细胞总RNA提取

细胞总RNA的提取

Step1：收集培养于6-孔板的细胞一孔（细胞数约为4.5×105个），弃去培养液，每孔加入400μl Trizol溶液，室温静置15分钟；

Step2：用DEPC处理过的细胞刮刀刮取裂解后的细胞裂解液，并转移至一个新的1.5ml离心管中；

Step3：按照氯仿：Trizol=1：5的体积比加入冰预冷的氯仿，颠倒混匀10次，冰上孵育15分钟；

Step4：于4℃，12000rpm离心样品15分钟；

Step5：小心吸取上层水相于另一新的1.5ml离心管中，加入等体积冰预冷的异丙醇，颠倒混匀，-20℃孵育20分钟；

Step6：于4℃，12000rpm离心样品15分钟；

Step7：弃上清，加入1ml冰预冷的无RNA酶的75%乙醇洗涤RNA沉淀2次；

Step8：于4℃，12000rpm离心样品10分钟，弃上清，真空适度干燥除去多余乙醇；Step9：每管加入30μl~50μl灭菌DEPC处理的去离子水溶解RNA样品。-20℃冻存备用。