SYBR gold 染色剂 no.11494 SAFETY DATA SHEET

SYBR gold 染色剂 no.11494 SAFETY DATA SHEET
SYBR gold 染色剂 no.11494 SAFETY DATA SHEET

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SAFETY DATA SHEET

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Identification of the substance/preparation

24 hour Emergency Response (Transport):866-536-0631301-431-8585

Outside of the U.S. +1-301-431-8585

Product code For research use only

Revision Date S11494

Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

Company/Undertaking Identification Page 1 / 6

1. Identification of the substance/mixture and of the company/undertaking

29-Sep-2011Product name

SYBR? Gold nucleic acid gel stain

Product code

GIBCO PRODUCTS

INVITROGEN CORPORATION 3175 STALEY ROAD P.O. BOX 68GRAND ISLAND, NY 14072++1 716 774 6700

INVITROGEN CORPORATION NEW ZEALAND LIMITED

18 - 24 BOTHA ROAD PENROSE

AUCKLAND 1006NEW ZEAL

S11494

Life Technologies

5791 VAN ALLEN WAY PO BOX 6482

CARLSBAD, CA 92008+1 760 603 7200

Aggravated Medical Conditions No known effects under normal use conditions

2. Hazards identification

HMIS

Health Hazard Principle Routes of Exposure/Potential Health effects

Eyes Irritating to eyes.

Skin

Components of the product may be absorbed into the body through the skin.Inhalation May cause irritation of respiratory tract.GHS - Classification Signal Word not hazardous

Ingestion May be harmful if swallowed.

Specific effects

carcinogenic effects not applicable

mutagenic effects

Substances which cause concern for man owing to possible mutagenic effects but for which the available information is not adequate for making a satisfactory assessment._____________________________________________________________________________________________

Reproductive toxicity not applicable Sensitization not applicable

Revision Date Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

Physical Hazards

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29-Sep-2011Health 1Product code

Reactivity

1

Flammability S11494

2

Soak up with inert absorbent material

Ingestion Never give anything by mouth to an unconscious person. Consult a physician.Engineering measures Ensure adequate ventilation, especially in confined areas Environmental precautions

Suitable extinguishing media

Dry chemical

Personal protective equipment

Skin contact Inhalation

Prevent further leakage or spillage if safe to do so Respiratory protection

In case of insufficient ventilation wear suitable respiratory equipment Special protective equipment for firefighters

Wear self-contained breathing apparatus and protective suit

Move to fresh air. Consult a physician.Wash off immediately with plenty of water. If symptoms persist, call a physician.See Section 12 for additional information.

Notes to physician

7. Handling and storage

Treat symptomatically

6. Accidental release measures

Handling Avoid contact with skin and eyes.Eye contact Storage

Keep in properly labelled containers

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Rinse thoroughly with plenty of water, also under the eyelids. If symptoms persist,call a physician.

Personal precautions 8. Exposure controls/personal protection

Use personal protective equipment 5. Fire-fighting measures

4. First aid measures

Methods for cleaning up Exposure limits Revision Date We recommend handling all chemicals with caution.

Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

Weight %Page 3 / 6

3. Composition/information on ingredients

SYBR? Gold nucleic acid gel stain

29-Sep-2011NONE

-Product code

0.1-1.0

Chemical Name

S11494

CAS-No EINECS-No

Prevent product from entering drains

11. Toxicological information

Odor

No information available Skin and body protection Acute toxicity

Lightweight protective clothing

Hand protection

Principle Routes of Exposure/Potential Health effects

Eyes Irritating to eyes.

Skin

Components of the product may be absorbed into the body through the skin.Inhalation May cause irritation of respiratory tract.9. Physical and chemical properties

Ingestion

May be harmful if swallowed.

Hygiene measures Oxidizing properties carcinogenic effects No information available

No information available Handle in accordance with good industrial hygiene and safety practice mutagenic effects

Substances which cause concern for man owing to possible mutagenic effects but for which the available information is not adequate for making a satisfactory assessment.

Reproductive toxicity

No information available Water solubility

soluble

Sensitization

No information available Eye protection

Safety glasses with side-shields General Information 10. Stability and reactivity

Impervious butyl rubber gloves. Nitrile gloves are not recommended. Some brands of Nitrile gloves have breakthrough times of five minutes. Nitrile gloves are not recomended. Some brands of Nitrile gloves have breakthrough times of five minutes.

Form

Stability

Stable under normal conditions.liquid

Materials to avoid

No information available _____________________________________________________________________________________________

Environmental exposure controls

Hazardous decomposition products

No information available

Appearance No information available polymerization

Hazardous polymerisation does not occur.

Autoignition temperature °F no data available Revision Date °C 94

Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

°C no data available Page 4 / 6

Melting point/range Boiling Point/Range °F no data available

29-Sep-2011°F no data available Product code

°C 18.4°F no data available °C 189S11494

Flash point

Subsidiary Class No information available Packing group No information available 13. Disposal considerations

UN-No

No information available

Biodegradation Inherently biodegradable._____________________________________________________________________________________________

Dispose of in accordance with local regulations

Bioaccumulation

Does not bioaccumulate.

14. Transport information

Ecotoxicity effects Revision Date No information available Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

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IATA

12. Ecological information

29-Sep-2011Proper shipping name Not classified as dangerous in the meaning of transport regulations Product code

Hazard class No information available S11494

Mobility

No information available

The above information was acquired by diligent search and/or investigation and the recommendations are based on prudent application of professional judgment. The information shall not be taken as being all inclusive and is to be used only as a guide. All materials and mixtures may present unknown hazards and should be used with caution.Since the Company cannot control the actual methods, volumes, or conditions of use, the Company shall not be held liable for any damages or losses resulting from the handling or from contact with the product as described herein.THE INFORMATION IN THIS MSDS DOES NOT CONSTITUTE A WARRANTY, EXPRESSED OR IMPLIED,INCLUDING ANY IMPLIED WARRANTY OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR ANY PARTICULAR PURPOSE.

16. Other information

End of Safety Data Sheet

For research use only

Reason for Revision

not applicable, (M)SDS sections updated

SARA 313

This product is not regulated by SARA.

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WHMIS hazard class: D2B Toxic materials

B3 Combustible liquid

U.S. State Regulations

This product has been classified according to the hazard criteria of the CPR and the MSDS contains all of the information required by the CPR

U.S. Federal Regulations

Revision Date Product name SYBR? Gold nucleic acid gel stain

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29-Sep-201115. Regulatory information

Clean Air Act, Section 112 Hazardous Air Pollutants (HAPs) (see 40 CFR 61) This product does not contains HAPs.

Product code

California Proposition 65

This product does not contain chemicals listed under Proposition 65S11494

生成m序列与gold序列

一、生成m序列 function [mseq] = m_sequence(fbconnection); n = length(fbconnection); N = 2^n-1; %m序列的长度 register = [zeros(1,n - 1) 1]; %定义移位寄存器的初始状态 mseq(1)= register(n); %m序列的第一个输出码元 for i = 2:N newregister(1)= mod(sum(fbconnection.*register),2); %寄存器与反馈的模2和 for j = 2:n, newregister(j)= register(j-1); end; register = newregister; %移位后的寄存器 mseq(i) = register(n); %新的寄存器输出 end clear all; close all; clc; fbconnection=[0 0 1 0 1]; %输入本原多项式系数,从C1开始 m_sequence=m_sequence(fbconnection); stem(m_sequence); %对m序列绘图 axis([0 35 -0.2 1.2]); grid on;

二、生成gold序列 function goldseq = g_sequence(connection1,connection2); msequence1 = m_sequence(connection1); %生成第一个m序列 msequence2 = m_sequence(connection2); %生成第二个m序列 N=2^length(connection1)-1; %gold序列长度 for i = 1:N; s = mod(msequence1+msequence2,2); %两个m序列模二加产生gold序列 goldseq = s; end clear all; close all; clc; connection1=[0 0 0 0 1 1]; connection2=[1 0 0 1 1 1]; goldseq = g_sequence(connection1,connection2);

扩频编码M序列和gold序列

M序列 由n级移位寄存器所能产生的周期最长的序列。这种序列必须由非线性移位寄存器产生,并且周期为2n(n 为移位寄存器的级数)。例如,考察图中a的非线性反馈移位寄存器,其状态转移关系如表:

状态(a k-3,a k-2,a k-1)的接续状态是(a k-2,a k-1,a k),其中a k=a k-3嘰a k-1嘰1嘰a k-2a k-1是一种非线性逻辑。从任一状态出发,例如从(000)出发,其接续状态恰好构成一个完全循环(图b),由此产生一个周期为23=8的3级序列。M序列最早是用抽象的数学方法构造的。它出现于组合数学的一些数学游戏中,例如L.欧拉关于哥尼斯堡的七桥问题等。后来发现这种序列具有某些良好的伪随机特性。例如,M序列在一个周期中,0与1的个数各占一半。同时,同样长度的0游程与1游程也各占一半。所有这些性质在数据通信、自动控制、光学技术和密码学诸领域中均有重要应用。 隐蔽通信内容的通信方式。为了使非法的截收者不能理解通信内容的含义,信息在传输前必须先进行各种形式的变化,成为加密信息,在收信端进行相应的逆变化以恢复原信息。电报通信、电话通信、图像通信和数据通信,都有相应的保密技术问题。另一方面,为了从保密通信中获得军事、政治、经济、技术等机密信息,破译技术也在发展。保密技术和破译技术是在相互对立中发展起来的。 1881年世界上出现了第一个电话保密专利。电话保密开始是采用模拟保密或置乱的方法,即把话音的频谱或时间分段打乱。置乱后的信号仍保持连续变化的性质。在第二次世界大战期间,频域和时域的置乱器在技术上已基本成熟。70年代以来,由于采用集成电路,电话保密通信得到进一步完善。但置乱器仍是有线载波和短波单边带电话保密通信的主要手段。模拟保密还可以采用加噪声掩盖、人工混响或逆向混响等方法,但因恢复后话音的质量大幅度下降或保密效果差,这些方法没有得到推广应用。数字保密是由文字密码发展起来的。数字信号(包括由模拟信号转换成的数字信号),由相同速率的密码序列加密,成为数字保密信号;保密信号传输到收信端后由同一密码序列去密,恢复原数字信号。随着集成电路的发展,数字保密通信已成为保密通信的主要发展方向。话音、图像等模拟信号都可以用数字保密方式。一般来说,数字破译要比模拟破译困难得多。数字保密的主要限制是传输数字信号所需带宽要比传输模拟信号的带宽大好多倍。 模拟保密通信话音信号置乱后的带宽基本保持不变,这是模拟保密通信的一个特点。但是,置乱后恢复的话音质量有所下降。置乱的过程越复杂,则话音质量下降的程度越大。 倒频用倒频器(图1)把话音频谱颠倒过来,使高频变为低频,低频变为高频,这是最简单的一种频域置乱方法。频域置乱器的基本电路是平衡调制器和带通滤波器。平衡调制器可以搬移和倒置频谱,而滤波器可以滤取所需要的频谱成分。输入的话音信号经过平衡调制器后输出上、下两个边带。适当地选择

核酸凝胶染色剂-GelRed

环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed&GelGreen-真正的EB替代者 水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成环境污染。 G elRedTM和GelGreenTM是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的,极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。 目前,大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。例如,EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质,且染色后背景荧光信号较高(图1)。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I,且毒性依然较高(图3)。GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色,都表现出了极高的灵敏度。为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的GelRed,在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后(该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液),在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。但与SYBR Gold 不同,GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的GelGreen可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。GelGreen 无论是在预制凝 胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当,但不存在后者的稳定性问题。实际上,GelRed 和 GelGreen ,特别是GelRed非常稳定,可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热,便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备,长期保存。同样重要的是,GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green 提高了安全性。独立的测试服务公司(Litron Laboratories, Inc.)进行的标准艾姆斯氏测试结果表明,在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下,GelGreen没有诱变性,而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。见图3。相反,SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色,这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用(Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)),因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。

m序列和Gold序列特性研究

扩频通信实验报告 - I- Harbin Institute of Technology 扩频通信实验报告 课程名称: 扩频通信 实验题目: Gold 码特性研究 院 系: 电信学院 班 级: 通信一班 姓 名: 学 号: 指导教师: 迟永钢 时 间: 2012年5月8日 哈尔滨工业大学

第1章实验要求 1.以r=5 1 45E为基础,抽取出其他的m序列,请详细说明抽取过程; 2.画出r=5的全部m序列移位寄存器结构,并明确哪些序列彼此是互反多项式; 3.在生成的m序列集中,寻找出m序列优选对,请确定优选对的数量,并画 出它们的自相关和互相关函数图形; 4.依据所选取的m序列优选对生成所有Gold序列族,确定产生Gold序列族的 数量,标出每个Gold序列族中的所有序列,并实例验证族内序列彼此的自相关和互相关特性; 5.在生成的每个Gold序列族内,明确标出平衡序列和非平衡序列,并验证其 分布关系。 6.完整的作业提交包括:纸质打印版和电子版两部分,要求两部分内容统一, 且在作业后面附上源程序,并加必要注释。 7.要求统一采用Matlab软件中的M文件实现。

第2章 实验原理 2.1 m 序列 二元m 序列是一种伪随机序列,有优良的自相关函数,是狭义伪随机序列。m 序列易于产生于复制,在扩频技术中得到了广泛应用。 2.1.1 m 序列的定义 r 级非退化的移位寄存器的组成如图1所示,移位时钟源的频率为c R 。r 级线性移位寄存器的反馈逻辑可用二元域GF(2)上的r 次多项式表示 2012() {0,1}r r i f x c c x c x c x c =++++∈ (1) 图 2-1 r 级线性移位寄存器 式(1)称为线性移位寄存器的特征多项式,其给出的表示反馈网络的而逻辑关系式是现行的。因此成为线性移位寄存器。否则称为,非线性移位寄存器。 对于动态线性移位寄存器,其反馈逻辑也可以用线性移位寄存器的递归关系式来表示 112233 {0,1}i i i i r i r i a c a c a c a c a c ----=++++∈ (2) 特征多项式(1)与递归多项式(2)是r 级线性移位寄存器反馈逻辑的两种不同种表示法,因其应用的场合不同而采用不同的表示方法。以式(1)为特征多项式的r 级线性反馈移位寄存器所产生的序列,其周期21r N ≤-。假设以GF(2)域上r 次多项式(1)为特征多项式的r 级线性移位寄存器所产生的非零序列{}i a 的周期为21r N =-,称序列为{}i a 是最大周期的r 级线性移位寄存器序列,简称m 序列。

分子生物学常用荧光核酸染料

由于只需简单温和的物理方法(光照)激发和检测,荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物,DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。除了染胶,荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂,它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内,还可分为两大类:通透性核酸染料和非通透性核酸染料。生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。 分子生物学常用荧光核酸染料 荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色,以及定量PCR。 EB EB(溴化乙锭)本身在紫外下不发光,能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。因其廉价且灵敏度高,一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。EB的使用非常简单方便,电泳结束后染色可获得最佳效果,也可以在制胶时加入进行前染。前染有利于节约时间,但是易出现条带变形拖尾等问题。EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂,且具有潜在的诱变作用。虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉,行为可怕”的家伙,一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶,但大多数人对EB还是“敬而远之”的,没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。偏偏对于搞分子生物学的人来说,跑胶就像吃饭一样平常,于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道,盼望EB的替代品早点出现在实验室。生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。 SYBR系列染料 说到EB的替代物,首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。自1993年SYBR核酸染料推出以来,就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎,成为明星产品之一。这一系列包括4种染料:SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。

Gold序列与m序列仿真应用

1. 绪论 m 序列具有优良的双值自相关特性,但互相关特性不是很好。作为CDMA 通信地址码时,由于互相关特性不理想,使得系统内多址干扰影响增大,且可用地址码数量较少。在某些应用场合,利用狭义伪随机序列复合而成复合序列更为有利。这是因为通过适当方法构造的复合序列具有某些特殊性质。Gold 序列就是一种复合序列,而且具有良好的自相关与互相关特性,地址码数量远大于m 序列,且易于实现、结构简单,在工程上得到广泛应用。 表1是m 序列和Gold 序列的主要性能比较,表中max ?为m 序列的自相关峰值,(0)s ?为自相关主峰;()t n 为Gold 序列的互相关峰值,(0)g ?为其自相关主峰。从表1中可以看出:当级数n 一定时,Gold 序列中可用序列个数明显多于m 序列数,且Gold 序列的互相关峰值和主瓣与旁瓣之比都比m 序列小得多,这一特性在实现码分多址时非常有用。 表1. m 序列和Gold 序列性能比较 在引入Gold 序列概念之前先介绍一下m 序列优选对。m 序列优选对,是指在m 序列集中,其互相关函数绝对值的最大值(称为峰值互相关函数)max ()R τ最接近或达到互相关值下限(最小值)的一对m 序列。 设{a i }是对应于r 次本原多项式F 1(x )所产生的m 序列, {b i } 是另一r 次本原多项式F 2(x )产生的m 序列,峰值互相关函数满足 12 max 2 221()214r ab r r R τr ++?+?≤??+? 为奇数 为偶数但不是的整倍数 (1) 则m 序列{a i }与{b i }构成m 序列优选对。 例如:6r =的本原多项式61()1F x x x =++与6522()1F x x x x x =++++所产生的m 序列{}i a 与{}i b ,其峰值互相关函数2622 2 max ()172 12117r ab R τ++=≤+=+=。满足式(1) ,故{}i a 与{}i b 构成m 序列优选对。而本原多项式65323()1F x x x x x =++++所产生的m 序列 {}i c ,与m 序列{}i a 的峰值互相关函数max ()2317ac R τ=>,不满足上式,故{}i a 与{}i c 不 是m 序列优选对。 2. Gold 序列 1967年,R·Gold 指出:“给定移位寄存器级数r 时,总可找到一对互相关函数值是最小的码序列,采用移位相加方法构成新码组,其互相关旁瓣都很小,且自相关函数和互相关函数均有界”。这样生成的序列称为Gold 码(Gold 序列)。 Gold 序列是m 序列的复合序列,由两个码长相等、码时钟速率相同的m 序列优选对的模2

DNAGREEN核酸染料使用说明

DNAGREEN核酸染料使用说明 货号:G7140 规格:0.5ml(10000×) 保存:常温运输,4℃保存,有效期一年。 注意:DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂,使用时请按照说明书操作。 产品简介: 目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花氰类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差;此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率下降。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料,其特点如下: 1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。 2.灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。 3.稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。 4.无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。 5.使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。 6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。 7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nm UV。 8.可用于RNA染色(也呈绿色)。 9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避

免了UV对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。 使用方法: 电泳中染色: 本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。 1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10uL,否则背景增强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在第一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。 2.将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS会跟染料结合,极大地降低灵敏度。 3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。 4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。 5.用配置了520-550nm滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。 6.后续Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。 电泳后染色: 本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的 染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。

Gold序列产生及其特性实验

湖南科技大学 移动通信实验报告 姓名:吴文建 学号:1208030104 专业班级:应用电子技术教育一班 实验名称:GOLD序列产生及其特性实验 实验目的:1)掌握Gold序列的特性、产生方法及应用。 2) 掌握Gold序列与m序列的区别。 实验仪器:1、pc机一台2、 实验原理: m序列虽然性能优良,但同样长度的m序列个数不多,且m序列之间的互相关函数并不理想(为多值函数)。 1.m序列优选对 m序列优选对是指在m序列集中,其互相关函数最大值的绝对值满足下式的两条n介m序列: 2.Gold序列的产生方法 Gold序列是m序列的组合序列,由同步时钟控制的两个码元不同的m序列优选对逐位模2加得到。这两个序列发生器的周期相同,速率相同,因而两者保持一定的相位关系,这样产生的组合序列与这两个自序列的周期也相同。当改变两个序列的相对位移,会得到一个新的Gold序列。Gold序列具有以下性质: (1)两个m序列优选对经不同移位相加产生的新序列都是Gold序列,两个n级移位寄存器可以产生2n+1个Gold序列,周期均为2n?1。 (2)Gold序列的周期性自相关函数是一个三值函数,与m序列相比,具有良好的互相关特性。 Gold序列的产生有两种形式:并联形式和串联形式 实验步骤: 1.预习Gold序列的产生原理及性质及独立设计Glod序列产生方法。 2.画出Gold序列仿真流程图。

3.编写MATLAB程序并上机调试。 4.比较m序列与Glod序列的异同。 5.撰写实验报告。 实验数据、结果表达及误差分析: 实验仿真图形如图所示 实验编写程序(此程序在实验五编写程序之上方可运行):function c=gold() n=7; a=[1 1 1 1 1 1 1 1]; co=[]; for v=1:2^n-1 co=[co,a(1)]; a(8)=mod(a(5)+a(1),2); a(1)=a(2); a(2)=a(3); a(3)=a(4); a(4)=a(5); a(5)=a(6); a(6)=a(7); a(7)=a(8); end m1=co; b=[1 0 1 0 0 0 0 1];

幻想战姬竞技场剑系4大战姬推荐

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剑系第三名:哪吒 首先我说要,哪吒后排的技能相当不错。在PVE中对很多难啃的BOSS有奇效,许多人都是靠天女和大腿的哪吒过的老牛,而且哪吒的攻击力成长也非常不错。但哪吒这卡有几个不协调的 缺点,首先,作为前排,血过少,不是很能抗,而且作为前排,贯通技能的倍率略感人,作为后排,虽然技能的眩晕3回合对PVP来说十分不错,发动实在太慢,很可能在发动前就会被打飞。

剑系第四名:钟馗姬 说实话,馗姬更适合推图,血量一般,前排AOE技能的倍率也一般。攻击虽然不错,但站不住的话就意义不大了,JJC中用的人也不算多。 最后说几张福袋剑卡

狂欢卡莉: 就是弱化版的后排钟馗姬,PVP价值不大。 心愿土特产: 技能相当优秀,奈何本身属性实在不行,本来是唯一可以痛打盾妲己的存在,奈何从属性上来看却不能对盾妲己造成什么实质的威胁。 华阳: 只能说技能看上很美,但是有两点致命缺点一、横扫回能量只回后排二、和贯通回能量不叠加。所以,实际来说,华阳很鸡肋。 另外,推荐非洲战神之一的赵萌萌,首充即送,初始相阶,成长却意外的还不错,前排技能倍率也很不错,是各位非洲大草原人民最忠实的好朋友,萌萌大法,千秋万代,一统江湖。 责任编辑【威尔】

GelRed-核酸电泳用染料

GelRed核酸染料(10,000×水溶液) GelRed核酸染料特点 ● 无毒性:GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。 ● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。 ● 稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳 定,耐光性强。 ● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。 ● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟 且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。 ● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙 烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。 ●无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的 普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。 GelRed使用方法简介 1.胶染法(用法同EB)(推荐方法) (1)制胶时加入GelRed核酸染料。每50mL胶中加入5μL GelRed 核酸染料。 (2)按照常规方法进行电泳即可。 ◆注:此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。当染料稀释 在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热,从而与通常制备预制凝胶的方法相同。含有染料的预制凝胶可以成批制备,并可以长期保存直到使用。 2.泡染法 (1)按照常规方法进行电泳。 (2)用0.1M的NaCl水溶液按照3300﹕1的比例稀释GelRed浓缩液,混匀,制成3×GelRed染色溶液。(例如:在45mL水溶液中加入5mL 1M的NaCl溶液及15μL10,000× GelRed水溶液。) (3)将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色30分钟左右,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。 ◆注:用泡染法染色时,染料用量较多。单次制备的染色溶液可重复使用3次左右。

GOLD 序列码产生及特性分析实验

实验二 GOLD 序列码产生及特性分析实验 一、实验目的 1. 了解Gold 码的性质和特点; 2. 熟悉Gold 码的产生方法; 二、实验内容 1. 熟悉Gold 码的的产生方法; 2. 测试Gold 码的的波形; 三、实验原理 m 序列虽然性能优良,但同样长度的m 序列个数不多,且m 序列之间的互相关函数值并不理想(为多值函数)。1967年,R .Gold 提出和讨论了一种新的序列,即Gold 码序列。这种序列有较为优良的自相关和互相关特性,构造简单,产生的序列数多,因而得到广泛的应用。 a) m 序列优选对 m 序列优选对是指在m 序列集中,其互相关函数最大值的绝对值满足下式的两条n 阶m 序列: 表2-1给出了部分m 序列优选对。 表2-1 部分优选对码表 级数 基准本原多项式 配对本原多项式 7 211 217,235,277,325,203,357,301,323 9 1021 1131,1333 10 2415 2011,3515,3177 11 4445 4005,5205,5337,5263 2.Gold 码的产生方法 Gold 码是m 序列的组合码,由同步时钟控制的两个码字不同的m 序列优选对逐位模2加得到,其原理如图2-1所示。这两个码发生器的周期相同,速率也相同,因而两者保持一整除为偶数,但不能被位奇数41212)(2/)2(2/)1(n n R n n xy ???++≤++τ

定的相位关系,这样产生的组合码与这两个子码序列的周期也相同。当改变两个m 序列的相对位移时,会得到一个新的Gold 码。Gold 码虽然是m 序列模2加得到的,但它已不再是m 序列,不过仍具有与m 序列近似的优良特性,各个码组之间的互相关特性与原来两个m 序列之间的互相关特性一样,最大的互相关值不会超过原来两个m 序列间最大互相关值。Gold 码最大的优点是具有比m 序列多得多的独立码组。 图2-1 Gold 码序列发生器 Gold 码序列具有以下性质: (1)两个m 序列优选对经不同移位相加产生的新序列都是Gold 序列,两个n 级移位寄存器可以产生2n +1个Gold 序列,周期均为2n -1。 (2)Gold 码序列的周期性自相关函数是一个三值函数,与m 序列相比,具有良好的互相关特性。 Gold 码的产生有两种形式:并联形式和串联形式。例如m 序列本原多项式为:61)(x x x f ++=和6521)(x x x x x f ++++=,构成的并联和串联形式的Gold 码发生器如2-2图所示。(a )为并联形式,(b )为串联形式。 (a )并联结构 (b )串联结构 图2-2Gold 码发生器 (a ) 并联形式(b )串联形式 为了观测方便,本实验用两个周期为31的m 序列优选对采用并联结构产生一个Gold

m序列产生及其特性

一、实验目的 通过本实验掌握m 序列的特性、产生方法及应用。 二、实验内容 1、观察m 序列,识别其特征。 2、观察m 序列的自相关特性。 三、基本原理 m 序列是有n 级线性移位寄存器产生的周期为21n -的码序列,是最长线性移位寄存器序列的简称。码分多址系统主要采用两种长度的m 序列:一种是周期为1521-的m 序列,又称短PN 序列;另一种是周期为 4221-的m 序列,又称为长PN 码序列。m 序列主要有两个功能:①扩展调制信号的带宽到更大的传输带宽, 即所谓的扩展频谱;②区分通过多址接入方式使用同一传输频带的不同用户的信号。 3、m 序列的互相关函数 两个码序列的互相关函数是两个不同码序列一致程度(相似性)的度量,它也是位移量的函数。当使 用码序列来区分地址时,必须选择码序列互相关函数值很小的码,以避免用户之间互相干扰。 研究表明,两个长度周期相同,由不同反馈系数产生的m 序列,其互相关函数(或互相关系数)与自 相关函数相比,没有尖锐的二值特性,是多值的。作为地址码而言,希望选择的互相关函数越小越好,这 样便于区分不同用户,或者说,抗干扰能力强。 在二进制情况下,假设码序列周期为P 的两个m 序列,其互相关函数R xy (τ)为 ()xy R A D τ=- (9-9) 式中,A 为两序列对应位相同的个数,即两序列模2加后“0”的个数;D 为两序列对应位不同的个数, 即两序列模2加后“1”的个数。 为了理解上述指出的互相关函数问题,在此以5n =时由不同的反馈系数产生的两个m 序列为例计算它 们的互相关系数,以进一步讲述m 序列的互相关特性。将反馈系数为8(45)和8(75)时产生的两个5级m 序 列分别记做:1m :1000010010110011111000110111010和2m :111110111000101011010000110100,序列1m 和 2m 的互相关函数如表9-3所示。 表9-3序列1m 和2m 的互相关函数表

GoldView Ⅰ型核酸染色剂使用说明

GoldViewⅠ型核酸染色剂使用说明 货号:G8140 规格:1.0ml(10000×) 保存:常温保存,有效期至少一年。 产品介绍: GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型DNA染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验,尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。 使用方法: 将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)放入微波炉中融化,冷却至60℃左右(不烫手时)后加入10ul GoldViewⅠ核酸染料,轻轻摇匀后倒胶(避免产生气泡),待胶完全凝固后上样电泳,电泳完毕在紫外灯下观察。 注意事项: 1、胶厚度宜不要超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。 2、加入GoldViewⅠ的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。 3、GoldViewⅠ在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合,因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。 4、由于GoldViewⅠ产生绿色荧光,因此不适于用一般单色胶卷拍照,可以使用凝胶成像系统保存图像。 5、含有GoldViewⅠ的凝胶不适于进行凝胶回收实验。要进行回收实验,请使用EB或

GoldViewⅡ型。 6、GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。如果检测小片段的DNA,请选用GoldViewⅡ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。 7、虽然尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用,但由于GoldViewⅠ溶液酸性较强,因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴手套。 应用特点: 高效:GoldViewⅠ可以检测50ng级的DNA或RNA片段。其激发波长有多处,其中两处最强:230nm和490nm。安全:尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用,使用该试剂不用接触EB(溴化乙锭)等有害物质。 相关试剂: D1200琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) D10106×DNA Lodding Buffer T106050×TAE缓冲液 E1027EB清除剂

gold序列的生成与相关特性仿真

Gold序列生成与相关性仿真 1.1 references [1] 基于Matlab的Gold码序列的仿真与实现. [2] Code Selection for CDMA Systems. 1.2 m序列的生成原理 1.2.1生成本原多项式 利用Matlab编程环境求解本原多项式,其运行结果如表1所示.选择n=7,采用7级移位寄存器,产生的序列周期是127,其程序如下所示. N=7; %以7级寄存器为例,并组其中的一组优选对:211,,217 connections=gfprimfd(N,'all'); 表(1)n=7 本原多项式 上面的多项式中,仅有9个是独立的.因为第一行和第十行,第二行和四行,第三行和第十六行,第五行和第八行,第六行和第十四行,第七行和第十三行,第九行和第十八行,第十一行和第十二行,第十五行和第十七行是两两对称的.用八进制数表示时,所选择的本原多项式为211、217、235、367、277、325、203、313和345共9条.在这9条本原多项式中,选择一个基准本原多项式,再按要求选择另一本原多项式与之配对,构成m序列优选对,对7级m序列优选对如下表:

表(2)n=7 m序列所以优选对 1.2.2构成移位寄存器 根据产生Gold码序列的方法,从上述本原多项式中选择一对m序列优选对,以211作为基准本原多项式,217作为配对本原多项式,通过并联结构形式来产生Gold序列,生成gold 序列的结构如图(6)所示: 图(6)Gold序列生成结构 1.3 自相关函数 仿真参数及初始值设定如下:

N=7; %以7级寄存器为例,并组其中的一组优选对:211,,217 connections=gfprimfd(N,'all'); f1=connections(4,:); %取一组本原多项式序列,211 f2=connections(16,:); %取另一组本原多项式序列,217 registers1=[1 0 0 0 0 0 0];%给定寄存器的初始状态 registers2=[1 0 0 0 0 0 0];%取相同的初始状态 生成的gold 序列自相关函数如图(7)、(8)所示 图(7) Gold 序列周期自相关函数 结论:自相关函数取值集合{127,15,-1,-17} 图(8)Gold 序列非周期自相关函数 020406080100120140 gold 序列周期自相关函数 020406080100120140 -40 -20 20 40 60 80 100 120 140 gold 序列非周期自相关函数

GoldView核酸染料

GoldenView 使 用 说 明 书 GoldenView? 核酸染料 概述 GoldenView?是一种可代替溴化乙锭(EB )的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA 时,GoldenV iew?与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB 相当,使用方法与之完全相同。在100ml 琼脂糖胶溶液中加入5-10μl GoldenV iew?即可。在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光,也可用于染RNA 。 使用方法 1. 将100ml 琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。 2. 加入5-10μl GoldenView (如果背景过高可以适当减少用量,如果敏感度过低,可以适当增加用量),轻轻摇匀,避免产生气泡。 3. 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。 4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。 注意事项 1. 胶厚度不宜超过0.5cm ,胶太厚会影响检测的灵敏度。 2. 加入GoldenView 的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。 3. 通过凝胶电泳回收DNA 片段时,建议使用GoldenV iew 染色,在自然光下切割DNA 条带,避免紫外线与EB 对目的DNA 产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。 4. 虽然未发现GoldenView 有致癌作用,但是各种核酸染料的致癌作用学术界一直存在争议,同时GoldenView 对皮肤、眼睛会有一定的刺激,为安全起见,我们强烈建议操作时依然应该每次带手套,不小心接触皮肤后应该立刻清洗,并妥善处理废弃物。 NOT FOR HUMAN OR DRUG USE

核酸染色剂

核酸染色剂 集团文件版本号:(M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988)

电泳后,核酸需经染色才能显色出带型,常用以下核酸染色剂: 1.(ethidium?bromide,?EB)最常用的核酸,这种扁平分子可嵌入核 酸双链的配对碱基之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光。激发荧光的能量来源于两个方面,一是核酸吸收波长为260nm的紫外线后能将能量传送给,二是结合在DNA分子中的EB本身,主要吸收波长为300nm和360nm的紫外线的能量,来源于这两方面的能量,最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深,可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L?MgCl2中5min,使非结合的EB褪色,这样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低。 在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况,这种方法使用于一般性的核酸检测。但EB带正电荷,嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性,使迁移率减慢,故不宜用于测定核酸分子量的大小,这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光易分解,应于4℃避光保存。 2.(acridine?orange,AO):吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在 254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光;还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格,应在 22℃,0.01mol/L(pH7.0)中避光浸

m序列和Gold序列特性研究要点上课讲义

m序列和G o l d序列特性研究要点

Harbin Institute of Technology 扩频通信实验报告 课程名称:扩频通信 实验题目:Gold码特性研究 院系:电信学院 班级:通信一班 姓名: 学号: 指导教师:迟永钢 时间: 2012年5月8日 哈尔滨工业大学

第1章实验要求 1.以r=5 1 45E为基础,抽取出其他的m序列,请详细说明抽取过程; 2.画出r=5的全部m序列移位寄存器结构,并明确哪些序列彼此是互反多项 式; 3.在生成的m序列集中,寻找出m序列优选对,请确定优选对的数量,并画 出它们的自相关和互相关函数图形; 4.依据所选取的m序列优选对生成所有Gold序列族,确定产生Gold序列族 的数量,标出每个Gold序列族中的所有序列,并实例验证族内序列彼此的自相关和互相关特性; 5.在生成的每个Gold序列族内,明确标出平衡序列和非平衡序列,并验证其 分布关系。 6.完整的作业提交包括:纸质打印版和电子版两部分,要求两部分内容统 一,且在作业后面附上源程序,并加必要注释。 7.要求统一采用Matlab软件中的M文件实现。

第2章 实验原理 2.1 m 序列 二元m 序列是一种伪随机序列,有优良的自相关函数,是狭义伪随机序列。m 序列易于产生于复制,在扩频技术中得到了广泛应用。 2.1.1 m 序列的定义 r 级非退化的移位寄存器的组成如图1所示,移位时钟源的频率为c R 。r 级线性移位寄存器的反馈逻辑可用二元域GF(2)上的r 次多项式表示 2012() {0,1}r r i f x c c x c x c x c =++++∈L (1) 图 2-1 r 级线性移位寄存器 式(1)称为线性移位寄存器的特征多项式,其给出的表示反馈网络的而逻辑关系式是现行的。因此成为线性移位寄存器。否则称为,非线性移位寄存器。 对于动态线性移位寄存器,其反馈逻辑也可以用线性移位寄存器的递归关系式来表示 112233 {0,1}i i i i r i r i a c a c a c a c a c ----=++++∈L (2) 特征多项式(1)与递归多项式(2)是r 级线性移位寄存器反馈逻辑的两种不同种表示法,因其应用的场合不同而采用不同的表示方法。以式(1)为特征多项式

红色荧光核酸染料使用说明

红色荧光核酸染料使用说明 货号:E1020 规格:5ml(10mg/ml) 保存:室温避光储存,有效期至少1年。 产品说明: 红色荧光核酸染料是一种高度灵敏的荧光染色剂,常用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳后核酸染色。该染料与DNA结合后在紫外光透射仪激发下放射出橙红色荧光,可用Polaroid 底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。结合DNA染料的复合物荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的红色荧光核酸染料(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng的DNA条带。 使用方法: 1、胶染:将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)放入微波炉中融化,冷却至60℃左右(不烫手时)后加入5-10ul染料,轻轻摇匀后倒胶(避免产生气泡),待胶完全凝固后上样电泳,电泳完毕在紫光灯下观察拍照(注:由于在该染料存在的情况下,线状DNA 的电泳迁移率约降低15%)。 2、泡染:琼脂糖凝胶电泳后,将胶浸没在含有染料(0.5ug/ml)的电泳缓冲液或去离子水中,室温下染色15-45min(取决于凝胶厚度)。脱色时用去离子水或者1mM的MgSO4溶液室温浸泡约10-30min可降低背景荧光(可选)。 注意事项: 1,本品为强烈的诱变剂,使用时请注意安全。 2,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关试剂:

T10505×TBE缓冲液 T106050×TAE缓冲液 D10106×DNA Lodding Buffe M1060D2000DNA Ladder G8140GoldView I型核酸染色剂(10000×) G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) SY1020SYBR Green I(10000×) SY1040SYBR Green‖(10000×)

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