眼底镜操作
眼底镜检查基本技能考核评分标准（100分）姓名：得分：
考评专家签名：年月日
Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明
Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明 操作步骤： 本显微镜的荧光光路与明视场（相差、DIC也属明视场）光路相对独立。当使用明视场时，无需打开荧光光源，进打开总电源即可。当使用荧光观察时，可同时打开总电源和荧光电源。 明视场观察： 1.开机：按动总电源开关“1”处接通电源，此时开关和指示灯点亮，打开显微镜底座左侧的透射照明器开关，从小到大调节照明器开关下方的亮度调节旋钮，使照明亮度适当。 2.首先将聚光器模板A放入光路，用10×物镜对样品进行对焦，调节目镜的屈光度调节环，然后换用40×物镜观察样品。 3.关机：将亮度调节旋钮旋至亮度最暗位置，关掉显微镜底座左侧的透射照明器开关，然后按动总电源开关“0”处关闭电源。 DIC微分干涉观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的DIC模板N1及起偏器、检偏器，将其放入光路后，再使用专用的银白色DIC物镜对焦观察。在观察过程中可旋转起偏器，达到最佳的观察效果。 相差观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的相差模板PH1。 荧光观察： 1.开机：先打开荧光灯电源开关，然后按住电源开关上方的荧光灯激发按钮3秒钟后松开，即可见荧光灯点亮。 2.打开荧光转盘上的荧光拨杆至“0”位置，此时荧光光路打开。旋转荧光转盘，转入所对应的滤光片位置即可进行荧光观察；在观察过程中可插入位于荧光灯源前方的减光片，以改变荧光强度，减弱对活细胞样品的损伤。 3.关机：直接关掉荧光灯电源开关即可。 注意事项： 1.短时间内频繁开关荧光灯电源，将极大的缩短荧光灯寿命。 2.荧光光源打开后即可使用，但必须使用20分钟才可以关闭；关闭30分钟以后才可以再次打开，否则会导致荧光灯损坏。 3.不要同时反方向转动显微镜左右两侧的调焦钮，否则会导致显微镜损坏。 4.粗动调焦钮达到限定位置后，如果继续向同一方向旋转会引起显微镜故障。请不要旋转过度。 5.显微镜光源在工作时会产生高温，因此小心不要接触光源以防烫伤，也不要将易燃品如纸张、布、塑料和酒精等放置于光源附近。
眼底镜
检眼镜检查（此方面的考核重在眼底镜的使用方法） 一）步骤： 走到病人跟前，对病人说：您好，您是1床的某某吧？我是您的主管医生，根据您的病情需要，需要给您做个眼底检查，希望您能够配合！ 关灯，病人坐于比一般椅子略高的位子上； 取检眼镜，打开开关，食指放在眼底镜片转盘上，拇指及其余三指握住眼底镜手柄； 嘱患者看正前方，先右后左检查，用自己的右眼检查病人右眼，自己的左眼检查病人左眼： （1）先将检眼镜置于患者眼前约20cm，用+8~+10D镜片检查患者的屈光间质是否透明（正常时瞳孔区呈橘红色反光，若间质有混浊，红色反光中会出现黑影，此时嘱患者转动眼球，如黑影移动方向与眼动方向一致，表明其混浊位于晶状体前方，反之则位于晶状体后方，若不动则在晶状体上）； （2）将检眼镜逐渐移向被检眼，在距受检眼约2cm处调整转盘的屈光度数至看清眼底像。顺序可以是视乳头、血管、视网膜、黄班。检眼镜的光源经瞳孔偏鼻侧约15度可检查视盘，再沿网膜血管检查颞上、颞下，鼻上、鼻下各象限，最后嘱患者注视检眼镜灯光，以检查黄斑部。眼底病变的大小，以视乳头直径表示，以透镜的屈光度测量病变的凹凸程度，3D相当于1mm。 检查过程中，隔一会儿要让病人休息一下双眼。 检查完后，开灯，嘱患者好好休息。 眼底检查可能需要记录的有：视盘大小、形状（有无先天发育异常）、颜色（有无视神经萎缩）、边界（有无视盘水肿、炎症）和病理凹陷（青光眼），视网膜血管的管径大小、是否均匀一致，颜色、动静脉比例、形态、有无搏动及交叉压迫征、黄斑部及中
心凹光反射情况，视网膜有无出血、渗出、色素增生或者脱失，并描述其大小、形状、数量等。 二）眼底病变： 视乳头水肿：视乳头充血、隆起及边缘模糊。 视乳头炎：初期，视乳头充血，边缘模糊，视网膜中央静脉扩张。当炎症高度发展时，视乳头水肿隆起，其高度一般不超过3个屈光度，边缘极模糊，视乳头及其周围有渗出与出血。视网膜中央静脉扩张迂曲，动脉正常或略细。邻近视网膜亦可被侵犯，出现水肿、出血、渗出，称为视神经视网膜炎。晚期可发生继发性视神经萎缩。 视盘静脉炎：临床可分为Ⅰ型(视盘水肿型)和Ⅱ型(视网膜静脉阻塞型)，前者是由筛板前睫状血管非特异性炎症所致，表现为视盘水肿、血流瘀滞；后者则为筛板后或视乳头的中央静脉炎症所诱发，表现为视网膜血液瘀滞、视网膜出血和水肿。 乳头黑色素细胞瘤：是完全或者部分位于乳头部位的颜色由深褐色到黑色的病灶。 视网膜蔓状血管瘤：是一种先天性视网膜动静脉的直接吻合，使动静脉均极度扩张、迂曲，形成血管瘤样畸形，有的甚至卷曲、盘旋呈蚯蚓状。 视网膜中央动脉阻塞：视网膜动脉显著变窄，血柱颜色发暗，常呈节段状。视网膜静脉亦狭窄，但程度不如动脉明显。视网膜呈乳白色水肿混浊。黄斑由于视网膜组织菲薄，能透露脉络膜毛细血管层，与周围乳白色混浊对比，形成典型的樱桃红点。中心凹反射消失。 视网膜睫状动脉栓塞： 视网膜中央静脉阻塞：总干阻塞时，眼底改变因病程早晚、阻塞程度不同而有所不同。视盘水肿混浊，境界消失。整个视网膜水肿混浊，布满大小不等的线状、火焰状、狐尾状的神经纤维层出血。有时也能见到加点状或形态不规则的深层出血。视网膜静脉怒张
直接检眼镜的标准操作规程
直接检眼镜的标准操作规程（SOP） SOP编号：SOP-YK-YQGL-029-1 页数：3 制定人：审核人：批准人： （签名、日期）（签名、日期）（签名、日期）生效日期：颁发日期： 修订登记： 审查登记：
仪器型号：苏州光学仪器六厂YZ6F型鹤牌868.00 一、用途 眼底检查的必要工具。 二、结构 头部，灯泡，手柄，电箱主体 三、操作方法 1.将电源输入插头插入电源插座。打开电箱主体上的电源开关，从电箱搁架上拿起检眼镜，电路自行接通，指示灯和检眼镜同时点亮； 2.使用检眼镜时根据需要进行亮度调节控制，顺时针旋转手柄上的调光旋钮，亮度变大，逆时针两度减少； 3.最好在暗室内进行检查；
4.患者坐位或卧位； 5.检查右眼时，检查者站在受检者的右侧，右手持镜，以右眼观察，检查左眼时，则改为左手持镜，左眼观察，站在左侧； 6.握镜时，以示指贴紧转盘的边缘，以便观察，更换转盘上的镜片，拇指，其余三指则握住镜柄； 7.先用侧照法观察眼的屈光间质有无混浊，将镜片转盘拨到+8.0D-+10.0D，距被检者10-24厘米； 8.将转盘拨到“0”处，距受检者2厘米处，拨动转盘到看清眼底为止。嘱患者注视正前方，检眼镜光源经瞳孔偏鼻侧约15°可检查视盘，再沿血管走向观察视网膜周边部，最后检查黄斑部； 9.用后关闭电源 四、保养与维护 1.为了延长灯泡的使用寿命，不能使灯泡满负荷工作，应确保检眼镜在不使用的状态下处于关闭状态； 2.清洁：若有灰尘粘于反光镜，可用毛笔拂去或用无水酒精
棉花擦拭；仪器外表若有灰尘，可用干净的软布擦拭； 3.检眼镜应放在较清洁的环境下使用，如果长期不用，应将其置于包装盒中以免灰尘侵入仪器内部。
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。
（3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。 （5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。 （4）调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。 （5）当需要得到较强的荧光图像时，可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路，可获得较明亮的荧光图像。
荧光显微镜操作手册
荧光显微镜操作手册 Olympus BX51 物镜： 4 ×0.16 （无DIC） 10×0.40 20×0.75 40×1.00 oil 100×1.40 oil 荧光滤色块转盘： 1. WU 蓝 2. WIB 绿（长通） 3. WIBA 绿（带通） 4. WIG 红 5. CFP 青 6. YFP 黄 操作步骤：（注意：样品须在低倍镜下放置和取下） DIC观察：
1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜应 与相应的物镜倍数相匹配 4.先选用低倍物镜（“10×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.换到高倍镜头，观察样品 7.DIC观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照 荧光观察： 1.打开明场电源开关 2.打开汞灯电源开关 3.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 4.检偏器、DIC棱镜在光路外 5.将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter 6.光路选择拉杆推至最里边 7.根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置 8.通过两组减光滤片调节激发光强度 9.从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野， 10.依次换到高倍镜头，观察样品 11.拍照时光路选择拉杆完全拉出 普通明场观察： 1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上，用样品夹夹好 3.起偏器、检偏器、DIC棱镜在光路外，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜拨到 明场（BF）位置 4.先选用低倍物镜（“4×”） 5.调节透射光的强度，调节焦距，找到视野 6.依次换到高倍镜头，观察样品 7.光路选择拉杆拉到中间位置既可观察，也可拍照 关机： 1.关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次 开启） 2.将透射光调到最小，关闭明场电源开关 3.将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头 4.确认数据已经保存，关闭软件 5.使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据） 6.关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况
眼检查法总结
角膜曲率计 概念：用于测量角膜曲率半径及角膜屈光力和散光轴位。 类型：Javal--Schiotz角膜曲率计 Baush--Lomb角膜曲率计 自动角膜曲率计 参数分析：角膜曲率计测量范围是以角膜顶点为中心的3mm直径区域内。 正常值： 1：国内角膜水平子午线曲率半径平均值为7.674±0.060mm,垂直子午线曲率半径平均值为7.579±0.007mm。 2.角膜屈光力水平子午线平均值为4 3.125±0.032D,垂直子午线角膜屈光力的平均值为43.531±0.036D. 随年龄增长曲率半径也增加，趋向于变长，角膜屈光力趋向于减少。 3.国人生理散光度平均值是0.406，其中90.2％分布在0.25—1.00D范围之内。检查时的注意事项： 1.检查时被检者头部要正确，否则最大角膜屈光力的轴位将出现误差。 2.检查时要注意光学轴线应该穿过被测角膜曲率中心（中央区域）。 3.检查一般在半暗室内进行。 4.令患者双眼睁大，充分暴露角膜。对上睑下垂或小睑裂者，要充分暴露其角膜并避免压迫角膜。 5.佩戴角膜接触镜者应至少摘镜2周再做检查。 6.角膜曲率计只能测定角膜表面曲率差所致散光，而不能测定整个眼球的散光。 7.不能确定散光是近视性的还是远视性的。 角膜地形图仪 （1）概述：作用：1）精确测量分析全角膜前表面任意点的曲率；2）检测角膜屈光力；3）是研究角膜前表面形态的一种系统而全面的定量分析手段。 （2）角膜地形图原理：利用镜面反射原理：1）角膜反射像经摄像接收；2）所得数据由计算机处理；3）得到角膜表面各处的曲率半径。 系统构成： Placido盘投射系统实时图像监视系统计算机图像处理系统（3）角膜地形图的优点和缺点 优点：1)测量的区域大，获得的信息量大:-检查面积大于95％以上，角膜曲率计8％; -数据点密度34个环，每个环256个点; -7000－8000个数据点（zeiss）-13000个数据点（AstraMax） -25000个数据点（PentaCam） 2) 屈光力测量范围广 3) 精确度高、误差小 4) 易于建立数学模型 5) 受角膜病变影响小 6) 直觉性强 7)一机多用 缺点：1）价格较昂贵；2）对周边角膜欠敏感；3）当非球性成分增加时，准确性降低；4.）易受眼眶高度及眼球内陷程度影响；5.）检查参数过多时费时。（4）操作步骤：1.)输入患者资料 2.)向患者说明检查过程，令患者姿势舒适 3.)嘱患者注视角膜镜灯光 4.)检查者操纵手柄，进行图像摄取 5.)根据需要选择合适的角膜图像 （5）参数分析：1）角膜的生理变化、前表面形态及分区：
荧光显微镜使用说明及注意事项
荧光显微镜使用说明及注意事项 （1）严格按照荧光显微镜厂家说明书要求进行操作，不要随意改变程序。 （2）观察对象必须是可自发荧光或已被荧光染料染色的标本。 （3）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。 （4）载玻片、盖玻片及镜油应不含自发荧光杂质，载玻片的厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚可吸收较多的光，并且不能使激发光在标本平面上聚焦。载玻片必须光洁，厚度均匀，无油渍或划痕。盖玻片厚度应在0.17mm左右。 （5）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。 （6）选用效果最好的滤光片组。 （7）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。 （8）荧光标本一般不能长久保存，若持续长时间照射（尤其是紫外线）易很快褪色。因此，如有条件则应先照相存档，再仔细观察标本。 （9）荧光显微镜光源寿命有限，启动高压汞灯后，不得在15min内将其关闭，一经关闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁开闭，否则，会大大降低汞灯的寿命。标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。 （10）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。 （11）若暂不观察标本时，可拉过阻光光帘阻挡光线。这样，既可避免对标本不必要的长时间照射，又减少了开闭汞灯的频率和次数。 （12）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。 （13）较长时间观察荧光标本时，一定要戴能阻挡紫外光的护目镜，加强对眼睛的保护。在未加入阻断滤光片前不要用眼直接观察，否则会损伤眼睛。 (14) 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。 (15) 作油镜观察时，应用“无荧光油”。 (16) 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。
学看鸽眼栉膜
学看鸽眼栉膜 近年身边一些鸽友对眼底视团津津乐道、情有独钟，好象找到了传说中的“葵花宝典”，已掌握武林秘藉一样，让我们这些门外汉感到眼底视团即神秘又好奇。最近在网上查找相关内容，自己备了一个医用眼底镜边学边实践了一番，感觉在看万花筒，越看越糊涂。现将部分相关内容（来源于网上搜索）节选与大家探讨：栉膜的优劣标准是什么？鸽眼栉膜有无科学依据？ 一、如何去观察眼底视团 我们将医用直接检验镜（以下简称眼底镜）的曲光度调节到黑色的20，一手按正常抓鸽子的方法，尾上头下与水平成45度角，将鸽子身体固定；另一只手的拇指与中指轻轻抓住鸽嘴，食指轻轻搭在鸽子的嘴、鼻、头的中部将鸽子的头固定，使鸽眼与眼底镜水平照射的光线成45度角；鸽眼与眼底镜之间间隔3-4厘米，掌握鸽子头部的手可以随时调整头部的角度、远近，这样眼底视团便可尽收眼底。 视团，其学名称栉膜。 二、视团可分成两个有机的组成部分：板、叶。 首先，我们来谈谈‘板’。通过眼底镜可观察到鸽眼瞳孔里面（底部）自鸽子的脑部开始至嘴角有一逐渐走宽的带状物，不同的鸽子起宽窄、色泽、长短不同。为了便于理解，我们将这一带状物称做-板；在板的两侧对称（也有一些不对称）长着类似树叶的，我们称其为-视叶。信鸽视团的板千姿百态，变化万千。但我们依据其共性将其分成两类：即单齿、双齿。 1、所谓单齿，是指板的两侧是平的，视叶与板连接的地方没有凸起，仿佛春天树枝刚刚发芽。双齿就是指板的两侧形状类似锯齿，无论大齿、小耻还是钝齿、利齿统称为双齿，双齿的视叶长在齿尖上，左右对称。 不论单齿、双齿，靠近脑部的我们称之为根，靠近嘴部的我们称之为头。板的颜色我们按其特征将其分成四类即：金、银、铜、铁。有时回出现纯白色的板，但十分罕见，属珍品。 2、‘视叶’的种类较多，，按其象形分为三类：高粱状、菜花状、菊花状；按其大小分为：大叶（发达）、小叶（不发达）；按其颜色，有些视团板和叶的颜色浑然一体，有些板和叶的颜色不同，但主要的颜色同板的颜色大同小异。 3、从整个视团来讲，无论是单齿板、还是双齿板；宽板、还是窄板；长板还是短板；还有颜色等，其视叶可以是任何一种。 三、视团的种类 以上将视团的板和叶进行了分类，但是整个视团究竟以什么标准去分类呢？
荧光显微镜介绍及使用
荧光显微镜 一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。 在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的
光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 二．工作原理 光源 多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
发布时间:2011-06-15 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是光学显微镜中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。 （3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。
（5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。
实验 荧光显微镜操作及海洋微藻细胞观测
荧光显微镜(Fluorescence microscope)操作及海洋细菌微藻观察 一.实验目的 ?了解荧光显微镜使用原理 ?了解荧光显微镜标本制作要求 ?了解使用荧光显微镜的注意事项 ?荧光图像的记录方法 掌握荧光显微镜对细菌及微藻的观察，提交实验报告（包括拍摄图片） 二．实验原理 某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。由此可见，被照射物质产生荧光必须具备以下两个条件：①物质分子（或所特异性结合的荧光染料）必须具有可吸收能量的生色团；②该物质还必须具有一定的量子产率和适宜的环境（如溶剂、pH、温度等）。 荧光显微术是利用荧光显微镜结可发荧光的物质进行观测的一种实验技术。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如见光)，这种光就称为荧光。有些生物体内的物质受激发光照射后可直接产生荧光, 称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不能产生荧光，但它吸收荧光染料后同样却能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后便可发出桔红色荧光。 荧光显微镜具特殊光源（多为紫外光光源），提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。在视场中所所观察到的图像，主要是样品的荧光映像。 三．荧光显微镜标本制作要求 （一）载玻片 载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。 （二）盖玻片 盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光女可激发标本。 （三）标本
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 发布时间:2011-06-15 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是光学显微镜中的一种。 关键字： 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中： （1）任选一块标本放在载物台上. （2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。 （3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 （4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。
（5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 （6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 （7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 （8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察： （1）将荧光染色标本放到载物台上。 （2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 （3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律：激发滤光片的透射波长＜双色束分离器的透射波长＜阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。 （4）调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。 （5）当需要得到较强的荧光图像时，可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路，可获得较明亮的荧光图像。 （6）当需要使用40×或100×荧光物镜观察时，应在标本和物镜间加上甘油，油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿，然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。 6. 荧光显微摄影——显微镜摄像头 由于荧光图像一般均较明场观察暗得多，所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间，在曝光时应注意避免仪器震动。 荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。因紫外光对荧光猝灭作用大
眼底镜的教与学_杜红俊
练习,教员轮流进行指导。 开展知识竞赛。为调动学员学习积极性,帮助学员巩固所学理论知识,熟练掌握护理操作技能,并于每次课终时,组织学员进行智力竟赛和护理操作技能比赛活动等。另外,充分利用现有的实验条件,以第二课堂的形式开展内科、外科等专科的模拟检查训练。 3.3 增加临床见习机会,使学员能够将理论联系实际在5内科护理学6、5外科护理学6和5护理学基础6的授课中,根据有关章节,增加护生到临床见习的机会,以促使护生理论联系实际,巩固所学理论知识和熟练操作技能,不断提高动手实践能力。 3.4 固定实习医院,定期检查指导 为了不断加强学员的动手实践能力,我们选择了带教力量强、带教规范的医院作为学员见习和实习的定点医院,这样既可达到让学员多看、多学、多做,不断提高动手能力的目的,又便于实习的管理、检查指导和考核。教研室并定期组织教员利用15-20天的时间,下到各实习点采用和护理部、护士长、病员分别召开座谈会,跟班抽考的形式进行检查和指导实习。 4 加强实践性教学的考试管理 4.1 学校内专业考试的管理对5内科护理学6、5外科护理学6和5基础护理学6三门护理 专业的主干课程,分别在期中和课终进行理论考试。5基础护理学6、5急救护理学6和5护理操作技术6在课终分别进行护理操作技能考试,其成绩单独计算,不与相应的理论成绩折合。 4.2 实习期间考试的管理教研室每年3月、10月利用教员下实习点,检查实习的时间进行。采取综合理论考试(内科护理学占30%、外科护理学占30%、基础护理学占40%)和跟班抽考专业护理操作技能的形式进行。 4.3 毕业时考试的管理 建立护理专业毕业考试题库,实现教考分离。对护理专业毕业生必考的5内科护理学6、5外科护理学6和5护理学基础6的理论考试,由过去分别考、分别记分,改为出一份综合试卷(内科护理学占30%、外科护理学占30%、护理学基础占40%),时间为100分钟。对护理操作技能考试在护理实验室进行,采用每人必考1项(静脉输液)、抽考1项无菌操作或非无菌操作,由护理教员和外聘专家共同评分,外聘专家督考的方式进行。其具体考试内容和模拭,逐年逐步得到了完善和规范。 参考文献: [1]武 巍,李亚洁,瞿慧敏.护理学员专业素质及护理技能规范化训练 的教学实践[J].中华护理杂志,1999,34(5):294-295. 收稿日期:2007-09-20 作者简介:杜红俊(1971-),男(汉族),山西人,副教授,博士,主要研究方向为眼底病和眼屈光不正的手术治疗。 眼底镜的教与学 杜红俊,王雨生,胡 丹 (第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所,陕西西安 710032) 摘要:掌握眼底镜的使用方法是普通医生,尤其是眼科医生的基本技能之一,但是眼底镜操作方法的学习却是临床教学中的难点。作者从多年的教学中总结出了常见的眼底检查设备,包括直接检眼镜、双目间接检眼镜、三面镜和裂隙灯前置镜的教学经验和体会,目的是让实习学生和初级临床医生能够尽快地掌握各种眼底镜的使用方法,为进一步的学习打下基础。 关键词:眼底镜;裂隙灯;三面镜;临床教学 中图分类号:G642.45 文献标识码:A 文章编号:1006-2769(2008)03-0583-03 检眼镜的发明和使用是眼科学发展的里程碑之一,借助检眼镜,人类才得以看见眼底,而由此真正开始了眼底病的诊断和治疗。虽然科技的发展催生了一系列先进诊断设备的出现,但检眼镜对于一个眼科医生就如同听诊器对于内科医生一样不能被替代。另外,由于眼底血管是全身唯一可以通过肉眼直接观察的血管,糖尿病、高血压和肾病等全身疾病在眼底也会有相应表现,通过眼底检查就可以了解这些疾病的发展,因此无论是否从事眼科专业,掌握眼底镜的使用对于每一个医生来说都十分必要。但在临床的带教中,无论是实习学生还是眼科的初级医生,都普遍反映眼底镜的使用是学习中的一个难点。作者在实习期间和最初从事眼科工作时也有这种体会。但随着临床经验和带教经验的丰富,作者总结出了常用眼底镜使用和教学中的 经验和要点,并在教学实践中收到了很好的效果,现分述如下: 1 直接检眼镜(direct opht halmoscope)的教与学 直接检眼镜是1851年由德国的Helmholtz 发明的,是目前眼科临床中最常用的眼底检查设备,掌握直接检眼镜的使用是眼科医生最基本的技能之一。直接检眼镜的主要部分是中央有一小孔、焦点距离为25cm 的凹面反光镜,镜后面是嵌有不同屈光度镜片的小圆盘,镜片的屈光度一般从-35D -+25D 不等,检查者可以根据自身和被检查者的屈光度以及所要检查的部位随意转动[1]。 初学者使用直接检验镜最常遇见的问题是:无法看见瞳孔或者稍加移动就找不见瞳孔、找见瞳孔又无法看见眼底、勉强看见眼底而无法看见周边视网膜。为了克服这些困难,必须注意以下几点。一是/四左0和/四右0的原则,即检查患者右眼时,检查者用右手持镜,站在病人的右侧,用右眼来观察,同法检查左眼。同时检查者还必须学会用食指熟练地转动小圆盘。掌握这一姿势就为进一步检查打下了基础。二是熟练找到瞳孔并保持 # 583#
糖尿病视网膜病变筛查方式探讨(一)
糖尿病视网膜病变筛查方式探讨(一) 作者：张蕾,许维强,谭荣强,刘姣,林绮敏 【摘要】目的：通过对散瞳直接眼底镜检查、免散瞳数码眼底照相及眼底荧光造影3种检查方法对可疑糖尿病视网膜病变患者进行检查和评估比较，优化检查程序和方法。方法：对就诊我院门诊和住院确诊的264例糖尿病患者进行散瞳直接眼底镜检查、免散瞳数码眼底照相及眼底荧光造影检查。眼底病专科医师阅片进行诊断，以眼底血管荧光造影诊断为标准。主要指标散瞳直接眼底镜检查、免散瞳数码眼底照相方法进行筛查诊断的敏感性、特异性及与眼底血管荧光造影诊断结果的一致性。结果：以糖尿病视网膜病变Ⅰ期为筛查阈值时直接眼底镜检查和免散瞳眼底照相的敏感度分别是63.4%,86.8%,特异度分别是76.9%,92.3%,Youden指数分别是41.1%,79.1%,Kappa检验的一致性分别是41.9%,80.7%。以糖尿病视网膜病变2期为筛查阈值时，直接眼底镜检查和免散瞳眼底照相的敏感性分别是65.5%,93.1%,特异性分别是94.7%,97.4%,Youden指数分别是60.3%,90.5%,Kappa检验的一致性分别是39.1%,61.2%。结论：免散瞳数码眼底彩色照相可作为糖尿病视网膜病变Ⅱ期以上糖尿病视网膜病变优化筛查诊断方法。 【关键词】糖尿病视网膜病变；筛查；数码眼底照相；荧光素眼底血管造影AbstractAIM:Toevaluatetheabilityofdigitalfundusphotographyanddirectfunduscopytodetectdiabet icretinopathy(DR)inpatientswithdiabeticmellitus(DM)comparedwithfundusfluoresceinangiograph y(FFA).METHODS:All264caseswithdia FA,anddirectfunduscopywithdilationoftheirpupils.Thenstatisticscontraststudyofdirectfunduscopya mparisonwithFFA,mildnonproliferativeDRbeingtakenasreferableDR,directfunduscopywithdilation ofpupilsgaveasensitivityof63.4%，aspecificityof76.9%，andaKappastatisticof41.9%,aYoudenof41.1%,digitalfundusphotographygaveasensitivityof86.8%，aspecificityof92.3%，andaKappastatisticof80.7%,aYoudenof79.1%;moderatenonproliferativeDRbeingtakenasreferableD R,directfunduscopywithdilationofpupilsgaveasensitivityof65.5%，aspecificityof94.7%，andaKappastatisticof39.1%,aYoudenof60.3%,anddigitalfundusphotographygaveasensitivityof93.1 %，aspecificityof97.4%，andaKappastatisticof61.2%,aYoudenof90.5%.CONCLUSION:Digitalfundusphotographycenteredatf oveaforscreeningofearlyDRespeciallystageDRⅡormoresevere. KEYWORDS:diabeticretinopathy;screening;digitalfundusphotography;fundusfluoresceinangiograp hy 0引言 糖尿病已成为我国主要的公共卫生问题，糖尿病性视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)是一种严重影响糖尿病患者视力的疾病,如不及时治疗将会造成不可逆的永久性损害。糖尿病视网膜病变容易通过眼底检查来发现，而开展糖尿病视网膜病变筛查项目可显著提高糖尿病视网膜病变的检出率。近年国外有多种筛查DR的方法被广泛应用1,2]。建立适合本地区糖尿病视网膜病变筛查方法成为目前待解决的问题。我们拟采用目前准确率较高荧光素眼底血管造影(fundusfluoresceinangiography，FFA)为标准对散瞳直接眼底镜检查、免散瞳以黄斑为中心45°单视野眼底照相筛查糖尿病视网膜病变的方法进行评估。 1对象和方法 1.1对象 就诊我院门诊和住院部的糖尿病患者（眼底窥不清者不列入此项研究），264例528眼，其中男150例，女114例，年龄32～85(平均61)岁。按年龄组分为3组：青
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程发布时间:2011-06-15 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 荧光显微镜是光学显微镜中的一种。 关键字: 荧光显微镜使用方法 荧光显微镜操作规程 荧光显微镜使用 荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的?5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。 4. 灯泡的调中: (1)任选一块标本放在载物台上. (2)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光(,)或蓝光(,)或绿光(,)激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。
(3)调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。 (4)前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。 (5)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。 (6)调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。 (7)调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。 (8)转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。 5. 荧光观察: (1)将荧光染色标本放到载物台上。 (2)将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。 (3)转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。 滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时，必须遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长,双色束分离器的透射波长,阻断滤光片的透射波长。 由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片，出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配，在观察和摄影时，只需选择滤光片组即可。 (4)调节粗调手轮，当看清荧光图像轮廓后，再用微调手轮调焦，直至看到清晰的荧光图像。
荧光显微镜操作说明
IX71 荧光倒置显微镜组件编号及说明 1：毛玻璃：平时观察应始终把毛玻璃放在光路中，调节光线均匀度。 2：色温平衡滤色片（LBD）：又称蓝色滤光片，滤掉黄色光，视场为白色，用于普通观察或显微照相。 3：绿色干涉滤色片（IF550）：视场为绿色，增强反差，立体感较好。 4：减光片（ND）：使25%的光透过，降低光强。 1-4为滤光片组。 5：视场光阑：根据所用物镜调节照明光束直径，为了防止散射光线，改善图象反差，将光阑调节到外切于视场；观察活细胞或荧光样品时，为了防止样品损伤或褪色，可关小视场光阑。 6：聚光镜孔径光阑：对中后一般不用调节。 聚光镜组 PhL 与4×物镜联合使用 Ph1与10×物镜联合使用 Phc与20×物镜联合使用 Ph2与40×物镜联合使用 以上四种观察的效果为相差； BF（明场观察）可与所有物镜联合使用，为普通观察，最常用。 7：物镜转换盘：4×、10×、20×、40×调节40×物镜可校正因盖玻片厚度引起的覆盖差，使标本看的更清楚。 8：激发块组：共有三个激发块 WB蓝色激发块：发出绿色荧光，用于FITC染色等； WG绿色激发块：发出红色荧光，罗丹明，TRITC，PI等； WU紫外激发块：发出蓝色荧光，DAPI染料，Hoechest 33258等。 看荧光时要打开SHUTTER，下面挡位转换至相应激发块挡；普通观察时关闭SHUTTER，且下面挡位要至于4、5或6，即无激发块挡。 荧光电源启动后，不能在少于15min内关闭，关闭后至少要等10min才能再次开启。 9：开启显微镜时，要先打开电源（TH4-200），然后按下9；如果用荧光则最后打开荧光电源（U-RFL-T）。 10：放大倍率选择拉杆：拉出后位于1.6×挡，相当于在原放大倍数上又放大1.6倍。 11：光路选择杆：可以在观察和照相之间转换光路，即视场与电脑之间转换。