化学发光法在水分析_大气监测中的应用
化学发光分析法在我国经过了多年的研究及应用已成为分析方法中一种独立的分析技术，有关专题评述已有报道［１－３］。作为一种有效的微量和痕量分析手段，化学发光法已广泛用于各个分析领域。加上该方法具有仪器设备简单、灵敏度高、线性响应范围宽、操作简易等特点，近年来就更为人们所重视。化学发光分析技术在环境科学研究和实践中，已成功地用于空气污染物的研究、自动监测、水污染研究和各种成份分析［４］。
１化学发光法的基本原理
化学反应产生光的现象称为化学发光。基于化学发光反应而建立的分析方法称为化学发光分析方法。发光物质在化学反应中吸收能量而产生光辐射现象，其化学发光强度（Ｉｃｌ）与发光反应速度有关。反应速度取决于反应物浓度，光强与浓度成函数关系，即：
Ｉｃｌ＝Φｃ１×
ｄＣＡ／ｄｔ式中：Φｃ１为化学发光效率，对固定条件下的特定反
应为一常数；ｄＣＡ／ｄｔ为瞬间反应速率，化学发光法测定的实质就是测定发光反应的速度。通过化学发光分析仪器检测化学发光强度就可以求出反应物浓度［５］。
２化学发光法在水分析中的应用
２．１
水中无机物的化学发光法测定
一些无机物对某些化学发光反应有催化或抑制作用，或者直接参与化学发光反应起氧化剂或还原剂的作用。据此，分析工作者已建立了许多无机物的化学发光分析法，并用于检测饮用水、天然水及污染水中的无机物浓度。到目前为止，已有５０多种无机物可用化学发光法测定，其中包括一些重金元素的离子，如Ｈｇ，Ｃｄ，Ｐｂ，Ｃｒ，Ｍｎ，Ｃｏ，Ｎｉ，Ｃｕ，Ｚｎ和Ａｓ等，以及其它一些无机物，如Ｓ２－，ＳＯ３２－，Ｉ２，ＣＮ－，ＳＣＮ－，ＮＯ３－，ＮＯｉ－等，Ｍｏｎｔａｎｏ等用光泽精（１ｕｃｉｇｅｎｉｎ）发光体系测定自来水中１０－９级的Ｃｏ２＋。Ｍｉｌｌｅｒ等用联苯三酚－Ｈ２Ｏ２－ＯＨ－化学发光体系测定Ｃｏ２＋，检出限为０．５
×１０－９。
该法已用于检测自来水和河水中的Ｃｏ浓度。笔者曾用酒石酸化学发光新体系测定了自来水、池塘水和丝绸印染废水中的微量Ｃｏ取得了满意的结果［６］。在ＥＤＴＡ存在下，应用鲁米诺（１ｕｍｉｎｏ１）发光体系可测定水体中的Ｃｒ３＋。Ｍａｒｉｎｏ等［１０］将洛粉（１ｏｐｈｉｎｅ）发光反应与离子交换树脂分离技术联用，测定了天然水中的Ｃｒ３＋，该法具有较高的灵敏度和较好的选择性。Ｓｅｉｔｚ和Ｈｅｒｃｕｌｅｓ利用鲁米诺发光体系建立了Ｆｅ２＋的化学发光分析法，该法对Ｆｅ２＋的检出限为５．６×１０－１１。已证实该法适宜于分析水中总Ｆｅ的浓度，分析总Ｆｅ时可用亚硫酸盐将所有的Ｆｅ都还原成Ｆｅ２＋，然后用化学发光法进行测定。笔者通过优化鲁
化学发光法在水分析、大气监测中的应用
马
艳
（灌云县环境保护局，
江苏
灌云
２２２２００）
摘
要：
通过提出化学发光法的基本原理，介绍了化学发光法对水中无机物、有机物的测定方法，并可应用于大气中ＳＯ２，Ｏ３，ＮＯ，ＮＯ２等的测定。
关键词：
化学发光法；
水分析；
大气监测
中图分类号：Ｘ８文献标识码：Ｂ文章编号：１００４－８６４２（２００８）Ｓ１－０１６３－０２
收稿日期：２００８－０３－１４作者简介：马
艳（１９７７－），女，江苏灌云人，助工，本科，主要从事环境监察工作．
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎＷａｔｅｒＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＡｔｍｏｓｐｈｅｒｅＭｏｎｉｔｏｒｉｎｇ
ＭＡＹａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｐａｐｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｉｎｏｒｇａｎｉｃｓａｎｄｏｒｇａｎｉｃｓｉｎｔｈｅｗａｔｅｒａｎｄＳＯ２，ｏｚｏｎｅ，ＮＯ，ＮＯ２ｉｎｔｈｅａｔｍｏｓｐｈｅｒｅｂｙｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｂａｓｉｃｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ；Ｗａｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ；Ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ
第２１卷
增刊第１期２００８年６月
江苏环境科技
ＪｉａｎｇｓｕＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖｏｌ．２１Ｓｕｐｐ．１Ｊｕｎ．２００８
江苏环境科技２００８年６月
米诺－Ｈ
２
Ｏ２－Ｆｅ３＋化学发光反应的条件，也建立了水体
Ｆｅ的化学发光测定法，使测定Ｆｅ的灵敏度提高，Ｆｅ３＋
检出限达６×１０－１２，且具有较好的选择性［７］。
化学发光法除可用于测定水中的无机金属离子
外，还可用来测定水中的其它无机物。Ｍａｒｉｎｏ等报
道，在Ｆｅ（ＣＮ）
６
３－存在下，可用鲁米诺体系检测水中的
Ｏ２，Ｃｌ２，ＨＣＩＯ和ＣｌＯ－等。也可用该发光体系测定水
中的ＣｌＯ
２
－。笔者曾用光泽精－Ｈ２Ｏ２－Ｃ１０－化学反光
反应测定了饮用水中的活性Ｃｌ［８］。通过将ＮＯ３－和
ＮＯ２－还原成ＮＯ，然后用ＮＯ－Ｏ３化学发光反应可检
测ＮＯ
３
－和ＮＯ２－。将ＰＯ４３－转化成ＰＨ３后，由ＰＨ３－Ｏ３化
学发光反应测定ＰＨ
３可达到测定水中ＰＯ
４
３－的目的。
此外，水体中的Ｈ
２
Ｏ２，ＭｎＯ４－等无机物也可用化学发光法进行测定。
２．２水体中有机物的化学发光测定
利用化学发光法可对水体中的有机物进行定量
分析。由固定甲醛氧化酶使甲醛、甲酸氧化得Ｈ
２
Ｏ２，通过应用２－（３，４，６－三氯苯基）草酸酯化学发光体系
测定Ｈ
２
Ｏ２，从而可测定天然水体中甲醛和甲酸的浓
度。Ｍａｒｉｎｏ等利用腐殖酸与ＭｎＯ
４
－间的化学发光反应测定了天然水中的腐殖酸。我们相信，如果将化学发光法与近代分离控术（如ＨＰＬＣ）相结合，则化学发光法可望成为水体有机物监测的有效手段。
３化学发光法在大气监测中的应用
３．１ＳＯ２
ＳＯ２大量存在于工业废气中，是大气的主要污
染物，是形成酸雨的主要成分，因此对环境中ＳＯ
２
的
监测显得尤为必要。目前，测定ＳＯ
２
浓度的方法有分光光度法、电位法、高效液相色谱法等，文献［９］较为系
统地介绍了近几年ＳＯ
２
分析研究的进展情况。化学
发光法因其高的灵敏度和操作简便，已应用于ＳＯ
２的分析中，Ｒｕ（ｂｉｐｙ）２＋－ＣＯ３２－－ＳＯ３２－－ＫＣ１０３体系化学发
光法测定空气中的ＳＯ
２
，结果令人满意［１０］。
３．２臭氧（Ｏ３）
Ｏ３是一种具特殊腥臭昧的浅蓝色气体，不稳
定，在常温下就能分解生成Ｏ
２
，在加热或有紫外线
照射时，分解加速。高空Ｏ
３
吸收大量太阳辐射，是
地球生物的屏蔽层，需保护其不受破坏。但同时，Ｏ
３对人体有很强的毒害作用，所以在近地面是需要防
治的大气污染物。Ｏ
３
问题受到人们的强烈关注，成
为全球性热点研究课题，其中对Ｏ
３
的分折监测是研究的关键。化学发光法因灵敏度高，特异性好，其
中乙烯与Ｏ
３的化学发光法应用较广，用于环境Ｏ
３
监测中，此法利用Ｏ
３与乙烯反应生成激发态的甲
醛，发出波长为４５０ｎｍ的荧光，可检验３～３０μｇ／ｇ
的Ｏ
３
［１１］。
３．３ＮＯ，ＮＯ２
ＮＯ和ＮＯ２是空气的主要污染物质，可利用均
相气相化学发光法进行监测。Ｔｈｒｕｓｈ等的研究工作
表明，ＮＯ与Ｏ
３
反应可生成激发态的ＮＯ
２
，然后产生
光辐射。以此为基础而设计的ＮＯ化学发光监测器
已用于检测大气中的ＮＯ。对于ＮＯ
２
的测定，应先通
过转化器将ＮＯ
２
转化成ＮＯ，然后通过测定ＮＯ来检
测ＮＯ
２
。Ｃｈａｒｐｅｎｅｔ等已用双通道化学发光仪对ＮＯ
和ＮＯ
２
进行了同时测定。Ｆｏｎｔｉｊｎ等利用ＮＯ，ＮＯ
２
与
氢原子（由Ｈ
２
的热裂解产生）间的化学发光来监测
ＮＯｘ（ＮＯ＋ＮＯ２），这种方法比以往的方法更具有优越
性。Ｊｅｎｋｉｎｓ和Ｇｉｌｌ利用ＮＯｘ化学发光分析器测定了
香烟烟气中的含ＮＯｘ，并取得了满意的结果。一些实
验结果表明，用化学发光法监测大气中的含ＮＯｘ与
其它方法比较，前者具有更高的选择性、准确性和灵
敏度。
３．４其它
除了含Ｎ，含Ｓ化合物可用化学发光法进行监
测外，其它空气污染物也可用化学发光法加以监测。
Ｍｅｒｅｎｙ等利用鲁米诺与Ｃｌ２之间的化学发光反应建
立了大气Ｃｌ的化学发光测定法；Ｓｔｅｄｍａｎ等利用Ｎｉ
（ＣＯ）４与Ｏ３和ＣＯ之间的化学发光反应测定了空气
中的Ｎｉ（ＣＯ）
４
。此外，还可用ＮＯ－Ｏ３化学发光检测器
监测大气中的自由基，如ＨＯ?，ＨＯ
２
?等。可以看出，
化学发光法在大气污染物的监测中已发挥重要作
用。
４结束语
化学发光研究发展比较迅速，化学发光作为水
分析和大气监测中的一种新型手段，具有灵敏、快速
等优点，而且仪器设备简单，便于实现自动化分析。
为此，我们相信化学发光的应用将会越来越广泛。
［参考文献］
［１］章竹君，吕九如．（Ⅲ）催化鲁米诺－过氧化氢体系化学发光
反应的研究［Ｊ］．化学通报，１９８４（５）：２５．
［２］李绍卿，王莉平，周春雨．化学发光测定钴的进展［Ｊ］．冶金
分析，２００１，２０（１）：３４．
［３］李绍卿，张小燕．化学发光分析技术［Ｍ］．西安：西安地图出
版社，２０００：２，２５，１２４，１１４．
［４］吕小虎，陆明刚．化学发光法在环境监测中的应用［Ｊ］．环境
科学，２００２，１１（１）：５８－６０．
［５］李绍卿，刘洪敏，高小红，王莉平．化学发光法测定铬的进
（下转第１７５页）
１６４
第２１卷增刊第１期
４．６在农牧结合的体系中，运用循环经济模式在农牧结合的体系中，物质和能量从种植业流向畜牧业，再部分地从畜牧业返回到种植业。即饲草饲料－畜禽饲料－畜禽粪便－饲草饲料（农作物、果树）生产，如经济林果园中，建成种果树、种草、养畜、养蜂并举的生态果园，以提高土地的利用率，扩大饲料来源，缓解人畜争粮的矛盾。再有，利用生物生长的时间差进行资源合理配置，组织季节性生产，达到草畜同步、生态平衡的生产方式。即在草场较多的地区，大力发展母畜养殖，肉畜则运到农作物秸秆较丰富、精料相对较多的粮食丰产区异地育肥。还可以通过食物链，实现鸡粪、猪粪喂鱼或生产沼气，再用沼液喂鸡、猪和鱼的循环利用模式。这样既提高了生物资源利用率，减少了资源的浪费，同时动物废弃物又得到了有效的处置，保护了环境。
４．７加大资金投入，在技术上进行革新和注重终端产物的利用
（１）利用畜禽粪养殖蚯蚓。蚯蚓养殖的方法很多，有简易养殖法、肥堆养殖、塑料大棚养殖（工厂化养殖）、越冬养殖、田间养殖、垃圾处理养殖、立体多层箱养殖等。简易养殖适合于农村集体或个体养殖，可充分利用房前屋后、庭院空地及木箱、筐、罐、盆、池等容器；肥堆养殖主要利用果园、桑园、饲料园、菜园、大田等园地，有条件、规模较大的企业可以进行大棚工厂化养殖，提高效率［１１］。
（２）采用好气或嫌气生物活性系统及在农田撒施等方法处理畜禽粪尿。欧洲已应用生物处理法。一些大饲养场开始修建蓄水池，截留暴雨溢流，并将清洗畜栏后的废水集中蓄入，经过沉淀、曝气等作用后，用泵打入喷灌系统，灌溉农田、草坪（地）和牧场。畜禽粪尿中含有大量粗纤维、蛋白质、糖类和脂肪类物质，其成分与人工合成的废物明显不同，它们在自然界易于分解，并参与物质再循环过程。充分利用这些循环途径，既能利用粪尿中的营养物质，又免于其对环境的危害。
（３）利用沼气池处理畜禽粪便是小规模化养殖业处理畜禽废弃物的好办法，也是对无害化进行处理和综合利用的有效途径，如年出栏５００头生猪规模的养殖户可建３０ｍ３体积的沼气池，按每立方米造价４５０元计算，投入３万元即可处理年出栏５００头猪的粪便。所产沼气可作燃料、照明、发电等，且清洁、卫生、无污染［１２］。
［参考文献］
［１］高定，陈同斌，刘斌，等．我国畜禽养殖业粪便污染风险与控制策略［Ｊ］．地理研究，２００６，２５（２）：３１１－３１９．［２］国家环境保护总局．国家农村小康环保行动计划［Ｒ］．北京：国家环境保护总局，２００６．
［３］李建华．畜禽养殖业的清洁生产和污染防治对策研究［Ｄ］．浙江：浙江大学，２００４．
［４］刘红侠，陶建国，王建芳，等．畜禽养殖业污染与循环经济［Ｊ］．污染防治技术，２００３，１６（３）：１４－１５．
［５］陈杰．论循环经济的实质与实践体系［Ｊ］．西南农业大学学报（社会科学版），２００４（２）：３７－４０．
［６］彭里．畜禽粪便环境污染及治理研究进展［Ｊ］．中国生态农业学报，２００６（２）：１９－２２．
［７］相俊红，胡伟．我国畜禽粪便废弃物资源化利用现状［Ｊ］．现代农业装备，２００６（２）：５９－６３．
［８］倪玉平，华桂．上海畜禽粪便污染综合治理的实践与思考［Ｊ］．中国环境管理，２０００（６）：３４－３６．
［９］沈玉英．畜禽粪便污染及加快资源化利用探讨［Ｊ］．土壤，２００４，３６（２）：１６４－１６７．
［１０］刘振江．我国畜牧业可持续发展研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（１１）：３４１６－３４１７．
［１１］朱辉鹏，王国学，胡天科，等．畜禽粪便污染与综合防治［Ｊ］．云南畜牧兽医，２００６（３）：３９－４０．
［１２］边江风，程继夏，陈学强，等．对禽畜粪便处理的研究［Ｊ］．江苏环境科技，２００６，１９（Ｓ２）：３５－３６．
（责任编辑朱歆莹）
展［Ｊ］．分析测试技术与仪器，２００３，９（３）：１４１－１４６．［６］陆明刚，吕小虎，尹方．水体中钴的化学发光法测定［Ｊ］．上海环境科学，１９８８（１１）：２３－２４．
［７］吕小虎，陆明刚，尹方．化学发光法测定中体中微量铁［Ｊ］．环境科学与技术，１９８９（２）：２３－２６．
［８］陆明刚，张晖，吕小虎，等．用化学发光法测定水体中的活性氯［Ｊ］．环境科学与技术，１９８８（４）：１５－１７．
［９］吴风武，何治柯，罗庆尧，等．二氧化硫分析研究进展［Ｊ］．
分析科学学报［Ｊ］．２０００，１６（３）：２４８．
［１０］王园朝，何治柯．Ｒｕ（ｂｉｐｙ）２＋－ＣＯ３２－ＳＯ３２－－ＫＣ１０３体系化学发光法测定空气中的二氧化硫［Ｊ］．分析科学学报，２００２，１８（６）：４５３－４５６．
［１１］李俐，陈坚．大气臭氧及其分析方法的研究进展［Ｊ］．分析科学学报，２００１，１７（２）：１６６－１７０．
（责任编辑朱鼎一）
（上接第１６４页）
张恒等循环经济：畜禽粪便污染治理之路１７５
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法 免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应， 应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。 一、免疫 免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。 特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。而对变异或其他抗原毫无作用。 1、抗原 1.1抗原的定义 抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答(免疫原性) ，并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质(免疫反应性)。 抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。 1.2抗原的分类
完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。 半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性， 1.3抗原的性质 决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。 抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。 因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。 2、抗体 2.1抗体的定义 抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。 2.2抗体的结构 抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。 人免疫球蛋白有五类，分别为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 3、抗原抗体的结合
化学发光免疫分析技术原理简介
化学发光免疫分析技术原理简介 20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。 一、化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或 抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。试
化学发光法及其应用
化学发光法及其应用 摘要：对近年来化学发光分析法的研究应用最新进展作了评述,包括化学发光体系的类型,化学发光法的新方法，化学发光在无机、药物分析及食品中的应用。 关键字：化学发光法；化学发光体系；应用； 化学发光是在没有光、电、磁、声、热源激发的情况下，由化学反应或生物化学反应产生的一种光辐射。以此为基础的化学发光化学发光(Chemiluminescence ，简称CL)分析法是近30 年来发展起来的一种高灵敏的微量及痕量分析法，由于可以进行发射光子计量，又没有外来激发光源存在时散射光背景的干扰，因而具有很高的灵敏度(检出限可达 10-12-10-21mol)，很宽的线性范围(3-6个数量级)，同时仪器设备又很简单、廉价、易微型化，在二十世纪的最后十年发展非常迅速。 近来,在改进和完善原有发光试剂和体系的同时，新发光试剂的合成,新体系的开发，与其它技术的联用，尤其是流动注射技术，传感器技术，HPLC 技术及各种固定化试剂技术的联用，更显示出化学发光分析快速，灵敏，简便等优点，也进一步拓宽了化学发光的应用范围。并且，化学发光在多类复杂有机物质，如氨基酸、蛋白质、维生素、核酸、DNA、激素、生物碱及各类药物及毒物的检测，多种生物活性物质的分析，多种抗体和抗原的免疫分析，基因芯片、蛋白质芯片、受体芯片、酶芯片、微流控芯片研究中得到了广泛地应用，而且呈现出上升趋势。为生命科学、环境科学、材料科学的研究提供了许多新的、高灵敏度的、有效的分析手段，推动了这方面科学理论和高新技术的发展；同时，其他相关学科的研究成果也为化学发光和生物发光提供了许多新的技术和手段，出现了许多新的化学发光和生物发光法，如纳米发光、发光成像、发光活体分析，大大促进了化学发光的发展及应用。本文将从以下几个方面论述化学发光分析法。 1 化学发光分析法的原理 化学发光(Chemiluminescence，简称CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，是指物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出一定波长的光。根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或发光总量来确定组分含量的分析方法叫化学发光分析法[1]。 换句话说，化学发光是指吸收了化学反应能的分子由激发态回到基态时所产生的光辐射现象, 广义的化学发光也包括电致化学发光。一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足
罗氏电化学发光免疫分析(精)
罗氏电化学发光免疫分析 技术是罗氏公司开发的,但全自动机械制造却由日本的日立公司承担,所以仪器上还有Hitachi的标志。这个仪器让大家吃惊的一大原因就在于一直在实验室研究的电致化学发光居然已经真正地产业化了,其中我们一直无法解决的诸多问题(尤其是重现性均已得到解答,看来罗氏的确花了不少心血开发这款仪器。 罗氏电化学发光免疫分析技术的性能特点——创新的技术,与众不同 一、最先进的检测原理 电化学发光免疫测定,是目前最先进的标记免疫测定技术,是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,具有敏感、快速和稳定的特点,在固相标记免疫测定中技术上居领先地位。 电化学发光(ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上是电化学和化学发光两个过程的完美结合。电化学发光与普通化学发光的主要差异在于前者是电启动发光反应,循环及多次发光,后者是通过化合物混合启动发光反应,是单次瞬间发光。因此ECL反应易精确控制,重复性极好。 电化学发光免疫测定是电化学发光(ECL和免疫测定相结合的产物,直接以[Ru(bpy3]2+标记抗体,反应时标记物直接发光。且[Ru(bpy3]2+在电极表面的反应过程可以周而复始进行,产生许多光子,使光信号得以增强。 二、专利的包被技术 链霉亲和素(streptoavidin,SA和生物素(biotin,B是具有很强的非共价相互作用的一对化合物,特异性强且结合紧密。一分子SA可与四分子B 相结合,增大了抗体结合量,达到放大效果。在ECL的试剂中,SA通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上,形成通用的能与B结合的固相载体,另一试剂为活化的B衍生物化合的抗原或抗体。两种试剂混合时,抗原或抗体即包被在磁性微粒上。 三、独特的载体
化学发光分析法的应用研究与新进展
化学发光分析法的应用研究与新进展 摘要：化学发光分析法是根据化学反应的发光强度或发光总量确定相应组分含量的一种分析方法。同荧光法相比，化学发光法不需要外来的光源，减少了拉曼散射和瑞利散射，降低了噪音信号的干扰，提高了检测的信噪比，扩大了线性范围。并具通过特定的化学发光可以定性定量的测定微量物质，有操作方便，易于实现自动化，分析快等特点。同时在实践的过程中化学发光分析法与其他方法相比较其灵敏度也较高，此外线性范围宽和仪器简单也是化学发光分析法的特点之一。正是基于这些特点，化学发光分析法在环境化学、临床医学、生物科学等领域得到十分广泛的应用和研究。本文从化学发光分析法的原理、优缺点和应用研究的新进展等方面进行了综述。 关键词：化学发光分析法，化学发光体系，鲁米诺，光泽精 引言 化学发光是化学反应体系中的某些分子或原子中的电子，如反应物、中间体或反应产物吸收了化学反应释放出的化学能后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子所产生的光辐射[2]。化学发光又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。由于不需要外源性激发光源，避免了背景光和杂散光的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比。具有灵敏度高，线性范围宽，设备简单，操作方便，易于实现自动化，分析快等特点。在生物工程学，药物学，分子生物学，临床和环境化学等各个领域正显示出它蓬勃的生机。本文主要介绍化学发光分析法的原理、优缺点，常用的化学发光试剂及其体系，和在环境化学、临床医学、生物科学等领域的应用研究和化学发光分析法的近两年的应用新进展。 1 化学发光 1.1化学发光的原理 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。根据形成激发态分子
常见化学发光免疫分析技术比较
常见化学发光免疫分析技术比较 1、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei] 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1.1、化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 1.2、化学发光免疫分析类型
化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种: (1)化学发光标记免疫分析法; (2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法 1.2.1化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 1.2.2化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。 12.2.1HRP 标记的CLEIA
化学发光免疫分析技术及在临床检验中的应用分解
本科毕业论文 题目：化学发光免疫分析技术 及在临床检验中的应用 学院：化学与环境工程学院 班级：2011级应用化学2班 姓名：王俊烽 指导教师：李小花职称：讲师 完成日期：2015年05 月 22 日
化学发光免疫分析技术及在临床检验中的应用 摘要：化学发光免疫分析技术（CLIA）是把免疫反应和化学发光检测方法结合的一种分析技术。其中免疫反应的特异性和灵敏度都很高。CLIA是在酶联免疫分析、放免疫分析和荧光免疫分析后面发展起来的一种检测技术。由于其具有操作简单，标记方便，稳定度和检测灵敏度高，速度快，对环境没有污染等优点因此CLIA在临床上受到医学检验者和医生的一致好评。 关键词：化学发光免疫分析技术；基本原理；临床；医学检验 CLIA Technology And Its Application in The Clinical Laboratory Abstract：Chemiluminescence immunoassay (CLIA) is an analytical technique the immune response and chemiluminescent detection methods combined. Which the immune response is very high specificity and sensitivity. CLIA is the enzyme-linked immunoassay, put immunoassay and fluorescence immunoassay later developed a detection technology. Because of its simple, easy to mark, high stability and sensitivity, speed, no environmental pollution, etc. Therefore CLIA praise medical tests and doctors at the clinic. Key words :chemiluminescent immunoassay; fundamental; clinical; medical laboratory
化学发光及生物发光的原理及其应用(精)
化学发光及生物发光的原理及其应用 第一部分概述 化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。化学发光体系用化学式表示为： 依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反 应 ) ； 2 ）生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应；简称 BCL) ； 3 ）电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应，简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为： 1 ）直接测定 CL 分析法； 2 ）偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合，测定体系中某一组份； 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ； 4 ）固相、气相、掖相 CL 。分析法； 5 ）酵联免疫 CL 分析法等。 化学发光的系统一般可以表示为：
在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系，而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形，以峰高定量，也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ，故进样与记录时差短，分析速度快。 第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ），第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4—氨基已基—N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。此外应用的还有 N 2(B2 羧基丙酰基 ) 异鲁米诺，并对其性能进行了研究。
全自动化学发光免疫分析仪Immulite2000标准操作规程完整
IMMULITE ? 2000 全自动化学发光免疫分析仪 标准操作程序 本文件仅供参考，各实验室需根据各自情况建立自己的操作规程 IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统标准操作规程
SOP编码：页数： 制定人签名：日期： 审核人签名：日期： 批准人签名：日期： 生效日期：颁发日期：周期性审查：年一次 修订登记： 审查登记：
[目的]描述IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统的使用和维护。 [范围] 适用IMMULITE?2000全自动化学发光免疫分析系统的操作。 [仪器工作原理和检测过程] 1 IMMULITE 2000使用包被特定抗体的聚苯乙烯珠子作为固相，包被珠放在一个特定的反应杯中，从而进行温育，清洗以及信号发生。
2. 样本与结合了碱性磷酸酶的试剂温育反应结合之后，通过高速离心将剩余试剂甩到与反应杯同轴的废液管路中。系统在几秒钟内完成四次离心清洗，以便与系统的其他同步。去除未包被试剂的包被珠仍然保留在反应杯中。 3. 包被珠上的结合标记随后同发光底物进行定量发光。当包被珠上结合的碱性磷酸酶标记同化学发光底物反应时，就产生发光。发光强度同样本中待测物的含量有关。仪器通过光电倍增管检测发光强度，随后计算出每个样本的结果。 4. 操作者在IMMULITE 2000上运行测试时，需要做下列操作：： 4.1进行每日探针清洗工作。 4.2 选择RUN IMMULITE 2000按钮。 4.3 查系统状态指示，加满或者清空耗材或者废物。 4.4 初始化样本和试剂加样器、蒸馏水喷嘴和底物喷嘴。 4.5 使用图像扫描器扫描试剂转盘上的过敏原试剂楔。 4.6在样本转盘上装载病人血清、质控、校正液和稀释液。 注意: 运行仪器需要用到的试剂都在 IMMULITE 2000试剂盒中。只有需要预稀释的测试项目才会有稀释液。 4.7 在工作列表列表界面为样本指定测试项目以及编号。 4.8 检查试剂以及与之匹配的包被珠是否足够完成所需测试。 4.9选择RUN开始实验。 5. 仪器自动检测过程: 在操作者按下 RUN 按钮之后，Immulite 2000 自动开始检测并输出检测结 果。 5.1 在反应杯中加入一个包被珠。 5.2 样本，特定的试剂和水加入到包被珠上。 5.3 反应杯运到温育圈，在37°C (98.6°F)的环境中震荡温育。 5.4 清洗测试杯。 5.5 加入底物，发光。 5.6 光电倍增管(PMT)检测光子强度，计算结果并打印。 [免疫分析原理] 1.双抗体夹心法：双抗体夹心法使用ALP标记的抗体在检测单位中进行反应。 1.1 标记的抗体的液相试剂加到检测单位中，标记有ALP的特异性抗体(Ab※ALP)与样品中的相应抗
化学发光免疫分析方法的研究及应用
本文由：华夏学术传媒网提供https://www.360docs.net/doc/0814066967.html, 摘要：本文根据各化学发光免疫分析方法所使用标记物质的不同，将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法，并对各方法经典标记物质及分析方法原理进行了分析。同时，介绍了化学发光免疫分析方法在医学检验、食品安全及环境科学方面的应用进展情况。 关键词：化学发光免疫分析；分类；研究进展 化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析［1］。 化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的［2］。 一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。 1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。 2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析 吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。在含有H2O2的碱性条件下，吖啶酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N－甲基吖啶酮，当其回到基态时发出一最大波长为430 nm 的光子。吖啶酯类化合物量子产率很高，可达0.05。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，发光体系简单、快速，不需要加入催化剂，且标记效率高，本底低。吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于CLIA，通常采用HNO3+H2O2和NaOH 作为发光启动试剂，有些在发光启动试剂中加入Triton X－100，CTAC，Tween－20等表面活性剂以增强发光。（二）化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析（Chemiluminescent Enzyme Immunoassay,CLEIA）是以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），它们有各自的发光底物。HRP 最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA 中，使用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂（NaOH和H2O2）作用下鲁米诺发光，酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强
全自动化学发光免疫分析仪产品技术要求
全自动化学发光免疫分析仪 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 该产品基于间接化学发光法，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对来源于人体血清、血浆或者其他体液样本中的被分析物进行体外定性或定量检测。 1.1产品型号划分说明 1.2结构组成 主要由主机（包含样本架输送模块、反应杯配备模块、加样模块、试剂处理模块、温育反应模块、清洗分离模块、光学检测模块、电路控制模块）、软件（发布版本：V1.0）、电源线、串口线及附件（包含样本架、液路管）组成。 1.3软件信息 1.3.1 软件名称：利德曼化学发光免疫分析仪器软件平台 1.3.2 发布版本：V1.0 1.3.3 版本命名规则 发布版本号：VX.Y 其中：VX.Y由version缩写V，主版本号及次版本号构成：表示正式发布的第一版程序。 X为主版本号，表示全功能集成第一个版本； Y为次版本号，表示此版本程序发布后暂时未发生变更。 1.3.4 运行环境 硬件配置：
CPU：主频1.7GHz以上。 内存：1G以上内存。 硬盘空间：40G以上均可。 软件配置：操作系统：WINDOWS 7 或WINDOWS 10。 2.1加样正确度与重复性 对仪器标称的样品最小加样量和最大加样量、试剂最小加样量和最大加样量进行检测，应符合表1的规定。 表1 加样正确度与重复性要求 2.2 反应区温度控制的正确度和波动度 反应区温度的偏倚应在：37.0℃±0.5℃，波动度不超过0.5℃。 2.3 光检测装置部分 2.3.1仪器噪声 检测空反应管的发光值应不大于200RLU。 2.3.2发光值的线性 在不小于3个发光值数量级范围内，线性相关系数（r）应≥0.99。 2.3.3发光值的重复性 采用发光剂法，变异系数（CV）不超过5％。 2.3.4发光值的稳定性 采用发光剂法，发光值的变化不超过±10％。 2.4 携带污染率 携带污染率应≤10-5。 2.5临床项目的批内精密度
SIEMENS ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析报告系统
1 目的 建立标准规范的西门子ADVIA CENTAUR CP全自动化学发光免疫分析仪操作规程。 2 范围 适用于生化科经授权的检验专业技术人员操作使用。 3 责任 由经过培训合格后，并经授权的检验专业技术人员操作，由科主任负责技术指导和质量监督。 4 程序 4.1 系统简介 SIEMENS ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析系统，提供了一个前所未有的临床免疫检查设备。该系统时刻处于准备状态。不停止上载试剂和样本及消耗品，不必每日开关机；可连续不断的样本加载，具有真正的急诊功能，15min分钟内即可提供急诊标本的检测结果；24小时随时待机，载机容量大，高达15种不同的试剂包或更多的过敏原测试方面的载机容量，最有特色是多达300以上的过敏原测试。灵活多样的样本加载方式。 ADVIA Centaur CP免疫分析各方面的设计都是为了提高检测效率和测试结果可靠性。具有凝块发现及管理，自动稀释，自动反射检测，自动复检等功能，不停止上载样本等功能，可大大缩短周转时间，急诊实验通道可在任何时候进行急诊测试而不需打断正常工作流程，一次性吸样头和反应杯，没有潜在的样本沾滞，用一次性的样本吸头减少了交叉污染，可在任何时候更换废料和水。多种分析形式的设计，双向运行的80个位置温育盘易于进行夹心法及其他测定。最优化的检测性能和生产力，每小时达180个测试，所有的试剂探针和冲洗探针都是独立运行和快速操作。
4.2运行环境 电源：207～253V/ 47-603HZ ；室内温度：18～3029℃；室内相对湿度：20%-80%。 4.3 测定原理 化学发光系统是利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的测定方法，用高敏感性的吖啶酯（Acridinium Ester ）作为化学发光标记物，以极细的磁性颗粒(PMP)作为固相载体，提供最大的包被面积。 4.3.1 液相：吖啶酯（AE ） 化学结构 N + CH 3 C O O R
化学发光免疫分析方法
化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。 化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。 一、化学发光免疫分析方法的类别 化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。 （一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。 1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。 鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。 2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析 吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。在含有H2O2的碱性条件下，吖啶酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N－甲基吖啶酮，当其回到基态时发出一最大波长为430 nm 的光子。吖啶酯类化合物量子产率很高，可达0.05。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，发光体系简单、快速，不需要加入催化剂，且标记效率高，本底低。吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于CLIA，通常采用HNO3+H2O2和NaOH 作为发光启动试剂，有些在发光启动试剂中加入Triton X－100，CTAC，Tween－20等表面活性剂以增强发光。 （二）化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析（Chemiluminescent Enzyme Immunoassay,CLEIA）是以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），它们有各自的发光底物。HRP 最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA 中，使用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂（NaOH和H2O2）作用下鲁米诺发光，酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强度。此传统的化学发光体系（HRP－H2O2－lumi-nol）为几秒内瞬时闪光，存在发光强度低、不易测量等缺点。后来，在发光系统中加入增强发光剂，以增强发光信号，并在较长时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析灵敏度和准确性。碱性磷酸酶（ALP）已广泛用于酶联免疫分析和核酸杂交分析。 碱性磷酸酶和1，2－二氧环己烷构成的发光体系是目前最重要、最灵敏的化学发光体系。这类体系中具有代表性的是Bronstein 等提出的ALP－AMPPD 发光体系。AMPPD 为1，
化学发光免疫分析法自己整理
化学发光免疫分析法(CLIA) A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法: (竞争法:用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体,待检抗原与检测信号成反比) 一、原理:本实验采用竞争法,酶标抗原与标准品抗原竞争抗体,标准品抗原浓度越大,结合到抗体上的酶标抗原越少,RLU越小,B/B 值越小。例:A为一种抗原 小分子,有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析,使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗A 抗体(FITC-A抗体)发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场经分离、洗涤后加发光底物,用冷光分析仪检测发光强度(RLU),测定尿液中A的含量。 二、仪器: 1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司); 2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min 3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯) 4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)
5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂) 6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司) 三、试剂 1、A标准品 2、A单克隆抗体 3、A-BSA结合物 4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子(5mg/mL) 5、FITC标记的A单克隆抗体 6、HRP标记的A 7、PBST 洗涤液(0、05mol/L PBS, 含0、05% Tween-20) 8、分析缓冲液(0、05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7、4, 含2、0%BSA、0、5 %的水解明胶、0、1%的Proclin-300) 9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢与对碘苯酚溶液) 实验用水为二次蒸馏水 四、试剂处理 1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品; 2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存、 FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。(具体分析) 五、数据处理 通过测量标准品与样品溶液的发光强度(RLU),使用Fl ash’n glow LB955 发光分析仪自带软件中的数据处理程序对测得的数据进行处理、线性方程采用的就是logit(Y)-log(X)的线性回归数学模型, 以logitY 为纵坐标, logX 为横坐标, 其线性方程表达式为logit(Y) = a + blog(X), 线性方程中 X 为标准品(或待测样品)溶液的浓度, logit(Y) =ln(y/1-y),y=B/B0,式中, B 为标准品(或待测样品)溶液的发光强度, B0 为不加标准品(或待测样品)而加分析缓冲液的发光强度、根据标准品的浓度与发光强度值, 经线性回归得标准曲线, 代入样品
化学发光免疫分析技术题库1-1-8
化学发光免疫分析技术题库1-1-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列不会影响标记的因素是（） A.被标记蛋白质的性质 B.原料比 C.温度 D.湿度 E.标记率 影响标记的因素包括：①发光剂的选择。②被标记蛋白质的性质。抗原作为被标志物时，应具有较高的纯度和免疫学稳定性；抗体作为被标志物时，则要求具有较高的效价，应用提纯的IgG来代替全血清。③标记方法的选择应正确选择与发光剂和被标志物结构相适应的耦联方式。④原料比。在制备发光剂-IgG抗体结合物时，IgG：发光剂：交联剂的克分子比mol：mol：mol会影响结合物的发光效率。⑤标记率。是指结合物中IgG与发光剂之间的克分子比。由于每一种发光剂对应于被标志物都有特定的最佳标记率，标志物选择不好，会出现不易保存等现象。⑥温度。控制标记时的反应温度极为重要，对于较稳定的小分子被标志物，温度可稍放宽些；而当被标志物是抗原或抗体蛋白质时，由于蛋白质对热的不稳定性，应在保证标记反应进行的前提下，尽量选择较低的温度，以避免蛋白质在标记过程中活性的丧失。⑦纯化与保存。多数经耦联反应制备的结合物，使用前都需进行纯化，除去未结合的发光剂和交联剂。结合物一般可分装保存在-70℃条件下，最好冷冻干燥保存。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]不需酶催化反应即可发光的发光底物是（） A.吖啶酯 B.三联吡啶钌 C.鲁米诺或其衍生物 D.4-MUP E.AMPPD 吖啶酯化学发光特点：①推动发光的氧化反应简单快速，不需要催化剂，只要在碱性环境中即可进行；②反应体系中加入H2O2和NaOH溶液后，发光迅速，背景噪声低，保证了测定的敏感性；③吖啶酯可直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标志物的生物学活性和理化特性；④吖啶酯发光为瞬间发光，持续时间短，因此对信号检测仪的灵敏度要求比较高。
化学发光免疫分析技术题库1-0-8
化学发光免疫分析技术题库1-0-8
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列有关化学发光错误的说法是（）. A.化学发光是指伴随着化学反应过程所产生的光的发射现象 B.化学发光与荧光形成激发态分子的激发能相同 C.化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光 D.大多数化学发光反应为氧化还原反应 E.化学发光必须提供足够的化学能 化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光，而荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列关于化学发光效率说法错误的是（）. A.又称化学发光反应量子产率 B.发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率 C.发光效率决定于激发态分子发射效率 D.发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质决定 E.所有的发光反应都具有相同的化学发光效率 每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]化学发光剂的标记方法不包括（）. A.碳二亚胺缩合法 B.过碘酸钠氧化法 C.重氮盐偶联法 D.N-羟基琥珀酰亚胺活化法 E.基因工程法 除选项E外，其余项均为化学发光剂的常用标记法。 (电子竞技 https://www.360docs.net/doc/0814066967.html,/)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]影响发光剂标记的因素有（）. A.被标记蛋白的性质 B.原料比 C.标记率 D.温度 E.以上都是 影响发光剂标记的因素除上还有发光剂的选择、纯化与保存等因素。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]电化学发光法的检测范围很广，其检测灵敏度可达（）. A.gL B.mgdl C.pgml D.ngml E.mgL 电化学发光法的检测灵敏度可达pgml。
化学发光法在药物分析中的应用的综述报告
化学发光法在药物分析中的应用的综述报告化学发光分析法是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法，作为一种有效的痕量分析技术,因其具有灵敏度高、线性范围宽、而且分析速度快、重现性好等特点,在分析化学领域得到了迅速发展；但选择性较差如果将其与流动注射、高效液相色谱（HPLC)、毛细电泳(CE)等技术联用，就能较好的克服这一缺点。 化学发光反应体系目前主要使用的有：①鲁米诺、②光泽精、③过氧草酸盐-荧光物质-H2O2等电致发光、④Ce（Ⅳ）、⑤高锰酸钾-还原性有机物等，在医学、生命科学等领域中具有广泛的应用前景。 如果将高效液相色谱（HPLC)、毛细电泳(CE)等技术联用对药物进行分析，是分析化学较为活跃的发展领域，此方法彰示着化学发光法的潜在优势。 下面介绍一些化学发光法的研究成果： 基于碱性介质中敌百虫增强鲁米诺-H2O2体系发光的研究,建立了测定敌百虫的流动注射化学发光分析方法。该法测定敌百虫的线性范围为 1.0×10-8—1.0×10-5g/mL,根据IUPAC建议计算出检出限为3.2×10-9g/mL,相对标准偏差为1.10%(1.0×10-7g/mL的敌百虫,n=11)。对蔬菜中的敌百虫进行固相萃取,有效地除去蔬菜中的干扰物质,并对蔬菜样进行加标测定,回收率范围在88.5%—92.6%之间。 阿莫西林在硫酸溶液中的降解产物与Ce（Ⅳ）在罗丹明6G的增敏作用下可产生化学发光。据此建立了流动注射化学发光测定阿莫西林的新方法。该方法线性范围为0.01～20.0mg·L-1,检出限为
0.008mg·L-1,相对标准偏差(n=11,C=1.0mg·L-1为0.7％。方法用于药物中阿莫西林含量的测定,结果满意。 基于碱性介质中莱克多巴胺对鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光的增敏作用,研究了各因素对化学发光的影响。结果表明,在最佳发光条件下,相对发光强度与莱克多巴胺浓度在 4.0×10-9～8.0×10-7 g.mL-1范围内呈良好的线性关系,检出限为2.5×10-9 g.mL-1,相对标准偏差为5.6%。应用该方法成功分析了猪肉和尿样中莱克多巴胺的含量,回收率为69.3%～101.3%,结果令人满意。 在甲醛存在下,高锰酸钾与尿酸能够发生化学发光反应,产生很强的化学发光。据此采用流动注射技术,建立了一种利用高锰酸钾甲醛尿酸化学发光体系测定尿酸的化学发光分析法。方法的检出限为6×10-6 g/L;相对标准偏差为1. 8% (4. 0×10-4 g/L尿酸,n=11 );线性范围为2. 0×10-5 ~5. 0×10-3g/L。本法用于人体尿液中尿酸的测定,结果令人满意。 在碱性条件下,铁氰化钾氧化鲁米诺产生发光,盐酸异丙肾上腺素对该体系有显著的增强作用。基于此并结合流动注射技术建立了测定盐酸异丙肾上腺素的新方法。该方法具有很高的灵敏度,检出限为8.6ng L(IUPAC) ;线性范围为0 .0 5～10 μg L。对1.0 μg L盐酸异丙肾上腺素平行测定11次,其相对标准偏差为3.6 %。 …… 化学发光法的分析对象可分为无机物（无机离子、N的氧化物、含S化合物）有机物、聚合物、活性氧、纳米分子等