岛津高效液相色谱仪

Lc-10AT岛津高效液相色谱仪的操作流程

流动相应使用HPLC级别有机试剂，均须经0.45微米滤纸过滤，除去溶液中气泡避免影响出峰，以及避免氧气与样品的反应。

按照标准操作规范（SOR）放置流动相以及连接合适的色谱柱，打开仪器并连接电脑，

双击启动软件如下：

在线分析

液相方法的创建：

依据SOR创建方法程序(File-new method file)，方法设置参数为检测波长（Detector A Wavelength Ch1:)、洗脱时间(Lc Stop Time)、洗脱程序(Pump & Lc Time Prog)、柱压限度(Advanced-Pump)。

检测波长：

检测器一般为紫外分光检测器，其检测波长（Detector A Wavelength Ch1:)范围为200～400nm。

检测时间：

初次创建方法，因保留时间不确定，检测时间(Lc Stop Time)应设置长一些。若在序列

运行之后，方法时间设置不够，可延长方法时间（change analsis time），请注意此方法并未更改方法文件，故下一针的方法时间还是与之前一样，应当停止序列，更改检测时间并保存后才生效。

洗脱程序：

洗脱程序分为等度洗脱与梯度洗脱，前者为恒定流速（一般为1.0ml/min）下，固定组分比例洗脱；后者为恒定流速（一般为1.0ml/min)下，组分比例随时间变化的洗脱。等度洗脱设置：Pump-Mode-Isocratic flow项下A，B泵流速（即A，B泵组分）的设置。梯度洗脱的设置较等度洗脱多了一个洗脱程序（Lc Time Prog），以中药材三七的液相方法为例：

Time A(%) B(%)

0～12 19 81

12～60 19～36 91～64

① Pump-Mode-binary graient项下流速（一般设置为1.0ml/min）和方法初始B组分的设置；

② Lc Time Prog 项下设置时间以及相对应的组分，A组分为（100%-B组分)，故仅设置B组分即可。此外，连续进样中，应在方法结束时增加平衡时间（60～70）。

柱压限度：

柱压限度(Advanced - pump)的设置是为保护色谱柱，压力过大会导致色谱柱填料的塌陷，进而影响色谱柱的柱效。柱压限度设置为最大值30MPa，最低值0MPa：

方法创建完成之后，以样品命名并保存，方便下次调用。

序列表的创建

表的一般操作

右键序列表可对表内容进行：复制、粘贴、剪切、填充、序列填充、插入行、增加行。

进样程序的编辑：

在线分析中打开序列表，右键选择表样式（table style），除去一些无关紧要的参数，仅留下进样位置（Vial#）、样品名称（Sample Name）、方法文件（method file）、数据文件（data file）、进样体积（injet. V olume)。依次填入样品信息，调用创建的方法，设置保存位置（数据文件）。

在走完样品序列之后，设置方法冲洗保存色谱柱时，并不需要进样，进样位置可设置为-1，这样会跳过进样按照方法走。

操作注意

使用前，应先用5%甲醇水1.0ml/min冲洗40min。一般250cm反相色谱柱平衡柱体积为22ml，加上管道，冲洗体积最低应为30ml。（本文所述色谱柱均为反相色谱柱，不再重复。）而后更换流动相，运行方法，等待系统达到平衡即可运行序列。

系统平衡：基线压力线均应平滑，基线噪音波动范围在0.05之间，各泵的压力变化应在5bar以内。连续两针进样峰面积以及出峰时间变化不大。

色谱柱的维护

实验完成后，用5%甲醇水冲洗40ml，而后用纯甲醇冲洗40ml。若当天不能及时冲洗色谱柱，可设置方法让Lc系统以0.1ml/min低流速冲过夜，第二天再以上述方法保存色谱柱。

在岛津高效液相色谱仪的工作站中，序列表（batch processing）的应用范围相当广泛，进样程序的编辑，信噪比的计算，离线图谱的批处理等，这里具体就这三方面展开。

信噪比的计算：

在离线分析中，