透析袋的预处理

透析袋的预处理
透析袋的预处理

我打算做蛋白的透析复性,透析袋买来了,但是不知道怎么做预处理在网上搜了预处理的步骤,但是有几点不明白。我搜索的步骤如下:

1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段,注意带手套。

2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。

3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。

4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。

5. 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。

6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。

我有以下几点不明白:

1.步骤一中,为什么要戴手套操作?

2.步骤二中,用“大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)煮沸”,是分别煮沸、还是两种溶液混到一块煮沸?

3.步骤四中,“透析袋必须浸没在溶液中”此处的溶液是指什么?1mmol/L EDTA(pH 8.0)?

第一点ls说了

第2点配一个溶液,含2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)

第3点2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)

(1)将透析管剪成适当长度,10-20cm的小段,即形成透析袋

(2)在大体积2%(m/V)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH*8.0)中将透析袋煮沸10min (3)将透析袋用蒸馏水彻底漂洗

(4)将透析袋置1mmol/L EDTA(PH*8.0)中煮沸10min

(5)将透析袋冷却,存放于4摄氏度,应确保透析袋始终浸没在液体中。

重要:从此步起用透析袋时一定要带手套操作

(6)在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。

我也做过透析袋相关实验,我们平时就是把剪好的透析袋保存于无水乙醇中,用的时候用蒸馏水洗净,然后在烧杯里面加入蒸馏水没过透析袋微波炉加热煮沸10分钟就可以了

丁香园方法

透析膜(前处理方法如下): 1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中15 min 泡软。2. 浸入10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至80℃,一边搅拌至少30 min。

3. 换到10 mM Na2?EDTA 中浸泡30 min,以新鲜的EDTA 同样方法处理三次。

4. 再用80℃蒸馏水洗30 min,然后换到20% 酒精中,放在4℃冰箱中保存。::

你可按下述方法处理:

i. 将透析袋剪为适当长度:一般为10,20和30cm。

ii. 将透析袋浸入50ml 5mM EDTA/200mM NaHCO3透析液中。

iii. 煮沸5min。将透析液弃掉。用去离子水简单冲洗透析袋。

iv. 再将透析袋浸入50ml 5mM EDTA/200mM NaHCO3透析液中。

v. 煮沸5min。将透析液弃掉。用大量去离子水彻底冲洗透析袋。用铝箔包起来。

vi. 高压灭菌10min。

vii. 4℃保存。可加入0.02%叠氮化钠避免长菌。

viii. 使用时,戴手套取所用透析袋,用去离子水将其里外全部冲洗。

透析袋买来后最好再处理一下,因为其中可能含有防腐剂及其他小分之化学物从而影响透析效果,先献上我常用的改良后的处理方法:

1 0.5M EDTA-2Na 1 毫升加10克碳酸氢钠,补蒸馏水至500毫升,调PH至8.0

2 透析袋放上述液体中煮沸10分钟

3 取出透析袋蒸馏水清洗干净,再放蒸馏水中煮沸10 分钟

4 冷却后就可以用了,如果暂时不用的话,可以放苯钾酸钠或叠氮化钠中保存

5 用过的透析袋同法处理,放50%甘油或50%乙醇中保存,下次用前蒸馏水洗净即可

6 注意取透析待一定要戴手套哦

透析袋使用说明

透析袋使用说明 自Thomas Graham1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 1技术指标 MWCO(截留分子量),单位:Diatoms。 透析时,小于MWCO的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜,其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度:4℃,升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器,均能提高透析速度。 2使用须知 某些化学物质会破坏透析袋微孔且不可逆转。计有:烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺、丙酮、甲基乙基酮、二氧杂环乙烷、环已烷等。酸(甲酸、乙酸、稀强酸如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水。甲醇、乙醇:浓度小于5%时,透析功能在,而MWCO变化。 2.1前处理 为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。 2.1.1方法一 将透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。在NaHCO3-EDTA处理液中煮沸10min后用蒸馏水彻底清洗干净,然后在EDTA处理液煮沸10min。冷却后,置于30%乙醇中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。使用前戴手套取用透析袋并用蒸馏水将透析袋内外清洗干净。[1] 2.2.2方法二 将透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段,沸水煮5至10分钟,再用蒸馏[1]乙二胺四乙酸二钠(EDTA)0.2mol/L储备液 称取7.4448g乙二胺四乙酸二钠,少量蒸馏水溶解,转至100mL容量瓶中,摇匀并定容。 EDTA处理液(1mmol/L pH8.0) 取2.5mL EDTA储备液,加蒸馏水并用1mol/LNaOH调节pH为8.0,定容至500mL。 NaHCO3-EDTA处理液 称取4.0g碳酸氢钠至200mLEDTA处理液中,配制成(2%)NaHCO3-(pH值8.01mmol/L)EDTA处理液。

瑞达恒辉即用型RC膜透析袋使用说明书

即用型RC膜透析袋使用说明书 一、膜技术参数: 生物技术RC膜(再生纤维素),重金属离子和硫化物含量为痕迹级别,湿型,浸泡在0.05%叠氮钠防腐储存液中,即用型,不需预处理,蒸馏水冲洗后使用;生物技术RC膜拥有广泛的化学兼容性,能承受弱酸弱碱或稀释的强酸强碱,绝大部分的醇类物质;弱极性有机物或者稀释过的强极性有机物,如DMSO,接触强极性有机溶剂可能会损害RC膜;标准RC膜能适用pH值2-12以及温度4-132 °C之间。 二、储存条件: 透析膜浸泡在储存液中,密封放置于4-25°C之间环境。建议密封放在冰箱冷藏室4℃保存。 透析袋使用方法: 1、先带好手套,把透析袋剪成适当长度(10cm左右)的小段,长度可以根据需要,但必须有足够的容器来容纳。 2、用蒸馏水彻底清洗透析袋,两头用手微微捏住,检查是否有漏袋。透析袋保存液含有防腐剂,对活性物质有抑制作用,至少用蒸馏水(纯水、去离子水均可)反复冲洗三次,有时间最好用蒸馏水浸泡30分钟再使用。 3、不使用的透析膜放回储存液中,密封保存,接触透析膜过程中必须戴手套。

4、使用时,一端用透析袋夹子夹紧,灌满水后,用手指适当加压,检查不漏,另一头也同样反复一次,以免夹子不够紧。然后装入样品,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋胀破。装完样品后,用夹子夹紧袋口,即可进行透析。为了加快透析速度,除多次更换透析缓冲液外,还可使用磁力搅拌器。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。根据样品浓度决定透析时间,也可以过夜透析,透析时间在24~48小时为宜。用线吊着透析袋,使透析袋处于悬浮状态,也可以加速透析速度。

透析袋的预处理

我打算做蛋白的透析复性,透析袋买来了,但是不知道怎么做预处理在网上搜了预处理的步骤,但是有几点不明白。我搜索的步骤如下: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段,注意带手套。 2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。 5. 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。 我有以下几点不明白: 1.步骤一中,为什么要戴手套操作? 2.步骤二中,用“大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)煮沸”,是分别煮沸、还是两种溶液混到一块煮沸? 3.步骤四中,“透析袋必须浸没在溶液中”此处的溶液是指什么?1mmol/L EDTA(pH 8.0)? 第一点ls说了 第2点配一个溶液,含2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0) 第3点2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0) (1)将透析管剪成适当长度,10-20cm的小段,即形成透析袋 (2)在大体积2%(m/V)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH*8.0)中将透析袋煮沸10min (3)将透析袋用蒸馏水彻底漂洗 (4)将透析袋置1mmol/L EDTA(PH*8.0)中煮沸10min (5)将透析袋冷却,存放于4摄氏度,应确保透析袋始终浸没在液体中。 重要:从此步起用透析袋时一定要带手套操作 (6)在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。 我也做过透析袋相关实验,我们平时就是把剪好的透析袋保存于无水乙醇中,用的时候用蒸馏水洗净,然后在烧杯里面加入蒸馏水没过透析袋微波炉加热煮沸10分钟就可以了 丁香园方法 透析膜(前处理方法如下): 1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中15 min 泡软。2. 浸入10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至80℃,一边搅拌至少30 min。

透析袋用法

透析袋使用前处理方法 透析袋的使用方法透析原理透析是指溶质从半透膜的一侧透过膜至另一侧的过程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要该膜含有使一定大小的溶质通过的孔径,那么这些溶质就可以通过弥散和对流从膜的一侧移动到膜的另一侧。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 人体内的毒物包括代谢产物,药物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合适,就能够通过透析清除体外。其基本原理是弥散和对流。弥散就是半透膜两侧液体各自所含溶质浓度梯度及它所形成的不同渗透浓度,溶质从浓度高的一侧通过半透膜向浓度低的一侧移动。对流也称超滤,是指溶质和溶剂因透析膜两侧的静水压和渗透压梯度的不同而跨膜转运的过程。 自ThomasGraham1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide(联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为1万左右。 透析袋的使用方法使用前处理: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和10mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。 5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。 注意事项: 透析袋一般来讲,最好一次性利用。如果对样品的纯度没有很严格的要求,还是可以重复利用的。但是不要重复利用太多次,一般5次就差不多了,而且透析时尽量避免有机溶剂(乙醇除外),因为重复多次利用或经有机溶剂腐蚀,虽然从宏观上看袋子完好,但是有可能微观上已有破损或者孔径已经改变,截留分子量(MWCO)已经不可靠。 新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。

透析袋原理、分子量的选择、使用方法步骤

透析袋原理、分子量的选择、使用方法步骤 透析袋原理 自1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液 中的大分子量的生物大分子被截留在袋内。 分子量的选择 透析是一个简单的扩散过程,溶质中小分子物质从高浓度溶液通过半透性膜扩散到低浓度溶液中,直至渗透 压达到平衡。由于多孔膜的选择性,使得溶质中小分子物质可以通过,而较大物质则被截留,从而分离出不 同大小分子量的物质,依据分子量大小截留,可高效用于分离工艺,改变或控制透析的条件,可在多种透析 应用中得到预期效果,通过截留分子量(MWCO)可使目标分子得到分离。所以透析袋分子量的选择就决定了实验的成败。这篇文章就详细介绍了如何选择合适的透析袋。 透析膜的材质 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,主要有再生纤维素(RC)、纤维素酯(CE)、聚偏二氟乙烯(PVDF)。但随着生物技术发展,对透析袋处理样品更多更严格的要求,根据 生产工艺有可以分为标准膜和生物技术级膜。 生物技术纤维素酯(CE)膜 生物学惰性和超纯的生物技术CE膜,用于带电荷分子的分离及大分子纯化。生物技术CE膜对条件及溶剂要求较高。一般而言,CE膜能够抗弱的或稀的酸碱溶液和轻微乙醇,MWCO只有轻微改变。**直接与有机溶剂接触会破坏CE膜。生物技术CE膜能在pH2-9与4-37℃下使用。即用透析装置中也可使用CE膜。 生物技术再生纤维素(RC)膜 生物技术RC膜通过再生过程制得,物理抗性与化学相容性得到改良,具有与生物技术CE膜一样高纯度与均一的MWCO。RC膜能够与高浓度的弱酸碱、低浓度的强酸碱、大多数醇类及一些温和的或低浓度有机溶剂共用,**直接与强极性或有机溶剂接触会破坏RC膜。生物技术RC膜能在pH2-12与4-60℃条件下使用。 生物技术聚偏二氟乙烯(PVDF)膜 疏水、惰性及无电抗性,生物技术PVDF膜是实验室透析的革命性进步,能够耐极端高温(130℃)及溶剂 条件。只有生物技术PVDF膜能够经受与大多数的酸碱(包括硝酸)和大多数的有机溶剂(包括DMF)直 接接触,**PVDF膜还具有独特的高温高压蒸汽灭菌的能力,可热封进行样品分装。

生化检测质控品和质控方法与制作流程

本技术涉及生化检测质控品和质控方法。本技术取得了如下有益的技术效果:1)本技术的生化检测质控品以健康人血清为原料制得,与临床检测标 本保持一致,最大程度避免了基质效应的同时,可以对ADA、AFU、DBIL、GPDA、TBA五项生化检测指标的检测进行有效质控,克服了现有的质 控品缺少部分或全部这五项物质的不足。2)可以采用健康人血清为原料制备,从而避免了临床生化检验剩余的大量血清无处可用所造成的浪费,节 约大量本来被浪费的血清资源;3)本技术的生化检测质控品通过科学设计制备,在合理的保存条件下,具有良好的批内、批间精密度和较长的稳定 性,适合在临床中使用。 技术要求 1.一种生化检测质控品,其特征在于:包括低值质控品和高值质控品; 所述低值质控品的制备步骤包括: S1,选取ADA、AFU、DBIL、GPDA、TBA五项生化指标在正常范围内的健康人血清作为低值质控品原料,灭活处理; S2,向步骤S1中经灭活处理的血清中加入叠氮钠,混合均匀,制得叠氮钠浓度为0.018~0.23wt%的混合溶液; S3,将步骤S2制得的混合溶液用滤膜过滤,得到低值质控品; 所述高值质控品的制备步骤包括: P1,选取AFU、DBIL、GPDA、TBA四项生化指标在正常参考范围2倍以上,且ADA生化指标在正常范围内的健康人血清作为高值质控品原料, 灭活处理; P2,使用透析袋对步骤P1中经灭活处理的血清进行浓缩处理,获得相当于原始体积60~70%的浓缩液; P3,向步骤P2制得的浓缩液中加入叠氮钠,混合均匀,制得叠氮钠浓度为0.018~0.23wt%的混合溶液; P4,将步骤P3制得的混合溶液用滤膜过滤,得到高值质控品。 2.根据权利要求1所述的生化检测质控品,其特征在于:所述低值质控品原料和高值质控品原料选自临床检测后剩余血清。 3.根据权利要求1所述的生化检测质控品,其特征在于,所述步骤S2和步骤P3中,所采用的叠氮钠为0.2wt%的叠氮钠溶液,用量按体积比为血清: 叠氮钠溶液=10:1。 4.根据权利要求1所述的生化检测质控品,其特征在于:所述步骤P1中,选取AFU、DBIL、GPDA、TBA四项生化指标在正常参考范围2~5倍,且 ADA生化指标在正常范围内的健康人血清作为高值质控品原料。 5.根据权利要求1所述的生化检测质控品,其特征在于:所述步骤P2中,采用聚乙二醇20000进行浓缩。 6.根据权利要求1所述的生化检测质控品,其特征在于:所述步骤S3和步骤P4中,采用0.2μm滤膜进行过滤。 7.根据权利要求1至6所述的生化检测质控品,其特征在于:所述步骤S1中选取的低值质控品原料与所述步骤P1中选取高值质控品原料的体积比为 2:3。 8.根据权利要求7所述的生化检测质控品,其特征在于:所述步骤S3制得的低值质控品和所述步骤P4制得的高值质控品采用1.5ml的棕色EP管分 装,每支分装量为150ul,并在-15~-30℃下冷冻保存。 9.一种生化检测质控方法,其特征在于:该方法使用权利要求1-8任一权利要求的生化检测质控品对ADA、AFU、DBIL、GPDA、TBA五项临床生 化检测指标的检测进行质控。 技术说明书 一种生化检测质控品和质控方法 技术领域 本技术涉及医学检验技术领域,特别涉及可以对ADA、AFU、DBIL、GPDA、TBA五项临床生化检测指标的检测进行有效质控的生化检测质控品和质控方法背景技术

生物制药工艺处理学考试2013-12(A卷)

中国药科大学 生物制药工艺学 期末试卷A卷 2013-2014学年第一学期 专业班级学号姓名 题号一二三四总分 得分 核分人: 得分评卷人一、填空题(每空0.5分,共30分) 1、细胞破碎包括哪三大类方法、和。 2、萃取因素也称萃取比,其定义为被萃取溶质进入的总量与该溶质在 中总量之比。 3、晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度,其中影响晶体大小的主要因素有 , , , 。 4、大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入 致孔剂,待网格骨架固化和链结构单元形成后,用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉,形成不受外界环境条件影响的 ,其孔径远大于2~4nm,可达 ,故称“大孔”。 5、在作分级分离时,为了提高分辨率,多采用比样品体积大倍的柱体积, 的柱比,较吸液量、较粒的凝胶固定相。 6、写出下列离子交换剂类型:732 ,724 ,717 ,CM-C , DEAE-C ,PBE94 。 7、请写出下列药物英文的中文全称:IFN(Interferon)、 第1页(共8页)

IL(Interleukin) 、 CSF(Colony Stimulating Factor)、rhGH(Recombinant Human Growth Hormone)、Ins(Insulin)。 8、生物药物的分类:、、、 。 9、在生化制药工艺中干燥的方法主要包括:、 、。 10、疫苗制备时,可用 、 和 方法扩增病毒。 11、各向异性膜分为两层,一层是,厚度为0.1~1μm,决定了膜的 性质,另一层是,厚度约0.1mm,作用是。 12、制备型高效液相色谱的重要参数有、、 、。 13、密度梯度离心常用的介质有、 、。 14、用100μmol/L NADH使乳酸脱氢酶吸附在固定化丙酮酸类似物上,若NADH从洗脱液中去除,则脱氢酶被洗脱,这种洗脱方法称为。 15、生化药物的主要资源有 、 、 和 。 16、粘多糖是一类含有 和 的多糖。 17、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)脂质是 ,临床应用效果 ,原因是 。从发现年代上看,该物质 于青霉素被发现。 第2页(共8页)

透析袋的选择和使用方法

透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,就叫做透析袋。 自ThomasGraham1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实 验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国UnionCarbide(联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管, 截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为 1万左右。 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为23mm~50mm不等。为防干裂,出厂时都用10% 的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。可先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠和0.001mol/LEDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。实 验证明,50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存 于4℃蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易 裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。 检查透析效果的方法是:用1%BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3检查NaCl、 KCl等。 为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(BiomedInstrumentsInc.)生产的各种型号的Zeineh透 析器,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。 根据个人使用经验,建议使用透析袋效果比较好,还有具体需要什么规格的 要看你的目的蛋白量有多大,才能决定使用多大的截留分子量的透析袋,一般截 留量越大价格也就会越高,还有就是透析袋宽度的选择,要看你的实验一次需要 透析多少量来决定。目前我的实验室使用的是上海生工的透析袋,宽度70mm普 通型的!

透析袋使用说明

北京索莱宝科技有限公司 透析袋使用说明 产品介绍 一、高精度、即用型透析袋,使用前无需处理(生物级,去除了硫化物和重金属离子,保存于防腐液中) 即用型透析袋的制造过程没有重金属污染及硫化物,无需预处理,只需用去离子水清洗即可使用,满足对截留分子量精确性和膜纯度的应用。 优点: 1.韧性膜材料,不易破损 2.杂质含量极少,可无需预处理,只需用去离子水清洗即可使用 3.孔径标准均一 4.对溶质的吸附性小 5.可选分子量范围广100-300000 6.多种扁平宽度可选 7.特有生物技术膜,不含硫化物及金属杂质 二、普通干型透析袋(美国联合碳化,甘油涂层,使用前需处理) 技术参数: 1.PH稳定范围:5-9 2.污染物水平:硫化物<0.3%;重金属<50ppm 3.化学兼容性:与很多盐兼容,比如CaCl2,(NH4)2SO4;还可与分子生物学及酶学中常用的水溶剂、有 机溶剂兼容,比如异丙醇、乙醇和丙酮。 4.温度抵抗性:可煮沸,可高压灭菌。 5.蛋白吸附:每克透析袋吸附蛋白量小于1ng。

北京索莱宝科技有限公司干型透析袋使用前处理方法: 1.把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2.在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟。 3.用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4.放在1mmol/L EDTA(pH8.0)中将之煮沸10分钟。 5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6.用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。 实验要求不高的可以用简易处理方法:在沸水中煮10min即可使用。 透析袋的应用: 去除盐类、表面活性剂和溶剂样品溶液的缓冲液置换和PH值的调节 浓缩蛋白质、多肽和抗体DNA电洗脱 电泳前稀释蛋白的制备小分子污染物清除 结合研究组织培养的提取纯化 透析袋的选择 1,正确选择合适的截留分子量 截留分子量的选择是以预留在膜内的大分子的分子量和将要被除去的小分子污染物的分子量为基础的。为达到合理有效的分离,需分离的两种物质分子量的比率至少为25. 选择截留分子量的经验法则:选择截留分子量值约为要保留的大分子分子量的一半,以获得至少90%的保留率。 2,正确选择扁平宽度 透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距

8种电化学水处理方法

8种电化学水处理方法 电化学水处理- 世间万物,都是有一利就有一弊。社会的进步和人们生活水平的提高,也不可避免地对环境产生污染。废水就是其中之一。随着石化、印染、造纸、农药、医药卫生、冶金、食品等行业的迅速发展,世界各国的废水排放总量急剧增加,且由于废水中含有较多的高浓度、高毒性、高盐度、高色度的成分,使其难以降解和处理,往往会造成非常严重的水环境污染。 为了处理每天大量排出的工业废水,人们也是蛮拼的。物、化、生齐用,力、声、光、电、磁结合。今天笔者为您总结用电’ 来处理废水的电化学水处理技术。 电化学水处理技术,是指在电极或外加电场的作用下,在特定的电化学反应器内,通过一定的化学反应、电化学过程或物理过程,对废水中的污染物进行降解的过程。电化学系统设备相对简单,占地面积小,操作维护费用较低,能有效避免二次污染,而且反应可控程度高,便于实现工业自动化,被称为环境友好’ 技术。 电化学水处理的发展历程 1799 年 Valta制成Cu-Zn原电池,这是世界上第一个将化学能转化为电能的化学电源 1833 年 建立电流和化学反应关系的法拉第定律。 19世纪70年代 Helmholtz提出双电层概念。任何两个不同的物相接触都会在两相间产生电势,这是因电荷分离引起的。两相各有过剩的电荷,电量相等,正负号相反,相互吸引,形成双电层。 1887 年 Arrhenius提出电离学说。 1889 年 Nernst提出电极电位与电极反应组分浓度关系的能斯特方程。 1903 年 Morse 和Pierce 把两根电极分别置于透析袋内部和外部溶液中,发现带电杂质能迅速地从凝胶中除去。 1905年 提出Tafel 公式,揭示电流密度和氢过电位之间的关系。 1906年

透析袋使用前如何处理解析

透析袋在使用前如何处理 透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素(再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美国美国光谱医学公司(spectrum,上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销)和美国Union Carbide (联合碳化物公司,上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商)生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写

为MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8 mm~77 mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide (联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量)通常为1万左右。 截留分子量越大也就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留的分子越小要求透析袋越密,价格越贵。 透析袋使用前处理: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中 将透析袋煮沸10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。前处理也可以将透析袋放在广口瓶中充满水,松动瓶盖,于20psi(1.40kg/cm2)

抗体纯化大全

抗体的纯化 第一节硫酸铵沉淀法 基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 试剂及仪器 ·组织培养上清液、血清样品或腹水等 ·硫酸铵(NH4)SO4 ·饱和硫酸铵溶液(SAS) ·蒸馏水 · PBS(含0.2g/L叠氮钠) (见附录一) ·透析袋 ·超速离心机 · pH计 ·磁力搅拌器 实验步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。 一、配制饱和硫酸铵溶液(SAS) 将767g(NH4)2SO4 边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液(4.1 mol/L, 25°C); 其它不同饱和度硫酸铵溶液的配制见表1;

二、沉淀 1、样品(如腹水)20 000′g 离心30 min,除去细胞碎片; 2、保留上清液并测量体积; 3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中,终浓度为1:1(v/v); 4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜(4°C),使蛋白质充分沉淀。 三、透析 1、蛋白质溶液10 000′g 离心30 min(4°C)。弃上清保留沉淀; 2、将沉淀溶于少量(10-20ml)PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L 叠氮钠透析24-48小时(4°C),每隔3-6 小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨; 3、透析液离心,测定上清液中蛋白质含量。 应用提示 一、先用较低浓度的硫酸氨预沉淀,除去样品中的杂蛋白。 1、边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中,使浓度为0.5:1 (v/v); 2、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜(4°C); 3、3000′g 离心30 min(4°C),保留上清液; 4、上清液再加SAS到0.5:1 (v/v),再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS,同前透析,除去硫酸氨; 5、杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时,用预沉淀除杂蛋白是非常有效的; 二、为避免体积过大,可用固体硫酸氨进行盐析(硫酸氨用量参考表1); 三、硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用,可得到更进一步纯化的抗体。 参考文献 1、Burd, R.S., Raymond, C.S., Ratz, C. A and Dunn, D.L (1993) A rapid procedure for purifying IgM monoclonal antibodies from murine ascites using a DEAE – disk. Hybridoma

透析袋使用方法

透析袋前处理方法: 方法一: 1、把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2、在大体积(500mL)的2%(W/V)的碳酸氢钠和1mmol/L EDTA.2Na (pH=8.0)中将透析袋煮沸10min。 3、用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4、放在500mL的1 mmol/L EDTA.2Na (pH=8.0)中将之煮沸10min。 5、冷却后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋必须戴手套。 6、在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。 说明: 透析液的配置:10g NaHCO3 + 186.6mg EDTA.2Na + 500mL蒸馏水 1 mmol/L EDTA.2Na:即373.2mg/L 方法二: 可用沸水煮5至10分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。 方法三: 可先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和1 mmol/L EDTA (pH=8.0)溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。

说明: 1.EDTA煮主要是为了除去生产时附着在透析袋上的金属离子。 2.透析袋的截留分子量3000kd。 使用后的透析袋保存方法: 1.用生理盐水浸泡以去掉蛋白,并用蒸馏水清洗干净,然后置于50%乙醇中保存即可; 2.用完以后,要彻底洗干净,透析袋也可以保存在0.1%叠氮钠(可防止微生物生长)里; 0.05%-0.1%叠氮钠,或者1mM EDTA,或者50%甘油中4度保存,公司的人建议前两种保存比较好! 3.使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水或者30%乙醇中,确保透析袋始终浸没在溶液内。若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌。从此时起取用透析袋必须戴手套。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。 透析膜前处理方法: 1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中15 min 泡软。 2. 浸入10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至80℃,同时不断搅拌至少30 min。 3. 换到10 mM EDTA.2Na 中浸泡30 min,以新鲜的EDTA 同样方法处理三次。 4. 再用80℃蒸馏水洗30 min,然后换到20% 酒精中,放在4℃冰箱中保存。

透析袋使用

透析即用半透膜(透析袋)将大分子蛋白质分离出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品,透析法最简便。 技术指标:MWCO(截留分子量),单位:Diatoms 。 透析时,小于MWCO的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜,其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度:4℃,升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器,均能提高透析速度。 使用须知 1某些化学物质会破坏透析袋微孔且不可逆转。计有: 烃、卤化烃、醇、酮、酯、胺、丙酮、甲基乙基酮、二氧杂环乙烷、环已烷等。 酸(甲酸、乙酸、稀强酸如5%HCI),10%苯酚,30%双氧水。 甲醇、乙醇:浓度小于5%时,透析功能在,而MWCO变化。 2蛋白质吸附量,小于1ug/克,(以透析袋干重计)。 正常使用PH值5-9(可重复使用)。 极限使用PH值2-12(一次性使用)。 3前处理:煮沸5分钟后用蒸馏水60℃洗冲2分钟,置4℃蒸馏水中待用。 长期保存液:0。05%-0。1%叠氮钠,1mMEDTA或50%甘油,温度(4℃),使用前以蒸馏水洗净。 4即用型透析袋毋须前处理,使用前用蒸馏水洗净即可。 5透析袋装液时应留1/3-1/2空间,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破(含盐量高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%系正常情况)。 6使用时须戴手套。 7透析效果检查用1%氯化钡检查硫酸铵、硫酸钠 1%硝酸银检查氯化钠、氯化钾[/size] 储存条件: 透析袋可存放于10-29度;每次使用后将余下的膜放回袋子并密封好,以防干裂。 透析袋使用前处理方法: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。 5. 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。 实验要求不高的可以用简易处理方法:在沸水中煮10min即可使用。

透析袋使用后保存方法:

透析袋使用后保存方法: 1.用生理盐水浸泡以去掉蛋白,并用蒸馏水清洗干净,然后置于50%乙醇中保存即可; 2.用完以后''要彻底洗干净''透析袋也可以保存在0.1%叠氮钠(可防止微生物生长)里; 0.05%-0.1%叠氮钠,或者1mM EDTA,或者50%甘油中4度保存。建议前两种保存比较好! 3.使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水或者30%乙醇中,确保透析袋始终浸没在溶液内。若长时间不用,可加少量NaN3,以防长菌。从此时起取用透析袋必须戴手套。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用 透析袋的使用方法透析原理 透析是指溶质从半透膜的一侧透过膜至另一侧的过程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要该膜含有使一定大小的溶质通过的孔径,那么这些溶质就可以通过弥散和对流从膜的一侧移动到膜的另一侧。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 人体内的毒物包括代谢产物,药物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合适,就能够通过透析清除体外。其基本原理是弥散和对流。弥散就是半透膜两侧液体各自所含溶质浓度梯度及它所形成的不同渗透浓度,溶质从浓度高的一侧通过半透膜向浓度低的一侧移动。对流也称超滤,是指溶质和溶剂因透析膜两侧的静水压和渗透压梯度的不同而跨膜转运的过程。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide(联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为1万左右。 透析袋的使用方法 使用前处理: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和10mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。 5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。 透析膜(前处理方法如下): 1. 戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中15 min 泡软。 2. 浸入10 mM sodium bicarbonate 中,并加热至80℃,一边搅拌至少30min。 3. 换到10 mM Na2?EDTA 中浸泡30 min,以新鲜的EDTA 同样方法处理三次。 4. 再用80℃蒸馏水洗30 min,然后换到20% 酒精中,放在4℃冰箱中保存。

透析袋实验前处理

①把透析袋剪成适当长度(10cm左右)的小段。 ②取适量透析袋处理液(Fast-Tre Solution)稀释100倍,将透析袋放于其中煮沸10分钟。 ③取出用蒸馏水彻底清洗透析袋。 ④暂不使用的话需要将透析袋完全浸泡到稀释100倍后的透析袋储存液(Long-Sav Solution)中,存放于4度。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 ⑤浸泡在透析袋储存液中的透析袋取出使用前,须将透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净,冲洗三次即可。 实验要求不高的可以用简易处理方法:在沸水中煮10min即可使用 ⑥使用时,一端用下沉透析袋夹子夹紧,灌满水后,用手指适当加压,检查不漏,方可装入样品。通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。装完样品后,用上浮夹子夹紧袋口,可在袋内放一玻璃珠,以使透析袋处于悬浮状态,即可进行透析(详见下页透析袋装置简图)。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁力搅拌器。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。 +

①PH稳定范围:5-9;②污染物水平:硫化物<0.3%,重金属<50ppm;③化学兼容性:与很多盐兼容,比如CaC12,(NH4)2SO4;还可与分子生物学及酶学中常用的水溶剂、有机溶剂兼容,如异丙醇、乙醇和丙酮;④温度抵抗性:可煮沸,可高压灭菌;⑤蛋白吸附:每克透析袋吸附蛋白量<1ng。 处理方法: 1.将透析管剪成适当长度(10-20cm)的小段,即成透析袋。 2.在大体积的2%(m/v)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH=8)中将透析袋煮沸10min。 3.将透析袋用蒸馏水彻底漂洗。 4.将透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。 5.透析袋冷却后存放于4度,应确保透析袋始终浸没在液体中。注:从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。 6.在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。

透析袋使用方法和注意事项

透析袋使用方法和注意事项 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,就叫做透析袋。 自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide (联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为1万左右。 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为23 mm~50 mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。可先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明,50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。 检查透析效果的方法是:用1%BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3 检查NaCl、KCl等。 为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(Biomed Instruments Inc.)生产的各种型号的Zeineh 透析器,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。 根据个人使用经验,建议使用透析袋效果比较好,还有具体需要什么规格的要看你的目的蛋白量有多大,才能决定使用多大的截留分子量的透析袋,一般截留量越大价格也就会越高,还有就是透析袋宽度的选择,要看你的实验一次需要透析多少量来决定。目前我的实验室使用的是上海生工的透析袋,宽度70mm 普通型的!

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