光合细菌的培养及应用方法
光合细菌的培养及应用方法
光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。
一、培养工具的消毒方法
1．加热消毒法：利用高温杀死微生物的方法。
（1）直接灼烧：此法可直接把微生物烧死，灭菌彻底，但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。
（2）煮沸消毒：一般煮沸5～10分钟，适用于小型容器、工具的消毒。
（3）烘干箱消毒：亦称为恒温干燥箱消毒法。
2．化学药品消毒法：适用在批量培养中，大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。
（1）酒精：浓度为70％的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分钟后，用消毒水冲洗两次即可。
（2）高锰酸钾：按300ppm配成高锰酸钾溶液，把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟，取出，再用消毒水冲洗2次～3次即可。
二、光合细菌的培养条件
1、营养条件
光合细菌细胞体构成元素主要有：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和一些微量元素等，它们也是所有生物细胞构成的主要物质。一般情况下，比重：水占80％-90％、无机盐1％-1.5％、蛋白质7％-10％、脂肪1％-2％、糖类和其它有机物1％-1.5％。其中干细胞含碳45％-55％、氢5％-10％、氧20％-30％、氮5％-13％、磷3％-5％、其它矿物元素3％-5％。光合细菌的细胞膜具有半透性，能选择性地让营养成分按一定需要进细胞内，在酶的作用下合成自己的细胞组分并促进分裂新的个体。
营养元素的全面合理的搭配,是培养高产光合细菌的关键。根据这一要求,郑州@@@@生物材料公司选用多种光合细菌生长必需的原料，科学配方，经特殊加工而成的"光合细菌发生剂（培养基）"，
基本符合光合细菌生长繁殖所需的营养要求，无毒无副作用，使用安全，固状结晶体便于包装和运输，而且有2年的保质期。
光合细菌培养基是光合细菌生长繁殖所需各种营养元素的复合体。每种原料都能得以充分利用，最大限度地生产高浓度的菌液，因此，单位效价的光合细菌菌液生产成本低、质量好，这无论是对于用户、经销商还是厂家都有很大的益处，对在工农业生产中的推广和普及将产生深远的影响。
2.环境条件
有了营养全面的光合细菌培养基，只是满足了其生长的内在条件，并不能培养出光合细菌菌液。还需有适宜光合细菌生长的环境条件，才能培养出优质的菌液。环境条件具体有以下几个方面：（1）.培养介质：含菌量低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实用的角度考虑，地下水含菌量低，为最佳水源；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用；蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种。
（2）.酸碱度（pH）值：7.5-8.5最佳（适应范围6-10）。
（3）.水硬度：pH值中性时10度以下。即调节pH值至8.0左右时，培养介质中的乳白色沉淀物不宜过多。
（4）.温度：25℃-34℃最佳（适应范围15℃-40℃）。
（5）.光照强度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的电灯泡进行光照，当然，太阳光最好且无需成本。
（6）.透气性：密闭、敞口皆可培养，密闭效果更好。
（7）.容器：透明或白色容器；大规模培养可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下为
佳。
三、接种
培养基配制好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一般为20％～50％，即菌种母液量和新配培养量之比为1：4（20％）～1：1（50％），且不应低于20％，尤其微气培养接种总量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势。
四、光合细菌的生产工艺
1、培养液的配制
将光合细菌培养基取一小包（0.5公斤），放入一个干净的容器中，加入100公斤水，搅拌均匀，直到培养基溶化为止。
注意事项：水源一定要选择好，含菌量较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实
用的角度考虑，地下水（井水）含菌量低，为最佳水源，另外，若当地自来水含氯较低，也可用，效果很好；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用。
容器：少量生产可用透明度较高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生产可用水泥池、水泥船，也可临时开挖土池，垫上双层塑料膜防漏防浑浊，培养液的深度为30厘米最佳。
2、培养方式有以下二种：
（1）做小规模培养
①容器为：1.25升的饮料瓶，即小规模生产方法，由于饮料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培养环境好，需要的接种量也少，比较简单。
②设备为：光照箱，用一个大的纸箱，放1个40瓦的白炽灯悬挂在箱子的顶部？（注意防火），纸箱内壁四周，摆装好了培养液并接了种的饮料瓶，这样，既达到了保温到25—40度的效果，又达到了光照的效果。较大的箱子要用60瓦的白炽灯，一般一个箱子，可放这种饮料瓶8个以上，即一次可生产约10公斤/箱。灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。夏天，可撤去纸箱，以防温度过高，并在纸箱四周钻孔以散热。
③操作规程如下：
配料：培养液和液体菌种4：1
培养：在箱子内，打开白炽灯，照几天即可，一般可达到温度在35度，控制在30--40度之内，第一次培养可能需要5天以上，每天早晚摇晃两次，一般只需要2天即可长成深红色。
成熟标准：以培养液长成深红色为准，这时一般成品的光合细菌浓度可达到30--50亿/毫升。
（2）大规模培养：利用太阳能大规模培养（以培养2吨菌液为例）：
选择阳光充足的地方，开挖一土池（长5米、宽1.8米、深0.4米），垫上塑料薄膜，然后再铺上桶状塑料薄膜，并将其一端密封，从另一端加入1.8吨配制好的培养液，和0.2吨的菌种，一共2吨，排尽薄膜中空气后，再将该端密封。保持适当的温度，冬天如果温度过低，搭建透明塑料薄膜棚增温。5天后，菌液培养成熟。
五、培养管理
光合细菌的培养日常管理包括测试、观察和分析处理等三个方面。
1.测试
（1）搅拌：光合细菌培养过程中必须搅拌或充气，其作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长，每天至少摇动3次，定时进行。
（2）调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明，白天可利用太阳光源培养，晚间则需人工光源照明，或完全利用人工光源培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。一般培养光照强度控制在2000lx～5000lx之间。
（3）调节温度：在光合细菌的培养过程中，一般在23℃～39℃均能正常生长繁殖，但如果温度过低，可以把培养容器放在箱子里，利用白炽灯炮散发的热提高箱内温度，并根据需要调整箱子的密封程度达到调节温度的目的。
（4）酸碱度的测定和调整为了延长光合细菌的指数生长期，提高培养基的利用率和单位水体的产量，测定和调整pH值是一项重要措施。一般采用加酸的办法降低菌液的酸碱度，醋酸、乳酸均可使用，而最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必须每天测定菌液的pH值，当pH值上升超出最适范围，即加酸调整。
（5）测定光密度（O.D.）值光密度值和细胞干重之间是近似线性关系，这种相关关系常用来测定培养物的浓度。首先根据测定的数据画出相关的标准曲线图，然后测定菌液的光密度值，即可根据标准曲线大致估算出菌细胞的浓度。光密度值常用分光光度计测定。在日常管理工作中，通过测定菌液的光密度，可以了解光合细菌的生长繁殖情况。
2.生长情况的观察和检查在培养过程中，可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大致情况。菌液的颜色是否正常，接种后颜色是否由浅迅速变深，均反映光合细菌生长是否正常以及繁殖速度的快慢。此外，通过测定菌液的光密度值及其变化情况，能更准确地了解菌体的生长繁殖情况。接种后，光密度值迅速加大，表示生长正常、繁殖迅速。如果光密度值不增加以及菌液颜色不正常、出现菌体附壁等现象，说明培养效果不良。必要时还可以通过显微镜检查，了解细菌生长情况。
3.问题的分析和处理：通过日常管理、检测、观察和检查，了解光合细菌的生长情况，就可以结合当时环境条件的变化进行分析，找出影响光合细菌正常生长的原因，采取相应的对策。影响光合细菌生长的原因很多，从内因看菌种本身是否优良，即接种的母种的质量是否优良；从外因看，不外乎是光照、温度、营养、敌害、厌气程度等方面。
六、光合细菌的培养液颜色解析
平时，在我们培养光合细菌的生产实践中，经常会遇到培养液出现不同的颜色，自然界的光合细菌分别属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、和绿色丝状菌科等四个科目，一共23属，
80余种菌侏。目前水产养殖上用得最为广泛的种类是红螺菌科，特别是红色假单孢菌属中的种类。这类光合细菌在净化水质、防治疾病和促进水产动物生长方面有着较明显的效果。
1、光合细菌培养液的颜色。
光合细菌的光合色素包括细菌叶绿素和胡萝卜素，菌体因各种色素含量的不同而呈现出不同的颜色。一般红螺菌科和着色菌科的菌呈现出红色、粉红色、橙色、紫色或茶褐色；绿杆菌科和绿色丝状菌科的菌呈现出绿色。
但由于培养条件的不同，其颜色在此基础上仍会有变化：如球形红色假单孢菌和荚膜红色假单孢菌的厌氧液体培养液呈茶褐色，而在半好氧（微厌氧）状态下培养液呈红色。这是因为由于氧的存在，对光合细菌色素的合成有十分明显的抑制作用。
下表为水养殖中常用的红色假单孢菌属的几个种在不同培养条件下的呈色反应：
表一、红螺菌科红假单孢菌属中的几个种在厌氧条件与半好氧条件下液体培养物的颜色比较
2、生产实践中光合细菌培养液颜色变化的分析：
很多客户一般在培养的开始期，如头几天会出现黄褐色，或浅黄色，如果坚持培养下去，而不是就此倒掉，最终仍可以培养出外观质量较好的红色菌液来。从上表也可以看出，往往是最后才变成红色。
很多客户往往出现，同样的操作，同一批产品，为什么有的培养容器中会产生绿色的溶液颜色。
这时，您可能要检查一下，是否容器密封得太死，最好是有一点氧气进入会更好。从上表也可以看出，在半好氧的条件下，往往可以得到比较鲜艳的红色产品。所以培养时，最好能进入一次空气，或在容器中留一部分空气，一来可以保持半好氧状态，二来也便于摇晃均匀。
如果最终培养成为了绿色的液体，这时，培养液中的营养也已消耗殆尽了，只是不能作为商品出售，可以自用（也是光合细菌）。
另外，温度高，光照强的条件下，容易得到绿色菌，这是因为此时的条件容易造成水体缺氧，从而引起绿色菌的生长优势。
总之，要得到颜色鲜艳的红色菌，就必须注意以下几个条件，1、注意要保持半好氧培养的条。
2、温度光照不要太强。
3、出现一点绿色也不要灰心，要及时采取措施，如增加供氧，遮荫降温等，并坚持培养下去。
4、平时注意用灯泡和纸箱的培养方式，不间断地培养一些菌种，因为必竟这种培养的方式得到的培养液的质量好，菌体稳定。
七、光合细菌在水产养殖中的应用技术
1、净化水质
由于高密度水产养殖的水体中含有大量的鱼类粪便和残饵，以及鱼药的残留物，它们腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质，直接污染水体和底泥。轻度污染可造成鱼类生活不适，饵料系数增高，生长缓慢，积累到一定程度后，可使水体底部缺氧的情况下，PSB能有效地将氨态氮、硫化氢等有害物质吸收，组成菌体本身，从而提高水体中溶氧含量，调节pH。水体的富营养化亦可滋生大量的病原微生物，使鱼类感染发病。施用PSB后，还能抑制其它病原菌的生长，从而达到净化水质，使鱼类健康生长的目的。
2、维护水体微生态平衡
水产养殖场的水体中存在着各种各样的微生物，有些是有益的，有些是有害的；也有些是处于中间状态的叫“条件致病微生物”，即正常情况下，这类微生物不致病，遇水质污染，鱼类免疫功能下降时，它们便大量繁殖危害鱼类。
通常人们采用消毒杀菌剂来控制，但随着施用次数的增加，病原微生物的耐药性也相应地增强，为了达到预防和治疗的效果，每次施用的剂量不得不逐渐加大，这不仅增加了用药成本，而且还污染了水体，造成水产品质量下降，甚至不能食用。
如何控制病原微生物的生长繁殖，又不使其不产生抗药性，不污染水体呢？答案是现成的，用光合细菌预防鱼病，完全可克服消毒杀菌剂的缺点，它不仅可降解或清除水体中包括鱼药在内的有害化学物质，占绝对优势的光合细菌还可与病原微生物争夺营养、空间，使其无法进行大量生长繁殖，
同时还不存在病原微生物耐药性问题，从而不易形成致病的环境条件，鱼类也就不易发病。
鱼类的病害防治原则是：防重于治。只有在日常的渔业生产中，维持水体中微生态系统平衡，使有益微生物始终占绝对优势，尽量不给病原微生物有大量生长繁殖的机会，才是健康养殖的出路之一，如果平时不能有效地预防，到了出现症状再去治疗，包括鱼药成本在内的重大生产损失将是不可避免的。
3、培养蜉蝣动物作饵料
PSB的菌体细胞营养很丰富，这正好是蜉蝣动物的优质饵料，实践证明，水体中的PSB越多，蜉蝣动物生长也就越旺盛，以蜉蝣动物为食的鱼类增产效果也就越明显
4、作为饲料添加剂
PSB的菌体细胞营养丰富，并含有大量的生理活性物质，可直接拌入饲料中投喂，除增加营养，降低饲料系数外，还可起到刺激动物免疫系统，增强消化和抗病能力，促进生长的作用。
5、间接增氧作用
PSB生长繁殖时，不需要氧气，也不释放氧气，它是通过吸收水体中的耗氧因子，而产生了间接地增加氧气的作用。
八、光合细菌在养殖和种植上的用法用量
（一）PSB在水产及畜禽养殖中的应用剂量及注意事项。
PSB对各种水产养殖动物都有益，尤其是育苗阶段的效果特别地明显，具有成活率高于对照20—60%，用于成鱼育肥，增产20%左右，饵料系数下降20%左右，个体增重15%，且无任何副作用。
育苗用量：每平方米用100克。间隔10天用一次。
鱼育肥：首次用7公斤一亩，以后用4—5公斤/亩，间隔15天用一次。
鱼苗或病鱼药浴：用光合细菌稀释10倍，把鱼苗或病鱼放入游15分钟即可。
药浴后，可使药浴鱼虾成活率提高90%，如患粘细菌病、烂鳃病、打印病后成活60-100%，患水霉病、赤鳍病、擦伤病后成活近100% 且无任何药浴副作用。
饲料中用量：鱼苗5%，成鱼3%，禽畜3%-5%，现拌现喂，喂水添加3%。现拌现喂。
施用方法：适当用水稀释后全池洒匀，若先用生石灰后2小时，再用PSB则效果更好。
注意事项：不可与消毒杀菌剂同时使用，水体消毒须1周后方可使用。晴天水温在20度以上时使用效果较好。液体PSB拌入料中后应于当天用完。酸性水体易使鱼生病，且不利于PSB生长，应常用生石灰调节水体pH值。
（二）在种植业上的应用：
水稻、小麦：每次亩用5千克叶面喷施。水稻秧苗期、孕穗期各用一次；小麦冬肥、拔节期各
用一次。
油菜：基肥亩用15千克浇根。窜苔前亩用15千克叶面喷施。
瓜果类蔬菜：每次亩用10千克，幼苗期稀释浇根一次，现蕾期喷一次。
叶菜类蔬菜：每次亩用20千克，生长期浇根或叶面喷施，7天用一次。
花卉：移载后每亩40千克浇根，生长期每亩20千克喷施，15天一次。
茶树：播种基肥亩用80千克。冬肥亩用40千克浇根。萌发期前亩用20千克浇根，叶片生长期亩用15千克喷施，每15天一次。
果树：冬肥亩用40千克浇根。新叶长成后亩用20千克叶面喷施。
（三）使用方法
（1）将光合细菌菌液稀释20-30倍全池均匀泼洒。
（2）将菌液用沸石粉吸附或拌和细土后撒入池中。
（3）将菌液拌和饲料后投喂。
（4）将菌液稀释10倍后，浸泡鱼种。
（5）拌种、浇根、叶面喷施。
（四）.注意事项
（1）不可与消毒杀菌剂混合使用，水体消毒须1周后方可使用。
（2）使用前，将菌液光照10小时以上，使用效果更好。
（3）晴天水温20℃以上时使用效果较好。
（4）拌入的饲料应于当天投喂完毕。
（5）应灵活掌握用量和使用的连续性，因为光合细菌在水体中只有形成优势群落后，才能发挥最大的作用。宜春专利中心提供光合细菌发生剂。
（6）水体呈碱性时施用效果最好。酸性水体易使鱼类生病，应常用生石灰或烧碱调节pH值至中性或偏碱程度。
（7）光合细菌菌液不能用金属器皿贮存。
（8）培育鱼苗时，在苗种入池前7天全池泼洒，以利于浮游生物生长。
（9）植物萌发期，施用效果最好。
九、光合细菌液体成品的保存方法
成品应放在低温环境下，15度以下最好，夏季应放在凉爽的地方，并要保持一定的光照度，每天不低于2小时，这是因为PSB在刚刚结束培养时，正处于生长旺盛期，形成了很强的“生长惯性”，如果此时突然没有了光照或光照很弱，经5~10天后会出现光合作用失衡而导致大量死亡，使菌液发
黑，并有恶臭，刚开始发黑时若施以适当光照，即可缓和。所以刚培养好的成品应尽量降温，逐步降光照，以减少生长惯性，到了生长惯性很弱或没有惯性时，PSB就进入了稳定期，此时在阴凉避光处可保存6个月。
总之，保存期的长短主要取决于温度、光度。通常您在正常的连续的生产及使用过程中，对PSB 的的保存及留种无须做特别的处理，如：夏天在太阳下培养的产品就放于阳光下，可保2个月，可不断地再培养，扩大，反复等。秋天，培养的最后一批产品可保1年之久。
十、光合细菌的活菌计数和纯种分离技术
采用琼脂固体培养基涂抹培养计数分离法。
条件：无菌室、过滤空气鼓风工作台、平皿、接种针、固体培养基、液体培养基、密封玻璃试管、高压灭菌锅、加热器、培养箱等。
步骤：（在无菌室内操作）
1.将适量琼脂固体培养基高压蒸煮(120℃)20分钟后，倒入若干个平皿冷却到45℃以下，制成固体培养基待用。
2.取待测光合细菌菌液，分别用蒸馏水以10万倍、50万倍、100万倍、500万倍、5000万倍、10000万倍稀释。
3.分别从每个稀释倍液中取1毫升的样本各10个，均匀涂布于贴好相应标签的平皿内固体琼脂培养基平面上。
4.将平皿放入培养箱培养12-50个小时，如菌落未长成，再继续培养，直到有明显的菌落长成为止。
5.各种菌的菌落颜色、形状各不相同，根据光合细菌菌落特征，找出光合细菌菌落，并计数。取同稀释倍液10个样本菌落的平均数，乘以它的稀释倍数，即可大约得出待测菌液每毫升含光合细菌的活菌数。取各稀释倍液算出的每毫升含光合细菌活菌的平均数，即可较为准确地检测出该待测菌液的浓度。实际操作并不如此简单，因为菌落有杂菌和光合菌交错在一起的，也有两个以上光合细菌菌落合在一起的，很难分辨计数。
6.用接种针将光合细菌菌落挑出，用适量蒸馏水稀释后，再涂布于固体培养基平面上，进行培养，待光合细菌在培养基上再次长成菌落后，在鼓风工作台内用接种针挑出，接入盛有经高压蒸煮灭活过液体培养基的试管内，进行密封厌氧培养，培养好的光合细菌就是纯菌种。
纯菌种的分离是专业性很强的一门技术，只有专业人员，且经验丰富的，才能识别各种菌落，从中分离出有用的菌株。
十一、光合细菌品质的鉴别
目前，市面上光合细菌产品良莠不齐，有些不法厂家为达到赢利目的，采用色素加水调配成所谓的光合细菌，或用培养得不好的劣质光合细菌加色素调配。这些假、劣产品从外貌看几乎可以乱真，但是由于质量低劣，完全达不到有关指标的标准，使用后甚至会残害养殖对象，严重地侵犯了用户的利益。如何分辨光合细菌产品的真与假、劣，成为许多用户头疼的事情。
科学培养出来的光合细菌产品的红色是光合细菌菌体的颜色，为非水溶性的，而用色素调配出来的假劣产品的红色为水溶性色素的颜色。根据这两者的不同，我们设计了一套鉴别真与假、劣产品的方法，经反复试验证明该方法科学、准确、易操作、易观察。现将此方法介绍给广大用户，希望能对用户辨别真与假、劣光合菌产品有所帮助。具体方法如下：
1、鉴别绿色色素溶液的配制：称取食用果绿色素0.1克，溶于100毫升自来水中，配成深绿色的鉴别色素溶液。或取少量食用果绿色素，溶于适量自来水中，配成深绿色的溶液。
2、取样品：取待测的样品10-20毫升装于干净、透明的玻璃管中。
3、滴2滴鉴别绿色素溶液于装有待测样品的玻璃管中。
4、观察颜色的反应。
若样品为真正培养的光合细菌产品，绿色素溶液则会与红色光合细菌分层，上层绿色为绿色素溶液，下层红色为光合细菌液，摇动之后稍微放置，分层仍是存在，滴加的鉴别绿色素溶液越多，绿色层所占的比例越多，最后，整玻璃管都为绿色。
若是用色素调配出来的假光合细菌产品，可见滴加的鉴别绿色素溶液会溶于红色产品中，绿色溶液与红色溶液不会分层，轻轻摇动后，两者颜色会混匀，样品的红色加深，红中带有点紫，滴加的绿色色素溶液越多，颜色就会逐渐加深为紫黑色。
有些厂家在培养得不好的劣质光合细菌产品中加色素调色。如果鉴别这一类加有色素的劣质光合细菌产品，同样也可用上述的方法。产品中因色素加量不同，加入鉴别绿色色素溶液后，会有不同的颜色反应。若其产品中红色素添加量较少，滴加鉴别绿色色素溶液后，会有分层，上层为浅绿，绿中带有些紫。随着产品内红色素加量的增加，滴加绿色素溶液后还会有分层，但上层较下层深紫红，产品内调配的红色素量进一步加大，上层颜色为深紫，轻摇后，整管颜色为紫黑色。
十二、沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准
1998-8-4 农牧函[1998]30号
沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准
1．主题内容与适用范围
本标准规定了沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品的质量指标、试验方法、检验规则、
标志包装、运输、储存的要求。
本标准适用于沼泽红假单胞菌类（光合细菌）水剂的生产。
2．引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用标准的各方应探讨、使用下列标准最新版本的可能性。
GB 13079－91饲料卫生标准
GB 13091－91饲料中沙门氏菌的检验方法
GB 8381－87 饲料中黄曲霉素B1的测定方法
GB 13079－91饲料中总砷的测定方法
GB 13080－91 饲料中铅的测定方法
GB 10648－93饲料标签
3．技术要求
3．1微生物指标
3．1．1菌落形态
本品稀释后在琼脂培养皿上培养，菌落形态为草帽形或园形，表面光滑，少隆起，边缘整齐，棕红色。
3．1．2菌体形态
显微镜下观察，本产品菌体形态为短杆状或卵园形，宽0.5-0.9微米，长1.2-2.0微米，无芽孢，无荚膜，单极鞭毛，可运动。
3．1．3革兰氏染色阴性
3．2感观指标
本品为红色悬浮液体，带培养基发酵味，长时间静置红色悬浮菌体会逐渐下沉，振荡后可恢复悬浮液状，无臭味。
3．3光合细菌含量
总菌数不低于30亿个／ml 活菌数不低于20亿个／ml
3．4理化指标
酸度pH6.5-7.0 电导率6－8ms/cm
3．5光谱指标
光吸收植A660＞1.5 A490＞2.5 A805＞1.7 A860＞1.9
3．6卫生指标
沙门氏菌无黄曲霉素B1 Mg/Kg ＜0.02 总砷（AS） Mg/Kg ＜0.5 铅 Mg/Kg ＜2.0 4．试验方法
4．1试剂和溶液
除特别注明外，试验中所用试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或相应程度的水，溶液为水溶液。4．1光合细菌培养液
5.5g磷酸二氢钠，1.5gDL苹果酸，2g乙酸钠，2g氢氧化钠，1g氯化铵，0.25g氯化镁，0.05g氯化钙溶于1升蒸馏水，再加入本产品生产中用的生长因子溶液和微量元素溶液各1ml，搅拌均匀，pH应于
6.5至
7.0之间。
4．2常规实验和仪器和设备
4．2．1分光光度计：有10mm比色池，可在340－900nm处测量吸光度。
4．2．2 1600倍光学显微镜
4．2．3电动离心机（4000转／分）
4．2．4酸度计：精度0.01pH
4．2．5电导仪：DDS－11型（或同等精度其它型号）
4．3取样
需备20ml具塞磨口无色透明的三角瓶为样品瓶，洗净后置烘箱120℃干燥灭菌，用清洁并灭菌后的25ml移液管（或吸管）随机在5桶产品中各取25ml左右置于样品瓶中混和，将靡口塞盖严，用胶布封住，贴上标签注明厂名、产品名，批号。取样日期、生产日期。
按和以上相同方法取样200ml置于一干燥灭菌洁净的200ml白塑料瓶中，注明标签（内容同上）密封后留存。
4．4检验方法
4．4．1微生物检验
4．4．1．1菌落形态检验：用含1.2％琼脂的光合菌用培养液，除菌处理后，在无菌环境中，充平皿板，厚约3－5mm。凝固后取光合菌液做平板划线，将平皿厌氧培养光照3－5天，室温30℃，3－5天后长出红色菌落，观察菌落形态。
4．4．1．2原菌液用培养液稀释100倍，取一滴置载片上（盖盖片）在高倍镜下（16×40）观察菌形态大小及运动状态。
4．4．1．3培养中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精灯火焰固定，经初染（结晶紫），媒染（路氏碘液），脱色（95％乙醇），复染（番红染液）后，油镜（16×100）观察，菌体呈红色。4．4．2感观检验
量取样品500ml，置三角瓶中，用肉眼观察颜色，用嗅觉检察嗅味。长期静置已有沉淀的产品应先振荡或搅拌10－20秒后再取样。
4．4．3含量测定
4．4．3．1总菌数测定：样品充分振荡后取0.5ml用水稀释到200ml灭菌水中，搅匀后从中取数微升充板入血球计数板的计数池中（每大格0.1mm3，置600倍显微镜下观察，同时用红血球计数法记菌数，将25个小格的每格菌数平均值乘1亿为每毫升总菌数。
4．4．3．2活菌数测定：将4．4．3．1节中稀释的菌液再稀释100000倍，取1ml加到10ml培养液中，混合均匀后加入20g/1000ml浓度琼脂溶液10ml，置平皿中凝固，加玻璃盖在25－30℃温度，无菌环境下，60瓦白炽灯照射，距灯泡12cm，1－2天后观察计数菌落数，以下式计算：
每毫升样品中的活菌数＝菌落计数／25×1亿
4．4．4理化指标测定
4．4．4．1酸度测定
以不低于0.01pH值精度的酸度计，直接于20ml样品中测量。
4．4．4．2电导率测定
以DOS－IIA型（或同等精度其它型号）电导仪直接于20ml样品中测量。
4．4．5光谱指标测定
取0.5ml样品置3ml容积，1cm光径比色杯中，加入2ml蒸馏水，以蒸馏水为对照，在可见分光光度计中读取660nm、490nm、805nm、860nm波长处光吸收值，再乘5得到以上几个波长处的光吸收值。
4．4．6卫生指标检验
4．4．6．1沙门氏杆菌检验：按GB13091－91测定方法检测
4．4．6．2黄曲霉素B1检验：按GB8381－87测定方法检测
4．4．6．3总砷含量测定：按GB13079－91测定方法检测
4．4．6．4铅含量测定：按GB13080－91方法检测
5．检验规则
5．1本品应由生产厂的质量检验部门进行检验，生产厂保证所有出厂的产品均符合本标准的要求，每批出厂的产品，都应附有质量检验合格证明书。
5．2感观指标、理化光谱及微生物指标为生产厂日常检验项目，由生产厂质检部门进行检验。6．判定规则
检验中有一项指标不符合本标准时，应重新抽样，进行复检，复检结果仍有一项指标不符合本标准时，则该批产品不能验收。
7．标签、包装、运输、储存
7．1标签
7．1．1采用鲜明的标签贴于外包装；
7．1．2标签内容应符合饲料标签标准规定要求；
7．1．3标签上需采用现已注册的商标，条件成熟时考虑增加防伪标志。
7．2包装：采用白色聚乙烯有密封盖的塑料桶或塑料瓶。
7．3运输：运输中应避免日晒，避免35℃以上高温，搬运装卸时小心轻放，不得到置，不得与有毒物质混装混运。
7．4储存
应保存于阴凉的仓库中，避免直接日晒，（不需要黑暗）避免30℃以上高温，不得和有毒、有害物质一起堆放。原包装（未开封）保质期4个月。
十四、培养基配方
光合细菌的培养基
对光合细菌培养条件进行了优化研究，结果表明：菌株的生长温度为30℃时，最适培养光照为3000ｌｘ，最低接种浓度为6%。培养基正交试验研究表明其最优培养基配方为：氯化铵2．00ｇ、磷酸氢二钾0．20ｇ、乙酸钠4．00ｇ、碳酸氢钠2．00ｇ、氯化钠1．00ｇ、酵母膏0．15ｇ、硫酸镁0．20ｇ、Ｔ.Ｍ储液少量、蒸馏水1000ｍＬ;其中乙酸钠为最大影响因子。酵母膏对产品品质影响较大，要求酵母膏质量稳定，无杂菌。
目前应用的光合细菌有多种配方，现介绍一种常用的配方：
磷酸氢二钾（K2HPO4）0.5g
磷酸二氢钾（KH2PO4）0.5g
硫酸铵（(NH4)2SO4 ）1g
硫酸镁（MgSO4.7H2O 0.5g
乙酸钠(或95%酒精3ml ) 2g
酵母浸出汁(或酵母膏) 2g
消毒海水1000ml
光合细菌使用方法
一．使用方法： 1.水体喷洒。适合改良水质，防治鱼病和培养优良藻类时使用。选择晴天上午或下午，将扩繁好的光合细菌菌液用池水稀释后，全池均匀泼洒，一般用量：苗种池：150ml/L每5―10天用一次。成鱼池：第一次5ml/L以后2ml/L，或第一次5―8公斤/亩，以后3―5公斤/亩，每10―20天用一次。施光合细菌的次数最好根据水质情况具体研究，水质好可每隔15天施一次，水质较差、较肥，应每隔7―10天施一次。由于光合细菌形态微细，比重小，若采用直接泼洒养殖水体的方法，其活菌不易沉降到池塘底部，无法起到良好的改善底环境效果。因此建议全池泼洒时，尽量将其与沸石粉合剂合用这样既能将活菌迅速沉降到底部，同时沸石也可起到吸附氨的效果，或拌土洒入鱼池。 2.饲料添加。内服拌饵作为饲料添加剂使用时，将扩繁好的光合细菌菌液喷洒干饲料中拌匀，如用投饵机投喂的可拌菌后散开吹晒一段时间再喂，当天拌当天喂完。 二、注意事项： 1.不可与消毒杀菌剂混合使用，使用前后一周内不得使用消毒剂，否则杀死光合细菌影响使用效果。 2.使用前，将菌液光照10小时以上，使用效果好，晴天水温20℃以上时使用；阴雨天勿用。 3.水体呈碱性时施用效果好。用生石灰或烧碱调节PH值至中性或偏碱程度。 4.应灵活掌握用量和使用的连续性，因光合细菌在水体中只有形成优势群落后，才能发挥作用。 5.光合细菌菌液不能用金属器皿贮存。 6.培育鱼苗时，在苗种入池前7天全池泼洒，以利于浮游生物生长；光合细菌菌液与粪肥配合使用，效果明显，增产增效特别显著。 7.若要同时施用不同的净水制剂，应该注意制剂之间的共容性。例如：硝化细菌和光合细菌并不适合同时放养在同一水池中，因为它们净化水质的过程互有抑制作用，可能会降低其净化效果。
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
光合细菌
光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB）是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，它广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤内，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。 第一节光合细菌的生物学和营养价值 一、光合细菌的生物学 光合细菌包括产氧光合细菌（蓝细菌）和不产氧光合细菌两大部分，在实际中应用的大部分是不产氧型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌、绿细菌和日光杆菌属、红色杆菌属等总共 27个属 66个种。不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同，它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型、光能异养型及兼性营养类型；从呼吸类型看包括好氧、厌氧和兼性厌氧型。 光合细菌是革兰氏阴性菌，在10～45℃范围内均可生长繁殖，最佳温度在30～40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH值范围在7～8.5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。 二、光合细菌的营养价值 光合细菌的菌体无毒，营养丰富，蛋白质含量高达65%，而且氨基酸组成齐全，含有机体需要的8种必需氨基酸，各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B族维生素，尤其是B12、叶酸、生物素的含量相当高是啤酒酵母和小球藻的20到60多倍。PSB 菌体内含有较高浓度的类胡萝素，而且种类繁多，迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素。除此之外，细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子，具有很高的营养价值。 光合细菌在虾、贝类的幼体培育中应用非常广泛，其一方面能净化水质，改善幼体的环境条件，另一方面作为饵料被幼体摄食（贝类幼体相对虾幼体的蚤状阶段都能直接摄食光合细菌），对促进幼体生长、变态和提高成活率有明显效果。 第二节光合细菌的培养方法 一、培养方式 光合细菌的大量培养通常采用全封闭式厌气光照培养和开放式微气光照培养两种方式。 （一）全封闭式厌气光照培养 全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑料薄膜袋，消毒后装入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，使整个容器均被液体充满，加盖（或扎紧接口）， 造成厌气的培养环境，置于有阳光的地方或用人工光源进行培养，定时搅动，在适宜的温度下，一般经过5～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时可采收或进一步扩大培养。 （二）开放式微气光照培养 开放式微气光照培养一般采用容量为l00～200升的塑料桶为培养容器。在桶底部装一气石，培养时微充气、使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶的正上方距捅面30厘米左有装一有罩的白炽灯泡，使被面照度达2000 lx左右。培养前先把容器消毒，加入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，照明，微充气培养。在适宜的温度下，一般经7～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时，进行采收或近一步扩大培养。 两种培养方式相比，以厌气培养方式较为理想，微气培养方式虽然设备比较简单，易于大量培养，但杂菌污染程度大，培养达到的菌细胞密度低。 二、菌种分离、保藏 培养光合细菌首先要有菌种。目前，应用于水产养殖业的光合细菌，主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基，和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。 （一）采样 红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，广泛分布在被有机物污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业 等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品，深水处借用采水器和采泥器采样。 （二）富集培养 富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，倒入配制好的培养液，充分搅拌。为造成厌气环境，在玻璃圆筒或大型
光合细菌培养基配方
光合细菌培养基配方 光合细菌是兼性厌氧的，不同的光合细菌用的培养基不一样我现在就在做关于光合细菌的问题，这几中细菌都是常见的细菌，培养基在许多微生物上后面都有，光合细菌的富集培养基是： NH4Cl0.1g NaHCO3 0.1g KH2PO4 0.02g CH3COONa 0.1-0.5g MgSO4.7HO2 0.02g NaCl0.05-0.2g 三生长因子１ml 微量元素溶液１ml 蒸馏水９７ml ＰＨ７.０ 生长培养基加氮源（谷氨酸钠）和碳源（乙酸．丙酸．丁酸盐等）及可．其他菌的分离只要选择不同的培养基就可以选择分离啊 光合细菌富集纯化详见网易网盘 光合细菌培养基配方 氯化氨1克，磷酸氢二钾0.5克，氯化镁0.2克，氯化钠2克，酵母膏0.1克，水900毫升。 各成份溶解后15磅灭菌20分钟，然后无菌的加入过滤的碳酸氢钠5.0克/50毫升水；50毫升过滤的乙醇。用过滤的0.1N 磷酸调PH=7.0即可。 响应面设计法优化光合细菌培养基配方。培养基成分中醋酸钠和蛋白胨对于光合细菌的生长影响最为显著，最优培
养基配方为：醋酸钠1．145g／L、蛋白胨0．055g／L、碳酸氢钠0．6g／L、硫代硫酸钠0．4g／L、氯化钠0．3g／L、硫酸镁0．1g／L、磷酸二氢钾0．05g／L。在此条件下，光合细菌生长最为良好，经过5d培养以后，培养液OD600可以达到0．5以上 光合细菌(含生产工艺) 优良的光合细菌菌种的外观质量是啥样？ 一般优良的光合细菌菌种和产品的外观质量有以下几点： 1、外观上看比较均匀，基本无上下分层。相反，市场上有许多光合细菌是上下分层的，包括我中心初期的产品也是这样，上层比较清淡，下层则比较深厚，上层颜色浅，下层颜色深，最底层可能还会有一层黑黑的沉淀。 而优秀的光合细菌菌种和产品，上下都是比较均匀的，没有较明显的分层，颜色比较均匀，外观看起来也悦目。（当然，除了培养基溶解时，会与硬水中的重金属离子反应产生的絮装沉淀除外） 这种上下无分层，颜色均匀，不是靠加悬浮剂，或增稠剂而造成的，而是自然培养出来的，不加任何修饰而成的。少数地方，由于水质的原因，可能会产生稍稍的差别。 2、没有粘壁现象。很多市场上的产品都有粘壁现象，即在容器的壁上形成一层红紫色的颜色层，就象是油漆一
光合细菌的功能及其在动物养殖中的应用
光合细菌的功能及其在动物 养殖中的应用 2003-09-25 摘要光合细菌是一类能进行光合作用 而不产氧的特殊生理类群原核生物的总称。它可 以利用光能，固氮合成有机物，也能通过多种方 式和途径转化不同类型的有机物和无机物质，而 且还具有独特的抗病、促生长以及提高畜禽生产 性能的作用，因而在畜禽以及水产动物养殖中具 有应用的潜力。 本文就光合细菌的功能及其在动物养殖中的应 用状况作一综述。 关键词光合细菌；生物学功能；畜禽；水产 养殖 中国分类号：S816．7 文献标识码： A 文 章编号：1004－－0084（2003）07－0006－03 光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB） 是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，它 广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、 活性污泥及土壤内，是一类以光作为能源、能在 厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有 机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合 作用的微生物。 PSB包括产氧光合细菌（蓝细菌）和不产氧光合 细菌两大部分，在实际中应用的大部分是不产氧 型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌 （Purple gacteria）、绿细菌（Green bacteria） 和日光杆菌属（Heliobacterium）、红色杆菌属 （Erythrobacter）等总共 27个属 66个种，近
几年来陆续还有一些新种报道。 1 光会细菌的生理特性及其功能 1．1亚光合细菌的生理特性 PSB是革兰氏阴性菌，菌体有球形、椭圆型、半环型，也有杆状和螺旋状。有些菌种的细胞形态还会随培养条件和生长阶段的不同而发生变化。光合细菌在10－45℃范围内均可生长繁殖，最佳温度在30－40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH 值范围在7－8．5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。 不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同，它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型。光能异养型及兼性营养类型；从呼吸类型看包括好氧。厌氧和兼性厌氧型。 1．2光合细菌的生物学功能 l．2．l营养功能 有研究表明，PSB的菌体无毒，营养丰富，蛋白质含量高达64．15％－66．0％，而且氨基酸组成齐全，含有机体需要的8种必需氨基酸，各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B 族维生素，其含量见表1。PSB菌体内含有较高浓度的类胡萝素且种类繁多。迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素，并不断有新的报道。除此之外，细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子，具有很高的饲料价值，在养殖业
光合细菌培养参数的研究审批稿
光合细菌培养参数的研 究 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、一、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting
光合细菌的分离、培养和鉴定
光合细菌的分离、培养和鉴定 摘要：从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。进行了菌落形态学观察和亚显微观察。于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。 关键词：生长曲线；沼泽红假单胞菌；光合细菌 The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris. Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria 引言 光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。经过研究发现光合细菌在环保、农业、医药等方面均有较高的应用价值。下面就光合细菌目前的开发应用研究近况作一概述。 光合细菌细胞营养价值极高。首先，光合细菌细胞干物质中蛋白质含量高达60%以上, 比目前生产的单细胞蛋白酵母中蛋白质的含量还高。而且其蛋白质氨基酸组成齐全, 是一种优质蛋白源。其次，光合细菌细胞含有多种维生素, 特别是B族维生素, VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远远高于酵母菌。另外, 光合细菌细胞还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等活性物质。因此, 光合细菌具有很高的营养价值。在水产养殖中, 光合细菌可被用于饵料或饲料添加剂。光合细菌促进鱼虾的生长, 无论是成活率或是产量的提高均可达10%-40%以上。同时，光合细菌还具有防治鱼虾疾病,净化养殖场所水质等方面的功能。使用光合细菌喂养的家禽, 成活率可提高5%-7%, 料肉比降低33%左右，肉鸡增重15%-17%, 产蛋率提高12.7%。而且所产
生物饵料培养学习题及解析
填空题： 1.在所有卤虫品系的脂肪酸组成中几乎没有_DHA__，所以对卤虫必须进行营养强化。 2.微藻藻种保藏的基本条件是_低温和弱光__。 3.光合细菌培养基灭菌的方式有_常压蒸汽灭菌和过滤灭菌__和高压蒸汽灭菌。 4.“绿水育苗”是指在育苗过程中利用__微藻___的育苗方式。 5.微藻基因工程育种是引入__外源基因__在微藻内表达以改良微藻遗传品质的方法。 6._褶皱臂尾_轮虫在海水鱼虾蟹苗种培育过程中应用最为广泛。 7.在开放式培养螺旋藻时，施用__碳酸氢铵__可以杀死藻液中的轮虫和原生动物，还可以作为肥料。 名词解释： 1.营养强化:指针对生物饵料的营养缺陷，有意识地通过其摄食特定食物进行改善和补偿，达到营养平衡和满足鱼虾幼体发育的 需求。 2.诱变育种: 是指人为地利用物理的或化学的因素，诱发微藻产生遗传变异，通过对突变体的选择和鉴定，培育出有利用价值 的新品种或新的种质资源 3.单种培养: 指在培养过程中不排除细菌存在的一种培养方式 4.生物饵料:指经过筛选的优质饵料生物，进行人工培养后投喂给养殖对象食用的活的饵料。 5.指数生长期: 指微藻细胞迅速地生长繁殖，细胞数目以几何级数增加的时期. 判断题: 1、所有卤虫卵都是在低盐度下有较高的孵化率。 X 2、小新月菱形藻的最佳培养生态条件和应用途径与三角褐指藻相似。√ 3、角毛藻在低盐度下比高盐度下生长好。√ 4、褶皱臂尾轮虫对低氧含量甚至短时间缺氧的耐受力很强，因此，在高密度培养时，不需要充氧。X 5、微藻对二氧化碳的需要量大，但给微藻培养液过量通入二氧化碳，会对微藻产生毒害作用。√ 6、实验室小型培养微藻，海水的消毒通常采用有效氯消毒。X 7、不同光合细菌体内的颜色在固定的培养条件下具有特征性，因此，每个菌种的颜色不会随着培养条件的变化而发生变化。X 8、刚产出的卤虫休眠卵就具有较高的孵化率。X 9、目前培养的桡足类主要是隶属于猛水蚤目和哲水蚤目的种类。√ 10、轮虫的营养价值与所摄食的饵料有关。√ 选择题: 1、标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个大格所在区域的体积是__C_____。 A: 1mm3B: 10mm3C: 0.1mm3D: 0.1mL 2、敌害生物对微藻培养的危害作用主要有_D___。 A:掠食 B:通过分泌有害物质对微藻起抑制和毒害作用 C:竞争营养盐 D: A+B 3、土池培养浮游动物饵料时，采用施放___C______肥料培育浮游植物较佳。 A:无机肥B:有机肥C:无机肥+有机肥D:粪肥 4、红螺菌科光合细菌的获能方式有__D__。 A:光合磷酸化B:氧化磷酸化 C:呼吸作用D: A+B+C 5、用藻类二次强化培养轮虫所需的时间一般至少要在_A___以上。 A:6-12小时B:24-36小时 C:36-48小时D:1-3小时 6、分布于咸水中的枝角类是__A__。 A:蒙古裸腹溞 B:大型溞 C:多刺裸腹溞 D:鸟喙尖头溞 7、在轮虫培养过程中，若以酵母为饵料进行培养，则适宜的轮虫接种量是_C___。 A:0.1个/ml～0.5个/ml B:1个/ml C:14个/ml～70个/ml D:200个/ ml 8、采用酒精对皮肤和器皿表面进行消毒时，常采用的浓度是___C______。 A: 40-45‰B: 60-65‰C: 70-75‰D:80-85‰ 9、在下列藻类中，最佳培养条件为高温、强光和强碱性的是__A__。 A:极大螺旋藻 B:湛江等鞭金藻 C:中肋骨条藻 D:小球藻 10、生产上螺旋藻的培养方式是_A___。
光合细菌的培养操作教程
光合细菌的培养操作教程 1、配制光合细菌菌液： （1）配制比例： 光合细菌培养基、清水、菌种的配制比例为：0.5:80:20。 示例1：0.5公斤（500克）培养基+ 80升水+ 20升菌种（接种），配成100升的光合细菌菌液。 示例2（少量培养）：0.05公斤（50克）培养基+ 8升水+ 2升菌种（接种），配成10升的光合细菌菌液。 （2）配制方法： 下面以配制100升光合细菌菌液为例来说明配制方法： ①溶化培养基：取培养基0.5公斤（500克），用少量水溶化（可以用50℃左右的热水，溶化培养基的速度会快些），搅拌均匀，然后倒入一个容量在100升以上的容器中； ②配制培养液：往容器中加水到80升，80升培养液配制完成； ③接种：再加入20升菌种，并搅匀，100升菌液配制完成；
④装瓶（袋）：将配制好的菌液装入干净的透明容器（瓶、壶、塑料袋等），容器中留5%的空气在里面，密封待用。 菌液配制说明及注意事项： a. 以上各成分的数量是以配制100升菌液为例来说明配制方法的，如配制其他数量的光合细菌菌液，各成分数量按比例增减即可; b. 培养用水源的选择： 一般含杂菌较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水都可以，如井水、河水、自来水、蒸馏水和纯净水等，甚至干净的池塘水也行。 从经济、实用的角度考虑，地下水（如井水）含杂菌低，是最理想的培养水源； 清洁的地表水也可使用,如河水、池塘水等； 含氯量较高的自来水应敞口放置两天或调PH值至偏碱后使用； 蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种； c. 培养用容器的选择： 必须为透明容器并清洗干净，透明的容器可让光合细菌最大限度的吸收到充分的光线，少量培养如饮料瓶、食用油壶等，规模培养如透明塑料桶、透明塑料袋等。 d. 菌种的接种量： 一般接种量为20-50%，即培养液与菌种的比例为4:1（4升培养液加1升菌种）到1:1（1升培养液加1升菌种），接种量最低不能低于20%。 接种量越高，光合细菌菌种越容易形成优势菌群而抑制其他杂菌生长，培养速度快，且培养成熟的浓度更高。但产出效率也越低，光合细菌易老化。 接种量越低，培养产出效率越高，但如果低于20%的接种量，光合细菌不容易形成优势菌群，培养初期易染杂菌，培养的成功率低。 我们推荐的接种量为20%，如果用太阳光培养，推荐的接种量为25-40%。
光合细菌及其在农业中的应用
光合细菌及其在农业中的应用 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下，进行不产氧的光合作用。 根据“伯杰氏细菌鉴定手册”（第9版），不产氧型的光合细菌可分成以下6类，27属：●着色菌科（Chromatiaceae）（又称红色硫细菌、紫硫细菌），含9个属； ●外硫红螺菌科（Ectothiorhodospiraceae），含1属； ●红色非硫细菌（Purple nonsulfur bacteria），即原红螺菌科（Rhodospirillaceae），含6属； ●绿硫细菌（Green sulfur bacteria）即原绿菌科（Chlorobiaceae），含5个属； ●多细胞绿丝菌（Multicellular filamentous green bacteria），即原绿丝菌科 （Chloroflexaceae），含4属； ●盐杆菌（Heliobacterium），含2个属。 由于光合细菌在物质转化循环中的重要作用，以及菌体含有的丰富营养，使这类古老的微生物成为近二、三十年来人们开发利用的一大热点。大量的研究成果表明，光合细菌在农业、水产、污染治理与资源化等方面，有着巨大的实用价值，应用前景十分广阔。以下就光合细菌的主要性状、在农业等领域的应用、方法、作用原理等，作一简要介绍。 一、光合细菌的主要特征 1．光合细菌的形态学特征 ⑴PSB培养物的颜色 PSB因含有光合色素（细菌叶绿素、类胡萝卜素）而呈现一定颜色。除少数例外，一般说来，红螺菌科和着色菌科的菌呈红、粉红、橙黄、紫色或茶褐色；绿菌科和绿色丝状菌科的菌呈绿色。 红螺菌科和着色菌科的的培养物之所以呈现有黄色到紫色的各种鲜艳的颜色，这是由类胡萝卜素高浓度蓄积并掩盖了细菌叶绿素的色调而形成的。少数类胡萝卜素含量少的菌，或缺乏类胡萝卜素的变异株，便会显示细菌叶绿素的蓝绿色。 每个菌种各有自己的颜色，但由于培养条件的不同，其颜色会发生变化。例如，球形红菌（Rhodobacter sphaeroides）和荚膜红菌（Rhodobacter capsulatus）的厌氧液体培养物呈茶褐色，半好氧培养物呈红色。这是由于氧的存在使细胞内类胡萝卜素组成发生变化的缘故。 ⑵PSB细胞形状与大小 PSB菌体形态极其多样，有球状、卵状、杆状、弧状、螺旋状、环状、半环状、丝状，以及链状、锯齿状、格子状、网篮状等等。不仅不同的菌种有多种多样的形态，就是同一种类也往往由于培养条件和生长阶段等不同而使细胞形态发生变化。尽管如此，许多菌种在细胞形态上仍然是各具特征的。如球形红菌（Rhodobacter sphaeroides）的细胞为球状；红微菌属（Rhodomicrobium）细菌的细胞丝相连；绿突菌属（Prosthecochloris）的细胞为具突起之球菌等等。 细胞的大小因种类不同而变化很大。如Rhodocyclus gelatinosus在0.4~0.5*1~2微米，Chromatium okenii的细胞则大得多，大体在4.5~6.0*3~10微米。一般说来，红螺菌科细胞的大小为0.6~0.7*1~10微米；着色菌科细胞大小为1~3*2~15微米；绿菌科细胞大小为 0.7~1*1~2微米。 ⑶光合作用器官 PSB的细胞内存在着载色体（chromatopheres）或绿菌泡囊（chlorobium vesicles），光合色素是它们的基本组成部分。它们是光合细菌吸收光能并转变成化能，即进行光合磷酸化作用的所在部位。 载色体由细胞膜陷入细胞质内而形成，与细胞膜成连续的状态。在红螺菌科和着色菌科
光合细菌不同属类的分离培养
光合细菌的分离培养 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。 1光合细菌的富集培养的一般方法 ①分离源 光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。 ②光合细菌富集培养基 用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。 基本培养基I： KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7 根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋
光合细菌培养参数的研究
光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、6.5一7.0、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合1.1菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农1.2实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺,E~mail:”y402@https://www.360docs.net/doc/ee10386464.html,南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting
光合细菌的培养及应用技术
光合细菌的培养及应用技术 1 引言 光合细菌（photosynthetic bacteria,简称PSB）是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源，进行不放氧光合作用的细菌，广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中，依据《伯杰细菌鉴定手册》（第九版）可分为6 个类群，27 个属。不产氧光合作用的红螺菌目分为紫细菌（purple bacteria）、绿细菌（Greenbacteria）和日光杆菌属（Heliobacteria）、红色杆菌属（Erybrobacter）。其中紫细菌中包含有红螺菌科（Rhodolspirillaceae）、着色菌科（Chromatiaceae）、外硫红螺菌科（Eceothiorhodospiraceae），包含16属49种。其中在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。PSB 均为革兰氏阴性细菌，一般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形，也可随培养条件和生长阶段而改变，大部分单个存在。PSB的一般菌体组成及营养成分见表1[2].表1 光合细菌菌体的组成与小球藻等比较Tab. 1 Components comparison betweenphotosynthetic bacteria and ChlorellaP S B 含有较高的优良蛋白质，粗蛋白含量为 65.45%，含有17 种氨基酸而且消化率较高；粗脂肪约7%；可溶性糖类约20%；粗纤维约3%[1]；维生素B12 含量是酵母的200 倍、小球藻的4 倍[2]，生物素含量也比较丰富；菌体的脂类成份含有大量的叶绿素、类胡萝卜素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中分离出80 种以上的类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜素对养殖生物的健康生长，增强对疾病的抵抗力有很大的益处。辅酶Q4 是与生命活动有重大关系的生理活性物质，PSB 中的含量特高，是酵母的13 倍。以上特点决定了PSB 可做为畜禽、鱼虾的饲料。但PSB 中缺乏ω3 系列20 碳以上的高度不饱和脂肪酸，单独作为仔鱼的初期饵料时，需与其它富含高度不饱和脂肪酸的饵料同时使用。 2 光合细菌的培养 水产养殖市场对PSB 活体菌种的需求缺口很大，为了满足水产养殖对PSB 活体菌种的需求，PSB的生产方法有很多，但是到目前为止，还没有进行产业化生产PSB的报道。冯云等[3]用50L的塑料桶来厌氧培养PSB，使培养密度达到2.1 × 109 个/ml；杨绍斌[4]在塑料大棚内建大小2000～5000L 的水池使其厌氧发酵富集扩大培养，培养液中含PSB 活菌数可达5 × 106 个／毫升；鄂春宇[5]用塑料薄膜袋培养PSB，培养密度达到2.5～3×105个/ml,12个月生产50 多吨，但是在PSB的密度检测时，很容易染菌。由中科院开发的PSB 大规模生产工艺，产品含菌量达到5 × 1010个／毫升，保质期3 个月以上，并可根据客户要求，设计和建设不同规模的生产线[6]。 2.1 菌种 菌种可从采集的池塘底泥或海水中重复富集、分离纯化获得.若用保存下来的菌种，在培养前必须提纯复壮，才能有效地进行扩大培养。光合细菌的生产需要采用优良菌种，要求菌种活性高，菌液中菌体分布均匀、无下沉现象，目前养殖中使用的PSB多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株[7]。 2.2 培养基及培养条件 PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCL2 0.3g，MgSO4·7H2O0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25℃～30℃最佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5 最佳。
光合细菌培养基
红螺菌培养基： 1、富集培养基： 经典的紫色非硫细菌（红螺菌）的富集培养基的配方为：NH4Cl：0.1g；NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O：0.02g；NaCl：0.05～0.2g；生长因子1ml，蒸馏水97ml，微量元素溶液 1ml，pH为7.0。 其中，①5％NaHCO 3 水溶液，过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。②生长因子：维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg，以上药品溶于蒸馏水中，定容至10ml，然后过滤除菌。③ 微量元素溶液：FeCl 3·6H 2 O ：5mg；CuS0 4 ·5H 2 O：0.05mg；H 3 BO 4 lmg； MnCl 2·4H 2 O：0.05mg；ZnSO 4 ·7H 2 O：1mg；Co(NO 3 ) 2 ·6H 2 O： 0.5mg。以上药 品分别溶于蒸馏水中，并定容至1000m1。 除①、②、③外，各成分溶解后100 Pa灭菌20min。然后分别加入①、 ②、③，如加入0.1％～0.3％的蛋白胨则能促进该菌生长。 2、分离培养基： 传统的红螺科分离培养基的配方为：NH 4Cl：0.1g； MgCl 2 ：0.02g；酵 母膏：0.01g； K 2HPO 4 ：0.05g； NaCl： 0.2g；琼脂2g，蒸馏水90ml。 100Pa灭菌20min。 灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO 3 ，再无菌加入过 滤除菌的0.1g或0.1mlNa 2S·9H 2 O（降低培养基的氧化还原值），最后再加 入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用过滤灭菌的0.1mol/H 3PO 3 调pH至7.0。 摘自百度知道。 筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。 参考文献：固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究* 黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎海洋湖沼通报 基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇2ml，用0.1N H3PO4调至pH7.0。 划线培养基:采用固体琼脂培养基，即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。 以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0，经121℃灭菌30分钟，NaHCO3过滤除 菌后加入。培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在3000uE.m-2s-1培养。光合细菌是一种兼性嫌气细菌，需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态，一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。具体方法:将混合菌装入10ml试管中，加入培养
光合细菌的优化培养和生长动力学
光合细菌的优化培养和生长动力学 摘要:对光合细菌(PSB)培养的最适温度、光照、pH、溶解氧等条件进行了较系统的研究.通过正交试验,得出PSB生长的 最适条件为光照度3000 lx、微好氧、30℃、pH 7.0.在此基础上,建立了PSB在模拟味精废水条件下以乙酸钠为底物的生长 动力学模型,其参数为:饱和常数Ks=0.20-0.24 g·L-1,最大比生长速率Lmax=0.038-0.044 h-1,试验表明该模型能够较 好地描述PSB的生长情况. 关键词:光合细菌;正交试验;优化培养;动力学模型 Optimal cultivation and growth kinetics of photosynthetic bacteria Abstract: This paper gives a detail study on the optimal growth conditions of temperature, illumination, pH and dissolved oxygen for photosynthetic bacteria. With the orthogonal experiment, the optimal culture conditions for the growth of photosynthetic bacteria were determined: illumination intensity 3000 lx, faintly aerobic, 30℃, pH 7.0. Under the optimal cultivation and the simulated monosodium-glutmate wastewater conditions, a kinetics model on the growth of photosynthetic bacteria in the substrate of CH3COONa was set up. The parameters in the model are as follows: the saturation constantKs0. 20-0.24 g·L-1and the maximum specific growth rateLmax0.038-0.044 h-1. The experiment results showed that this model could describe the growth data of PSB very well. Key words: photosynthetic bacteria; orthogonal experiment; optimal cultivation; kinetics model 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB)是自然界中广泛存在,比较古老的细菌类群,是一大类能 进行光合作用的原核生物的总称[1].近年来,随着人们对PSB形态、结构、生理生化以及生态等特性研究 和认识的不断深入,发现PSB,特别是其中的红螺菌科能利用多种硫化物或有机物作为其光合作用的供氢 体和碳源,在厌氧光照、好氧光照、甚至好氧黑暗环境中都能很好地增殖,且能耐受很高盐度和浓度的有机 物,具有很强的分解、去除有机物的能力,显示其在高浓度、高盐度有机废水处理中的独特优势和广阔应用 前景,成为废水处理技术研究的一个新方向[2].同时,因其菌体富含蛋白质和胡萝卜素,可作为单细胞蛋白 应用于种植业、养畜业和渔业以及作为各种食用色素[3-5].PSB的上述特点,吸引着人们对其进行发掘、研 究和商品化生产.研究PSB的优化培养条件和生长动力学,对其规模化生产和资源化开发利用