家畜家禽免疫注意事项
浅谈家畜家禽免疫注意事项
疫苗免疫是预防动物传染病最重要的措施之一，通过疫苗免疫可使动物获得坚强的抵抗力。由易感动物转变为不易感动物，从而保障动物的健康。特别是对病毒性疾病，由于没有有效的治疗药物，因此，疫苗免疫显得尤为重要。但是，在实际应用中疫苗免疫的效果受到多种因素的影响，如疫苗的内在质量、类型以及保存、运输条件，动物的品种、营养、饲养管理条件、环境、应激、母源抗体，以及免疫程序是否合理和是否存在免疫抑制因子等等。这些因素可通过不同的机制干扰疫苗的免疫效果，从而造成动物机体免疫力不足甚至免疫失败，导致个体或一定群体的疾病发生或流行，给养殖业造成重大损失，并影响动物食品质量安全。因此，只有充分了解影响疫苗免疫效果的因素，科学地开展疫苗的免疫接种，才能充分发挥疫苗的作用，保护养殖业健康发展。
一、免疫前的准备工作
1.市级相关部门应培训县级骨干，而县级兽医行政管理部门则负责乡镇兽医、村级防疫员和其他协助人员的组织，并进行疫苗免疫技术、个人防护知识和防止疾病扩散知识的专门培训。
2.制定详细的免疫计划。村级防疫负责统计本乡镇的养殖户、饲养动物品种及数量，乡镇兽医负责统计本乡镇的养殖户、饲养动物的品种及数量。因此，乡镇兽医可计算所需疫苗的品种、数量以及需要的防疫人员数量、天数。县级畜牧局根据各乡镇养殖量的不同，负责乡镇与乡镇之间的协调。
免疫组化技术全程原理
免疫组化技术全程原理 一、概念和常用方法介绍 1、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。 3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 2）免疫酶标方法
动物疫病免疫接种技术
动物疫病免疫接种技术 一、概念 免疫接种是给动物接种疫苗或免疫血清，使动物机体自身产生或被动获得对某一病原微生物特异性抵抗力的一种手段。通过免疫接种，使动物产生或获得特异性抵抗力，预防疫病的发生，保护人、畜健康，促进畜牧业生产健康发展。 二、免疫接种 （一）免疫接种的类型 根据免疫接种的时机不同，可分为预防接种、紧急接种和临时接种。 1、预防接种。指在经常发生某类传染病的地区、或有某类传染病潜在的地区、或受到邻近地区某类传染病威胁的地区，为了预防这类传染病发生和流行，平时有组织、有计划地给健康动物进行的免疫接种。 2、紧急接种。指在发生传染病时，为了迅速控制和扑灭传染病的流行，而对疫区和受威胁区尚未发病的动物进行的免疫接种。紧急接种应先从安全地区开始，由外向内，逐头（只）接种，以形成一个免疫隔离带。 3、临时接种。指在引进或运出动物时，为了避免在运输途中或到达目的地后发生传染病而进行的预防免疫接种。 （二）免疫接种的准备 1、器械。 （1）接种器械根据不同的免疫方法、畜禽的大小，准备所需要的接种器械。注射器、针头（大小）、镊子、刺种针；点眼（滴鼻）
滴管；饮水器、玻璃棒、量筒；喷雾器等。 （2）消毒器械剪毛剪、镊子、消毒灭菌器等。 （3）动物保定器。 （4）带盖瓷盘、疫苗冷藏箱、冰袋、体温计、听诊器、废弃疫苗瓶收纳器等。 （5）动物防疫人员防护用具：防护服、防护靴、防护帽、防护目镜、防护口罩等。 2、药品 （1）注射部位消毒75％酒精、5%碘酊、脱脂棉等。 （2）防疫人员专用消毒药及肥皂等。 （3）抗应激过敏药品 0.1%盐酸肾上腺素、地塞米松磷酸钠等。 3、注意事项 (1)器械清洗一定要保证清洗的洁净度，不能有污染。 (2)灭菌后的器械一个周内不用，下次使用前应要重新消毒灭菌。 (3)禁止使用化学药品消毒，因为用化学消毒药消毒后，器械上难免会残留化学消毒剂，与疫苗接触会造成疫苗的失效。 （4）使用一次性无菌塑料注射器时，要检查包装是否完好和是否在有效期内，开袋要马上使用，不能开袋在空气中放置太长时间，以免造成污染。 （三）检查待接种动物健康状况 为了保证免疫接种动物安全及接种效果，接种前应观察了解预接种动物的健康状况。按照几不打的原则： （1）检查动物的精神、食欲、体温，不正常的不接种。 （2）检查动物是否发病、是否瘦弱，发病、瘦弱的动物不接种。 （3）幼小、怀孕的动物不接种。 （4）对上述动物进行登记，以便以后补免，不能漏免。
免疫组化方法
免疫组化技术及其注意事项 一、免疫组化染色前处理技术操作规范 1、取材：理想的取材厚度是0.2cm~0.3cm，大多数实验室都认为组织在加热抗原修复过程中造成脱片的主要原因是取材过厚或脱水浸蜡处理不当所致。良好的取材、固定、脱水过程是免疫组化质控的前提，如果H&E切片都做不出满意的染色结果，那么免疫组化染色也将无从谈起,根本无法保证染色质量。 2、固定：在众多的组织固定液中（如甲醛、乙醇、戊二醛、多聚甲醛等），不同的实验方法在使用上各有千秋。但在保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性以及试剂的价格上，福尔马林是最好、既经济又通用。而含酸或含汞的固定液对抗原保存均不理想。组织离体后固定一般不要超过30分钟，在常温条件下固定时间为8-24小时。同时还要注意避免福尔马林过度固定造成的组织抗原丢失，有研究发现新鲜组织经过福尔马林一周固定后组织抗原丢失严重，抗原几乎不能被检测，因为组织固定后会引起蛋白或蛋白分子之间形成交联，导致抗原位点遮盖，可以通过抗原修复方法来修正，若加抗体前不采用抗原修复，则免疫组化染色常不能到达理想结果或不成功。组织同样不能长时间放置在70%的乙醇中，酒精固定后的组织形态不如福尔马林固定的组织.脱钙液对抗原破坏较为严重，因此在组织脱钙前最好在福尔马林液中固定48小时，若组织没有固定透则酸会破坏抗原，脱钙液中酸的浓度与脱钙时间都必须尽量控制在最低的限度。 3、浸蜡：我们认为浸蜡温度应控制在58~60℃左右，浸蜡用的石蜡应经常更换，以减少石蜡中二甲苯的含量。高温下的二甲苯容易使组织发脆，细胞收缩，更容易掉片。 4、切片厚度：用于免疫组织化学染色的切片厚度为3-4微米。为防止在染色过程中脱片，需要使用硅化玻片裱片。 5、硅化玻片的制备：载玻片经酸洗冲洗干净后烤干；2%APES丙酮或无水酒精中浸泡1~2min；丙酮或无水酒精洗1~2分钟；蒸馏水浸洗1~2min；烤干备用。 6、烤片：切片在60℃~65℃烤箱中烤片30-60分钟左右。有些实验室采用烤片过夜。有报导烤片温度超过60℃时，烤片时间超过18小时的切片，免疫组化染色强度比烤4小时的切片要略弱。温度过高或时间过长均会影响抗原的活性，原因是在高温干燥条件下可以加速组织切片中抗原的氧化。 7、切片保存：一些实验室研究人员习惯将组织蜡块连续切片后长期保存在室温
免疫组化基本步骤
细胞免疫组化染色步骤 1．细胞爬片，取出后，PBS洗三遍，每次3分钟。4℃冷丙酮固定10分钟，（或用4%多聚甲醛固定30分钟），干燥30分钟。 2. 用PBS洗三次，每次5分钟，加3%过氧化氢30μl，室温孵育10分钟，（以消除内源性过氧化物酶的活性）蒸馏水冲洗，PBS洗三次，每次5分钟。 3．加1%的Triton X-100 30μl，室温孵育10分钟，增加细胞膜的通透性。蒸馏水冲洗，PBS洗三次，每次5分钟。 4．滴加正常山羊血清30μl，封闭非特异性结合位点，以消除非特异性染色，室温孵育30分钟，倾去勿洗。 5．滴加适当稀释度的一抗，空白对照组以PBS代替一抗，4℃湿盒孵育过夜。PBS洗三次，每次5分钟。 6．滴加生物素标记的二抗工作液30μl，室温孵育30分钟。PBS洗三次，每次5分钟。 7．滴加辣根酶标记链酶卵白素30μl，室温孵育30分钟。PBS洗三次，每次5分钟。 8．滴加DAB显色剂30μl，显微镜下观察显色，自来水冲洗。 9. 将处理好的玻片细胞核衬染：浸入苏木精染液染色2min，自来水洗，迅速过盐酸酒精溶液，自来水洗，过氨水溶液，自来水洗。 10.梯度酒精脱水，过70%酒精1次，95%酒精2次，无水乙醇3次，每次1min 11.二甲苯透明，过二甲苯溶液3次，每次１min。 12.中性树胶封片将有细胞的一面向下，用中性树脂封片。 稀盐酸酒精溶液：用75%酒精配制1%盐酸。 淡氨水溶液：在400ml自来水中滴2滴浓氨水(使细胞核蓝化) 另外：需1%TritonX-100增加细胞膜通透性。苏木素复染时间和盐酸酒精脱色时间需自己摸索，我是染5-6秒脱色1-2秒。盐酸酒精还可用70%乙醇配制1%盐酸。我没用淡氨水溶液。若为悬浮细胞则需涂片，20μl即可。
动物免疫操作规程及注意事项
动物免疫操作规程 （一）、器械的准备和消毒。注射器、针头、镊子、针盒等严格冲洗，经煮沸20--25分钟后备用。并备体温表、包裹纱布、药棉、耳标钳、耳标、疫苗专用储存箱、登记簿、动物免疫证、疫苗、碘酒、酒精和抢救药品等。 （二）、严格遵照各种疫（菌）苗使用说明中的各项要求和注意事项。 （三）、掌握片区内及周围的动物疫情，并对预防对象进行健康检查。对于疫区内的、正在患病的、瘦弱的、母源抗体尚未消失的和重胎临产的动物暂时不免疫接种，待上述原因消除后再进行预防接种。 （四）、疫（菌）苗的稀释。按各种疫（菌）苗的要求进行稀释，猪瘟冻干苗用生理盐水、猪二联苗用氢氧化铝液按每头份疫苗1毫升稀释；禽流感-新城疫二联苗、鸡新城疫苗、狂犬病疫苗用注射用水按使用方法酌情份量进行稀释；口蹄疫疫苗、牛出败苗、蓝耳病、禽流感等不需稀释,只需在使用时振荡均匀即可。稀释、吸药所用注射器和针头都必须严格消毒。稀释、吸药的针头留在药未用完的瓶塞上，用挤干的酒精棉花包裹，作专门吸药用。 （五）、注射时，在注射部位用碘酒、酒精消毒后，准确、足量注射（我县现行规格的猪瘟冻干苗、猪二联苗、猪三联苗每瓶40头份，注射38头猪；每瓶20头份，注射19头猪；牛出败苗100毫升，注射18头牛；口蹄疫苗按猪苗每头份2毫升，牛苗每头份3ml进行注射）。 （六）、注射后，打耳标进行标识，并作好登记、应填发免疫证的填发免疫证，嘱咐畜主保存好免疫证，以备以后查验。 （七）、疫（菌）苗药瓶及沾有疫（菌）苗药液的废弃物等均需烧毁或深埋，器械立即消毒。 （八）注意事项： 1、吸药时只准吸出，不准推入。需排空气时，针头尖孔处用消毒药棉吸干排出的药液。
免疫组化步骤
免疫组化实验步骤 细胞和组织的固定 （一）固定 为了更好的保持细胞和组织原有的形态结构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定。固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度的保存细胞和组织的抗原性，使水溶性抗原转变为非水溶性抗原，防止抗原弥散。不同抗原，其稳定性也不相同，因而对固定剂的耐受性差异较大 （二）固定剂 用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如下。 1．醛类固定剂双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强，收缩性小。有人认为它对IgM、IgA、J链、K 链和λ链的标记效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。 1）4%多聚甲醛为我们常用固定剂 2）Bouin’s液 该固定液为组织学、病理学常用固定剂之一，对组织穿透力较强而收缩性较小，比单独醛类固定更适合免疫组化染色。Kayhko认为用于标记B细胞的J链较好，但Bullock则认为它可导致Igg γ重链变性，故必需加大第一抗体的浓度。 2．丙酮及醇类固定剂 系最初免疫细胞化学染色的固定剂，其作用是沉淀蛋白质和糖，对组织穿透性很强，保存抗原的免疫活性较好。但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，解决的办法是和其它试剂混合使用，如加冰醋酸、乙醚、氯仿、甲醛等。 丙酮的组织穿透性和脱水性更强，常用于冰冻切片及细胞涂片的后固定，保存抗原性较好，平时4。C低温保存备用，临用时，只需将涂片或冰冻切片插入冷丙酮内5-10min，取出后自然干燥，贮存于低温冰箱备用。 以上介绍了免疫组织化学中常用的固定液，用于免疫组化的固定剂种类很多，不同的抗原和标本需经过反复试验，选用最佳固定液，迄今尚无一种标准固定液可以用于各种不同的抗原固定。而且同一固定液固定的组织，免疫组化染色标记
免疫组化常用方法介绍及个人经验总结
免疫组化常用方法介绍及个人经验总结 1 、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2 、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3 、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。 3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP 法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4 、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 2）免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60 年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。 免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC 法、SP 三步法、即用型二步法检测系统等。
免疫接种技术及免疫接种注意事项
免疫接种技术及免疫接种注意事项 免疫接种技术及免疫接种注意事项 摘要：动物免疫接种是通过给健康动物接种某种抗原物质，激发动物机体产生特异性抵抗力，使易感动物转化为不易感染的一种手段。有组织、有计划地进行免疫接种是预防和控制动物传染病的有效措施，尤其对重大动物疫病的免疫有关键作用，如每年进行的禽流感、口蹄疫、伪狂犬、猪瘟等的预防接种。笔者从事动物免疫多年，现就动物免疫接种技术及注意事项作以阐述，以供参考。 关键词：动物动物免疫注意事项 1、家禽免疫接种技术 1.1滴眼、滴鼻。这种方法适用于新城疫Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系疫苗、传染性法氏囊、弱毒毒疫苗、传染性支气管炎弱毒苗及传染性喉气管炎弱毒型疫苗的接种，对幼雏应用这种方法，可以避免疫苗病毒被毒源抗体中和。 1.2翼下刺种。此法适用于鸡痘疫苗、新城疫I系疫苗等的接种。 1.3羽毛囊涂擦。此法可用鸡痘疫苗的接种，但已少用。 1.4滴肛或擦肛。此法仅用于传染性喉气管炎的强毒型疫苗。 1.5皮下注射。马立克氏疫苗，宜用颈背皮下注射接种。各种油乳剂灭活疫苗也适用皮下注射法。 1.6肌肉注射。此法是把疫苗直接注射于肌肉内，禽霍乱弱毒菌苗或灭活菌苗以肌肉注射较好。此法作用迅速，剂量准确。新城疫I 系苗肌肉注射免疫效果比滴眼、滴鼻好，灭活苗必须用注射法，不能口服或于滴眼、滴鼻。 肌肉注射一般按使用说明书稀释后，较小的禽只注射0，3毫升，成禽则每只注射0.5毫升。肌肉注射以胸部肌肉为好，应斜向前，以防刺入肝脏、心脏或胸腔内造成死亡，对较小禽尤其注意。 1.7饮水法。对于大群禽只（万只）逐只进行免疫接种费时费力，且不能于短时间内达到全群免疫。对于产卵期和产卵盛期的鸡群为避免骚扰禽群，常采用群体免疫法。群体免疫法中最常用，最易做的就
免疫组化染色的操作技巧和注意事项
免疫组化染色的操作技巧和注意事项 【摘要】目的本院对免疫组化染色过程中存在的问题及对策进行深入的探讨以及仔细的分析。方法自从2010 年6 月~2011 年7 月期间, 本院共收治免疫组化染色标本患者有200 例, 对其中存在问题的60例患者标本进行了仔细的分析, 并且要提出科学的应对措施。结果本院对疫组化染色过程提出了主要的积极应对措施和科学的建议。结论对于每一个步骤以及环节, 都会影响到染色的最终后果, 对此, 要尽量避免在染色过程中会出现一些问题, 会使免疫组化染色的质量有所提高。 【关键词】免疫组化；技术方法；质量控制；抗原修复；原因分析对于免疫组化(IHC) 技术在上世纪的80 年代之后, 在我国就迅速的开展, 至今已经有20 年快速发展的历程, 现在已经逐渐的成为病理科工作中主要的组成要素。综合性操作技术主要是导致免疫组化, 这样会使其反应步骤增加, 出现复杂的影响因素, 技术员在基础技术上的操作要求是相对较高的, 对免疫组织学习要进行不断的提高, 了解这种技术在病理诊断方面是主要的辅助方式, 在对疾病诊断、分析、预后以及指导临床个体化治疗等方面, 都有着主要的作用。
在免疫组化的技术方面, 也存在着各种实质性的问题, 收治免疫组化染色标本200 例, 其中有60 例标本存在着问题, 本院对其进行仔细的分析, 并且提出相应的科学对策治疗方式。 1 免疫组化染色不理想的原因分析及改进措施 1. 1 由于大分子的化学结构相对稳定, 它在水中呈现胶状体, 不易被机体破坏或排除, 这样在体内存留时间就很长, 有利于持续刺激淋巴细胞。抗体是人体抵抗感染的一种重要武器, 抗体是人或动物受抗原物质刺激后, 由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质, 并具有疏水性, 因此当对抗体进行稀释时可降低它的疏水性, 当pH 接近抗体的等电点时, 抗体的疏水性能十分巨大。 1. 2 抗体与抗原的交叉反应抗原是一类能诱导免疫系统发生免疫应答, 并能与免疫应答的产物发生特异性结合的物质；抗体是人或动物受抗原物质刺激后, 由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质。组织中其它蛋白质存在相同的抗原, 就能与抗体直接产生反应, 会有其它反应, 临床由于多克隆抗体适应性强, 极容易有交叉反应单克隆抗体也能产生交叉反应, 所以对克隆抗体的应用必须谨慎, 使交叉反应降到最低。 1. 3 抗原修复不足对于固定的组织, 会导致抗原之间有相交的联系, 是抗原决定簇被封闭, 对此, 要尽早的对抗原进行有效的修复。应根据需要进行选择在修复时所用
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较
动物免疫接种及疫苗基础知识.doc
动物免疫接种及疫苗基础知识 第一章免疫接种 免疫接种是给动物接种疫苗或免疫血清，使动物机体自身产生或被动获得对某一病原微生物特异性抵抗力的一种手段。通过免疫接种，使动物产生或获得特异性抵抗力，预防疫病的发生，保护人、畜健康，促进畜牧业生产健康发展C 第一节疫苗基础知识 一、疫苗的概念 由病原微生物、寄生虫以及其组分或代谢产物所制成的、用于人工自动免疫的生物制品, 称为疫苗。给动物接种疫苗，刺激机体免疫系统发生免疫应答，产生抵抗特定病原微生物（或寄生虫）感染的免疫力，从而预防疫病。 二、疫苗种类 由细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体等完整微生物制成的疫苗，称为常规疫苗。常规疫苗按其病原微生物性质分为活疫苗、灭活疫苗、类毒素。 利用分子生物学、生物工程学、免疫化学等技术研制的疫苗，称为新型疫苗，主要有亚单位疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗等。 （一）活疫苗 活疫苗是指用通过人工诱变获得的弱毒株，或者是自然减弱的天然弱毒株（但仍保持良好的免疫原性），或者是异源弱毒株所制成的疫苗。例如布鲁氏菌病活疫苗、猪瘟活疫苗、鸡马立克氏病活疫苗（H型）、鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗等。 1、活疫苗的优点 （1）免疫效果好。接种活疫苗后，活疫苗在一定时间内，在动物机体内有一定的生长繁殖能力，机体犹如发生一次轻微的感染，所以活疫苗用量较少，而机体所获得的免疫力比较坚强而持久C （2）接种途径多。可通过滴鼻、点眼、饮水、口服、气雾等途径，刺激机体产生细胞免疫、体液免疫和局部黏膜免疫。 2、活疫苗的缺点 （1） W能出现毒力返强。一般来说，活疫苗弱毒株的遗传性状比较稳定，但由于反复
家禽免疫接种技术及注意事项
家禽免疫接种技术及注意事项 近年来，随着重大动物疫病防控工作的开展，家禽免疫技术越来越得到重视。家禽免疫已成为禽病防制的主要手段，多种重大禽病通过免疫接种得到了控制。但是事物总存在两个方面。同是免疫，效果就参差不齐。有的农户运用自如，效果良好，有的农户实现不了初衷。血清学监测时抗体滴度总差1～2个单位甚至更多。显然这部分农户免疫技术不规范或某些环节存在问题。为帮助农户更好地开展免疫工作，笔者在本文中尽可能将免疫技术及应注意的问题提出，供农户免疫时参考。 一、家禽免疫技术 家禽免疫技术主要有以下几种方法：饮水免疫、气雾免疫、注射免疫、点眼滴鼻免疫、刺种免疫、拌料免疫、涂肛或擦肛免疫等等。现分别予以介绍： （一）饮水免疫饮水免疫是将可供口服的疫苗溶于水中，家禽通过饮水，疫苗病毒经腭裂、鼻腔和肠道而获得的局部和全身免疫。优点是省时省力、操作简单、应激小。不足是每只禽饮入的疫苗量不一，免疫效果参差不齐。 饮水免疫要达到最佳的免疫效果有以下要求： 1．疫苗要求：疫苗必须高效价且适于饮水免疫，用量一般加倍或3～4倍量即可。 2．水质要求：洁净凉爽pH值适中。即饮水中不含任何对疫苗有害的物质，水温在1 8℃～22℃之间，pH值6.8～7.4为宜。 3．停水要求：免前适时停水，一般春秋季停水＜5小时，炎夏停水＜3小时，冬季停水时间可稍长些。停水时间应视季节、气温和饲料干温度灵活掌握，以便使禽只能尽快而又一致地饮用到疫苗溶液。但若气温过高又是高峰期产蛋鸡不宜停水。 4．水量要求：饮水免疫的用水量一般是禽群在断水后1.5小时左右能够饮用完毕的水量。水量确定的方法：①日龄法：1～2周龄，8～10 ml/只；3～4周龄，15～20 ml/只；5～6周龄，20～30 ml/只；7～8周龄，30～40 ml/只；9～10周龄，40～50 ml/只；10～11 周龄，50～60 ml/只。②经验法：对21日龄以下的商品肉鸡群进行饮水免疫时，用水量多少的一个经验公式是：每1 000只鸡用水量的公升数约等于免疫时的日龄。③实测法：在用疫苗前3天连续记录鸡的饮水量，取其平均值以确定饮水量。更准确的方法应是在接种疫苗前一天，预先测量被免疫鸡群在断水适宜时间后约1.5小时的时间内所实际消耗的饮水量，并据此准备相应的饮水进行次日的饮水免疫。 5．器具要求：①清洁不含消毒剂和洗涤剂。②非金属制品，可用塑料或陶瓷容器。 ③数量充足，以使所有禽能在短时间内同时饮到足够的免疫量。一般50～100只鸡应有一个饮水器。④鸡群大，饮水器不足时可分批进行。 6．操作要求：①疫苗溶液必须充分混匀。.②疫苗稀释不得暴露在阳光下。③冰冻疫苗令其自然融化，不能用火烤、用温水、光照加温。④疫苗液应尽量装满饮水器，以增加对鸡鼻腔、眼的免疫机会。⑤炎热季节饮水免疫应在清晨或傍晚进行。 7．时间要求：从稀释疫苗起到饮用完毕控制在1～2 h之间。 8．其他要求：①为避免意外，较大规模禽群免疫应先进行小群实验，经1 d左右未见异常，再大批饮水免疫。②饮水免疫接种的间隔时间不宜太长，因为饮水免疫不能产生足够的免疫力，不能抵御毒力较强的毒株引起的疫病流行。③小于4日龄的雏鸡不进行饮水免疫，因为太小饮水量不定且常找不到饮水器。 (二)气雾免疫气雾免疫是通过气雾发生器将稀释的疫苗喷射出去，使疫苗雾化粒子均匀地悬浮于空气中，家禽通过呼吸吸入肺内获得免疫的方法。气雾免疫不仅可诱导鸡的呼吸道局部免疫，又可引起全身性的免疫应答，且产生免疫力的时间要比其它方法快。对
常用免疫组化
一、泌尿与男性生殖系统肿瘤 前列腺癌：CK、P63、34E12、PSA、P504S（9AMAC）、AR 前列腺增生／腺瘤：CK、P63、34BE12、P504S 肾癌：CK、EMA、Inhibin、Melan－A、CK7、Vimentin、PAX2、CD10 肾母细胞瘤：WT－1、CK、P53、Ki－67 膀胱尿路上皮癌：CK7、CK20、P53、Ki－67、P63 精原细胞瘤：CK、PLAP、CD117、LCA、OCT3／4 二、淋巴造血系统肿瘤 胸腺肿瘤：CK、CD3、CD5、CD20、TdT、EBV＊ 霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、ALK－1、EMA、CD3、CD20、EBV＊、PAX －5 非霍奇金淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、TdT、CD43 间变大细胞淋巴瘤：CD30、CD15、ALK－1、EMA、CD3、CD20、EBV＊ 弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD30、Ki－67 小B细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD79α、CyclinD1、TdT T细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、TdT、TiA－1、Perforin 套细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD20、CD79α、CyclinD1、TdT、Bcl－2、Ki－67 T／NK细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD56、TiA－1、Perforin、粒酶B 淋巴上皮病变／癌：CK、EMA、S－100、Ki－67、P53、EBV＊、P63、CD30、CD20
常用的免疫抑制剂的使用以及注意事项.
常用的免疫抑制剂的使用以及注意事项 2015-03-09 环孢素(CsA)：新山地明、田可、赛斯平 作用机理 属于钙神经蛋白抑制剂，可以选择性抑制免疫应答，通过破坏使T 细胞活化的细胞因子的表达，阻断参与排斥反应的体液和细胞效应机制，防止排斥反应的发生。 目前，市面出售的环孢素A有两种：一种为进口的，为瑞士诺华制药（新山地明），其剂型主要是胶囊；另一种为国产的，其剂型有口服液和胶囊。国內已有华东医药（赛斯平）、华北制药（田可）等多家生产厂家。 药物的吸收和代谢 环孢素A依靠胆汁排泄，肝功能障碍，胆汁淤积症或严重胃肠功能 障碍都会影响环保素A的吸收和代谢。只有极少部分药物经肾脏排出，且不能经透析去除，所以对于肾脏功能不全者和需透析治疗的患者，均不需调整药物浓度。 新山地明受进食和昼夜节律的影响较山地明小，所以服药时间不必将用餐考虑在内。 副作用 1、肾毒性：个体差异大，临床表现不典型，与其他原因引起的移植 肾损害很难鉴别。且发生肾损害时，血药浓度可能正常，甚至偏低。
2、接近半数的患者会出现肝脏毒性，其发生率与用药量密切相关。 3、其他并发症的发生率高血压41%～82%，高胆固醇血症37%，高尿酸血症35%～52%，高钾血症55%，震颤12%～39%，牙龈增生7%～43%，糖尿病2%～13%，多毛症29%～44%。 用量 联合用药时：初始剂量为6～8mg/kg/日，分两次服用，以后根据血药浓度调整。 注意事项 1、严格按医嘱服药,禁忌自行调整用药剂量。 2、遵医嘱监测血药浓度。 3、药品储存在15～30度室温中,忌冷冻。 4、定时服药,养成良好的定时服药习惯。 5、环孢素有不同的剂型,不同的厂家，各药在同一患者体内的生物利用度不尽相同，故改换不同剂型、不同厂家的药物时一定要在医生的指导下进行,以免出现排斥反应或药物中毒。 6、接受本药治疗的母亲不应授乳。 7、过敏体质者慎用注射液。 8、因硝苯吡啶可引起齿龈增生，故在应用环孢素A期间，发生齿龈增生的患者应避免使用硝苯吡啶。 血药浓度 1、CsA谷值浓度（C0）
动物防疫操作技术培训材料
动物防疫操作技术培训材料 一、疫苗的概念、原理及种类 1、疫苗的的概念： 疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于动物预防接种的疫苗类预防性生物制品。其中，由细菌制成的为菌苗；由病毒、立克次体、螺旋体制成的为疫苗，有时也统称为疫苗。 2、原理： 疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的生物制品。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。 3、种类： 动物免疫接种常用的疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。 ①灭活疫苗：是将病原生物大量繁殖后，采用物理或化学方法其失活，但仍保留其免疫原性制成的生物制品即灭活疫苗。常用的灭活疫苗有高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性猪蓝耳病灭活疫苗。灭活疫苗进入人体后不能生长繁殖，对机体刺激时间短，要获得持久免疫力需多次重复接种。
②弱（减）毒活疫苗：用人工定向变异方法，或从自然界筛选出毒力减弱或基本无毒的活微生物制成活疫苗或减毒活疫苗。常用活疫苗有猪瘟兔化弱毒苗、鸡新城疫疫苗、狂犬病疫苗、高致病性猪蓝耳病活疫苗等。弱毒活疫苗接种后在体内有生长繁殖能力，接近于自然感染，可激发机体对病原的持久免疫力。活疫苗用量较小，免疫持续时间较长。活疫苗的免疫效果优于死疫苗。 二、疫苗的保存和运输 疫苗的保存是保证免疫效果的重要环节，运输保存不当极易造成免疫失败。通过以上了解，可以看出疫苗均是由细菌、病毒、立克次体、螺次体等微生物制成，其本质还是微生物的活体或死体因此疫苗的保存和运输应遵循低温、避光的要点： 1、保存：一般情况下大多数的活疫苗都必须在-15℃以下保存，大多数灭活疫苗必须在2-8℃保存，不得冻结。活疫苗用多少取多少，以免反复冻溶，降低疫苗效价。 2、运输 运输途中，必须有冷藏设施，没有冷藏设施的一定要加冰运输，温度超过25摄氏度，疫苗效果会受损，避免阳光直射，运输过程要短，速度要快，弱毒疫苗一定要用疫苗冷藏箱加冰运输，各站不拿疫苗冷藏箱不得运输弱毒疫苗。 三、免疫前的准备 1、疫苗检查：主要目的是检查疫苗的质量是否合格。
免疫抑制剂整理
类风湿性关节炎药物选择 （网上搜集，感谢同行） 类风湿关节炎的常用药物分为四大类：即非甾类抗炎药、改善病情的抗风湿药（DMARDs）、糖皮质激素和植物药。NSAIDs和糖皮质激素可以减轻症状，但关节炎症和破坏仍可发生或进展。 类风湿关节炎患者一经诊断即开始DMARDs治疗。推荐首选常用的如甲氨蝶呤（MTX）、柳氮磺吡啶、羟氯喹。视病情可单用也可采用两种或两种以上的DMARDs联合治疗。一般对单用一种DMARDs 疗效不好，或进展性、预后不良和难治性类风湿关节炎患者可采用机理不同的DMARDs联合治疗。联合用药时，其不良反应不一定比单一用药多。联合用药时，可适当减少其中每种药物的剂量，如MTX可选用7.5mg ～25mg/周和柳氮磺吡啶1.0~3.0g/日。目前常用的联合方案有：① MTX+柳氮磺吡啶；② MTX+羟氯喹（或氯喹）；③ MTX+青霉胺；④ MTX+金诺芬；⑤ MTX+硫唑嘌呤；⑥柳氮磺吡啶+羟氯喹．国内还可采用MTX和植物药(如雷公藤、青藤碱和白芍总甙)联合治疗。如患者对MTX不能耐受，可改用来氟米特或其他DMARDs。 ⑴ NSAIDs 通过抑制环氧化合酶活性，减少前列腺素合成而具有抗炎、止痛、退热、消肿作用。由于NSAIDs使前列腺素的合成减少，故可出现相应的不良反应，如胃肠道不良反应：恶心、呕吐、腹痛、腹泻、腹胀、食欲不佳，严重者有消化道溃疡、出血、穿孔等；肾脏不良反应：肾灌注量减少，出现水钠潴留、高血钾、血尿、蛋白尿、间质性肾炎，严重者发生肾坏死致肾功能不全。NSAIDs还可引起外周血细胞减少、凝血障碍、再生障碍性贫血、肝功损害等，少数患者发生过敏反应（皮疹、哮喘），以及耳鸣、听力下降，无菌性脑膜炎等。应强调，NSAIDs虽能减轻类风湿关节炎的症状，但不能改变病程和预防关节破坏,故必须与DMARDs联合应用。 ⑵DMARDs 该类药物较NSAIDs发挥作用慢，临床症状的明显改善大约需1-6个月，故又称慢作用药。它虽不具备即刻止痛和抗炎作用，但有改善和延缓病情进展的作用。目前尚不清楚类风湿关节炎的治疗首选何种DMARDs。从疗效和费用等考虑，一般首选甲氨蝶呤，并将它作为联合治疗的基本药物。 ①甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）口服、肌注或静注均有效。口服60%吸收，每日给药可导致明显的骨髓抑制和毒性作用，故多采用每周一次给药。常用剂量为7.5~25mg/周，个别重症患者可以酌情加大剂量。常见的不良反应有恶心、口炎、腹泻、脱发、皮疹，少数出现骨髓抑制，听力损害和肺间质变。也可引起流产、畸胎和影响生育力。 ②柳氮磺吡啶（sulfasalazine, SSZ）一般服用4~8周后起效。从小剂量逐渐加量有助于减少不良反应，使用方法：每日250~500mg开始，之后每周增加500mg，直至每日2.0克，如疗效不明显可增至每日3.0克，如4个月内无明显疗效，应改变治疗方案。主要不良反应有恶心、呕吐、厌食、消化不良、腹痛、
动物免疫接种制度
动物免疫接种制度 ⑴准时准量免疫接种，做到头头免疫注射。 ⑵注射疫苗时,小猪1栏换1个针头，种猪1针筒疫苗换1个针头。病猪不能注射，病愈后及时补注。 ⑶接种活菌苗前后1周停用各种抗菌素。 ⑷发生过敏反应肌注肾上腺素；为预防过敏反应及加强免疫效果，可在注射疫苗前饮水添加维力康等抗应激、免疫增效剂药物。
卫生消毒制度 1、进入猪场大门和生产区大门口处设消毒池，并设人员过往消毒通道，消毒药物可用2%的火碱溶液，消毒对象主要是车辆的轮胎和人员的鞋底。 2、大门口处设喷雾器械，消毒对象是车身和车底盘。 3、工作人员进入生产区之前，必须经过消毒间，淋浴，更换工作衣、帽、胶鞋，脚踏消毒池进入。经批准允许入场参观人员的消毒方法与工作人员相同，并按制定路线参观。 4、空猪舍在引入猪群前应彻底消毒，程序为：清扫杂物、粪尿，用高压水管冲洗墙壁、地面及栏架。水冲洗干燥后可用0.3%的过氧乙酸或2-3%的火碱溶液喷雾消毒。对于封闭舍可随后关闭门窗及出风筒，用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒24小时（甲醛30毫升/立方米，高锰酸钾15克/立方米，加水15毫升/立方米）。熏蒸时先将甲醛称好放入容器内（按猪舍面积均匀放开）。最后放入高锰酸钾，放高锰酸钾时动作要快，以免溶液溢出，烧伤皮肤。并迅速离开现场，封闭门窗。 5、猪场过道及运动场每周可用2%的火碱溶液或1：800的百毒杀消毒一次，饲养用具（如饲槽）必要时每周刷洗一次，同时可用0.1%的新洁尔灭消毒。 6、母猪进入产房前，将产房彻底冲洗干净，干燥后再用消毒药喷雾消毒。母猪进入产房前，全身冲洗干净，经过消毒、驱除体表寄生虫后再上产床。母猪分娩前用0.1%的高锰酸钾消毒乳房和阴部，分娩后再用消毒药布擦拭乳房、阴部和后躯，并及时清理胎衣和产房。 7、作好配种时的卫生消毒工作。 8、作好接产时的卫生消毒工作。 9、作好经常性的环境消毒、带猪消毒，消毒剂应按性质经常更换。
动物免疫注意事项
动物免疫接种注意事项及免疫接种失败的原因 1、动物免疫接种，是用人工的方法将有效的生物制品（疫苗、菌苗、抗血清和高免蛋黄液）引入动物机体内，从而激发动物机体产生特异性抵抗力，以避免疾病的发生和流行。免疫接种是预防和控制动物传染病的一项极为重要的措施。动物免疫接种注意事项和免疫失根据动物免疫接种的时机不同，动物免疫接种可分为预防接种、紧急接种和临时接种。 1.1预防接种。在经常发生某些传染病的地区，或某些传染病潜在的地区，为了防患于未然，有计划地给健康的动物进行免疫接种。动物机体预防接种通常使用疫苗、菌苗、类毒素等生物制剂，采用皮下、皮内肌肉或皮肤刺种、点眼、滴鼻、喷雾、 1.2紧急接种。当一地区发生某种疾病时，为了控制和扑灭其流行，给受威胁地区及周围的动物紧急免疫接种该疫病的疫苗，可有效地防止该病的蔓延。但对病畜及可能已受感染的潜伏期病畜，必须严格消毒隔离，但不能再接种疫苗。 1.3临时接种。在引进或运出动物时，为了避免在运输途中发生传染病进行的预防免疫接种。 2、免疫接种注意事项
2.1注意消毒、无菌操作 2.1.1器械消毒。对使用的注射器及针头要严格消毒，消毒方法可以用蒸煮消毒、高压灭菌或使用一次性注射器，禁止使用化学药品消毒器械。 2.1.2动物体表消毒。在动物注射部位，剪毛后用碘酊或75% 酒精进行消毒。 2.1.3针头选择。为避免交叉感染，家畜应一畜一个针头，禽至少50只换一个针头。 2.14做好免疫接种的个人人员安全防护和消毒 2.2正确使用疫苗 2.2.1 在使用疫苗前，要检查疫苗的外观质量。凡发现疫苗瓶破损，瓶盖或瓶塞密封不严或松动，无标签或标签不完整（包括疫苗品种、批准文号、生产日期、出厂日期、有效期、生产厂家等），超过有效期、色泽改变、疫苗发生沉淀、破乳、有异物、霉变、异味、无真空等，这样的疫苗（菌苗）不得使用。 2.2.2 疫苗使用时，要详细阅读使用说明书并做好记录。记录内容包括：接种日期、畜禽的品种、日龄、数量、使用疫苗的品种、厂名、生产日期及有效期、接种方法等。 2.2.3 正确稀释疫苗。疫苗稀释前冻千疫苗应先置于室温（15 ℃～25 ℃）先平衡疫苗温度再稀释，并严格按疫苗说明书进行。有专用稀释液的疫苗使用稀释液，没有稀释液的疫苗用蒸馏水或去离子水，但不能用自来水（自来水中的消毒剂会把疫苗
一文读懂免疫组化步骤结果分析及注意事项
一文读懂免疫组化步骤结果分析及注 意事项
一文读懂 免疫组化步骤、结果分析及注意事项... 导语实验室花花师姐正在教导新来的师弟：“想拿高分文章，不学免疫组化怎么行？”免疫组化王子毛博旁边插话：“是这个理，今天我就豁出去，将我十多年的心得和经验奉献给小师弟你了。”小师弟感激涕零，唯诺细听两位前辈的教诲...... 免疫组化，免疫组织化学技术（immunohistochemistry），是一项利用抗原抗体反应，经过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但能够抗原修复，因此石蜡切片依然是首选的标本制作方法。免疫组化步骤详解免疫组化结果分析很多时候，我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。可是却不知道如何正确地分析，得出理想的结果。这实在是一件憾事。如下图，正常的结果应该是这样的：镜下细胞核呈蓝色，阳性结果呈深浅不一的棕色。结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在40*光镜下，随机10个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0分阴性着色，1分淡黄色，2分浅褐色，3分深褐色）和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。
免疫组化结果分析是毛博的特长，以下是她传授的独门绝技。1.对照染色 和做实验的时候必须设立对照组一样，免疫组化也必须设立对照染色。没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。对照一般有阳性组织对照，阴性组织对照，阴性试剂对照，自身对照。一般来说，有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照就足够了。 2.定位 抗原表示必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内等等。不在抗原所在部位的阳性着色，不能视为确切的阳性结果。有可能是非特异性染色或者假阳性。不能确定怎么办？这就要用到上一段提到的对照染色了。 3.半定位 现在一般用图像分析系统进行定量。如果你的实验室不幸没有那么高大上的话，就只好赶鸭子上架，用肉眼定一下量了。因为人为主观性比较强，因此只能称作半定量。免疫组化的半定量一般就分为三级：弱（+），中（++），强（+++）。以绿色免疫荧光为例，则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光。弱（+）=1，中（++）=2，强（+++）=3。至少随机观察5-10个HPF。然后根据（+）% x 1 +（++）% x 2 +（+++）% x 3计算出数值；总数值1.5者为(+++)。4.图像分析仪 如果要进行精确定量的话，就要用到图像分析仪。图像分析仪类