pGL4.27哺乳动物表达载体说明
pGL4.27
编号 载体名称
北京华越洋生物VECT6095 pGL4.27
pGL4.27载体基本信息
载体名称: pGL4.27 [luc2P/minP/Hygro]
质粒类型: 哺乳细胞表达；信号通路报告载体高拷贝/低拷贝: --
启动子: --
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 6010 bp
5' 测序引物及序列: --
3' 测序引物及序列: --
载体标签: --
载体抗性: 氨苄青霉素Ampicillin
筛选标记: 潮霉素Hygromycin
备注: --
稳定性: --
组成型: --
病毒/非病毒: 非病毒
pGL4.27载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGL4.27载体序列
ORIGIN
1 GGCCTAACTG GCCGGTACCT GAGCTCGCTA GCCTCGAGGA TATCAAGATC TGGCCTCGGC 61 GGCCAAGCTT AGACACTAGA GGGTATATAA TGGAAGCTCG ACTTCCAGCT TGGCAATCCG 121 GTACTGTTGG TAAAGCCACC ATGGAAGATG CCAAAAACAT TAAGAAGGGC CCAGCGCCAT 181 TCTACCCACT CGAAGACGGG ACCGCCGGCG AGCAGCTGCA CAAAGCCATG AAGCGCTACG 241 CCCTGGTGCC CGGCACCATC GCCTTTACCG ACGCACATAT CGAGGTGGAC ATTACCTACG 301 CCGAGTACTT CGAGATGAGC GTTCGGCTGG CAGAAGCTAT GAAGCGCTAT GGGCTGAATA 361 CAAACCATCG GATCGTGGTG TGCAGCGAGA ATAGCTTGCA GTTCTTCATG CCCGTGTTGG 421 GTGCCCTGTT CATCGGTGTG GCTGTGGCCC CAGCTAACGA CATCTACAAC GAGCGCGAGC 481 TGCTGAACAG CATGGGCATC AGCCAGCCCA CCGTCGTATT CGTGAGCAAG AAAGGGCTGC 541 AAAAGATCCT CAACGTGCAA AAGAAGCTAC CGATCATACA AAAGATCATC ATCATGGATA 601 GCAAGACCGA CTACCAGGGC TTCCAAAGCA TGTACACCTT CGTGACTTCC CATTTGCCAC 661 CCGGCTTCAA CGAGTACGAC TTCGTGCCCG AGAGCTTCGA CCGGGACAAA ACCATCGCCC 721 TGATCATGAA CAGTAGTGGC AGTACCGGAT TGCCCAAGGG CGTAGCCCTA CCGCACCGCA 781 CCGCTTGTGT CCGATTCAGT CATGCCCGCG ACCCCATCTT CGGCAACCAG ATCATCCCCG
841 ACACCGCTAT CCTCAGCGTG GTGCCATTTC ACCACGGCTT CGGCATGTTC ACCACGCTGG 901 GCTACTTGAT CTGCGGCTTT CGGGTCGTGC TCATGTACCG CTTCGAGGAG GAGCTATTCT 961 TGCGCAGCTT GCAAGACTAT AAGATTCAAT CTGCCCTGCT GGTGCCCACA CTATTTAGCT 1021 TCTTCGCTAA GAGCACTCTC ATCGACAAGT ACGACCTAAG CAACTTGCAC GAGATCGCCA 1081 GCGGCGGGGC GCCGCTCAGC AAGGAGGTAG GTGAGGCCGT GGCCAAACGC TTCCACCTAC 1141 CAGGCATCCG CCAGGGCTAC GGCCTGACAG AAACAACCAG CGCCATTCTG ATCACCCCCG 1201 AAGGGGACGA CAAGCCTGGC GCAGTAGGCA AGGTGGTGCC CTTCTTCGAG GCTAAGGTGG 1261 TGGACTTGGA CACCGGTAAG ACACTGGGTG TGAACCAGCG CGGCGAGCTG TGCGTCCGTG 1321 GCCCCATGAT CATGAGCGGC TACGTTAACA ACCCCGAGGC TACAAACGCT CTCATCGACA 1381 AGGACGGCTG GCTGCACAGC GGCGACATCG CCTACTGGGA CGAGGACGAG CACTTCTTCA 1441 TCGTGGACCG GCTGAAGAGC CTGATCAAAT ACAAGGGCTA CCAGGTAGCC CCAGCCGAAC 1501 TGGAGAGCAT CCTGCTGCAA CACCCCAACA TCTTCGACGC CGGGGTCGCC GGCCTGCCCG 1561 ACGACGATGC CGGCGAGCTG CCCGCCGCAG TCGTCGTGCT GGAACACGGT AAAACCATGA 1621 CCGAGAAGGA GATCGTGGAC TATGTGGCCA GCCAGGTTAC AACCGCCAAG AAGCTGCGCG 1681 GTGGTGTTGT GTTCGTGGAC GAGGTGCCTA AAGGACTGAC CGGCAAGTTG GACGCCCGCA 1741 AGATCCGCGA GATTCTCATT AAGGCCAAGA AGGGCGGCAA GATCGCCGTG AATTCTCACG 1801 GCTTCCCTCC CGAGGTGGAG GAGCAGGCCG CCGGCACCCT GCCCATGAGC TGCGCCCAGG 1861 AGAGCGGCAT GGATAGACAC CCTGCTGCTT GCGCCAGCGC CAGGATCAAC GTCTAAGGCC 1921 GCGACTCTAG AGTCGGGGCG GCCGGCCGCT TCGAGCAGAC ATGATAAGAT ACATTGATGA 1981 GTTTGGACAA ACCACAACTA GAATGCAGTG AAAAAAATGC TTTATTTGTG AAATTTGTGA 2041 TGCTATTGCT TTATTTGTAA CCATTATAAG CTGCAATAAA CAAGTTAACA ACAACAATTG 2101 CATTCATTTT ATGTTTCAGG TTCAGGGGGA GGTGTGGGAG GTTTTTTAAA GCAAGTAAAA 2161 CCTCTACAAA TGTGGTAAAA TCGATAAGGA TCCGTTTGCG TATTGGGCGC TCTTCCGCTG 2221 ATCTGCGCAG CACCATGGCC TGAAATAACC TCTGAAAGAG GAACTTGGTT AGCTACCTTC 2281 TGAGGCGGAA AGAACCAGCT GTGGAATGTG TGTCAGTTAG GGTGTGGAAA GTCCCCAGGC 2341 TCCCCAGCAG GCAGAAGTAT GCAAAGCATG CATCTCAATT AGTCAGCAAC CAGGTGTGGA 2401 AAGTCCCCAG GCTCCCCAGC AGGCAGAAGT ATGCAAAGCA TGCATCTCAA TTAGTCAGCA 2461 ACCATAGTCC CGCCCCTAAC TCCGCCCATC CCGCCCCTAA CTCCGCCCAG TTCCGCCCAT 2521 TCTCCGCCCC ATGGCTGACT AATTTTTTTT ATTTATGCAG AGGCCGAGGC CGCCTCTGCC 2581 TCTGAGCTAT TCCAGAAGTA GTGAGGAGGC TTTTTTGGAG GCCTAGGCTT TTGCAAAAAG 2641 CTCGATTCTT CTGACACTAG CGCCACCATG AAGAAGCCCG AACTCACCGC TACCAGCGTT 2701 GAAAAATTTC TCATCGAGAA GTTCGACAGT GTGAGCGACC TGATGCAGTT GTCGGAGGGC 2761 GAAGAGAGCC GAGCCTTCAG CTTCGATGTC GGCGGACGCG GCTATGTACT GCGGGTGAAT 2821 AGCTGCGCTG ATGGCTTCTA CAAAGACCGC TACGTGTACC GCCACTTCGC CAGCGCTGCA 2881 CTACCCATCC CCGAAGTGTT GGACATCGGC GAGTTCAGCG AGAGCCTGAC ATACTGCATC 2941 AGTAGACGCG CCCAAGGCGT TACTCTCCAA GACCTCCCCG AAACAGAGCT GCCTGCTGTG 3001 TTACAGCCTG TCGCCGAAGC TATGGATGCT ATTGCCGCCG CCGACCTCAG TCAAACCAGC 3061 GGCTTCGGCC CATTCGGGCC CCAAGGCATC GGCCAGTACA CAACCTGGCG GGATTTCATT 3121 TGCGCCATTG CTGATCCCCA TGTCTACCAC TGGCAGACCG TGATGGACGA CACCGTGTCC 3181 GCCAGCGTAG CTCAAGCCCT GGACGAACTG ATGCTGTGGG CCGAAGACTG TCCCGAGGTG 3241 CGCCACCTCG TCCATGCCGA CTTCGGCAGC AACAACGTCC TGACCGACAA CGGCCGCATC 3301 ACCGCCGTAA TCGACTGGTC CGAAGCTATG TTCGGGGACA GTCAGTACGA GGTGGCCAAC 3361 ATCTTCTTCT GGCGGCCCTG GCTGGCTTGC ATGGAGCAGC AGACTCGCTA CTTCGAGCGC 3421 CGGCATCCCG AGCTGGCCGG CAGCCCTCGT CTGCGAGCCT ACATGCTGCG CATCGGCCTG
3481 GATCAGCTCT ACCAGAGCCT CGTGGACGGC AACTTCGACG ATGCTGCCTG GGCTCAAGGC 3541 CGCTGCGATG CCATCGTCCG CAGCGGGGCC GGCACCGTCG GTCGCACACA AATCGCTCGC 3601 CGGAGCGCAG CCGTATGGAC CGACGGCTGC GTCGAGGTGC TGGCCGACAG CGGCAACCGC 3661 CGGCCCAGTA CACGACCGCG CGCTAAGGAG GTAGGTCGAG TTTAAACTCT AGAACCGGTC 3721 ATGGCCGCAA TAAAATATCT TTATTTTCAT TACATCTGTG TGTTGGTTTT TTGTGTGTTC 3781 GAACTAGATG CTGTCGACCG ATGCCCTTGA GAGCCTTCAA CCCAGTCAGC TCCTTCCGGT 3841 GGGCGCGGGG CATGACTATC GTCGCCGCAC TTATGACTGT CTTCTTTATC ATGCAACTCG 3901 TAGGACAGGT GCCGGCAGCG CTCTTCCGCT TCCTCGCTCA CTGACTCGCT GCGCTCGGTC 3961 GTTCGGCTGC GGCGAGCGGT ATCAGCTCAC TCAAAGGCGG TAATACGGTT ATCCACAGAA 4021 TCAGGGGATA ACGCAGGAAA GAACATGTGA GCAAAAGGCC AGCAAAAGGC CAGGAACCGT 4081 AAAAAGGCCG CGTTGCTGGC GTTTTTCCAT AGGCTCCGCC CCCCTGACGA GCATCACAAA 4141 AATCGACGCT CAAGTCAGAG GTGGCGAAAC CCGACAGGAC TATAAAGATA CCAGGCGTTT 4201 CCCCCTGGAA GCTCCCTCGT GCGCTCTCCT GTTCCGACCC TGCCGCTTAC CGGATACCTG 4261 TCCGCCTTTC TCCCTTCGGG AAGCGTGGCG CTTTCTCATA GCTCACGCTG TAGGTATCTC 4321 AGTTCGGTGT AGGTCGTTCG CTCCAAGCTG GGCTGTGTGC ACGAACCCCC CGTTCAGCCC 4381 GACCGCTGCG CCTTATCCGG TAACTATCGT CTTGAGTCCA ACCCGGTAAG ACACGACTTA 4441 TCGCCACTGG CAGCAGCCAC TGGTAACAGG ATTAGCAGAG CGAGGTATGT AGGCGGTGCT 4501 ACAGAGTTCT TGAAGTGGTG GCCTAACTAC GGCTACACTA GAAGAACAGT ATTTGGTATC 4561 TGCGCTCTGC TGAAGCCAGT TACCTTCGGA AAAAGAGTTG GTAGCTCTTG ATCCGGCAAA 4621 CAAACCACCG CTGGTAGCGG TGGTTTTTTT GTTTGCAAGC AGCAGATTAC GCGCAGAAAA 4681 AAAGGATCTC AAGAAGATCC TTTGATCTTT TCTACGGGGT CTGACGCTCA GTGGAACGAA 4741 AACTCACGTT AAGGGATTTT GGTCATGAGA TTATCAAAAA GGATCTTCAC CTAGATCCTT 4801 TTAAATTAAA AATGAAGTTT TAAATCAATC TAAAGTATAT ATGAGTAAAC TTGGTCTGAC 4861 AGCGGCCGCA AATGCTAAAC CACTGCAGTG GTTACCAGTG CTTGATCAGT GAGGCACCGA 4921 TCTCAGCGAT CTGCCTATTT CGTTCGTCCA TAGTGGCCTG ACTCCCCGTC GTGTAGATCA 4981 CTACGATTCG TGAGGGCTTA CCATCAGGCC CCAGCGCAGC AATGATGCCG CGAGAGCCGC 5041 GTTCACCGGC CCCCGATTTG TCAGCAATGA ACCAGCCAGC AGGGAGGGCC GAGCGAAGAA 5101 GTGGTCCTGC TACTTTGTCC GCCTCCATCC AGTCTATGAG CTGCTGTCGT GATGCTAGAG 5161 TAAGAAGTTC GCCAGTGAGT AGTTTCCGAA GAGTTGTGGC CATTGCTACT GGCATCGTGG 5221 TATCACGCTC GTCGTTCGGT ATGGCTTCGT TCAACTCTGG TTCCCAGCGG TCAAGCCGGG 5281 TCACATGATC ACCCATATTA TGAAGAAATG CAGTCAGCTC CTTAGGGCCT CCGATCGTTG 5341 TCAGAAGTAA GTTGGCCGCG GTGTTGTCGC TCATGGTAAT GGCAGCACTA CACAATTCTC 5401 TTACCGTCAT GCCATCCGTA AGATGCTTTT CCGTGACCGG CGAGTACTCA ACCAAGTCGT 5461 TTTGTGAGTA GTGTATACGG CGACCAAGCT GCTCTTGCCC GGCGTCTATA CGGGACAACA 5521 CCGCGCCACA TAGCAGTACT TTGAAAGTGC TCATCATCGG GAATCGTTCT TCGGGGCGGA 5581 AAGACTCAAG GATCTTGCCG CTATTGAGAT CCAGTTCGAT ATAGCCCACT CTTGCACCCA 5641 GTTGATCTTC AGCATCTTTT ACTTTCACCA GCGTTTCGGG GTGTGCAAAA ACAGGCAAGC 5701 AAAATGCCGC AAAGAAGGGA ATGAGTGCGA CACGAAAATG TTGGATGCTC ATACTCGTCC 5761 TTTTTCAATA TTATTGAAGC ATTTATCAGG GTTACTAGTA CGTCTCTCAA GGATAAGTAA 5821 GTAATATTAA GGTACGGGAG GTATTGGACA GGCCGCAATA AAATATCTTT ATTTTCATTA 5881 CATCTGTGTG TTGGTTTTTT GTGTGAATCG ATAGTACTAA CATACGCTCT CCATCAAAAC 5941 AAAACGAAAC AAAACAAACT AGCAAAATAG GCTGTCCCCA GTGCAAGTGC AGGTGCCAGA 6001 ACATTTCTCT
//
其他哺乳动物表达载体：
pCHO1.0 pBApo-CMV-Pur pOPRSVI
pcDNA3.1/His C pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO pREP4
pcDNA3.1/His B pcDNA5/FRT/TO-TOPO pDual-GC
pcDNA3.1/His A pcDNA5/TO pBK-RSV
pIRESpuro3 pcDNA5/FRT/TO pBK-CMV
pIRES2-EGFP pcDNA5/FRT pBI-CMV4
pTT5 pFLAG-CMV2 pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ pNFkB-DD-tdTomato pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO pOPI3CAT
pBI-CMV5 pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO pGene/V5-His B pSEAP2-Basic pOptiVEC-TOPO pSwitch
pSEAP2-Control pCMV-MEKK1 pCMVLacI
pBI-CMV3 pCMV-MEK1 pVgRxR
pBI-CMV2 pCMV-PKA pIND
pBI-CMV1 pcDNA6.2/nTC-Tag-DEST pTRE3G-Luc
pNFκB-MetLuc2-Reporter pcDNA6.2/cTC-Tag-DEST pTRE3G
pCRE-MetLuc2-Reporter pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO pTRE2-hygro
pAcGFP1-Actin pcDNA6.2/V5/GW/D-TOPO pTRE-Tight
pAcGFP1-N In-Fusion Ready pcDNA6.2/nGeneBLAzer-GW/D-TOPO pTK-hyg
pAcGFP1-C3 pcDNA6.2/C-YFP-DEST pTet-On
pAcGFP1-C pcDNA6.2/cGeneBLAzer-DEST pTet-Off
pAcGFP1-p53 pcDNA6/V5-His A pTet on advanced pAcGFP1-Mito pcDNA6/V5-His B pRevTRE
pAcGFP1-Mem pcDNA6/V5-His C pRevTet-On
pAcGFP1-Lam pcDNA6/myc-His C pRevTet-Off
pAcGFP1-Golgi pcDNA6/myc-His A pCMV-Tet3G
pAcGFP1-F pcDNA6/myc-His B pTRE2
pAcGFP1-Hyg-C1 pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST pBD-NF-κB
pAsRed2-N1 pcDNA4/HisMax-TOPO pCMV-AD
ptdTomato-N1 pcDNA6.2/nLumio-DEST pCMV-BD
pCMV-tdTomato pcDNA6.2/cLumio-DEST pBIND-Id Control
pCRE-DD-tdTomato pcDNA4/myc-His C pBIND
pCMV-DsRed-Express2 pcDNA4/HisMax C pG5 luciferase
pEF1α-tdTomato pcDNA4/HisMax A pACT-MyoD
pCRE-hrGFP c-Flag pcDNA3 pACT
ptdTomato-C1 pcDNA4/HisMax B pCMV-SPORT6 pAsRed2-C1 pcDNA4/myc-His B pGL4.13
pGL3-Promoter pcDNA4/myc-His A pGL4.19
pGL3 basic pcDNA4/His C pGL4.26
pAcGFP1-C2 pcDNA4/His B pGL4.20
pAcGFP1-C1 pcDNA4/His A pGL4.29
pAcGFP1-N3 pcDNA6/TR pGL4.30
pAcGFP1-N2 pcDNA4/TO/Myc-His A pGL4.27
pAcGFP1-N1 pcDNA4/TO pGL4.75
pAcGFP1-C In-Fusion Ready pcDNA4/TO/Myc-His B pGL4.10
pCRE-DD-AmCyan1 pcDNA4/TO/Myc-His C pGRN145
pNFkB-DD-AmCyan1 pcDNA3.3-TOPO pSecTag2 A pDsRed2-Bid pBudCE4.1 pEBVHis B pDsRED2-Mito pFLAG-CMV-4 pEBVHis A
pDD-AmCyan1 Reporter pFLAG-CMV-3 pCMV-Tag 3C pAmCyan1-N1 pFLAG-CMV-2 pCMV-Tag 3A pAmCyan1-C1 pFLAG-CMV-5a pCMV-Tag 3B
pEF1α-IRES-DsRed-Express2 p3XFLAG-CMV-9 pCMV-Tag 5C
pEF1α-DsRed-Monomer-N1 p3xFLAG-CMV-10 pCMV-Tag 5A pDsRED-Monomer-N1 p3XFLAG-CMV-8 pCMV-Tag 4A pDsRed-Express-N1 p3XFLAG-CMV-7.1 pCMV-Tag 5B
p3XFLAG-CMV-7 pDsRed-Monomer-N In-Fusion Ready pCMV-Tag 4B pDsRed-Express-C1 p3XFLAG-CMV-13 pCMV-Tag 2C pIRES2-ZsGreen1 p3XFLAG-CMV-14 pCMV-Tag 2B pDsRed-Express2-C1 plRES2-ZsGreen1 pCMV-Tag 2A pDsRed-Express2-N1 pBApo-EF1α-pur pCMV-LacZ
pEF1α-DsRed-Express2 pBApo-EF1α-neo pCMV-Myc
pIRES2-DsRed-Express pBApo-CMV pEF1α-IRES-AcGFP1 pIRES2-DsRed-Express2 pBApo-CMV-neo pEF1α-IRES-ZsGreen1 pIRES-hrGFP-1a pIRES-EGFP pEF1α-AcGFP1-N1 pIRESneo2 pIRESneo3 pIRES2-DsRed2 pIRESneo pDsRed-Monomer pIRES2-AcGFP1 pIREShyg3 pIRES
八体外哺乳动物细胞染色体畸变试验
九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 In Vitro Mammalian Cells Chromosome Aberration Test 1 范围 本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No.473, July 1997) 3试验目的 本试验是用于检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。 4 定义 染色体型畸变(Chromosome-type aberration)：染色体结构损伤，表现为在两个染色单体相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。 染色单体型畸变(Chromatid-type aberration)：染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。 染色体数目改变(Numerical aberration)：所用细胞株的正常染色体数目的变化。 结构畸变(Structural aberration)：在细胞分裂的中期相阶段，用显微镜检出的染色体结构改变，表现为缺失、断片、互换等。 有丝分裂指数(Mitotic index)：中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是一项反映细胞增殖程度的指标。 5 试验基本原则 在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞，制片，染色，分析染色体畸变。 6 试验方法 6.1 试剂和受试物制备 6.1.1 阳性对照物：可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物，阳性对照物应是已知的断裂剂，能引起可检出的、并可重复的阳性结果。当外源性活化系统不存在时，可使用甲磺酸甲酯（methyl methanesulphonate (MMS)）、甲磺酸乙酯（ethyl methanesulphonate(EMS)）、乙基亚硝基脲(ethyl nitrosourea)、丝裂霉素C(mitomycin C)、4-硝基喹啉-N-氧化物（4-nitroquinoline-N-oxide）。当外源性活化系统存在时，可使用苯并（a）芘[benzo(a)pyrene]、环磷酰胺(cyclophosphamide)。 6.1.2 阴性对照物：应设阴性对照，即仅含和受试物组相同的溶剂，不含受试物，其它处理和受试物组完全相同。此外，如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照。 6.1.3 受试物 6.1.3.1 受试物的配制：固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中，用前稀释至适合浓度；液体受试物可以直接加入试验系统和/或用前稀释至适合浓度。受试物应在使用前新鲜配制，否则就必
哺乳动物进化史
哺乳动物不比恐龙年轻 早在三叠纪晚期，就在恐龙刚刚登上进化舞台的同时，一群在当时并不起眼的小动物从兽孔目爬行动物当中的兽齿类里分化出来。它们有点“生不逢时”，因为在随后从侏罗纪到白垩纪长达1亿多年的漫长岁月里，它们一直生活在以恐龙为主的爬行动物的巨大压力下，在夹缝里求生存。直到白垩纪之末，当恐龙等在中生代异常适应的爬行动物发生了大灭绝之后，它们才得以在随后的新生代中顽强地崛起并成为新生代地球的主宰。它们就是哺乳动物，它们最终能够从夹缝里崛起的原因则是它们已经具备了一系列进步的特征。哺乳动物的起源从晚三叠纪开始，哺乳动物在整个中生代经历了艰难而不屈不挠的发展过程，分化出始兽亚纲、异兽亚纲和兽亚纲三大类。其中，始兽亚纲包括柱齿兽目、三尖齿兽目两类；异兽亚纲仅有一目，即多瘤齿兽目；兽亚纲包括三个次亚纲，即祖兽次亚纲、后兽次亚纲和真兽次纲。 哺乳动物特征的确立 哺乳动物是灵活的四足动物，有比较大的脑颅，反映了它们脑量的增加和与之相关的神经控制能力和智力的提高。哺乳动物基本代谢水平高，体被能够保温的毛发，再加上机体内的其它生理机制（如出汗等），使得它成为体温恒定的温血动物。除了单孔类之外，哺乳动物的幼体都是胎生，使得幼崽在出生前已在母亲体内完成了一定的发育过程，因此幼崽更具生命力；同时，幼崽出生后以母亲的乳汁为营养，得到母亲的保护，使得它们的成活更有保证。哺乳动物的牙齿分化成门齿、犬齿和颊齿（包括前臼齿和臼齿），颊齿通常有一个包括几个齿尖的齿冠，以两个或更多的齿根固着在颌骨上，这样的牙齿更能够适应于咀嚼多样化的食物。哺乳动物有次生的骨质硬腭，使鼻道与口腔分开，使得它们在咀嚼食物时不影响呼吸。此外，哺乳动物还有一些其它不同于爬行类的解剖学特征。例如：哺乳动物颈部的肋骨（颈肋）与颈椎愈合，成为颈椎的一部分；腰椎两侧具有游离的肋骨；肠骨、坐骨和耻骨愈合成为一块整个的骨盆结构；头骨有一对枕髁。尤其突出的是，哺乳动物头骨与下颌的关节由鳞骨和齿骨组成，原来在爬行动物中连接头骨和下颌的方骨和关节骨在哺乳动物中进入了中耳，分别变成了三块听小骨中的两块：砧骨和锤骨，它们与镫骨（在爬行动物唯一的一块听小骨）一起组成一套杠杆结构，用以传导从耳膜到内耳的声波震动。这是在脊椎动物进化史上解剖结构从一种功能转变到另一种功能的最好例证之一。 附件 01-3.jpg (27.81 KB) 2007-8-27 20:18 哺乳动物的内耳构造
型循环流化床蒸汽锅炉使用说明书教学提纲
YG-130/9.8-M型循环流化床蒸汽锅炉 使用说明书 （阳泉专用） 图号：55300-0-0 编号：55300S Y S 编制： 校对： 审核： 标审： 审定： 济南锅炉集团有限公司 二00四年十月
目录 一、概述 二、锅炉机组启动应具备的条件 三、锅炉机组启动前的检查与准备 四、锅炉机组启动方法与步骤 五、整定安全阀 六、锅炉机组的运行 （一）水、汽监测与调整 （二）锅炉受热面的吹灰 （三）锅炉的排污 （四）燃烧调整 七、锅炉的压火与热启动 八、锅炉机组的正常停止 （一）停炉前的准备工作 （二）锅炉的停炉 九、故障处理 十、停炉后的冷态再启动 十一、启动中的组织与分工 十二、压火注意事项
一、概述 该循环流化床锅炉，是济南锅炉集团有限公司开发的一种高效、低污染的新型锅炉。 本说明书着重论述的是锅炉首次启动的条件、步骤、方法。 锅炉安装完毕后的首次启动是对各设备各系统设计、安装的一次全面检查，通过试运，暴露和消除设备的缺陷和问题，为机组投产做好准备，通过启动如烘炉、煮炉、吹管等，使运行人员通过操作设备，熟悉系统，积累经验，检验各种联锁保护、自动系统投入率，同时也是对循环流化床系统、燃烧系统、上煤除灰、除渣、辅机等的一次运行考核。在整定安全阀等工作结束后，转入七十二小时试运。 二、锅炉机组启动应具备的条件 1、试运的现场条件 （1）场地基本平整,消防、交通及人行道路畅通。厂房各层地面起码应做好粗地面，最好使用正式地面，试运现场应有明显标志和分界，危险区应有围栏和警告标志。 （2）试运区的施工脚手架全部拆除，现场清扫干净，保证运行安全操作。 （3）试运区的梯子、步道、栏杆、护板应按设计安装完毕，正式投入使用。 （4）新扩建部分的排水沟道畅通、沟道及孔洞盖板齐全。 （5）试运范围的工业、消防及生活用水系统应能够投入正常使用，并备有足够的消防器材。 （6）试运现场具有充足的正式照明。事故照明应能在故障时及时自动投入。 （7）各运行岗位都应有正式的通讯装置。根据试运要求增设临时岗位，并应有可靠的通讯联络设施。 （8）严冬季节，应对有关阀门和管道采取必要的防冻措施，以防冻裂。 2、下列系统中的设备、管道、阀门等安装完毕，保温完成。 （1）锅炉范围内管道、汽水系统、疏放水、放汽系统、加药系统、辅用蒸汽系统、排污系统。
#130t_h高温高压流化床说明书
目录 一、锅炉基本特性 (1) 1、主要工作参数 (1) 2、设计燃料 (2) 3、安装和运行条件 (3) 4、锅炉基本尺寸 (3) 二、锅炉结构简述 (4) 1. 炉膛水冷壁 (4) 2. 高效蜗壳式汽冷旋风分离器 (5) 3. 锅筒及锅筒内部设备 (6) 4. 燃烧设备 (7) 5. 过热器系统及其调温装置 (9) 6. 省煤器 (10) 7. 空气预热器 (10) 8. 锅炉范围内管道 (11) 9. 吹灰装置 (11) 10. 密封装置 (11) 11. 炉墙 (12) 12. 构架 (12) 13．膨胀系统 (13) 14．锅炉水压试验 (13) 15. 锅炉过程监控 (13) 三、性能说明 (15) 一、锅炉基本特性 1、主要工作参数 额定蒸发量 130 t/h 额定蒸汽温度 540 ℃
额定蒸汽压力（表压） 9.81 MPa 给水温度 215 ℃ 锅炉排烟温度～142 ℃ 排污率≤2 % 空气预热器进风温度 20 ℃ 锅炉计算热效率≥88.58 % 锅炉保证热效率≥85 % 燃料消耗量 25.6 t/h 一次热风温度 202 ℃ 二次热风温度202 ℃ 一、二次风量比 55：45 循环倍率 25 ～ 30 脱硫效率（钙硫摩尔比为2.5时）≥ 80 % 2、设计燃料 （1）煤质分析资料： 的 入 炉 粒 度 要 求： =2mm，详见附图。粒度范围0～10mm，50%切割粒径d 50 （2）点火及助燃用油 锅炉点火用油:0#轻柴油
（3）脱硫剂特性 石灰石作为脱硫剂，外购成品石灰粉，粒度0-1mm，详见附图；其成分： CaCO 3：92%，MgCO 3 ：3.5%，酸不溶物+R 2 O 3 ：4.5%。 3、安装和运行条件 地震烈度抗震设防烈度为7度 海拔高度： 347.5m 锅炉给水满足GB/T12145-1999《火力发电机组及蒸汽动力设备水汽质量》标准。 4、锅炉基本尺寸 炉膛宽度（两侧水冷壁中心线间距离） 7010mm 炉膛深度（前后水冷壁中心线间距离） 4530mm 炉膛顶棚管标高 34500mm 锅筒中心线标高 37700mm 锅炉最高点标高 43000mm 运转层标高 8000mm 操作层标高 5200mm 锅炉宽度（两侧柱间中心距离） 9400mm 锅炉深度（柱Z 1与柱Z 4 之间距离） 19900mm
ZDFR流化床热风炉使用说明书
ZDFR流化床热风炉使用说明书 2004-06-10点击: 1539 一、准备工作： １、准备好司炉工具：钩、耙、锹、铲、推车等。 ２、准备好点火用材料： ●木柴100公斤左右，直径<100mm，长度500mm左右。 ●优质碎烟煤100－200公斤，筛选1－6mm粒径为宜。 ●木炭，废油或废棉纱适量。 ●黄砂或炉渣（沸渣）0.5m３，炉渣粒径<10mm。 ３、逐台检查配套设备：风机、提升机、破碎机及圆盘喂料机等运行情况是否正常。 ４、检查控制柜连线及各仪表、传感器情况是否正常。 ５、检查布风板上风帽通风孔是否通畅，将炉床清理干净。 ６、在炉床上面铺上厚150mm左右的干粗黄砂，打开风机让炉料沸腾后逐渐减小风量至黄砂成鼓泡状，观察床料是否腾跃均匀；然后停风机观察床料是否平坦。
二、点火： １、在炉床上加铺厚度250mm左右的过筛干粗黄砂，并同时加入占其总量8－10%，粒度<10mm的优质煤。若用干煤渣做床料，则视渣的含煤量多少适当减少加入的煤量。然后开启风机使床料混合均匀、平整。 ２、视炉型大小加入适量木柴，以预热炉膛和加热底料，底料上有足够火炭层后，再把未烧透的木柴钩出，将赤红火炭层扒平。 ３、开动风机，瞬间将风压升至3500Ｐa后突然关闭风门，使火炭、砂、煤三者混合均匀，再徐徐开启风门，使炉料均匀蠕动，并不断搅拌均化，扒出焦块，待全部炉料燃烧成桔黄色后，加大风门开度，使之沸腾燃烧。 ★要点：加热床料到灼热！ 三、运行： 流化床炉的炉温变化是非常快的，很短时间就可能造成熄火或结焦，因此司炉人员必须密切监视仪表及炉膛燃烧情况，注意调整风量、风压、给煤量以让沸腾炉膛保持在一定温度范围内正常燃烧，并利用增减风、煤量来控制温度及供热大小。 １、送风量：
【2014】EPI,哺乳动物细胞的非CG位点的甲基化
Introduction DNA methylation involves the addition of a methyl group to the 5th carbon atom of cytosine to create 5-methylcytosine. In most mammalian cells, the majority of 5-methylcytosine is found immediately preceding (5′) guanine residues and is referred to as CpG methylation. The mammalian genome is interspersed with regions of high CpG density, known as CpG islands (CGIs), which overlap the promoter regions of ~70% of human genes.1 DNA methylation has also been described in non-CpG con-texts, such as CpA, CpT, and CpC, which will be collectively referred to as non-CpG methylation throughout this review. First described in the plant genome,2 non-CpG methylation has since been found independent to, or coexisting with, CpG methyla-tion in various contexts within mammalian genomes. Non-CpG methylation occurs within various cell types and at specific stages during cell development; however, the functional significance of this in the mammalian genome is poorly understood. In this review, we will describe evidence for the existence of non-CpG methylation, specifically in mammalian genomes, and discuss the differences between CpG and non-CpG methylation, possible mechanisms of its establishment and maintenance, and the potential functions of this DNA modification. The Function of CpG Methylation in Mammalian Cells The function of CpG methylation is context-dependent 3; how-ever, it is most clearly understood as a mechanism of controlling gene expression. Changes in CpG methylation, histone modifica-tions and nucleosome positioning can alter promoter DNA acces-sibility and regulate the recruitment of DNA binding proteins, such as transcription factors. CpG methylation can also repress transcription by directly blocking the binding of transcription activating proteins.4,5 Although CpG methylation at promoters is associated with transcriptional silencing, high levels of methyla-tion within the gene body are associated with highly expressed genes.6 The enrichment of CpG methylation within gene bod-ies, particularly at exonic regions, may contribute to exonic rec-ognition and splicing by promoting the pausing of the RNA polymerase II complex at exons and increasing the probability of co-transcriptional splicing.7,8 Other functions of CpG meth-ylation include the regulation of interactions between enhancers and promoters through the regulation of specific DNA-protein interactions. For example, nucleosome occlusion and hyper-methylation of the distal enhancers of the NANOG /OCT4 and glucocorticoid receptor promoters prevents them from activat-ing these genes.9,10 The expression of the imprinted IGF2 gene is regulated by methylation at sites within the IGF2-H19 imprinted locus, which prevents binding of the CTCF insulator and allows interaction of the IGF2 gene promoter with its enhancer.11 CpG *Correspondence to: Luke Hesson; Email: l.hesson@https://www.360docs.net/doc/04805829.html,.au Submitted: 02/24/2014; Revised: 03/26/2014; Accepted: 04/02/2014;Published Online: 04/09/2014; https://www.360docs.net/doc/04805829.html,/10.4161/epi.28741 The evidence for functional non-CpG methylation in mammalian cells vibha Patil, Robyn L ward, and Luke B Hesson* Adult Cancer Program; Lowy Cancer Research Centre and Prince of wales Clinical School; University of New South wales; Sydney, NSw Australia Keywords: DNA methylation, non-CpG methylation, non-CG methylation, epigenetics Abbreviations: B29, Immunoglobin β-Chain; CDKN2A, cyclin-dependent kinase inhibitor 2A; CGI’s, CpG islands; CTCF, CCCTC-binding factor; DNMT, DNA methyltransferase; EBF, early B-cell factor; ESCs, embryonic stem cells; GSTP1, glutathione S-transferase pi 1; GVOs, germinal vesicle oocytes; H19, imprinted maternally expressed transcript; hESCs, human embryonic stem cells; IGF2, insulin-like growth factor 2; iPSCs, induced pluripotent stem cells; LUMA, luminometric-based assay; MSRE, methylation sensitive restriction endonuclease; PDK4, pyruvate dehydrogenase kinase, isozyme 4; OR, odourant receptor; PGC-1α, peroxisome proliferator-activated receptor gamma co-activator-1 α; SOX2, sex determining region Y-box 2; SYT11, synaptotagmin XI; TNF-α, tumor necrosis factor-α; TP53, tumor protein p53; T2DM, type 2 diabetes mellitus; WGBS, whole genome bisulphite sequencing in mammalian genomes, the methylation of cytosine residues within CpG dinucleotides is crucial to normal devel-opment and cell differentiation. However, methylation of cytosines in the contexts of CpA, CpT, and CpC (non-CpG methylation) has been reported for decades, yet remains poorly understood. in recent years, whole genome bisulphite sequencing (wGBS) has confirmed significant levels of non-CpG methylation in specific tissues and cell types. N on-CpG methylation has several properties that distinguish it from CpG methylation. Here we review the literature describing non-CpG methylation in mammalian cells, describe the important characteristics that distinguish it from CpG methylation, and discuss its functional importance. ?2014 L a n d e s B i o s c i e n c e . D o n o t d i s t r i b u t e .
pGL3-Promoter哺乳动物表达载体说明
pGL3-Promoter 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT6010 pGL3--‐Promoter pGL3--‐Promoter载体基本信息 载体名称: pGL3-promoter, pGL3promoter 质粒类型: 荧光素酶报告系统载体 高拷贝/低拷贝: 高拷贝 启动子: SV40 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 5010bp 5' 测序引物及序列: RV primer3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC 3' 测序引物及序列: GLprimer2: CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA 载体标签: -- 载体抗性: 氨苄 筛选标记: -- 备注: 用于快速定量评估影响哺乳动物细胞特定基因表达的因子及其影响能力。 稳定性: 稳定 组成型: 非组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pGL3--‐Promoter载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGL3--‐Promoter载体序列 ORIGIN 1 GGTACCGAGC TCTTACGCGT GCTAGCCCGG GCTCGAGATC TGCGATCTGC ATCTCAATTA 61 GTCAGCAACC ATAGTCCCGC CCCTAACTCC GCCCATCCCG CCCCTAACTC CGCCCAGTTC 121 CGCCCATTCT CCGCCCCATC GCTGACTAAT TTTTTTTATT TATGCAGAGG CCGAGGCCGC 181 CTCGGCCTCT GAGCTATTCC AGAAGTAGTG AGGAGGCTTT TTTGGAGGCC TAGGCTTTTG
110吨流化床锅炉设计说明书
太原锅炉集团有限公司设计文件锅炉设计说明 书 目录 前言 (1) 1．锅炉概述 (1) 2．锅炉基本特性 (2) 2.1. 主要工作参数 (2) 2.2. 设计燃料 (2) 2.3. 锅炉基本尺寸 (3) 3．锅炉主要部件结构简述 (4) 3.1锅筒 (4) 3.2 水冷系统 (5) 3.3 过热器系统及汽温调节 (6) 3.4 省煤器 (6) 3.5 空气预热器 (7) 3.6燃烧设备 (7) 3.7 分离回料系统 (8) 3.8 锅炉范围内管道 (9) 3.9 构架 (10) 3.10 炉墙 (10) 3.11 膨胀设计 (10) 3.12 防磨设计 (11) 3.13 密封设计 (11) 3.14水容积表 (12) 4．锅炉设计、制造、检验、安装执行规范 (12) 5．特别说明 (12)
太原锅炉集团有限公司设计文件锅炉设计说明书 前言 循环流化床燃烧是一种新型的高效、低污染的清洁燃煤技术，其主要特点是锅炉炉膛内含有大量的物料，在燃烧过程中大量的物料被烟气携带到炉膛上部，经过布置在炉膛出口的分离器，将物料与烟气分开，并经过非机械式回送阀将物料回送至床内，多次循环燃烧。由于物料浓度高，具有很大的热容量和良好的物料混合，一般每公斤烟气可携带若干公斤的物料，这些循环物料带来了高传热系数，使锅炉热负荷调节范围广，对燃料的适应性强。 循环流化床锅炉具有燃料适应性广、环保性能优异、负荷调节范围广、灰渣易于综合利用等优点，因此在世界范围内得到了迅速发展。随着环保要求日益严格，普遍认为，循环流化床锅炉是目前最实用和可行的高效低污染燃煤设备之一。在循环流化床燃烧技术快速发展的今天，我们对循环流化床锅炉的磨损、耐火材料、辅机系统三大问题进行研究解决后，使CFB锅炉的可用率得到很大提高。 太原锅炉集团与清华大学通过多年的密切合作，深入分析了常规循环流化床锅炉面临的问题和挑战，提出了低能耗循环流化床锅炉设计理论和方法，形成了第二代节能型循环流化床锅炉全套设计导则，在此基础上同时完成了第二代节能型循环流化床锅炉的产品结构设计。使第二代循环流化床锅炉产品具有供电煤耗低、厂用电率低、锅炉可用率高的技术优势，其技术关键在于分离器效率提高后，循环物料中的细灰份额增加，适当减少床存量低床压运行依然可以保证锅炉正常运行。床存量降低后，二次风区域物料浓度降低，二次风穿透扰动效果增强，炉膛上部气固混合效果得以改进，提高了锅炉燃烧效率，降低了锅炉机组的供电煤耗；床存量降低后，物料流化需要的动力减小，锅炉一、二次风机的压头降低，风机电耗下降，从而降低锅炉机组的厂用电率；床存量降低后，炉膛下部物料浓度大幅度减小，从而可以减轻炉膛下部浓相区特别是防磨层与膜式壁交界处的磨损，提高锅炉机组的可用率。 本循环流化床锅炉运用了经过实践检验过的第二代节能型循环流化床锅炉全套设计导则进行设计。在燃用设计煤种时，锅炉能够在定压时50～100%额定负荷范围内过热器出口蒸汽保持额定参数；在燃用设计煤种或校核煤种时，在30～100%额定负荷范围内锅炉能够稳定燃烧。 1．锅炉概述 本锅炉为高温高压，单锅筒横置式，单炉膛，自然循环，全悬吊结构，全钢架π型布置。锅炉采用室外布置，运转层设置在8m标高。 锅炉主要由炉膛、绝热旋风分离器、自平衡回料阀和尾部对流烟道组成。炉膛采用膜式水冷壁，锅炉中部是绝热旋风分离器，尾部竖井烟道布置两级四组对流过热器，过热器下方布置三组光管省煤器及一、二次风各三组空气预热器。 在燃烧系统中，给煤机将煤送入落煤管进入炉膛，锅炉燃烧所需空气分别由一、二次风机提供。 1
哺乳动物的进化过程
哺乳动物的进化过程 摘要：哺乳动物配子发生过程中双亲特异性甲基化印迹导致父母双方的基因组在发育中的不等性和互补性,使父母双方的基因组对正常发育都是必需的.因此,基因组印迹是胚胎发育过程中基因组整体水平上基因表达调控至关重要的第一步,也是哺乳动物两性生殖的表观遗传基础.但基因组印迹在脊椎动物中的进化起源、形成并维持稳定的表观遗传修饰分子机制都还完全不清楚.在动物界,由于至今未在非哺乳动物中发现内源印迹基因,基因组印迹被认为可能是胎生哺乳动物单独进化出来的。 关键词：哺乳动物；恐龙化石；进化树 Abstract：Mammals gametes problems in specific methylation parents to the genome of molecularly imprinted both parents in development of sex and complementary range, make both parents to the normal development of the genome is necessary. Therefore, genomic imprinting is in the process of the development of embryo whole genome level regulating gene expression in a crucial first step, and mammals apparent genetic basis of both sexes reproduction. But genomic imprinting vertebrates evolution in the origin, form and keep the stability of the apparent genetic modification molecular mechanism is completely not clear. In the animal kingdom suggests, because so far, in the mammals found endogenous imprinting gene, genomic imprinting is thought to be viviparous mammals evolved alone. Keywords：Mammals; Dinosaur fossils; Evolutionary tree; 【引言】 对于现生动物来讲，可以简单地定义为出生后哺乳的动物。现生的哺乳动物有单孔类和兽类。单孔类，如鸭嘴兽和针鼹等，是卵生的哺乳动物，仅产于大洋洲。兽类又分为有袋类和有胎盘类。前者主要产于南半球的澳大利亚和南美洲，胎儿出生时未发育完全，必须在育儿袋中抚育一段时间，如大袋鼠、考拉等等。后者则包含了所有其他现生哺乳动物，如牛、马、狗、鼠以及我们人类，等等。 现生哺乳动物出生后哺乳是一个不争的事实，是胎生还是卵生也可以通过观察直接求证。然而对于化石来说，我们就缺乏直接的证据了。好在科学家通过努力，建立了哺乳动物起源和系统演化的框架，给我们讨论这个问题提供了依据。根据分支系统学的简约性原则，我们可以判定所有哺乳动物(包括鸭嘴兽)应该是吃奶的。关于胎生还是卵生的问题，依据相同的原理，我们可以判定哺乳动物之外的哺乳型动物与单孔类都是卵生的，而构成兽类的有袋类和有胎盘类的共同祖先及其所有后裔则应该是胎生的。 【哺乳动物的进化】 1、恐龙大灭绝体型巨大，形态各异的恐龙一直吸引着人们的兴趣，很多描绘恐龙的书、电影逼真地再现了恐龙的形象。在两亿多年前遥远的中生代，大量的爬行动物在陆地上生活，因此中生代又被称为“爬行动物时代”，地球第一次被脊椎动物广泛占据。那时的地球气候温暖，遍地都是茂密的森林，爬行动物有足够的食物，逐渐繁盛起来，种类越来越多。恐龙是所有爬行动物中体格最大的一类，很适宜生活在沼泽地带和浅水湖里，那时的空气温暖而
pAcGFP1-N1哺乳动物表达载体说明
pAcGFP1-N1 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT6107 pAcGFP1--‐N1 pAcGFP1--‐N1载体基本信息 载体名称: pAcGFP1-N1 质粒类型: 哺乳动物细胞表达载体；荧光报告载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝 克隆方法: 限制性内切酶，多克隆位点 启动子: CMV IE 载体大小: 4726 bp 5' 测序引物及序列: -- 3' 测序引物及序列: -- 载体标签: AcGFP1 (C-端） 载体抗性: 卡那霉素 筛选标记: 新霉素（Neomycin） 克隆菌株: DH5α, HB101 宿主细胞（系）: 常规细胞系（293、CV-1、CHO等） 备注: 哺乳动物载体pAcGFP1-N1组成型表达C端AcGFP融合蛋白；AcGFP1与GFP相比，密码子经过了优化，更适合在哺乳动物细胞中高水平表达，同时也增强了亮度。 稳定性: 稳表达或瞬表达 组成型/诱导型: 组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pAcGFP1--‐N1载体质粒图谱和多克隆位点信息
pAcGFP1-N1载体描述 pAcGFP1-N1 encodes a green fluorescent protein (GFP) from Aequorea coerulescens (excitation maximum = 475 nm; emission maximum = 505 nm). The coding sequence of the AcGFP1 gene contains silent base changes, which correspond to human codon-usage preferences (1). The MCS in pAcGFP1-N1 is between the immediate early promoter of CMV (PCMV IE) and the AcGFP1 coding sequences. Genes cloned into the MCS will be expressed as fusions to the N-terminus of AcGFP1 if they are in the same reading frame as AcGFP1 and there are no intervening stop codons. SV40 polyadenylation signals downstream of the AcGFP1 gene direct proper processing of the 3' end of the AcGFP1 mRNA. The vector backbone also contains an SV40 origin for replication in mammalian cells expressing the SV40 T antigen. A neomycin-resistance cassette (Neor), consisting of the SV40 early promoter, the neomycin/kanamycin resistance gene of Tn5, and polyadenylation signals from the Herpes simplex virus thymidine kinase (HSV TK) gene, allows stably transfected eukaryotic cells to be selected using G418. A bacterial promoter upstream of the gene expresses kanamycin resistance in E. coli. The pAcGFP1-N1 backbone also provides a pUC origin of replication for propagation in E. coli and an f1 origin for single-stranded DNA production. Fusions to the N terminus of AcGFP1 retain the fluorescent properties of the native protein allowing the localization of the fusion protein in vivo . The target gene should be cloned into pAcGFP1-N1 so that it is in frame with the AcGFP1 coding sequences, with no intervening in-frame stop codons. The inserted gene should include the initiating ATG codon. The recombinant AcGFP1 vector can be transfected into mammalian cells using any standard transfection method. If required, stable transformants can be selected using G418 (2). pAcGFP1-N1 can also be used simply to express AcGFP1 in a cell line of interest (e.g., as a transfection marker). Propagation in E. coli Suitable host strains: DH5α, HB101 and other general purpose strains. Single-stranded DNA production requires a host containing an F plasmid such as JM101 or XL1-Blue. Selectable marker: plasmid confers resistance to kanamycin (30 μg/ml) to E. coli hosts. E. coli replication origin: pUC Copy number: ≈500 Plasmid incompatibility group: pMB1/ColE1
循环流化床锅炉使用说明书
一、概述 该循环床锅炉是新开发的一种高效低污染的新型锅炉。 锅炉安装完毕后的首次起动是对各设备各系统设计、安装的一次全面检查，通过试运，暴露和消除设备的缺陷和问题，为机组投产做好准备，启动前应根据有关规程和设备技术文件制定符合设计、设备特点的启动试运调整方案及措施，有计划、按步骤进行。通过启动和如烘炉、煮炉、吹管等，使运行人员通过操作设备，熟悉系统，积累经验，检验各种联锁保护，自动系统投入率，同时也是对循环流化床系统、燃烧系统、上煤除灰除渣、辅机等的一次运行考核，在整定安全阀等工作结束后，转入七十二小时试运。 二、锅炉机组启动前应具备的条件 1．试运现场的条件 ⑴场地基本平整，消防交通及人行道路畅通。厂房各层地面起码应做好粗地面，最好使用正式地面，试运现场应有明显标志和分界，危险区应有围栏和警告标志。 ⑵试运区的施工脚手架应全部拆除，现场清扫干净，保证运行安全操作。 ⑶试运区的梯子、步道、栏杆、护板应按设计安装完毕，正式投入使用。 ⑷新扩建部分的排水沟道畅通，沟道及洞盖板齐全。 ⑸试运范围的工业、消防及生活用水系统应投入正常使用，并备有足够的消防器材。 ⑹试运现场具有充足的正式照明。事故照明应能在故障时及时自动投入。 ⑺各运行岗位都有正式的通风装置。根据试运要求增设的临时岗位、并应有可靠的通风联络设施。 ⑻严冬季节，应对有关阀门和管道采取必要的防冻措施，以防冻裂。 2．下列系统中的设备、管道、阀门等安装完毕，保温完成。 锅炉范围内管道、汽水系统、疏放水、放汽系统、加药系统、辅用蒸汽系统、排污系统。 3．下列设备经调试合格 ⑴一、二次风机，引风机经调试结束并符合点火要求。 ⑵热工测量，控制和保护系统的调试已符合点火要求。 4．漏风试验
哺乳动物细胞蛋白表达FAQ
哺乳动物细胞蛋白表达FAQ 1、什么是质粒超螺旋，超螺旋对提高表达量有什么帮助？答：闭环DNA（closed circular DNA）没有断口的双链环状DNA，亦称为超螺旋DNA ，超螺旋比例90%以上是比较理想的真核表达质粒，较低的超螺旋比例会降低表达量近50%以上。 2、CHO细胞与293细胞有什么区别？ 答：CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞，是目前表达外源蛋白最多最成功的细胞之一。该细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌型细胞，自身很少分泌内源蛋白，因此有利于目的蛋白的纯化分离；相较于其他细胞类型，CHO细胞是治疗性蛋白生产的主要宿主细胞的原因如下：（1）能在化学成分限定和无血清悬浮培养中稳定生长， （2）该细胞基因组信息明确，在人类致病病毒应答方面表现出合理的安全性， （3）能够表达与人相似的翻译后修饰。 此外，CHO细胞表达系统的最重要优势之一是能够容易的得到基因改造的细胞。然而，因为糖基化模式与人类不完全相同，导致CHO细胞产生的重组蛋白在某些时候仍然表现出免疫原性。 HEK293细胞是真核蛋白表达常用的细胞之一，它具有以下优势：更快的生长速度，更高的生长密度、转染效率高，表达后修饰更接近人体蛋白的结构，可能会有潜在的人病毒污染。
3、常用的哺乳动物细胞蛋白表达系统是什么？原理是什 么？ 答：我们常用的系统是2936e细胞配套PTT5(pAZ5)载体 HEK2936E 是在细胞的基因组中整合了EBV病毒的 nuclear antigen 1 (EBNA1), 该蛋白可以保证含有EBV病毒复制原点(EBV ori）的质粒在HEK293E 细胞株中复制，提高质粒的拷贝数，进而提高克隆在此种质粒上的外源基因的表达水平。该系统比常规的293F细胞表达量要高。 4、导致哺乳动物细胞蛋白表达低或者不表达的原因有哪些？哪类蛋白不容易表达？ 答：基因是否优化，有的蛋白稀有密码子较多，需要对应表达细胞进 行优化密码子。 蛋白本身就比较难做，比如细胞因子类的，衣壳蛋白类的，膜蛋白。质粒质量：内毒素水平、有无蛋白和核酸污染、超螺旋比例、无盐苯酚等试剂 分子量较大或者太小：大于150KD表达会有一定的难度，小于5KD也会有难度。 有的表达量不低，但是纯化得率低（可溶性差，不挂住，不稳定，易降解） 难表达蛋白：细胞因子、激素、抗菌肽、衣壳蛋白、膜蛋白