高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展

张良晓

(中国地质大学(武汉)材料科学与化学工程学院,武汉　430074)

摘　要　本文综述高效液相色谱法作为药物分析的常规方法,药物动力学研究,药物含量测定等药物分析上的应用研究进展,并对应用研究的方向进行了预测。

关键词　高效液相色谱;药物分析;应用研究;进展高效液相色谱法(Hig h-Per for mance Liquid Chr omatogr aphy,HPLC)是以液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80%则需用高效液相色谱来分析。液相色谱根据分离机理的不同可分为液液分配色谱、液固吸附色谱、离子交换色谱和排斥色谱(或凝

胶渗透色谱)[1]

。高效液相色谱已经广泛应用于药物的含量测定、组成分析、质量控制等方面[2]。

近年来高效液相色谱法在药物分析中占主要地位。据美国药典22版载,HPLC 在含量测定方法中位居第一。其特点是分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样

品处理较简单[3]

。本文在按在药物分析中的作用从以下几个方面综述了高效液相色谱法在药物分析的研究进展。

1　高效液相色谱作为常规分析方法在药物分析中的应用

高效液相色谱法作为药物分析中的最主要的分析方法,常被作为常规分析和检验方法。近年来在这

个方面的研究比较多,刘树业.等[4]

为时刻监控治疗肝癌时的抗癌药物剂量即血中的药物浓度,提高疗效,减少副作用,采用紫外-HPLC 法对血中和组织中的阿霉素浓度进行分析.用U V -240紫外分光光度计,BECKM AN332型高效液相色谱仪,采用反向色谱法.秦.等[5]针对近几年国际奥委会医学委员会公布的禁用表中新增药物及一系列利尿剂的相关化合物进行了研究,比较了不同的提取方法及回收率,研究了几种药物的排泄情况;建立了同时分析13种利尿剂的高效液相色谱测定方法,检出限小于5ng 。左雄军.等[6]用0.02mol/L 的三羟甲基胺基甲烷(用磷酸调pH 值至7)和甲醇(含2%乙酸和0.25%庚烷磺酸钠)作流动相进行梯度洗脱,建立了脂性油膏药物中黄芩甙含量的反相高效液相色谱分析方法,本法分析速度快,重现性好,黄芩甙的平均回收率为103.7%。张晓青.等[7]采用反相离子对高效液相色谱法研究了唑来膦酸及其有关化合物的色

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The assessment of heavy metal pollution for the

sediments of Jiaozhou Bay W A N G Gui ,YA O De

(Chem istry Departm ent,Baotou T eacher's Co llege,Baotou,Inner Mo ng olia 014030)

(Co lleg e of Reso ur ce and Enviro nmental Engineer ing ,Shando ng U niv ersit y o f T echno lo gy ,Z ibo,Sha ndong 255091)

Abstract :Potential eco logical risk (RI)and Geoaccumulatio n index (Igeo)w ere aplied for heavy m etal po llution assessment in Jiaozhou Bay.The r esults sho w ed that the middle level pollutions were ex isted in Jiaozhou Bay.T he Ig eo indexes w ere fro m 1to 4and RI v alues w ere mostly betw een 100～300.A higher RI value o f about 600w as appear ed in the sediments o f Haipo River estuar y ,w hich show ed a co mpar atively heavier po llution ex ist there .The consequence of potential eco logical r isk for heav y metals w as Cd >Pb >Cu >As >Zn .

Key words :Jiaozhou Bay ;sedim ent ;heav y m etal ;pollution ass ;essment

收稿日期:2005年6月28日

　2005年第7期内蒙古石油化工

谱分析与分离方法。优化的分离条件:以Hy persilC8

柱为固定相,以甲醇5m mol/L磷酸二氢钠缓冲液(含6m mol/L四丁基溴化铵溶液,用氢氧化钠溶液调节pH至7.0)(体积比为20∶80)为流动相,等度

洗脱,流速为1.0m L/min,紫外检测波长为220nm,柱温为室温。在该色谱条件下,唑来膦酸与有关化合

物(包括其合成过程中残余的原料咪唑乙酸和其他氧化分解产物)的分离良好,与保留时间最接近的杂

质峰的分离度大于2.5。该方法不需进行复杂的样品处理,简单快速,适用于唑来膦酸的常规分析。

另外,国内在这个方面的研究还在兴奋剂中几种易分解药物[8],乙酰螺旋霉素活性成分[9],血或尿中咪达唑仑及其代谢物[10],饲料中八种磺胺药物[11],山羊血浆中三苯双脒[12],嘌呤类化合物[13]等药物上。这些研究充分利用了高效液相色谱的操作

简单,灵敏度高,回收率高的特点,利用高效液相色谱与其他检测方法联用,在最佳吸收峰、检出线、精密度上进行了研究。

2　高效液相色谱在药物动力学研究进展

高效液相色谱测定药物在肌体内的浓度,并结

合一定的统计方法对数据进行处理可以对药物代谢动力学进行研究。刘湘新.等[14]对家兔单剂量静注和灌服儿茶素(Catechin)25m g/kg体重各5只。用高效液相色谱法测定其血药浓度。房室模型分析表明,注给药后的药时数据符合无吸收二室开放模型,儿茶素在健康家兔体内的药动学特征是:吸收迅速,达峰时间短,消除快,半衰期短,表观分布容积较大,口服摄入吸收不完全。张祚新.等[15]应用HPLC法测定了单次混饲口服氧氟沙星(10mg/kg)后,鲤鱼体内不同时间的血浆药物浓度。利用MCPKP药代动力学软件分析数据,其药代动力学特征符合一级吸收一室开放模型,结果表明,氧氟沙星在鲤鱼体内吸收较迅速,达峰时间较短,血药峰浓度高,消除缓慢,保持有效杀菌浓度时间长,适用于鱼类细菌性疾病的预防和治疗。李克.等[16]建立了反相高效液相色谱法监测人口服地尔硫卓缓释片后血药浓度。血样用正己烷-氯仿-异丙醇混合溶剂(60:40:5)提取后,以C18化学键合硅胶为固定相,甲醇-水-三乙胺为流动相,安定为内标,在239nm波长处定量检测。血药浓度在15～300 g/L范围内线性关系良好,最低检测浓度为3 g/L。批内(n=7)及批间(n =5)测定相对标准偏差分别小于6.8%和8.4%,回收率为91%～104%。监测了8名健康人口服盐酸地尔硫卓缓释片后的不同时间的血药浓度变化,计算了有关的药代动力学参数。

高效液相色谱在药物代谢动力学上的研究主要

是为药物代谢动力学软件提供数据,并最终通过药代动力学软件处理得到药物动力学结果。其中动力

学参数主要集中在:吸收半衰期(t

1/2 )、消除半衰期(t1/2)、达峰时间(t max)、最大血药浓度(C max)、曲线下

面积AU C、消除率ClB、表观分布容积Vd等。通过

这些动力学参数对药物代谢动力学进行研究,并通过这种方法对药物对机体的作用情况进行比较,有利的指导药物的开发和研制,在这个方向的研究可能是高效液相色谱与药代动力学软件联用分析的发展方向。

3　高效液相色谱在药物含量的测定研究应用进展高效液相色谱法在药物含量的测定在药物分析中是主要的一个方面,是一种及分离和测定为一体的分析方法,主要的特点是:专一性强,灵敏,快速简便。下面按应用的不同从以下几个方面论述近年来的研究进展情况。

3.1　高效液相色谱在药物(含草药)成分含量测定上的应用

在药物分析中,高效液相色谱由于其专一性,灵敏度高,快速简便的特点,广泛的应用于药物分析中的定量分析,尤其在干扰因素较多的时候表现出更大的优越性。关日晴[17]采用高效液相色谱法测定盐酸洛美沙星滴眼液中的洛美沙星含量;用C柱为分离柱,0.02mol/nm酸溶液(用三乙胺调节pH值至2.6)-乙腈(体积比85:15)为流动相,检测波长287nm;洛美沙星进样量在0.48～0.72 g范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9998),平均回收率100.4%,重复进样的RSD0.33%(n=6)。李克.等[18]应用反相高效液相色谱法检测了雷公藤提取物中雷公藤甲素的含量。样品经洗脱提取后,以C18化学键合硅胶为固定相,乙腈-水(40:60,V/V)为流动相,用210nm波长定量检测。测定结果表明,雷公藤甲素浓度在0.25～4.00mg/L范围内线性良好,最低进样检测浓度为0.1m g/L。批内(n=5)及批间(n=5)测定相对标准偏差分别为1.9%～6. 5%和2.7%～7.8%,回收率为89.8%～92.0%。此外国内还对喹诺酮类抗菌药[19]、复方阿莫西林粉中阿莫西林和克拉维酸[20]、复方感冒液[21]、芩连口服液中黄芩苷[22]、氢溴酸右美沙芬片[23]、饲料中氯羟吡啶[24]、注射用硫酸奈替米星[25]、小诺霉素中C2b[26]、保健食品中的西地那非和西力士[27]、植物愈伤组织中的喜树碱及其衍生物[28]、饲料中十三种磺胺类药物[29]等药物的测定进行了研究。

在利用高效液相色谱法进行测定与其他技术联用,检测器一般有紫外分光光度计,质谱等。这些精密的检测器决定了分析的灵敏度,对于分析起着重要的重要,是高效液相色谱分析法中重要的组成部分。

3.2　高效液相色谱在药物残留测定上的应用

由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量分析,被广泛使用于药物残留的测定上。周东海.等[30]以高效液相色谱法建立了猪、羊、鸡肝组织中西维因残留量的检测方法。采用ODS色谱柱,二极管阵列检测器,甲醇/水(65/35)为流动相,222nm 检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低检测限为0.1mg/L,线性范围为0.1～20mg/L,标准曲线回归方程为:y=-22459.83+454684.31x,线性关系良好(r=0.9999)。样品以乙腈提取,并加入无水硫酸钠和正已烷,过滤后去除杂质,乙腈层在45～50℃下水浴氮气吹干,残渣用甲醇溶解后,进样分析。平均回收率均大于80%,日间和日内变异系数均小于10%。符合药物残留痕量分析要求。林海丹.等[31]研究了动物源性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件,建立了高效液相色谱法测定动物性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的方法,该法检测限0.025m g/kg,回收率为84%～98%。此外,在人血中药物含量的测定中也有很多的应用。金鸣.等[32]建立了血浆及尿液中异烟肼的高效液相色谱快速测定方法,以满足临床药物分析和法医学鉴定的需要,提高对血浆及尿液中异烟肼浓度检测的准确性。以香草醛为衍生化试剂,将异烟肼经柱前衍生为异烟肼香草醛腙,直接对处理后样品中的腙进行定性、定量分析。以在空白人体液样本中定量添加标准异烟肼的方法考察了样品的前处理方法、仪器条件、线性范围、精密度、回收率等,并对健康受试者血液中的异烟肼浓度进行了监测。

4内蒙古石油化工 2005年第7期　

结果表明,方法的线性范围为0.2mg /L ～12.0m g /

L ;检测限为0.2mg /L ;日内、

日间精度均小于4.0%(n=5);回收率在96.3%以上。该方法快速、准确、实用,适用于临床药物浓度监测、法医毒物分析和药代动力学等相关研究。本方法在药物评估,法医鉴定等方面有很大应用前景。4　结束语

高效液相色谱法由于分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单等优点在确定药方案和治疗剂量,以及药物动力学分析和药效学评价提供了方法的基础,有着广泛的应用前景。

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作者简介:张良晓(1981-),中国地质大学(武汉)材料科学与化学工程学院,主要从事药物合成与分析的研究。

The Progress of Application Study of the HPLC in Pharmaceutical Analysis ZH A N G Liang -x iao

(China U niversity of Geosciences (w uhan )Faculty Of M aterial Science

And Chemical Eng ineering ,Hubei,Wuhan,430074)

Abstract :T his article summ arizes the pro gress of application study of HPLC in Pharmaceutical Analysis w hich m ainly includes routine m ethod of pharmaceutical analysis ,the study of pharmaco kinetics and determination of phar mic content.In addition,the author fo recasts the study dir ection o f com bination of HPLC .

Keywords :HPLC,Pharm aceutical Analysis ,Applicatio n Study ,Pr ogress

收稿日期:2005年6月28日

　2005年第7期张良晓　高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展