SOP-P-IF-002-03 菌种岗位标准操作规程

深圳市蓝安琪生物工程股份有限公司

菌种岗位标准操作规程

1.目的

建立菌种岗位标准操作规程。

2.范围

菌种岗位种子液的制备操作。

3.职责

菌种岗位制备操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程的实施负责。

4.规程

4.1.操作前准备：

4.4.1.根据生产指令开出领料单。领取时，核对物料名称、数量、批号、有效期等，然后将其送到传递窗。

4.1.2.岗位生产操作人员按照《进出十万级洁净区更衣标准操作规程》进入操作间。

4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性，设备、容器、工具、管道、室内

卫生是否有清洁合格证，清洁合格证是否在有效期内，如不合格按其清洁标

准操作规程重新清洁。

4.2种子液的制备

4.2.1种子液培养基的配制和灭菌

4.2.1.1LB琼脂培养基按比例配制（100ml）

蛋白胨 10g/L

酵母提取物 5g/L

氯化钠 10g/L

纯化水 100ml

调PH至6.8-7.2

4.2.1.2培养基灭菌：按《YXQ-SG46-280SA型手提式灭菌锅标准操作规程》灭菌，

灭菌温度121，灭菌时间30min。

4.2.2菌种活化

领取工作种子批菌种管，室温融化，用接种环在LB培养基平板上划线，按《生化培养箱标准操作规程》放置于30℃恒温箱倒置培养过夜。

4．2.3.一级种子液培养基的配制和灭菌

4.2.3.1一级种子液培养基按比例配制

蛋白胨 10g/l

酵母提取物 5g/L

氯化钠 10 g/L

调PH至6.8-7.2

4.2.3.2一级种子液培养基的灭菌：：按《YXQ-SG46-280SA型手提式灭菌锅标准操作规程》灭菌，灭菌温度121，灭菌时间30min。

4.2.4 一级种子液制备

将活化后的单个菌落用接种环从平板上刮取，接种在装有100ml一级种子培养基的三角瓶中，按《SHZ-82型恒温振荡器标准操作规程》放置入30℃、150rpm恒温空气摇床培养约12小时，培养物取5ml转接到含300ml LB培养基三角瓶中，共4瓶。30℃、150rpm培养约8小时。

4.2.

5.二级种子液培养基的配制和灭菌

4.2.

5.1二级种子液培养基按比例配制（10L）

蛋白胨 16g/l

酵母提取物 10g/l

氯化钠 5g/l

调至PH至6.8-7.2