包好,再用棉绳捆绑好。然后标明培养基的名称,

组别以及日期

6. 灭菌

7. 搁置斜面

8. 无菌检查

五、实验报告:

高压蒸汽灭菌

一、目的要求

1. 了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围

2. 学习高压蒸汽灭菌的操作方法

二、基本原理

高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,是灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,其原因有三:一是湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;二是湿热的穿透力比干热大;三是湿热的蒸汽有潜热存在,每1克水在100℃时,由气态变为液态时可放出2.26KJ的热量。这种潜热能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效果。

在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时,灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要,因为空气的膨胀压大于冷空气的膨胀压,所以,当水蒸汽中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。

三、操作步骤

1. 首先将内层锅桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。

2. 放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。

3. 加盖,并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧

相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。

4. 加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排除后,

关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力

时,控制热源,维持压力至所需时间。

5. 灭菌所需时间到后,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降为0

时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。

6. 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时,经检查若无杂菌生长,即可待用。

思考题

1. 培养基应具备哪些条件?

1.在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么?

2.培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?

3.培养不同种类微生物能否用同一种培养基?为什么?细菌、酵母菌、霉菌通常用什么培养

基培养?

4.高压蒸汽灭菌的关键为什么是高温而不是高压?高压蒸汽灭菌前为什么要将灭菌锅内的

冷空气排尽?灭菌完毕后什么情况下才可以开锅盖取出灭菌物品?

5.玻璃器皿为什么在灭菌前要先行干燥?

6.对含糖(如含葡萄糖或乳糖等)培养基进行高压蒸汽灭菌时,应采用多大压力,多长时间

灭菌为宜?

培养基的制备与灭菌

实验八培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置方法。 3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代 谢类型的多样性.因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同.例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 三、实验材料 1.药品:待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 (一)玻璃器皿的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。(2)移液管的包扎:在移

液管的上端塞入一小,勿用脱脂棉)段棉花(它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应左右,0.5cm距管口约约身自长度棉花可。塞棉花时.1~1.5cm 用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管移液管的包扎图8-1 口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条5cm先将报纸裁成宽约℃角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管45报纸的一端,约成. 压紧.在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。 (二)液体及固体培养基的配制过程 1.液体培养基配制 1)称量:一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品,先按培养基配方计算出各成分的用量.然后进行准确称量。 2)溶解:将称好的药品置于一烧杯中,先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),用玻璃棒搅动,加热溶解。 3)定容:待全部药品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需体积。如某种药品用量太少时,可预先配成较浓溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。 4)调pH:一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围,如培养基偏酸或偏碱时,可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。边加边搅拌,并不时用pH试纸测试,直至达到所需pH为止。 5)过滤:用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时,此步可省去。 2.固体培养基的配制 配制固体培养基时,应将已配好的液体培养基加热煮沸,再将称好的琼脂(1.5~2%)加 入,并用玻棒不断搅拌,以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化,最后补足因蒸发而失去水分。(三)培养基的分装 根据不同需要,可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内,分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口,造成污染。如操作不小心,培养基沾污管口或瓶口时,可用镊子夹一小块脱脂棉,擦

实验三:培养基的制备与灭菌

实验三:培养基的制备与灭菌 一、实验目的与要求: (1)熟悉玻璃器皿的洗涤包装和灭菌前的准备工作。 (2)学习微生物培养基和无菌水的制备,了解培养基配方中各成分的作用、制备流程及各环节的操作技术与应用。 (3)学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。 二、实验原理 培养基的制备原理 培养基是按照微生物生长发育的需要,用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。人工制备培养基的目的,在于给微生物创造一个良好的营养条件。把一定的培养基放入一定的器皿中,就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。自然界中,微生物种类繁多,由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究上的目的不同,所以培养基在组成原料上也各有差异。但是,不同种类和不同组成的培养基中,均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。此外,培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。 根据制备培养基对所选用的营养物质的来源,可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。根据培养基使用目的,可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。 培养基的类型和种类是多种多样的,必须根据不同的微生物和不同的目的进行选择配制,本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。 固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的,常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠,其中以琼脂最为常用,其主要成份为多糖类物质,性质较稳定,一般微生物不能分解,故用凝固剂而不致引起化学成份变化。琼脂在95℃的热水中才开始融化,融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。 高压蒸气灭菌原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,其原因有三:一是湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低(表Ⅴ-2),二是湿热的穿透力比干热大(表Ⅴ-3);三是湿热的蒸汽有潜热存在,每1克水在100℃时,由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。 表Ⅴ-2 蛋白质含水量与凝固所需温度的关系

培养基的配制与灭菌实验报告

培养基的配制与灭菌实验报告 (文章一):培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌 (一)、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 (二)、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。 (三)、实验材料 1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 (四)、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2.灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。(2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约1~ 1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端,约成45℃角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。(二)液体及固体培养基的配制过程1.液体培养基配制(1)称量(假定配制1000ml 培养基)按培养基配方比例依次准确地称取

培养基的配置和灭菌

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 (一)玻璃器皿的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端,约成45℃角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。 (二)液体及固体培养基的配制过程1.液体培养基配制 (1)称量(假定配制1000ml培养基) 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。 (2)溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量(如约700ml),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上

实验一 培养基的制备与灭菌

实验一培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1. 了解配制培养基的一般方法和步骤;掌握牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基的制备方法。 2. 了解灭菌的原理,掌握高压蒸气灭菌的操作方法。 二、实验器材 1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;葡萄糖(蔗糖);琼脂;1N NaOH;1N HCl等。 2. 仪器及其他:试管;锥形瓶;量杯;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或台秤;马铃薯;电炉;铝锅;灭菌锅等。 三、实验方法 (一)配制培养基的基本过程: (1)称量:按照培养基配方,称取各种原料放于锅中; (2)溶解:锅中加入所需水量(自来水),加热溶解。要不断搅拌,以免糊底烧焦,最后加水补足失去的水分; (3)调pH值:按配方要求调节; (4)过滤:用过滤纸或多层纱布过滤,一般无特殊要求,此步可以省去。 (5)分装:按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 分装量:斜面培养基装入的培养基约为试管高度的l/5,1/4,灭菌后制成斜 面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。 (6)加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。

制作棉塞时,应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块,铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上,用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞,然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入,也可以用折叠卷塞法制作棉塞(见图)。 棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。棉塞不宜过紧或过松,塞好后以手提棉塞,以瓶、管不下落为准。 棉塞的2/3应在管内,上端露出1/3,便于提拔。如制作时不慎沾上培养基则不可再用。 (7)包扎:加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中,则应以7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。然后用笔注明培养基名称、组别、日期。 (8)灭菌:将上述培养基于121.3?湿热灭菌30min。 (9)摆斜面:灭菌后,如制斜面,则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度,便斜面的长度不超过试管总长的1/2。 (10)无菌检查:将灭菌的培养基放入37?温箱中培养24,48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用。 (二)灭菌方法采用高压蒸气灭菌法灭菌,步骤如下: (1)打开锅盖,内层锅装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 (2)加适量水。 (3)加盖,旋紧螺栓,勿使漏气。

培养基配制、分装和灭菌

一、实验目的 1了解并掌握培养基的配制、分装方法; 2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质,是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反复融化,其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌,以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中,在放有石棉网的电炉上小火加热,并用玻棒搅拌,以防液体溢出。待各种药品完全溶解后,停止加热,补足水分。如果配方中有淀粉,则先将淀粉用少量冷水调成糊状,并在火上加热搅拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后,置电炉上一面搅拌一面加热,直至琼脂完全融化后才能停止搅拌,并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口,以免浸湿棉塞,引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜;分装三角瓶,其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。

培养基的制备与灭菌实验报告

陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基: 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌: 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 (一)玻璃器皿的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端

培养基的配制和灭菌

培养基的配制和灭菌 姓名 摘要:培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基须经灭菌后方可使用。培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。此次实验我们配制LB(Luria Broth)培养基和麦康凯(MacConkey)培养基并进行高压蒸汽灭菌,目的是掌握LB培养基和麦康凯培养基的配制方法,了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围,并且熟悉培养基的灭菌方法。通过此次实验,我们成功地进行了LB培养基和麦康凯培养基的配制,熟悉了培养基的灭菌方法,达到了预期目的。 关键词:LB培养基麦康凯培养基高压蒸汽灭菌 培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基必须具备下列条件:碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子、水分和合适的pH。培养基种类较多,按其营养物来源不同,可分为天然培养基和合成培养基;按其物理状态分为液体、固体、半固体三种类型。在一定的条件下,培养繁殖得到的微生物群体叫做培养物。培养物分为纯培养物和混合培养物。只有一种微生物的培养物叫做纯培养物,含有多种微生物的培养物叫做混合培养物。通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果,自然环境中极少存在纯培养物,纯培养物通常是由人工方法获得的。获得纯培养的关键一是所有的相关物品必须无菌,二是分离出单个的微生物细胞并将其培养成一个群体。因此,无菌技术是保证微生物学研究正常进行的关键。 在分离、转接和培养纯培养时,防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。无菌技术包括灭菌和无菌操作。灭菌是杀死包括芽孢在内的所有微生物。灭菌的目的是让用于分离、培养微生物的器具和基质事先不含任何微生物。微生物培养的常用器具(例如试管、三角瓶、培养皿等)和培养基都需要灭菌。无菌操作要在火焰附近(酒精灯、煤气灯)进行,并且接种工具(接种环、接种针等)需要灼烧灭菌。 培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌锅的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。高温使蛋白质、核酸等重要生物大分子发生变性、破坏,以及破坏细胞膜上的类脂成分,导致微生物死亡。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大。 1.材料和方法 1.1材料和试剂 实验试剂:蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH、琼脂、麦康凯培养基、去离子水 实验器材:2个300mL三角瓶、2个100mL三角瓶、1个500mL三角瓶、量筒、电子天平、称量纸、称量匙、500mL烧杯或搪瓷缸、试管、pH试纸、电炉、高压蒸汽灭菌锅 1.2方法 1.2.1 LB培养基的配制方法 ①清洗三角瓶。需要清洗2个300mL三角瓶和2个100mL三角瓶。三角瓶用自来水洗净, 然后蒸馏水冲洗2遍,最后沥干。

培养基的制备与灭菌

培养基的制备与灭菌 实验八培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置方法。 3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方

法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微 生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代 谢类型的多样性.因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同.例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本 环节大致相同。 三、实验材料 1.药品:待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 试纸、记号笔、其他物品:药匙、称量纸、pH3.

棉花等。四、操作步骤(一)玻璃器皿 的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、用量筒等浸入含有洗涤剂的水中.培养皿、试管、移液管然后用自来水及蒸馏水冲净。毛刷刷洗,再用自来水及蒸馏水先用含有洗涤剂的水浸泡,洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备冲洗。用。.灭菌前玻璃器皿的包装2培养皿由一盖一底组成一培养皿的包扎:1()或者将套,可用报纸将几套培养 皿包成一包,加盖几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。移液管2)( 的包扎:在移液管的上端塞入一小勿花(棉段移液管的包扎8-1 图 用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂 菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花 自身长度约1~1.5cm。塞棉花时.可用一 外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不

培养基的配制及灭菌实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告 篇一:培养基的制备与灭菌实验报告(详细) 一、实验题目:培养基的制备与灭菌 二、实验目的: 1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。 2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。 三、实验器材: 1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、实验原理: 1、培养基的制备 包括一下几种成分: (1)水分:主要成分。 (2)n源:包括无机氮和有机氮。 (3)c源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 (4)无机盐:如nacl、Kh2po4等。

微量元素:cu、K、mg、s、p、Zn。 有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些 氨基酸或核酸等。 2、培养基配置的原则 根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。 培养基有以下分类: 按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基 按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基 按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基 培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。 3、灭菌: 用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。 (1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器, 加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。若 是含糖培养基,110℃、30min。

培养基的制备与灭菌.

实训六 培养基的制备与灭菌 一、实训目标 知道培养基的用途,能根据不同微生物和不同培养目的选择培养基类型。学会常用培养基的配制、分装、无菌操作方法。了解高压蒸汽灭菌和干热灭菌的基本原理及应用范围,学会高压蒸汽灭菌和干热灭菌的操作步骤与方法。 二、实训材料用具 1.材料与药品:马铃薯、蔗糖(葡萄糖)、琼脂、可溶性淀粉、牛肉膏、蛋白胨、1 mol/L NaOH 、 1 mol/L HCl 、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7 H2O 、FeSO4?7 H2O 等。 2.仪器与用具:灭菌室、超净工作台或接种箱、恒温箱、烘箱或红外线干燥箱、紫外线灭菌灯、电炉、铝锅、天平、烧杯、量筒、培养皿、高压灭菌锅、pH 试纸(5.5~9.0)、试管、三角瓶、铁丝试管筐、试管架、漏斗及漏斗架、玻璃棒、纱布、棉花、牛皮纸、绳、记号笔等。 三、实训步骤与要求 (一)配制培养基 1.配方 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA )主要用于植物病原菌物的分离和培养,有时也用于植物病原细菌;牛肉膏蛋白胨培养基(NA )主要用于细菌的分离和培养。 2.配制流程 (1)称量原料 按配方比例准确称量各种原料,马铃薯称重前需洗净去皮。 (2)溶化原料 制备PDA 培养基的马铃薯要切成小块,加水煮沸约0.5 h 后,用纱布滤去马铃薯残渣,在马铃薯滤液中加入琼脂,继续加热使琼脂完全溶化。注意溶化琼脂过程中要控制火力的大小并不断搅拌,以免溢出或烧焦;待琼脂完全溶化后应补充加热过程中蒸发的水分,以保持溶液的浓度。牛肉膏蛋白胨培养基先将琼脂加水煮至溶化后,再将其他原料溶于水中。 (3)调节pH PDA 培养基略带酸性,培养菌物一般不需调节pH 。培养细菌一般需调节pH 至 7.2~7.4,可用l mol /L NaOH 或 1 mol /L HCl 溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH 或HCI 溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

实验一 MS培养基配制和灭菌

实验一MS培养基配制和灭菌 一.目的和要求: 1. 学会MS培养基的制作方法; 2. 掌握高压灭菌的方法和基本操作。 二、仪器与试剂 1. 仪器:灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯(500ml)、培养皿、移液管等 2. 试剂:MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖,琼脂粉,1N NaoH 和1N HCl 三、方法步骤 (一)配方设计: 以MS为基本培养基(mg/L) (二)配制培养基 (1)溶化琼脂:量取300ml左右蒸馏水,加入4.8g琼脂粉,加热溶解直至完全融化。 (2) 各种母液的吸取:Macro-e 50ml Micro-e 1ml 有机成分1ml Fe盐5ml 肌醇10ml 加在一起,倒入烧杯(1L) (3)加入糖:称取30g 蔗糖,溶于溶有琼脂的300ml 蒸馏水中。

(4)根据实验设计,量取生长调节剂:加在一起,倒入烧杯。 (5)定容:加蒸馏水(用量杯)。 (6)调节pH至,用pH试纸进行测定,用1molHcl或1Mol NaoH调节。 (7)分装:30~40 ml/瓶6,培养基勿碰三角瓶口。 (8)用具清理和洗涤:各种母液按原位置摆整齐,用过的量筒,移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净,然后按次序放回原处。 (三)灭菌:用高压蒸汽消毒器灭菌,其压力为~,温度为120~126℃,保持15~20 min。 具体操作步骤: 1. 加水; 2. 把包扎好的培养基装入高压锅; 3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀; 4. 加热; 5. 排除冷空气; 6. 排除冷空气后,关闭放气阀,待压力升到1Kg位置时,开始计算灭菌时间,一般在1Kg 压力(121℃)下灭菌15~20 分钟即可,但要注意保持稳定压力。 7. 灭菌时间达到20 分钟后,停止加热,待压力自动降到0磅时,打开放气阀,打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。 四.作业 1. 总结配制培养基的注意事项。 2. 制作培养基前为何要提前配制母液

[整理]1实验一培养基的制备和灭菌

实验一培养基的制备和灭菌 一、实验目的 (一)熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 (二)掌握培养基和无菌水的制备方法。 (三)掌握高压蒸汽灭菌技术。 二、基本原理 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质用人工方法配制而成的基质。其中含有水分、碳水化合物、含氮化合物、无机盐及各种必要的维生素。培养基可以为微生物的生长提供能源、组成菌体细胞的原料以及调节代谢活动。由于不同微生物营养类型不同,对营养物质的要求也各不相同,因此,需要配制不同种类的培养基。一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,培养放线菌常用淀粉培养基,培养霉菌常用马铃薯培养基,培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外,还应保证微生物所需要的其他生活条件,如适宜的酸碱度,渗透压等,因此,根据不同种类微生物的要求,应将培养基调节到一定的pH范围,如,细菌培养基中性偏碱、放线菌培养基偏碱、霉菌、酵母菌培养基偏酸。 根据研究的不同,可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式,固体培养基的成分与液体相同,仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物,通常加入 0.5~2.0 %的琼脂,半固体加入0.3~0.5 %琼脂作支持物,有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。 培养基的种类很多,它们的配方及配制方法虽各有差异,但一般培养基的配制程序却大致相同。例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内冷空气从排气阀中

实验一 培养基的制备和灭菌

实验一 培养基的制备和灭菌 培养基的制备 一、 实验目的 1. 了解配制培养基的原理和熟悉常用培养基的名称。 2. 通过对基础培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步 骤。 二、 实验原理 培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质,用以培养或分离各种微生物。因此,营养基质应当有微生物所能利用的营养成分(包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素)和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。 微生物的生长繁殖除需一定的营养物质以外,还要求适当的pH范围。不同微生物对pH要求不一样,霉菌和酵母菌的培养基的pH是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基是中性或偏碱性的。所以配制培养基时,都要根据不同微生物对象用稀酸或稀碱将培养基的pH调到合适的范围。 但配制pH低的琼脂培养基时,如预先调好pH并在高压蒸气下灭菌,则琼脂因水解不能凝固,因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混 合,或在中性pH条件下灭菌后,在调整pH。 此外,由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物,此外,已配制好的培养基必须立即灭菌,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基的酸碱度而带来的不利影响。 以牛肉膏蛋白胨培养为例,牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛 和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基,由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏,蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。 牛肉膏蛋白胨培养配方: 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml -7.4

培养基的制备和灭菌

实验六培养基地制备和灭菌 一、目的要求 1、了解培养基地配制原理和方法,熟悉分离、培养微生物的有关准备工作。 2、了解几种灭菌方法,掌握加压蒸汽气菌原理及方法。 二、实验说明 培养基是用人工方法,将多种生物质按照微生物生长所需要而调制成的一种营养基质。由于不同微生物营养类型不同,对营养物质的要求也不同,因此所需要培养基种类也不同。培养基可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基三类。 根据是否有凝固剂及含有凝固剂的多少又可将培养基分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。凝固剂一般为琼脂(洋菜)也有用明胶等制成。 三、实验材料 1、高压蒸汽灭菌锅、天平、电炉、烧杯、试管、量筒、漏斗、玻棒、吸管、防水油纸、绳索、棉花、pH试纸等。 2、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、麦芽汁、磷酸氢二钾、硫酸镁、洋菜、马铃薯、蔗糖、可溶性淀粉、硫酸亚铁、1M盐酸液、1MNaOH 液等。 (一)配制培养基 培养基配制容器中先盛所需水量的一部分(蒸馏水或自来水,视实验要求而定),然后按培养基配方,称取各种原料,依次加入解,最后加足所需水量,如为蛋白胨、牛肉膏等物质,则需加热使之溶解。

在加热过程中所蒸发掉的水分,应待全部溶解后补足。 2、调节pH值用pH试纸或其他方法测定pH值,以1M的NaOH 或1M的HC1调节至所需要的pH调节至所需要的pH值。 3、溶化凝固剂如制备固体培养基,应先将琼脂称好洗净,煮沸已配好的液体培养基,在沸腾状态下将琼脂加入,并不断撑拌直至完全溶解为止。加热水补足所蒸发的水分。过滤或不过滤(视需要而定)。 4、培养基分装将已过滤好的增基分别按需要分装于锥形瓶或试管内。分装方法(图6-1)。注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸润棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量,视试管大小及需要而定,一般制成斜面培养基时,每支小试管(15×150mm)约装4-5ml(1/4-4/5试管高度)如制深层培养基时,每支试管(20×220mm)约装12-15ml即可。分装后,塞上棉塞,包上防水纸,然后进行高压灭菌。 按上述步骤分别配制下列培养基: (1)牛肉膏白胨培养基 (2)淀粉培养基 (3)麦芽汁培养基 (4)马铃薯培养基 (二)培养基和玻璃器材的灭菌方法 常用的灭菌(消毒)的方法,通常可分为四大类:(1)加热灭菌(包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮佛消毒);(2)过滤除菌;(3)射线灭菌和消毒;(4)化学药剂灭菌和消

培养基配制及灭菌实验报告单

培养基配制及灭菌实验报告单 班级名字小组成员时间指导老师 一、实验目的 了解培养基的配制原理;掌握配制培养基的一般方法和步骤;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;掌握高压蒸汽灭菌操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。 马铃薯培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养 基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 平板划线接种法(分离培养法):是将细菌分离培养的常用技术,其目的是将混有多种细菌的培养物,或标本中不同的细菌(病原菌与非病原菌)使其分散生长,形成单个菌落或分离出单一菌株,便于识别鉴定。平板划线接种方法较多,其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 三、试剂与器材 1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽 灭菌锅、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、镊子等。 2.试剂 马铃薯、葡萄糖、琼脂、水等 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排气→取物→无菌检查 五、关键步骤及注意事 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。 六.讨论 1.如何检验灭菌后培养基是否合格? 2.高压蒸气灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后,为什么要待降到0时才能打开排气阀,开盖取物?

实验五 培养基的制备与灭菌

实验五培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置方法。 3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性.因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同.例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。本实验配置牛肉膏蛋白胨培养基、配方如下: 牛肉膏 3.0g 蛋白胨10.0 g NaCl 5.0 g 水1000ml pH 7.4~7.6 三、实验材料 1.药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LHCL、NaOH。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养 皿等。 3.其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 (一)玻璃器皿的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2)移液管的包扎:在移 液管的上端塞入一小 段棉花(勿用脱脂棉), 它的作用是避免外界 及口中杂菌进入管内, 并防止菌液等吸入口 中。塞入此小段棉花应 距管口约0.5cm左右, 棉花自身长度约 1~1.5cm。塞棉花时.可 用一外围拉直的曲别 图8-1 移液管的包扎

实验一培养基的配制及灭菌

实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代产物。各类微生物对营养的要求不尽相同,因而培养基的种类繁多。在这些培养基中,就营养物质而言,一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。培养基的配制,一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要,二是培养基在使用前不带菌,三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。培养基的灭菌通常在培养基配制后进行,其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体,保证培养基在贮存过程中不变质,也防止其他生物对培养的污染。 一、实验目的 1.掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。 2.明确培养基的配制原理。 3.掌握配制培养基的一般方法和步骤。4.了解湿热和干热灭菌的原理,并掌握有关的操作技术 。 二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性,从而达到灭菌的作用,实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关,在菌体受热时,当环境和细胞含水量越大,则蛋白质凝固就越快,反之含水量越小,凝固缓慢。因此,与湿热灭菌相比,干热灭菌所需温度高(160?170C),时间长(1?2h)。但干热灭菌温度不能超过180C。否则,包器皿的纸或棉塞就会烧焦,甚至引起燃烧。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅,通过加热,使灭菌锅隔套 间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸气不能溢出,而增加了灭菌器的压力,从而使沸点增高,得到高于 100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下,湿热的杀菌效 力比干热大。其原因有三:一是湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低,二是湿热的穿透力比干热大,三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。

培养基的配制及灭菌

培养基的配制及灭菌 一.实验目的 1.三角瓶,培养皿,试剂瓶,试管,枪尖盒等仪器的清洗。 2.三角瓶棉塞的制作,三角瓶,吸管,培养皿,试剂瓶,试管,枪尖盒的包装 与灭菌。 3.高温蒸汽灭菌原理的学习。 4.LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。 二.实验原理 1.高温灭菌的原理: 由于培养基配置过程中并非是无菌操作,所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。 高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广,效果最好的一种湿热灭菌法。在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 注意:①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。否则在同一压力下,锅内实际温度和理想温度就会有差距,不能达到最好灭菌效果。②在使用灭菌锅前切勿忘记加水,水加至与三角搁架相平,以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖,否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染,也容易伤害到操作者。 2.培养基的配置原理: 微生物的生长依赖于可利用的营养物质和适宜的生长环境。培养基是用于培养,转移,贮存微生物的固体,半固体或液体的营养物质。培养基中含有微生物所需的全部营养物质,包括碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。适宜的pH对微生物的生长是必不可少的。 培养基的物理状态有三种:液体、半固体和固体。这些培养基的主要区别是在固体和半固体培养基里面加了固化剂------琼脂。当将琼脂加入溶液中时,在98℃能融化成有一定粘性的液体。并在42℃凝固。琼脂具有的特性有:不易被微生物降解;接近无色等。对于固体培养基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%,半固体培养基加入约0.6%~0.8%。 培养基在配制过程中容易受到污染,因此必须进行灭菌,同时不能将培养基中的营养物质破坏。 三.实验材料 1.培养基与试剂:蛋白胨,酵母粉,NaCl固体,NaOH液体,琼脂,MacConkey。 2.仪器:三角瓶,培养皿,试剂瓶,试管,枪尖盒,电子称,高压蒸汽锅,电 炉,药匙,称量纸,量筒或搪瓷缸,烧杯,pH试纸。

相关文档
最新文档