苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展

苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展
苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展

苏云金芽孢杆菌的分离及鉴定

苏云金芽孢杆菌的分离及鉴定 09级园林工程系生物技术及应用班级 (制作人—王珏指导教师—韩磊) 内容提要 本论文描述了苏云金芽孢杆菌的选择性培养、分离以及鉴定的过程,从而熟悉了灭菌、接种等无菌操作技术,掌握了鉴定菌种的不同方法以及了解到了苏云金芽孢杆菌在生产上的应用和发展前景前景。 关键词 苏云金芽孢杆菌;选择性培养;生化鉴定;明胶酶;明胶的液化;精氨酸脱羧酶;尿素酶1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1玻璃器皿 烧杯;三角瓶;量筒;玻璃棒;培养皿;试管;移液管;涂布棒;酒精灯;胶头滴管等 1.1.2实验仪器 超净工作台;光照培养箱;水浴锅;摇床;电子天平等 1.1.3其他用具 研钵;纱布;吸耳球;八层纱布;剪刀;棉塞;pH试纸;胶头滴管;牛皮纸;麻线;喷壶等 1.1.4实验材料 土壤表层土样;叶片;苏云金芽孢杆菌菌粉 1.2方法与步骤 1.2.1选择性培养及扩大培养 1.2.1.1灭菌前准备 1)PBA培养基的制备 PBA培养基配方(1L) 配置750mL的PBA搖瓶培养基后分装于三个大三角瓶内,随后用棉塞及牛皮纸封口包扎;以备灭菌(121℃,20min)。

注(制备的培养基中有500mL中不含有醋酸钠) 2)灭菌器材的准备 将需要灭菌的三角瓶、纱布、搁置架分别包扎后同培养基利用手提式高压灭菌器进行灭菌(121℃,20min)。 1.2.1.2灭菌 1、注水:往灭菌锅内注入适量的蒸馏水; 2、预热:放入需灭菌的器材和培养基之前先预热十分钟; 3、加热升温过程:将需要灭菌器的材放入灭菌锅内→盖 好灭菌锅的顶盖→打开放气阀→接通电源进行升温、升压→ 待到有大量热气从放气阀冒出时关掉放气阀;此后是升压的 过程; 4、升压、降压过程:开始升温后压强随之升高,待到压 强为0.05mpa时关掉电源;此后为降压过程,当压强降到 0mpa时打开放气阀放气。放完气后关掉放气阀接通电源,再 次升温、降温后打开放气阀放气,放完气之后关掉放气阀接 通电源;此后为升压保压的过程; 5、升压保压过程:当压强从0mpa升到1.1mpa时开始计时;当压强升到1.13mpa时关掉电源,待压强降到约1.1mpa时再接通电源;再次升压至1.13mpa时关掉电源开始降压,当降到1.1mpa时再接通电源然后开始升压。重复上一步操作,使此过程保持20分钟。此后为降压出锅过程; 6、降压出锅过程:保压20分钟后关掉电源等待降压至0mpa时打开放气阀放气;用抹布打开灭菌锅的锅盖,然后将灭完菌的器具和培养基取出; 1.2.1.3样品的预处理 三个小组分别取土壤表层土样和植物叶片共5份→土壤研磨、叶片剪碎→每份样品称取5g→溶于适量的自来水中→摇匀→置于75℃的水浴锅中保温10min→静置 1.2.1.4超净工作台的准备 接通电源后打开紫外灯,30分钟后关掉紫外灯打开风机约20分钟;然后用肥皂洗手后进行无菌操作。 1.2.1.5无菌操作 1)培养基的完善及分装(对照试验)

Bt(苏云金杆菌)乳剂生产工艺规程

Bt(苏云金杆菌)乳剂生产工艺规程 衡阳市微生物厂 一九九二年三月

Bt 乳剂工业生产技术 一、概述 Bt 即苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis )的简称,是一种寄生于昆虫体内引起昆虫发病死亡的能产生伴孢晶体的芽孢杆菌,其制剂广泛应用于农、要、果、蔬、城市园林方面的害虫防治。 二、生产工艺流程 砂土管菌种 斜面菌种 扁瓶 菌种扩大培养 发酵罐 过滤 浓缩 加助剂 检验 包装 三、生产工艺操作规程 (一)砂土管菌种的制备 1、砂的处理: 取建筑用砂或河砂经60-80目过筛后用工业Hc 浸泡48h 后用清水洗净,再用0.2NNao 中和,烘干后用磁铁除去其中带磁性之金属微粒,装入洁净容器内备用。 2、砂土管制备: 将以上已处理好之砂土分装于1.2×12公分之小试管中,每管约装2克,塞上棉塞,先用2.0kg/cm 2高压灭菌1.5小时,间歇灭菌三次,再以160℃干热灭菌2小时,经无菌试验,即抽取一点砂土置于斜面试管中 36℃培养24小时才检查无杂菌后备用。 27-29℃ 48-72h 27-29℃ 18-24h 27-29℃ 36-48h

3、砂土孢子的制作: 选择生长良好,经过生产能力考查合格的优良试管斜菌种一支加入无菌水5ml,用接种针刮下孢子制成高浓度的孢子悬液用无菌吸管吸取0.2-0.3ml接入砂土管中,而后置入真空干燥器内,用真空泵间歇抽干,用石蜡封口,以后置于0-5℃冰箱中,在干燥情况下保存。 (二)斜面菌种的制备 1、培养基:牛肉膏0.3%、蛋白胨1%、琼脂2%,调节7.5-8.0溶化后分装试管,加塞放入试管篓内包好灭菌。 2、灭菌:在消毒锅内 1.1kg/cm2下蒸气灭菌30分钟,等冷却到60-70℃时取出摆成斜面,空白培养2天观察无杂菌方可使用。 3、接种培养:将菌种试管斜面放在接种室内或无菌操作箱中,打开紫外线灯灭菌30分钟后关闭。用接种环按操作规程刮取种子菌苔少许,转至新鲜斜面培养基上划线接种,然后放入30℃培养箱内3-4天,经检查正常,放入冰箱内备用。 (三)扁瓶扩大种子制备 1、培养基:同斜面培养组成,另加葡萄糖1%,溶化后装入扁瓶。 2、灭菌、接种、培养均与斜面菌种同。 (四)发酵 1、培养基棉籽饼粉 3.5% 玉米粉 2.0% 鱼粉 1.0% 酵母粉0.2%

苏云金芽孢杆菌

本文对农业上研究最多、用量最大的两类微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis, Bt)和昆虫杆状病毒(baculovirus)进行了综述,分别论述了它们的杀虫优势、杀虫的分子机理、目前的研究状况,并对它们的基因工程技术改良路线以及在农业上的应用,提出了一些建议。 由病虫害引起的农作物的减产减收已成为制约农业生产进一步发展的限制因素,全球每年农作物因虫害造成的损失约占总产量的13%,而目前对农作物害虫的防治主要依赖于化学农药。完全依赖化学杀虫剂存在许多弊端,其中最主要的问题是,一种化学物质的广泛使用会使害虫的后代产生选择性进化优势,从而对该化学物质产生抗性。例如,世界各地的家蝇品系对杀灭它们的每种杀虫剂都产生了抗性。第二个问题是,有的杀虫剂影响非靶目标品种,产生灾难性后果,某些益虫被无意中消灭,导致其次要害虫急剧增长。第三问题是在于环境的耐受性和许多杀虫剂的毒性,不仅造成了严重的环境污染,而且给人类的健康带来巨大的威胁。上述不利因素促使人们急欲寻求控制害虫的替代方案。 在对农业害虫进行的长期防治实践中,人们逐渐认识到必须采取综合治理的措施,才能有效的控制害虫的危害。基因工程技术的发展,为防治农林害虫提供了一种有效、减污的新技术手段,微生物农药也因此在世界范围内受到广泛重视。微生物农药是指非化学合成、具有杀虫防病作用的微生物制剂,如微生物杀虫剂、杀菌剂、农用抗生素,等等。这一类微生物包括杀虫防病的细菌、真菌和病毒。 杀虫微生物是指其代谢产物或微生物本身对宿主昆虫有致死效应或致病的微生物类群,通常也称为昆虫病原微生物。目前已知的杀虫防病微生物主要有芽孢杆菌科、假单胞菌科、肠杆菌科、链球菌科和杆状病毒科等类群。尽管不同杀虫微生物引起昆虫致病的症状不尽相同,但杀虫微生物对害虫的作用方式主要是通过产生特异性的杀虫毒素来破坏害虫的代谢平衡,或者是通过营养体在虫体内的繁殖复制而引起昆虫死亡和发生流行病。 除了这一独特的杀虫机制外,微生物杀虫剂还具有以下一些特点:对人畜安全无毒,不污染环境;杀虫作用具有一定特异性和选择性,不会使天敌和非目标昆虫致死;易于和其他生物学手段结合进行害虫综合治理,维持生态平衡;由于杀虫活性蛋白的多样性,昆虫产生抗性较缓慢或不易产生抗性;可以通过发酵法生产,具有较低的生产成本;可以通过基因工程技术途径筛选或构建优良性能的菌株来满足生产与应用所需等。所以微生物杀虫剂自问世以来发展很快,据报道,全世界已商品化的微生物农药约30种,微生物杀虫剂占其中的90%。 苏云金芽孢杆菌 杀虫微生物中研究最多,用量最大的是苏云金芽孢杆菌。苏云金芽孢杆菌从上世纪20年代起就用于害虫的防治,它的生物学特性决定了它的微生物杀虫剂功能。 苏云金芽孢杆菌菌株在生长代谢过程中会形成芽胞,在芽胞形成过程中产生一个芽胞及一个或多个较大的蛋白质性质的晶体内含体。这种蛋白质性质的晶体被敏感昆虫摄食后会导致昆虫死亡,蛋白质晶体含有不具活性的原毒素分子——δ-内毒素,当昆虫幼虫吞食了这种内毒素,晶体就会被幼虫的碱性肠液溶解,随后被肠道蛋白酶降解,形成有活性的蛋白质毒素,最终导致昆虫死亡。苏云金芽孢杆菌菌株在营养体生长旺盛期,某些菌株还会产生一些其它的外毒素,如α-外毒素、β-外毒素、γ-外毒素,等等。除上述毒素外,近年来从

苏云金杆菌的使用方法

苏云金杆菌的使用方法 尽管苏云金杆菌是杀虫剂中使用比较广泛的杀虫剂之一。但还是有不少农民用户对苏云金杆菌的使用方法不是很了解的。今天小编详细给大家介绍苏云金杆菌的使用方法。 苏云金杆菌的使用方法: 十字花科蔬菜菜青虫、小菜蛾 幼虫3龄前,每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂100~300克,或16000IU/毫克可湿性粉剂100~150克,或32000IU/毫克可湿性粉剂50-80克,或2000IU/微升悬浮剂200~300毫升,或4000IU/微升悬浮剂100~150毫升,或8000IU/微升悬浮剂50~75毫升,或100亿活芽孢/克可湿性粉剂ioo~iso克,兑水30~45丁-克均匀喷雾。 水稻稻纵卷叶螟、稻苞虫 幼虫孵化高峰至3龄前,每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂300~400克,或16000IU/毫克可湿性粉剂150r-_J200克,或32000iu/毫克可湿性粉剂80~100克,或2000IU/微升悬浮剂400~500毫升,或4000IU/微升悬浮剂200~250毫升,或8000IU/微升悬浮剂100-120毫升,兑水30~45千克均匀喷雾。 棉花棉铃虫、造桥虫 幼虫孵化高峰至钻铃前,每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂400~500克,或16000克可湿性粉剂200~250克,或32000IU/毫克可湿性粉剂120克,或2000IU/微升悬浮剂400---500毫升,或4000升悬浮剂200~250毫升,或8000IU/微升悬浮剂100-120毫升,

或100亿活芽孢/克可湿性粉剂250~400克,兑水45-75千克均匀喷雾。 玉米、高梁玉米螟 每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂250-300克,或4000IU/微升悬浮剂150-200毫升,在玉米或高粱大喇叭口时期喷雾或混细沙制成毒土灌心叶。 大豆天蛾、甘薯天蛾 幼虫孵化盛期,每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂200~300克,或16000iu/毫克可湿性粉剂100~150克,或32000iu/毫克可湿性粉剂50~80克,或2000iu/微升悬浮剂200-300毫升,或4000IU/微升悬浮剂100~150毫升,或8000IU/微升悬浮剂50-75毫升,兑水30~45千克均匀喷雾。 烟草烟青虫 幼虫3龄前喷药,每667平方米使用8000IU/毫克可湿性粉剂400-500克,或16000IU/毫克可湿性粉剂200~250克,或32000IU/毫克可湿性粉剂100~120克,或2000IU/微升悬浮剂400~500毫升,或4000IU/微升悬浮剂200--250毫升,或8000IU/微升悬浮剂100~120毫升,兑水30~45千克均匀喷雾。 茶树茶毛虫 幼虫孵化高峰至3龄前喷药,使用8000IU/毫克可湿性粉剂100~150倍液,或16000iu/毫克可湿性粉剂200~300倍液,或32000iu/毫克可湿性粉剂400-500倍液,或2000IU/微升悬浮剂80~100倍液

苏云金芽孢杆菌基因组研究概况

基因组学与应用生物学,2009年,第28卷,第1期,第202-208页Genomics and Applied Biology,2009,Vol.28,No.1,202-208 专题介绍Review 苏云金芽孢杆菌基因组研究概况 谭寿湖1,3张文飞1,3叶大维2* 1广西大学生命科学与技术学院,南宁,530005;2南开大学生命科学院,天津,300071;3海南海德热带农业资源研究所,三亚,572025*通讯作者,yehtawei@https://www.360docs.net/doc/1e1911696.html, 摘 要 迄今为止,全球已有2个Bt 株菌株完成了全基因组测序,1个Bt 菌株正在拼接中,15个Bt 菌株正在 进行测序中。已有22个Bt 质粒完成了全序列测定。Bt 是作为生物农药使用最广泛的微生物菌株,也是最为成功地将其杀虫晶体蛋白基因应用于植物转基因的微生物。在基因组进化、新基因发现、基因表达调控等方面一 直是科学家研究的热点,并取得了相当多的成果。本文概述了苏云金芽孢杆菌基因组测序现状、基因组特征及比较基因学等方面的研究进展。 关键词苏云金芽孢杆菌,Bt 基因组,质粒基因组,比较基因组 Summary of Research Progress in the Genomics of Bacillus thuringiensis Tan Shouhu 1,3 Zhang Wenfei 1,3Ye Dawei 2* 1College of Life and Technology Science,Guangxi University,Nanning,530005;2College of Life Sciences,Nankai University,Tianjin,300071;3Haide Institute of Tropical Agricultural Resources,Sanya,572025*Corresponding author,yehtawei@https://www.360docs.net/doc/1e1911696.html, Abstract Presently,there are two Bt strains that have completed whole genomic sequencing,while one Bt strain is being assembled,and 15Bt strains are in progress.Furthermore,22Bt plasmids have completed sequencing.Bt is the most widely used microbial strains as a biological pesticide and also have the most successful application in genetically modified plant with the use of its insecticidal protein gene.Scientists have been looking at the genomic evolution,new gene discovery,gene expression and regulation with considerable achievements.This article pro-vides an overview on the latest research development of Bt genome sequencing,genome characteristics and com-parative genomics studies.Keywords Bacillus thuringiensis ,Bt Genome,Plasmid genome,Comparative genome 基金项目:本研究由国家863项目(2006AA022189)资助 随着基因组测序技术的快速发展,测序成本的降低,对任何生物的基因组进行测序变得现实和可能(Marguerat et al.,2008)。自1995年首次完成流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae )的全基因组序列以来,已有大量的微生物菌株基因组全序列测定完成。截止到2009年2月3日,全球已经完成基因组测序的微生物菌株有834株,有643株微生物菌株的基因组正处在拼接阶段,此外,有797株微生物菌株的基因组由于各种原因只完成了基因组草图。在已经完成测序的微生物中,有779株为真细菌,55株为古生菌(https://www.360docs.net/doc/1e1911696.html,/genomes/lproks.cgi)。 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis ,简称Bt )在《伯杰氏系统细菌学手册》(第九版)中被列为第2类 第18群中的芽孢杆菌属。与蜡状芽孢杆菌(B.cereus ),炭疽芽孢杆菌(B.anthracis )同属于蜡状芽孢杆菌群细菌(Rasko et al.,2005)。 Bt 广泛存在于土壤、 虫尸、污水、淤泥、尘埃以及叶面等介质中,是一种广泛存在于自然界的革兰氏阳性细菌。苏云金芽孢杆菌也是一种典型的昆虫病 原菌,对鳞翅目(Lepidoptera )、 双翅目(Diptera )、鞘翅目(Coleoplera )、膜翅目(Hymenoptera )、同翅目(Ho - moptera )、 直翅目(Orthoplera )、食毛目(Mallophaga )等多种昆虫,以及线虫、 螨类和原生动物等具有特异的毒性活性,由此成为目前世界上研究最深入,应用最广泛的农业害虫生物防治细菌(Crickmore et al.,1998;喻子牛等,1996)。

苏云金杆菌使用注意事项及作用机理

苏云金杆菌 苏云金杆菌(简称Bt)是目前商业开发最为成功的微生物杀虫剂。当前全世界每年生 产的Bt制剂约有7000~10000吨,年销售额已达1.5亿美元,其中欧洲国家产量在2000 吨左右,占欧洲国家生物农药总量的90%。 Bt制剂的研究与利用始于20世纪30年代,因其生产设备较为简单,使用比较方便, 尤其是它可有效地防治150多种鳞翅目幼虫(其中有些是重要的经济害虫),因此,70年代以后,Bt制剂便成为防治农田和仓库害虫的重要生物杀虫剂之一。美国环保局已将其指定 为用于大田作物、果树、蔬菜和观赏植物的主要生物农药,并将它用于仓库害虫的防治。 晶体或孢子的混合物进入敏感幼虫体内后,这种没有杀虫活性的原毒素被碱性肠液活化,并在中肠蛋白酶作用下进一步转化为有杀虫活性的δ-内毒素。δ-内毒素能破坏幼虫肠壁 的上皮细胞,使幼虫停止取食,从而中毒死亡。幼虫致死的时间取决于昆虫种类和剂量。 使用苏云金杆菌杀虫剂注意事项 温度:细菌生物农药杀虫剂的活性成分是蛋白质晶体和有生命的芽孢。在低温条件下(15℃以下),蛋白晶体不易发生作用。15℃以下或30℃以上使用Bt都基本无效,但在相对高温下更能发挥作用,一般在30℃左右时最好,害虫死亡速度较快。 湿度:细菌生物农药杀虫剂中细菌的芽孢喜欢潮湿环境,因此,在田间湿度越大药效越高。阳光:阳光中的紫外线对芽孢有杀伤作用。所以,喷施细菌生物农药最好再傍晚或阴天进行。雨水:喷施细菌生物农药后短期内,如遇大雨,会降低药效。 本品对蜜蜂有毒,对家蚕高毒;对鱼类等水生生物有毒。 不能与内吸性有机磷杀虫剂或杀菌剂混合使用。 对人、畜无毒,使用安全。选择性强,不伤害天敌。不污染环境,不影响土壤微生物的活动,连续使用,无残毒,不易产生抗性。

苏云金杆菌

苏云金杆菌杀虫剂 苏云金杆菌简称Bt,是包括许多变种的一类产晶体芽孢杆菌。可用于防治直翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目,特别是鳞翅目的多种害虫。目前世界上研究最深入, 应用最广泛的微生物杀虫剂, 对人畜安全, 不伤害控制害虫群体的天敌, 不污染环境, 是生物防治害虫的重要组成部分, 更适合农作物虫害的综合防治。 苏云金杆菌是一种微生物源低毒杀虫剂,以胃毒作用为主。该菌可产生两大类毒素,即内毒素(伴胞晶体)和外毒素,使害虫停止取食,最后害虫因饥饿和死亡而外毒素作用缓慢,在蜕皮和变态时作用明显,这两个时期是RNA合成的高峰期,外毒素能抑制依赖于DNA的RNA 聚合酶。该药作用缓慢,害虫取食后2天左右才能见效,持效期约1天,因此使用时应比常规化学药剂提前2~3天,且在害虫低龄期使用效果较好。由于苏云金杆菌制剂的杀虫活性物质是一种毒性晶体蛋白与活菌的混合物, 其防效易受强光、温度和雨水的影响。最适宜使用苏云金杆菌的温度是24~32℃, 不适宜温度为13~17℃, 雨水主要影响施药的残效期。使用苏云金杆菌杀虫剂一定要在阴天或晴天下午4点以后施药于害虫危害部位。对鱼类、蜜蜂安全,但对家蚕高毒。 苏云金杆菌一般对暴食叶片的鳞翅目害虫防效好, 对结苞、卷叶、钻蛀性害虫防治技术性强。如: 2 代棉铃虫发育世代较整齐, 前代成虫产卵主要在棉株嫩尖上, 且初孵幼虫有食卵壳的习性, 防治2代棉铃虫, 主要喷在棉株顶部嫩叶正反面, 即可达到防治效果。稻纵卷叶螟幼虫两龄前结苞较松, 傍晚转苞危害, 防治它应在其幼虫2 龄前, 傍晚施药。玉米螟幼虫在玉米心叶末期, 有群聚喇叭口内危害习性,只要用苏云金杆菌对着喇叭口喷雾或拌毒土撒施入喇叭口内即可。小菜蛾( 吊丝虫) 幼虫2 龄前, 喜在十字花科作物叶背群聚食叶肉, 这是防治的最适期。豆荚螟, 本着治花不治荚的原则, 在日出前重点喷在蕾、花、嫩荚和落地花上。第2 代茶毛虫的初孵幼虫,有群聚叶背取食叶肉习性, 用苏云金杆菌防治应掌握这一时机。苏云金杆菌杀虫剂混用性能好,苏云金杆菌杀虫剂与化学农药交替使用可克服害虫的抗化学农药性。Bt杀虫剂可与多种其它生物制剂、昆虫生长调节剂、菊酯类沙蚕毒素类、氨基甲酸酯类、有机磷类农药及部分杀菌剂和化学肥料现混现用。

苏云金芽孢杆菌作业

发酵工艺学作业 题目苏云金芽孢杆菌生物农药发酵工艺研究进展 学院 班级学号 姓名

苏云金芽孢杆菌生物农药发酵工艺研究进展 摘要:苏云金芽孢杆菌(Bt)是一种开发和利用较为成功的微生物生物农药,但也存在着生产成本高、发酵条件难控制等缺点。本文主要综述了Bt生物农药的发酵工艺研究进展,主要包括BT发酵中的培养基、温度、PH值、通氧量以及发酵时间等方面。并对Bt生物农药的发展前景作出了展望。 关键词:苏云金芽孢杆菌;生物农药;发酵工艺;展望 Review on fermentation of Bacillus thuringiensis Abstract:Bacillus thuringiensis (Bt) is a microbial pesticides,Which has been successful developed and used.The fermentation technology of Bacillus thuringiensis (Bt) in recent years were summarized, including raw material, temperature, pH value, oxygen, fermentation time.In this aricle,the development prospct of Bt microbial pesticides is also put forward. Key words: Bt;microbial pesticides; fermentation technology;forward 前言 生物农药又可称为绿色农药、生态农药,是20世纪70年代提出的,是指可以用来防治病、虫、草、鼠等有害生物及调节植物生长的生物体或源于生物体的各种生理活性物质。生物农药不仅具有常规农药的高活性,能大规模工业化生产,而且专一性强,一般不伤害虫的天敌和有益生物,对人畜无毒,不污染环境,可在田间大规模应用。 微生物生物农药是生物农药中的主要类型之一[1]。而在微生物生物农药方面又以苏云金芽孢杆菌(Bt)为目前产量最大,应用最为广泛的一类细菌杀虫剂[2,3],占到生物农药的90%左右[4]。Bt的发酵方式可分为液体发酵和固体发酵两种类

苏云金芽孢杆菌的研究——综述

苏云金芽孢杆菌的研究 摘要苏云金芽孢杆菌是目前应用最广泛、研究最深入、生产量最大的微生物杀虫剂。目前已发现多种Bt亚种或血清型对害虫具有杀虫活性,同时也发现了一些新的杀虫晶体蛋白,通过纯化得到高效的杀虫晶体蛋白也是目前研究热点之一。本文简要介绍了Bt的发展历史、晶体蛋白的纯化及在杀虫方面的一些应用。 关键词苏云金芽孢杆菌、历史、伴孢晶体、杀虫 苏云金杆菌(Bacillu .thuringiensis,简称Bt)是一种革兰氏阳性芽孢杆菌,为昆虫病原细菌,其菌体为短杆状、有鞭毛,一般单生或形成短链。在芽孢形成期可产生具有杀虫活性的伴孢晶体,且伴孢晶体(原毒素)对鳞翅目或双翅目等多种昆虫具有毒杀活性[15]。苏云金杆菌是一种应用广泛的绿色环保型微生物杀虫剂,全世界年产值已突破1亿美元[1]。自20世纪60年代实现工业化生产以来,已成为世界上用途最广、商业开发最成功、产量最大的微生物杀虫剂,每年以20%的速度增长[2,3]。苏云金杆菌杀虫剂的稳定性较差、残效期短、杀虫速度慢等问题都待解决,关于苏云金芽孢杆菌的研究都将继续进行。 1Bt的发展历史 1901年,日本学者石渡繁胤(Ishiwata)从虫尸体液中分离出苏云金杆菌猝倒变种(Bacillus.thuringiensis var.sott) 成为苏云金杆菌研究的起点[4]。1911年,Berliner 发现一杆菌,并详细描述了该菌的形态和培养特征,定名为苏云金杆菌(Bacil-lus.thuringiensis),指明苏云金杆菌含伴孢晶体(Paraspora crystl) 。 1938年,苏云金杆菌商品化,用于防治地中海粉螟。20世纪50年代许多国家进行了商业性生产。从发现该菌至今已有整整105年历史,世界上有超过万篇的研究报道,涉及生物学、分类命名、有效成分、杀虫机理、分子生物学、遗传学、产品化和安全性,包括近年来的转基因植物等诸多方面[5]。 1953年,Hannay第一次发现苏云金杆菌的杀虫活性与伴孢晶体有关,并和Fitz-James于1955年证实,伴孢晶体是一种蛋白质。1981年,Schnept和Whiteley 首次将HD21菌株伴孢晶体的基因克隆到大肠杆菌中,并得到表达。用血清学技术进行Bt的鉴定和分类始于20世纪60年代。 我国对苏云金芽孢杆菌的研究和应用起步较晚,但发展迅速,据统计,在在70年代,我国苏云金杆菌制剂年产量大1000吨以上,并且部分产品用于出口。 1992年联合国“世界环境和发展大会”在巴西的召开促进了全球生物防治的发展,推进了苏云金杆菌制剂产业化进程。世界上许多科学家致力于Bt的研究,并作出卓越贡献,时至今日,Bt在农药上所占的比例仍处于劣势,许多问题依然有待解决。 2 苏云金芽胞杆菌的伴孢晶体的纯化方法 2.1等密度梯度离心法 等密度梯度离心法是利用密度的差异将伴孢晶体与杂质分离,获得纯品的方

苏云金杆菌&阿维菌素简介

苏云金杆菌 苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌,英文名称:Bacillus thuringiensis(B.t.)为了方便都将B.T.写成BT或Bt,故Bt即苏云金杆菌的简称。苏云金杆菌杀虫剂是利用苏云金杆菌杀虫菌经发酵培养生产的一种微生物制剂。苏云金杆菌在自然状态下以一种生物细菌的形式生存于土壤及水中。这种杀虫菌在生长发育过程中产生芽胞并形成一种蛋白质毒素,在显微镜下观察,通常是不规则的菱形结晶,叫做伴孢晶体。 当害虫蚕食了伴孢晶体和芽孢之后,在害虫的肠内碱性环境中,伴孢晶体溶解,释放出对鳞翅目幼虫有较强毒杀作用的毒素。这种毒素使幼虫的中肠麻痹,呈现中毒症状,食欲减退,对接触刺激反应失灵,厌食,呕吐,腹泻,行动退缓,身体萎缩或卷曲。一般对作物不再造成危害,经一段发病过程,害虫肠壁破损,毒素进入血液,引起败血症,同时芽孢在消化道内迅速繁殖,加速了害虫的死亡。死亡幼虫身体瘫软,呈黑色。所以,害虫只有把Bt细菌吃到肚子里,再经过一个发病过程,才能死掉,大约48小时方能达到杀灭害虫的目的。 Bt杀虫剂与化学农药相比有许多优点 第一,对人畜无毒,使用安全。Bt细菌的蛋白质毒素在人和家畜、家禽的胃肠中不起作用。

第二,选择性强,不伤害天敌。Bt细菌只特异性地感染一定种类的昆虫,对天敌起到保护作用。 第三,不污染环境,不影响土壤微生物的活动,是一种干净的农药。 第四,连续使用,会形成害虫的疫病流行区,造成害虫病原苗的广泛传播,达到自然控制虫口密度的目的。 第五,没有残毒,生产的产品可安全食用,同时,也不改变蔬菜和果实的色泽和风味。 第六,不易产生抗药性,这只是相对而言。最近已经发现了抗药性的报道,但不象化学农药产生的那么快。 毒性: 鼠经口按2*10^22活芽孢/Kg体重给药无死亡,也无中毒症状。18名志愿者每人每天吞服30亿芽孢,连服5天,1个月后检查,一切化验正常,无毒性反应。亚急性和毒性试验未见异常,对猪、禽、鸟、鱼、蜂的急性和慢性饲喂养试验未见不正常现象,对家蚕敏感。无致癌、致畸、致突变作用。注意事项: [1]本品对家蚕有毒,蚕室和桑园附近禁用; [2]不能与内吸性有机磷杀虫剂或杀菌剂混合使用(如乐果、甲基内吸磷、稻丰散、伏杀硫磷、杀虫畏)及碱性农药等物质混合使用。

苏云金杆菌说明书

苏云金杆菌说明书 篇一:常用农药安全技术说明书 常用农药安全技术说明书 目录 百菌清......................................................................................................... 1 甲基托布津................................................................................................... 2 甲霜灵......................................................................................................... 3 福美双......................................................................................................... 4 多菌灵......................................................................................................... 5 井冈霉素...................................................................................................... 6 辛硫磷.........................................................................................................7 苏云金杆菌 (8) 1. 百菌清

苏云金杆菌对环境生物的安全性评价

Open Journal of Nature Science 自然科学, 2018, 6(1), 63-70 Published Online January 2018 in Hans. https://www.360docs.net/doc/1e1911696.html,/journal/ojns https://https://www.360docs.net/doc/1e1911696.html,/10.12677/ojns.2018.61010 Safety Evaluation of Bacillus thuringiensis to Environmental Organisms Zeqing Wang1,2, Fanmin Huang1,3, Jianhua Chen1,3 1Guangdong Engineering Research Center of Microbe Pesticides, Yangjiang Guangdong 2Guangzhou Harit Bioscience CO. LTD, Guangzhou Guangdong 3Guangdong New Scene Biological Engineering CO. Ltd., Yangjiang Guangdong Received: Jan. 1st, 2018; accepted: Jan. 12th, 2018; published: Jan. 19th, 2018 Abstract This study evaluates the safety of Bacillus thuringiensis GDX026 to environmental organisms based on degrees of toxicity and division standards. The results showed that the toxic degree of Bacillus thuringiensis8000 IU/μL SC to birds, bees, zebrafish, Daphnia, Trichogramma and silk-worm was Ib. The toxic degrees of Bacillus thuringiensis·Indoxacarb 5% SC to bees, silkworm and Daphnia magna was I b, to zebrafish and Trichogramma was II and low toxicity to birds. The toxic degrees of Emamectinbenzoate·Bacillus thuringiensis2.4% SC of silkworm and Daphnia magna was Ia, Ib to bees and zebrafish, II to Trichogramma and no risk to birds. Mixture of Bacillus thu-ringiesis GDX026 and chemical pesticides showed higher risk levels to environmental organisms compared with Bacillus thuringiesis GDX026. Keywords Bacillus thuringiensis, Environmental Organisms, Safety Evaluation 苏云金杆菌对环境生物的安全性 评价 王泽清1,2,黄番敏1,3,陈建华1,3 1广东省微生物农药工程技术研究中心,广东阳江 2广州禾立田生物科技有限公司,广东广州 3广东新景象生物工程有限公司,广东阳江 收稿日期:2018年1月1日;录用日期:2018年1月12日;发布日期:2018年1月19日

苏云金杆菌(2014551355)

品名:苏云金杆菌(无添加任何化学杀虫成分) 有效含量:16000iu/mg 剂型:可湿性粉剂 净含量:100克 一、作用方式及特点 苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌是一种革兰氏阳性细菌,英文名称:Bacillus thuringiensis (B.t.)即苏云金杆菌的简称。苏云金杆菌(Bt菌)杀虫剂是利用苏云金杆菌杀虫菌经发酵培养生产的一种微生物制剂。Bt的杀虫活性物质,主要有二种,即晶体和孢子.晶体又叫原毒素,它是一种蛋白质。当害虫蚕食了伴孢晶体和芽孢之后,在害虫的肠内碱性环境中,伴孢晶体溶解,释放出对鳞翅目幼虫有较强毒杀作用的毒素—毒性肽。这种毒素使幼虫的中肠麻痹,肠道内碱性内含物漏入血腔,孢子和菌体通过被破坏的肠壁进入体腔。使其呈现中毒症状,食欲减退,对接触刺激反应失灵,厌食,呕吐,腹泻,行动退缓,身体萎缩或卷曲。一般对作物不再造成危害,经一段发病过程,害虫肠壁破损,毒素进入血液,引起败血症,同时芽孢在消化道内迅速繁殖,加速了害虫的死亡。死亡幼虫身体瘫软,呈黑色。所以,害虫只有把Bt细菌吃到肚子里,再经过一个发病过程,才能死掉,大约48小时方能达到杀灭害虫的目的,不象化学农药作用那么快,但染病后的害虫,上吐下泻,不吃不动,不再危害作物。 毒性:对人、畜低毒,大鼠口服急性LD50 852.7-856.7毫克/公斤,对家禽、鸟类、鱼、畜等低毒,对害虫天敌无伤害。 中毒症状: 吞服了制剂可能引起胃肠炎。 中毒急救:溅到皮肤或眼内立即用清水冲洗15分钟后就医。吸入,应将病人移到通风处,就医。误服,立即催吐,并送医院对症治疗。 二、杀虫原理 苏云金杆菌长得像根棍棒,矮矮胖胖,身高不到5‰毫米。当它长到一定阶段,身体一端会形成一个卵圆形的芽孢,用来繁殖后代;另一端便产生一个菱形或近似正方形的结晶体,因为它与芽孢相伴而生,我们叫它伴孢晶体,有很强的毒性。昆虫取食后,晶体蛋白在昆虫碱性肠道内溶解,经过中肠蛋白酶的酶解作用,将前毒素降解为活性蛋白。活性蛋白插入昆虫中肠细胞膜,形成跨膜离子通道或孔,破坏钾离子平衡,最终使昆虫中毒,麻痹而死。三、防治对象 Bt对鳞翅目、双翅目、鞘翅目等100多种害虫和动植物线虫有很好的毒杀作用。国内外应用统计,Bt对64种森林害虫,34种果树害虫,12种茶树害虫都显示高毒力。最常用具特效的防治对象有:菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、玉米螟、稻苞虫、稻纵卷叶螟、二化螟、三化螟、棉铃虫、棉小造桥虫、茶毛虫、茶尺蠖、松毛虫、天幕毛虫、毒蛾、刺蛾等鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目等害虫有很好的防治效果,且有杀卵作用。此外对大豆拌种防治地下线虫也有特效。 四、使用方法 1.一包100克可兑水100斤 2.可放农用喷雾器里(一喷雾30斤水),也可放园艺喷雾(800ml约可配18桶/1500ml 可配10桶。记得喷撒之前先过滤沉淀物哦,以免塞住喷壶嘴) 3.杀虫剂苏云金杆菌制剂可用于喷雾、喷粉、灌心、制成颗粒剂或毒饵等,也可进行 大面积飞机喷洒,也可与低剂量的化学杀虫剂混用以提高防治效果。草坪害虫的防 治用100亿孢子/g的菌粉750g/hm2对水稀释2000倍喷洒,或用乳剂1500~ 3000g/hm2与52.5~75kg的细沙充分拌匀,制成颗粒剂撒人草坪草根部,防治危 害根部的害虫。也可将苏云金杆菌致死的发黑变烂的虫体收集起来,用纱布袋包好,在水中揉搓,每50g虫尸洗液加水50~l00kg 喷雾(病毒重复利用!)。(2)防治蔬

苏云金杆菌转基因技术及其生态影响

苏云金杆菌转基因技术及其生态影响 赵希 (环境学院2013级本科资源与环境经济学专业) 摘要:作为广泛应用的抗虫类转基因植物的外源基因来源之一,苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, 以下简称Bt)自从1901年被成功从昆虫尸体中分离以来的这100多年内,科学家们已经详尽的研究过其有效成分、生物机理、遗传特性、以及商品化等方面。以Bt 为有效成分的杀虫剂,是目前世界上应用最为广泛的,产量最大的生物杀虫剂。因为Bt生产的杀虫毒蛋白有着高度的特异性与专一性,所以它一直被认为是一种对人非常安全的生物杀虫剂。因而在转基因技术发明以来,Bt一直是应用第二广泛的转基因外源基因来源,仅次于耐除草剂基因。本文将从对Bt的研究历史出发,介绍Bt毒蛋白的作用机理以及相关的转基因技术原理,并利用这些原理探讨转Bt基因农作物的生物作用效应,重点分析转Bt 基因农作物的生态影响,最后针对其负面影响提出一些简单的解决方案。本论文以作者的高中和大学本科生物学以及生态学学习为理论基础,参考了国内外大量针对转Bt基因的研究以及转基因技术的综合研究相关文献,综合了对Bt和转基因技术的个人见解,对转Bt基因技术的以及其生态影响进行了分析与讨论。 关键词:苏云金杆菌,Bt,杀虫蛋白,转基因,生物安全性,基因漂移,土壤微生物,生物多样性,抗性效应 一.Bt的研究历史及其杀虫机理 1.Bt的研究历史 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种革兰氏阳性芽孢杆菌,为昆虫病原细菌,其菌体为短杆状、有鞭毛,一般单生或形成短链。在芽孢形成期可产生具有杀虫活性的伴孢晶体且伴孢晶体(原毒素)对鳞翅目或双翅目等多种昆虫具有毒杀活性[1]。1901年,日本学者石渡繁胤从虫尸体液中分离出苏云金杆菌猝倒变种,成为苏云金杆菌研究的起点。1911年,Berliner发现一种杆菌,并详细描述了该菌的形态和培养特征,定名为苏云金杆菌,指明苏云金杆菌含伴孢晶体。1938年,苏云金杆菌实现商品化,用于防治地中海粉螟。20世纪50年代许多国家进行了商业性生产。1981年,Schnept和Whitely首次将HD21菌株伴孢晶体的基因克隆到大肠杆菌中,并得到表达。这被视为转基因技术的开始。我国对苏云金芽孢杆菌的研究和应用起步较晚,但发展迅速,据统计,在在70年代,我国苏云金杆菌制剂年产量大1000吨以上,并且部分产品用于出口[2]。 2.Bt的作用机理 苏云金杆菌在芽孢形成时期,会产生具有高度特异性杀虫活性晶体蛋白。这种晶体蛋白常常以原毒素形式存在。昆虫进食含有原毒素的食物后,在昆虫消化道内,在中肠消化酶的作用下,原毒素会被降解成多肽。此时原毒素的毒性会被激活,变成活化毒素。活化毒素会与昆虫肠道上皮细胞上的特异性受体结合,使肠道上皮细胞细胞膜破裂,进而导致昆虫进食困难从而达到杀灭昆虫的目的。 二.转Bt基因的原理及其相关应用 1.Bt基因的转基因原理 目前科学家普遍接受将Bt毒蛋白的基因,按照其氨基酸序列的同源性、抗原性和杀虫效力分为CryI,CryII和CryIII三种。转基因的第一步是分离目的基因。通常利用的方法是化学合成和PCR扩增技术。转Bt基因通常利用PCR扩增,因为目的基因已经存在且比较容易获取。扩增之前先使用限制性核酸内切酶将目的基因序列从Bt的DNA序列上切下,获得

苏云金杆菌配上它能杀130多种害虫持效期期可达20天

苏云金杆菌配上它能杀130多种害虫持效期期可达20天苏云金杆菌是大家非常熟悉的一种生物杀虫剂,由于其杀虫范围广,价格便宜,成为目前销量最大的生物杀虫剂,但是苏云金杆菌也有一个致命的缺点,就是速效性差。今天给大家介绍两个非常优秀的配方,不但杀虫范围广,持效期长,价格还便宜。 杀虫机理 苏云金杆菌是一种杆状细菌,由于该菌在繁殖过程中可产生两大类毒素,内毒素(伴胞晶体)和外毒素,害虫取食后,细菌进入昆虫消化道后,伴孢晶体被昆虫碱性肠液破坏成较小单位的δ-内毒素,使害虫中肠停止蠕动、

瘫痪,中肠上皮细胞解离、停食,芽孢则在肠中萌发,经被破坏的肠壁进入血腔,大量繁殖,使害虫得败血症而死;而外毒素在害虫蜕皮和变态时作用明显,外毒素能抑制依赖于DNA的RNA的聚合酶的活性,使害虫无法蜕皮,最终导致害虫死亡。 主要特点 (1)速效性差:苏云金杆菌主要是通过胃毒作用将害虫杀死,速效性较差,害虫取食后2天左右才能见效,持效期约1天,因此使用时应比常规化学药剂提前2~3天,且在害虫低龄期使用效果较好。

(2)杀虫范围广:苏云金杆菌对中肠道内呈碱性的害虫均有很高的杀虫活性,对鳞翅目、膜翅目、直翅目、鞘翅目等130多种害虫都具有杀虫活性。 (3)安全性好:苏云金杆菌是从土壤中分离得到的一种微生物细菌,因此对作物安全,在作物的各个时期均可使用。 (4)适用范围广:苏云金杆菌安全性好,价格便宜,可广泛用于防治蔬菜、水稻、玉米、棉、果树、茶树和林区等多种作物上的害虫。 常用优秀配方

(1)阿维·苏云菌:将苏云金杆菌与阿维菌素复配使用,由于阿维菌素是由链霉菌中的阿维链霉菌发酵产生的一种十六元大环内酯化合物,具有很强的渗透性,以触杀和胃毒作用为主,可快速击倒害虫,弥补了苏云金杆菌的缺点,一般施药后,害虫一旦接触阿维菌素,快速出现麻痹症状,不活动、不取食,2~4天后死亡。可有效防治甜菜夜蛾、棉铃虫、二化螟、三化螟、卷叶螟、豆荚螟、蚜虫、飞虱、盲蝽蟓、潜叶蝇等害虫。可在害虫低龄幼虫期,用1.8%阿维菌素乳油15~20毫升+8000IU/微升/克苏云金杆菌微乳剂100~150克,兑水30公斤均匀喷雾,可将害虫彻底杀灭。 (2)甲维·苏云菌:是将苏云金杆菌与甲维盐复配使用,甲维盐是从发酵产品阿维菌素B1开始合成的一种新型高效半合成抗生素杀虫剂,其活性比阿维菌素高10~100倍,主要通过增强昆虫神经质谷氨酸盐和γ-氨基丁酸的作用,使大量氯离子进入神经细胞,使细胞功能丧失,扰乱神经传导。害虫取食后,很快停止进食,发生不可逆转的麻痹致死。一般在3-4天内达到最高致死率,在10天以上又出现第二个杀虫致死率高峰,因此持效期大大延长,一般持效期可达15~20天。可有效防治斜纹夜蛾、菜青虫、小菜蛾、二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟、棉铃虫、烟青虫、玉米螟等害虫。于卵孵化盛期至幼虫发生高峰期,用5%甲维盐水分散粒剂5克+100亿孢子/克苏云金杆菌可湿性粉剂50~75克/亩,兑水30公斤均匀喷雾,重点喷施作物的顶尖和叶片正反两面。

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