LB培养基的制备

LB培养基是一种近年来用于培养基因工程受体菌（大肠杆菌）的常用培养基。LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基的配方如下：

酵母提取物 5g

蛋白胨 10g

NaCl 5g

琼脂 15～20g

水 1000mL

pH 7.4～7.6

三、器材

酵母提取物，蛋白胨， NaCl，琼脂；

1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤

1．称量

按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。

3．调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH

值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．分装

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

5．加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

6．包扎

加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

7．灭菌

将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

8．搁置斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

9．无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，以检查灭菌是否彻底。

LB培养基怎样配制

LB培养基怎样配制 LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基配方(每升) 酵母提取物 5g 胰化蛋白胨 10g 氯化钠 10g NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。 LB固体培养基 LB培养基 1L

琼脂粉 15g NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。 LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。 LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。 LB培养基配制方法配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH 至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。 1.LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板1。配制：100mlLB 培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。配400ml 的话成分按比例减少就行了，pH还是要按规定的。

lb培养基配方与tb培养基配方

lb培养基配方与tb培养基配方 LB培养基和TB培养基这两种培养基名字有点像，它们之间的区别在哪呢?首先是用途上，LB经常用来预培养菌种，而TB培养基则用于慢病毒载体等多种实验中，另外，两者的配方也是大有不同的。一起了解一下吧。 TB培养基的配方去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g 酵母提取物24 g 甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方 10g NaCl 10g 蛋白胨5g酵母粉加去离子水至1L 调PH 7.0-7.2 分装灭菌即可用之配方区别： TB培养基，Terrific肉汤(Terrific Broth，TB) 去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g，酵母提取物24 g，甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方如下：胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L

常用细菌培养基配方

常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。常用培养基 LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

LB培养基中所用抗生素终浓度

抗生素的贮液和工作液浓度 ①以水为溶剂的抗生素贮存液应用 0.22 μm滤器过滤除菌； ②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌； ③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。注意：镁离子是四环素的拮抗剂。对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度氨苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒）羧苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒）氯霉素贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml（严紧型质粒）170 μg/ml（松弛型质粒）卡那霉素贮液浓度10 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）链霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）四环素贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒）质粒类型： DNA construct

Plasmids pUC vectors pBluescript? vectors pGEM? vectors pTZ vectorsOrigin of Replication Copy number Classification pMB1* ColE1 pMB1* pMB1*500–700 300–500 300–400 >1000high copy high copy high copy high copy pBR322 and derivatives pMB1* pACYC and derivativesp15A pSC101 and derivatives pSC101 Cosmids SuperCos pWE15pMB1*

lb培养基的配置实验方案

实验LB培养基的配置一、实验目的明确培养基配置原理通过对LB培养基的配置，掌握配置培养的一般方法二、实验原理 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基的配方如下：酵母提取物5g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15～20g 水1000mL pH 7.4～7.6 三、实验设备试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，

麻绳，纱布等。四、实验试剂酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH，1mol/L HCl；五、操作步骤 1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3．调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH 偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl 进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

LB培养液的配制

1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。 2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。三、灭菌和消毒 1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。 3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。 4．比较消毒和灭菌： 5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落了。

常用培养基配制

常用培养基

参考文献 1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液 10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS) /升终1 X浓度 NaCl 80.0 g 137 mM KCl 2.0 g 2.7 mM Na2HPO414.4 g 100 mM KH2PO4 2.7 g 2 mM H2O 至800 ml HCl 至pH 7.4 H2O 至1升 20X SSC /升终1 X浓度 NaCl 175.3 g 150 mM Na3citrate x H2O 88.2 g 15 mM H2O 至800 ml 1M HCl调节pH值至7.0

LB培养基

LB培养基：10 g牛肉膏蛋白胨，5 g酵母浸膏，2 g氯化钠(NaCl)，0.1 g 葡萄糖(C6H12O6)，5 g乳酸钠(C3H5NaO3)溶于1 L水，自然pH值；固体培养基中加入2.5%的琼脂。取制得的土壤样品用于分离筛选重金属抗性菌株，称取10 g晒干的土壤样品于150 ml已灭菌的锥形瓶中，加入10 ml灭菌培养基，于30 ℃培养箱中培养4 d，在火焰旁放入装有100mL无菌水的锥形瓶中，震荡10min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成稀释度为10-1的土壤悬液。另取6支装有9ml无菌水试管，用特种铅笔编写10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，放在试管架上。让制好的10-1土壤悬液静止0.5min，取1支无菌移液管，从移液管包装纸上半段（近吸管口）撕口，将包装纸分成上下两段，去上段包装纸，左手持锥形瓶底，以右手掌及小指、无名指夹住锥形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞（棉塞夹在手上，不得放在桌面上），去下段包装纸，将移液管吸液端伸进锥形瓶内，吸取1ml土壤悬液（常用嘴巴吸取，也可用定量移液器或自动移液器吸取），右手将棉塞插回锥形瓶上，左手放下锥形瓶，换持编号为10-2的无菌水试管，在火焰旁拔出棉塞（试管塞），将移液管伸进无菌水试管内，放入土壤悬液，并在试管内反复吹吸3次，使之充分混匀，制成10-2土壤稀释液，取出移液管，插回棉塞（试管盖）。接着换一支无菌移液管，按照前面的方法从编号为10-2的试管中吸取1mL稀释液，加入编号为10-3的无菌水试管中，混匀后制成10-3土壤稀释液。继续上述操作，一次制成10-4、10-5、10-6土壤稀释液。本次实验共取样6份，随机抽取两份土样，按照上述方法制备土壤稀释液Ⅰ组和Ⅱ组，待下面实验备用。用移液枪从第Ⅰ组和第Ⅱ组的10-4、10-5和10-6稀释液中分别取0.1 ml 接种于含有重金属的LB固体培养基上(0，0.005,0.01,0.02,0.05,0.1g/L)，编号分别为A、B、C、D、E、F，轻轻转动平板，将菌液用三角棒涂布于培养基上，将平板倒置于30℃培养箱中培养5 d，观察菌落的形态，采用常规平板划线法分离纯化，并用相机拍照。重金属浓度逐级加大为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0g/L)培养，选取抗性最高的菌株。扩大培养将活化后的斜面菌种用5ml无菌水洗脱于装有200mlLB液体培养基的锥形瓶中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）预培养24h。胁迫培养配制LB液体培养基，分别添加PbCl2（A.R），CdCl2（A.R），, HgI2（A.R），，使Pb2+、Cr6+、Hg2+、浓度梯度为0、5、10、20、40、80和100mg.L-1 (以纯Pb2+、Cr6+和Hg2+计)，另以不含任何重金属离子的LB液体培养基作对照，将预培养的菌液按10%的接种量分别接种于上述培养基中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）摇瓶培养。生长曲线测定培养过程中每隔2h用紫外光栅分光光度计，于600 nm 波长测其光密度，绘制不同微生物在不同浓度重金属胁迫后的生长曲线。

LB培养基配方

LB培养基配方 2007年03月22日下午07:49 成分表(1L溶液中)： Tryptone(胰蛋白胨)：10g, Y east Extract(酵母提取物)：5g, NaCl(氯化钠)：10g 若配置固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)。 LB培养基液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在 15psi高压下蒸汽灭菌20min. LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础. LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并

LB培养基

LB培养基 LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去液态LB培养基离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g LB Medium (LB 培养基) Yeast extact (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 10g NaCl 10g Agar (琼脂) 1-2% Distilled water (蒸馏水) 1000ml pH 7.0 适用范围：大肠埃希氏菌（大肠杆菌）摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min. LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的

无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础. LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。扩展阅读： 1 https://www.360docs.net/doc/f218641019.html,/ 开放分类：

大肠杆菌培养基配制及培养方法

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大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。二、培养基制备 LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水 1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。 3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。 6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。四、接种大肠杆菌 1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。 2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。 3）因实验一般都要求挑取单菌落，故涂平板适应考虑冻存液内细菌数量，若菌量过大应适当稀释。一般方法一获得单菌落的可能性比较大。涂平板应在酒精灯附近进行，若冻存液涂完的平板应倒置，防止平皿盖上产生水蒸气。五、大肠杆菌的培养

LB培养基

一、基本原理： LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。碳源和能源：酵母提取物，氮源：磷酸盐、蛋白胨，无机盐：NaCl。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基的配方如下：酵母提取物5g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15～20g、水1000mL、pH 7.4～7.6 二、实验用品试剂：酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/L NaOH，1mol/L HCl；仪器：试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，牛角匙，pH试纸（pH 5.5～9.0），培养基分装器，天平，高压蒸汽灭菌锅，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。三、实验步骤 1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3．调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免

LB培养基和MS培养基的比较

LB培养基和MS培养基的比较疑难问题：在选修１教材中出现两种培养基，有必要整理它们之间的不同之处，以免在回答问题时混淆。一、LB培养基 LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，根据其发明人贝尔塔尼（Giuseppe Bertani）的说法，这个名字来源于英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。 1．用途一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求，可分为液体培养基和固体培养基。 2．LB培养基的配方胰蛋白胨（Tryptone)）10g/L 国产的胰蛋白胨一般是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化而得到，与进口的成分和工艺不同。进口的胰蛋白胨以酪蛋白为基础进行消化，实为胰酪蛋白胨；而国产的是以肉、骨为原料。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定酵母提取物（YE）5g/L 采用以蛋白质含量丰富的食用酵母为原料，采用自溶、酶解、分离、浓缩等现代生物高新技术，将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解后精制而成的一种棕黄色可溶性膏状或浅黄色粉状纯天然制品。主要成分为多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族维生素及微量元素。氯化钠（NaCl）10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH，使其达到7.4，该pH适合目前使用最广的原核表达菌种大肠杆菌（E.coli）的生长。二、MS培养基 Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。 1．用途可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。 MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。 2．MS固体培养基的配方（单位：mg/L）由大量元素、微量元素和有机成分组成，配方如下表。也可将大量元素、微量元素和有机成分分别配成浓度为配方的5-10倍，用时稀释。

LB培养基

LB培养基 LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。成分表(1L溶液中)： Tryptone(胰蛋白胨)：10g Yeast Extract(酵母提取物)：5g NaCl(氯化钠)：10g 若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。若配制低盐培养基，则全部减半。液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种 E.coli的生长）。用去离子水定容至1L。

121℃高压灭菌20min。高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。瓶盖用封口膜封好，4℃保存。固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。

生物学实验 LB培养基的配置

实验6 LB培养基的配置一、实验目的明确培养基配置原理通过对LB培养基的配置，掌握配置培养的一般方法二、实验原理 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基的配方如下：酵母提取物5g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15～20g 水1000mL pH 7.4～7.6 三、实验设备试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH 试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、实验试剂酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH，1mol/L HCl；五、操作步骤 1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3．调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。 4．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 (1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 (2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 (3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 5．加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 6．包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 7．灭菌将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

查氏、TBS、LB培养基等培养基的制备

1. 查氏培养基--Czapek–Dox Medium 蔗糖 30 g，NaNO3 3 g，K2HPO4 1 g， KCl 0.5 g， MgSO4· 7H2O 0.5 g，FeSO4 · 7H2O 0.01 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至7.2-7.4。121℃灭菌 20 min，冷却后备用。液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。成分: 硝酸钠3g 磷酸氢二钾1g 硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g 氯化钾0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂20g 蒸馏水1000mL 制法: 加热溶解，分装后121℃灭菌20min。用途: 青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。 2. TSB 培养基--牛肉膏蛋白胨培养基： (牛肉膏 5g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, H2O 1000mL, pH 调至 7.2 ~7.4。) 胰蛋白胨 15 g，大豆蛋白胨 5 g，NaCl 5 g，牛肉膏 5 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至 7.2-7.4。121℃灭菌 20 min，冷却后备用。液液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。 3. LB 培养基---细菌基础培养基 (Tryptone 10g, Yeast extract 5g, NaCl 10g, 水1000mL, pH 调至7.2 ~7.4。 ) 胰蛋白胨 10 g，酵母提取物 5 g，NaCl 5 g，琼脂 15 g，水 1000 mL，并用氢氧化钠调节 pH 至 7.2-7.4。121℃灭菌 20 min，冷却后备用。液体培养基不加琼脂，用于菌种的扩大培养。

LB液体和固体培养基的配制及抗生素浓度

LB培养基配方液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.（1.05kg/cm3） LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础. LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。抗生素终浓度Amp 100ug/ml,Kan 50ug/ml.

LB培养基怎样配制

L B培养基怎样配制 Prepared on 24 November 2020

LB培养基怎样配制 LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基配方(每升) 酵母提取物 5g 胰化蛋白胨 10g 氯化钠 10g NaOH调pH至，121℃、20min高压灭菌。 LB固体培养基 LB培养基 1L 琼脂粉 15g

PDA LB培养基

PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基是分离菌物和细菌的常用培养基，其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），15磅蒸气（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。小技巧： 1、做PDA培养基用土豆应去皮，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。 PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。分装于试管按物理性状划分：固体培养基按培养基成分划分：半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然PH 配制步骤其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。其他事项 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH 试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性