胡萝卜愈伤组织培养

验名称胡萝卜的愈伤组织诱导培养实验时间 4月至6月

小组合作：是○√ 否○

一、实验预习 1、实验目的：

1.1通过本次实验，能够熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。

1.2熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，同时能设计和配制胡萝卜伤组织增殖培养基。

1.3熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术；设计和配制胡萝卜细胞悬浮培养的培养基。 2、实验准备：

2.1 MS 母液培养基的配置主要实验用具和仪器：

电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：

NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、 MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、H 3BO 3、MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、Na 2MoO 4·2H 2O 、 CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、 Na 2-EDTA ·2H 2O 、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 2.2胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配置主要实验用具和仪器：

冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用口杯、精密pH 试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、电炉、高压蒸汽灭菌锅等。药品和试剂：

MS 培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol ·L-1HCl 、1mol ·L-1NaOH

2.3胡萝卜愈伤组织诱导主要实验用具和仪器：

100ml 三角瓶、500ml 搪瓷杯、25ml 量筒、10ml 和5ml 吸管、pH 试纸（5.4~7.0）、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯等。

药品和试剂：

MS基本培养基母液、愈伤组织诱导培养基、蒸馏水、无菌水、75％酒精、蔗糖琼脂、NAA、6-BA、水解酪蛋白、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、0.1%HgCl2。

实验材料：

胡萝卜肉质质根（贮藏根）

2.4 胡萝卜愈伤组织的继代培养

主要实验用具和仪器：

酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、枪状镊子、眼科手术剪、手术刀、酒精灯、 100ml三角瓶、500或1000ml搪瓷杯、50ml量筒、1ml、2ml、5ml、10ml吸管、精密pH试纸（5.4~7.0）、封口膜、橡皮圈、药勺、称量纸等。

药品和试剂：

愈伤组织继代培养基、75％酒精、MS培养基和常用试剂母液、蒸馏水。

实验材料：

处于脱分化进程中的外植体。

3、实验原理：

配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要。诱导愈伤组织常用的生长素是2，4-D，IAA和NAA，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。愈伤组织形成的过程分为3个时期：诱导期、分裂期、分化期（形成期）。愈伤组织的生长是发生在不与琼脂培养基接触的表面。

4、实验方法步骤：

4.1 MS母液培养基的配置

配置过程以课本33页的配方图为标准

4.11大量元素的配置(CaCl2·2H2O要在最后单独加入)

用量=放大倍数*体积*培养基中的浓度

n=20 v=1L

4.12微量元素的配置(Fe单独配置)

N=200 v=1L

4.13有机成分的配置（单一母液）

N=200 v=250ml

4.14铁盐母液的配置

螯合态的铁，混合煮沸PH=5.8-6.2(用NaoH2调)

4.15生长调节物得配置

2-4-D：0.5mg/ml v=100ml

6-BA:0.1mg/ml v=100ml

NAA:0.5mg/ml v=100ml

注：不能直接加入水中，可先用酒精或NaoH2溶解2-4-D或NAA,用盐酸溶解6-BA.

4.16其他常用试剂

75%酒精

4.2胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配置

组织增殖培养基的配制

配方：

MS基本培养基+ 2 mg/LNAA +0.1 mg·L—16—BA + 200 mg·L—1水解酪蛋白+ 3%蔗糖+ 0.7%琼脂粉

配制体积：各小组500ml(两个组配1000ml)

即大量元素:50 ml; 微量元素：5 ml; 有机物成分：5 ml; 铁盐：5 ml; 2 mg/L NAA：2mg(2ml); 0.1 mg·L—16—BA:0.1mg (1ml); 200 mg·L—1水解酪蛋白:200mg; 蔗糖:30g; 琼脂：7g

配制流程：

(1)根据需要配制培养基的量（各小组500ml）称好所需的琼脂放入医用口杯中，

(2)待琼脂完全溶解后，加入规定用量的母液（可事先取好放在一烧杯中），再加入规定用量的蔗糖，继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基配方及培养基体积加入所需的生长调节物质，定容至所需的体积，并用玻棒搅拌均匀。

（3）调节培养基的酸碱性至PH5.8。由于培养基的PH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料的生长有很大的影响。此外，PH还影响到琼脂培养基的凝固情况。所以，当培养基配制好后应立即进行PH值的调整。培养基若偏酸时用氢氧化钠（1mol·L-1）来调节，若过碱就用盐酸（1mol·L-1）来调整。当PH值高于6.0时，培养基将会变硬；当PH值低于5.0时5.0时，琼脂不能很好地凝固。

（4）配制好的培养基要趁热分装，试管、三角瓶等培养基的容器加注量应占容积的1/3~1/4，果酱瓶每瓶20~30毫升，太多既浪费培养基，又减少了培养材料的生长空间；太少又会因营养不良影响生长。培养基分装完，用封口膜封严瓶口，并用橡皮筋扎紧。

（5）培养基的灭菌消毒

灭菌时，压力表读数为0.11MPa,温度121℃时保持30分钟左右即可。为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压之前应先将灭菌锅内的冷空气放尽。排净冷空气的方法：可事先打开放气阀，煮沸等大量热蒸汽排出后再关闭；也可采用先关闭放气阀，待压力升到一定时打开放气阀排出空气，再关闭放气阀。

4.3 胡萝卜愈伤组织诱导

4.31准备工作

A．接种室的清洁和消毒；超净工作台的开机和消毒；消毒溶液、无菌水、装材料的容器、剪刀、镊子、培养皿、计时器、待用培养基等的准备。

B．实验材料的准备

第一步：材料的修整、刷洗、冲洗。

第二步：是用洗衣粉水或肥皂水浸洗并搅动。

4.32植物材料表面的灭菌

A．工作人员吸收消毒

B．装材料的容器及玻璃棒用酒精进行表面消毒

C．将待消毒材料浸入75%酒精中10秒，取出用无菌水冲洗

D．倒入消毒液并计时

E．到时倒出消毒液

F．倒入无菌水清洗后，切块接种到培养基上

4.4胡萝卜愈伤组织的继代培养

4.41准备工作

接种室的清洁和消毒；超净工作台的开机和消毒；剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；实验材料的准备（选择装有无污染的已分化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于超净工作台）

4.42 愈伤组织继代培养

将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体上产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织继代诱导培养基上，放置在25 0C全黑暗条件进行愈伤组织的增殖培养，以获得足够的愈伤组织，作为后续实验的实验材料

5、参考文献

[1].植物组织培养.李浚明.中国农业大学出版社.第二版.2004.

二、实验内容

1、实验结果

进行胡萝卜愈伤组织诱导，共诱导6瓶，最终实验结果得到：6瓶诱导中，只有两瓶成功诱导，并且长势良好，其余四瓶均被细菌污染；

进行愈伤组织继代培养，共培养5瓶，均成功，长势较好，但是由于继代培养时间过长，愈伤组织已经出现死亡，其中瓶内培养基数量少的愈伤组织，死亡情况更明显。

2、实验结果分析与讨论：

进行胡萝卜愈伤组织诱导，培养成功两瓶，其余均被细菌污染。其原因可能是在无菌操作过程中，没有保持培养瓶封口膜的无菌条件，最终造成污染；

在进行愈伤组织几代培养中，均获得成功，没有背污染，但是愈伤组织出现不同程度的死亡，究其原因为：愈伤组织继代培养中，愈伤组织生长需要大量的营养，由于培养时间过长，培养基中的营养成分及水分不能满足愈伤组织的继续生长和生活，故出现死亡。

三、实验小结

1、本次实验的自我评价：

本次实验，在愈伤组织诱导环节中，由于在无菌操作过程中的不谨慎，造成了污染，只获得两瓶成功的胡萝卜愈伤组织，在继代培养中，所有的愈伤组织培养均成功，说明自己在进行无菌操作时，还需要认真和谨慎。

2、教师评语及评分：

签字年月日

胡萝卜素愈伤组织培养开题报告

胡萝卜素愈伤组织培养开题报告 1011421130 徐亮 1、本论文课题国内外概况和文献综述：应用细胞的全能性(totipotency)理论，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能，可以将成熟胡萝卜直根的部分组织培养成完整胡萝卜植株。国内外研究者在探讨胡萝卜愈伤组织的成因时，发现影响胡萝卜愈伤组织的发生频率主要有基因型、外植体、培养基、激素等因素。胡萝卜的基因型是影响其离体培养再生能力的重要因素。对于不同品种的胡萝卜种子,大多数研究者认为利用其刚萌发的无菌苗的下胚轴诱导愈伤组织，出愈率较高 [1-3] 。同一基因型的不同外植体其愈伤组织的发生能力有明显差异，这与不同外植体的分化程度和脱分化能力不同有关。近年来的研究表明，以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和贮藏根 [1,3,4] 。此外，杨宁等（1999）选取胡萝卜贮藏根的皮层、木质部及韧皮部为外植体，发现从韧皮部诱导出的愈伤组织有较好的生长效果 [5] 。在胡萝卜愈伤组织诱导和分化中，基本培养基成分对胚性愈伤组织的诱导率和质量均有显著影响，一般认为MS 培养基对体细胞胚的发生更为有利。但也有认为B5基础培养基略优于MS 基础培养基 [1] 。不同的激素种类、浓度及其组合对愈伤组织的诱导率有显著影响。已有的研究结果表明，在培养基中加入2,4-D,6-BA,BA,KT 等，会影响胚性愈伤组织的发生。2,4-D 的浓度从0.1～10.0 mg/L 不等，6-BA 的浓度从0.2～4.5mg/L 不等，BA 的浓度从0.5～1.0mg/L 不等，KT 的浓度从0.2～2.0mg/L 不等 [2,3,6] 。此外还有研究结果表明，2,4-D/KT 比值是影响愈伤组织形成的关键因素，随着比值的增大，愈伤组织诱导率有逐渐升高的趋势[7] 。

胡萝卜组织培养系统实验

云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院年级专业：2013级生物技术（国家生命科学与技术姓名：杨梦梅选课号：2015107066 学号：20131070156座号：A2 开课日期：2015.09 学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗 ( 云南大学生命科学学院,昆明650504) 摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT;继代培养 1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织; The study about inducement, subculture and suspension cell lines of Carrots’ callus

Abstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh root s really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth. Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。中国是农业大国, 胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。因此, 加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。近些年来, 随着生物技术与分子生物学技术的快速发展, 作为生物技术研究的理想材料, 许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展, 特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多, 因此继续深入研究还是很有必要的。本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨, 为其次生代谢产物α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素（维生素A前体）的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础。 1 材料和方法 1. 1材料来源胡萝卜肉质根自农贸市场购买. 1. 2 方法 1. 2. 1MS培养基的配制1000ml 1)用大烧杯取蒸馏水100-120ml 2)依次用移液管量取加入母液：100ml大量（10x）、100ml大量钙盐（10x）、10ml微量 I（100x）、1ml微量II（1000x）、10ml铁盐（100x）、10ml有机（100x）、100ml有机肌醇（10x）、以及适当含量植物激素。 3)称取30g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解，作为1号溶液备用。 4)称取9g琼脂，用量筒量取500ml蒸馏水一起加入1000ml体积白瓷缸中，放在电炉上一边加热一边搅拌，加热直至清澈无沉淀。将1号溶液加入，继续加热搅拌，至将要沸腾，离火。 5)用pH试纸调pH至5.8-6.0 。 6)在白瓷缸中定容至1000ml，搅拌均匀。 7)分装至350ml培养瓶中每瓶约40~50ml。121℃高压灭菌20min。

胡萝卜愈伤组织培养

验名称胡萝卜的愈伤组织诱导培养实验时间 4月至6月小组合作：是○√ 否○ 一、实验预习 1、实验目的： 1.1通过本次实验，能够熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。 1.2熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，同时能设计和配制胡萝卜伤组织增殖培养基。 1.3熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术；设计和配制胡萝卜细胞悬浮培养的培养基。 2、实验准备： 2.1 MS 母液培养基的配置主要实验用具和仪器：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品： NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、 MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、H 3BO 3、MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、Na 2MoO 4·2H 2O 、 CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、 Na 2-EDTA ·2H 2O 、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 2.2胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配置主要实验用具和仪器：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用口杯、精密pH 试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、电炉、高压蒸汽灭菌锅等。药品和试剂： MS 培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol ·L-1HCl 、1mol ·L-1NaOH 2.3胡萝卜愈伤组织诱导主要实验用具和仪器： 100ml 三角瓶、500ml 搪瓷杯、25ml 量筒、10ml 和5ml 吸管、pH 试纸（5.4~7.0）、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯等。

胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告.

综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的（一）实验目的 1、通过MS培养基母液的配制和保存，掌握配制于保存培养基母液的基本技能。 2、通过MS固体培养基的配制，掌握培养基的制备基本技能。 3、学会和掌握诱导愈伤组织的基本技术。 4、初步掌握组织培养的无菌操作技术。 5、初步掌握外植体的消毒技术。 6、掌握组培室常用的化学试剂。 7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。（二）实验原理 1、配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 2、在自然情况下，根主要为植物吸收和固定的重要器官，同时，有些植物的

根亦具有繁殖的功能。植物根生长快、代谢能力强、变异小，使得其在研究根的营养吸收、生长和代谢的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。依据细胞全能性原理，即指任何具有完整细胞核的细胞（动物、植物等），都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息（DNA）。就胡萝卜根来说，其肉质根细胞同样具有形成完整再生植株的能力。这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的，在遗传上具有一致的根的培养物，称为离体根无性系。利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研究。 3、愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木于接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木与接穗沟通。在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。其发生过程是：外植体的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要。诱导愈伤组织常用的生长素是2,4-D，IAA和

胡萝卜组织培养

. 研究背景 1.1 胡萝卜胡萝卜(Daucus carota L．)为伞形科植物，是世界上最重要的蔬菜作物之一，占蔬菜生产总量的3％，达13．5百万吨(Hole，1996)。胡萝卜块根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪[1] 。由于其富含维生素A前体类胡萝b素和植物纤维，因而是一种重要的营养保健品。其适于生食、加工、烹调等多种用途。中国是农业大国，胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。因此继续深入研究胡萝卜细胞培养还是很有必要的。 1.2 组织培养植物组织培养是在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术[2]。其理论基础是植物细胞具有全能性，即一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，具有发育成完整植株的潜能，在适宜的条件下能够发育成一个完整的植株。进行离体培养时，植物的组织或器官通过脱分化形成愈伤组织。胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。

2. 材料与方法 2.1 材料培养皿、锥形瓶、无菌纸、镊子、解剖刀、烧杯、量筒、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台、高压灭菌锅、微波炉、PH试纸。 MS培养基、2,4-D、6-BA、活性炭、无菌水、蔗糖、琼脂粉、75%酒精、1% (体积比)浓度的次氯酸钙溶液、胡萝卜块根（2012-2-21-怡购，2012-2-24-水果摊，2012-3-13-水果摊，2012-3-21-珠影，2012-3-29-荣一） 2.2 方法 2.2.1 MS培养基的配制200ml ◆用大烧杯取无菌水100-120ml ◆依次用移液管量取加入母液：20ml大量（10x）、2ml微量（100x）、 2ml铁盐（100x）、4ml有机（50x）、2mg/L2,4-D。 ◆称取6g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解。 ◆用量筒定容至20ml。 ◆用pH试纸调pH至6.0-6.2 ◆称取1.6g琼脂加入，搅拌。 ◆放入微波炉内加热直至清澈无沉淀。 ◆分装后高压灭菌3h。探究实验1激素为1.0mg/L2,4-D，1.0mg/L6-BA[3] 探究实验2激素为2.2mg/L2,4-D[3 4]

胡萝卜组织培养教学设计培训讲学

胡萝卜组织培养教学设计小组成员：何家会、宋亚伟、冯海艳、尹化、黄洁、牛伟坤一、教学目标 1、知识目标：说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行胡萝卜的组织培养。 2、能力目标：掌握培养基制备、外植体消毒、接种、培养、移栽以及栽培等基本操作技术。 3、情感目标：关注植物组织培养技术在实践生活中的运用，养成严谨的科学素养。二、实验目的 1、掌握植物组织培养过程中的愈伤组织诱导和生根培养技术。 2、掌握植物组织培养过程中使用的无菌技术。三、实验原理植物组织培养：指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 ?外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的那部分材料。 ?愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则薄壁细胞，多在植物体切面上产生。 ?脱分化：已分化好的组织细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。或者说是由高度分化的植物组织或器官产生愈伤组织的过程。

?再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。或者说是由愈伤组织再生出小植株的过程。 ?植物体的任何一个细胞都具有全能性。分化了的植物根、茎、叶等组织器官在一定的条件下进行离体培养，给于一定的营养和激素，可以脱分化为愈伤组织。愈伤组织在不同的营养和激素的作用下，又可以再生出完整的小植株。植物的脱分化和再分化培养，证明分化了的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全套基因。四、实验材料与方法实验材料 ?胡萝卜（新鲜幼嫩） ?MS培养基+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA ?70%酒精2.5%NaCLO无菌水超净工作台、光照培养架、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡器、打孔器、小刀、培养皿、解剖刀、镊子、植物组培试剂盒。实验方法 ?培养基的配制。 ?小麦籽粒用无菌水浸泡10小时。 ?取材、消毒和接种。五、实验过程胡萝卜愈伤组织的诱导 1、外植体消毒用清水洗干净胡萝卜直根，用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。先用70%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钠溶液消毒10min（或用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍，再用无菌水浸泡30min），放入无菌水中漂洗2~3次，用无菌吸水纸吸干待用。 2、外植体接种把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，

胡萝卜组织培养论文

植物组织培养论文摘要：在胡萝卜组培试验，用胡萝卜做外植体，在培养基上接种诱导形成愈伤组织，由于接种时对外植体消毒不彻底，接种操作不规范，导致培养基全部污染，实验失败胡萝卜胡萝卜（Daucus carrot），又称甘荀，是伞形科胡萝卜属二年生草本植物。以肉质根作蔬菜食用。原产亚洲西南部，阿富汗为最早演化中心，栽培历史在2000年以上。名为Daucus carota，通常为一年生，根可食。常见品种中，根呈球状或锥状，橘黄色、白色、黄色或紫色。原产阿富汗及邻近国家。野胡萝卜已成为分布于欧洲、美国和其他温带国家的杂草。地中海地区早在西元前就已栽培胡萝卜，在中国和西北欧不迟于14世纪，现栽培于整个温带地区。组织培养发展简史 Haberlandt(1902)首次提出细胞培养的概念，也是第一个用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的人。与rechinger不同，Haberlandt相信切块大小不会影响细胞增殖，但由于Haberlandt使用的培养液成分简单，培养的细胞是高度分化的细胞，又没采取消毒技术，所以实验失败，培养的细胞虽然存活了几个月但没能分裂。Haberlandt 转而对损伤修复发生兴趣，提出激素作用的概念（leptohormone)，与维管组织特别是韧皮部有关；另一类是创伤激素(woundhomone)，与细胞损伤有关，为后来激素理论的建立和在组织培养中的广泛应用奠定了基础。但自Haberlandt的实验之后直到1934年White培养番茄离体根尖的成功，其间的30多年里，植物组织培养技术几乎没有什么进展。分析其原因，主要就是培养基的成分和实验所选取的材料不够合适。 20世纪60年代，在植物组织培养方面的另外两项成就就是划分小孢子培养和原生质体培养的成功。Guha和Maheshwari（1966，1967），Rourgin和Nitsch（1967）先后利用烟草和胡萝卜的小孢子培养获得单倍体植株，并成功地实现了染色体的加倍，使这种同源二倍体植株在5个月内收获到种子。Cocking等用纯化的纤维素酶和果胶酶处理烟草细胞，获得原生质体，通过调节渗透压的方法控制原生质体膨胀，使培养获得成功，得到了再生植株。自20世纪60年代始，植物组织与细胞培养逐渐走向了工厂化和商品化阶段。材料与方法

胡萝卜组织培养系统实验

胡萝卜组织培养系统实验标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]

云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院 2013级生物技术（国家生命科学与技年级专业：术基地班）姓名：杨梦梅选课号：学号：座号：A2 开课日期：学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗 (云南大学生命科学学院, 昆明 650504) 摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT;继代培养1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织; The study about inducement, subculture and suspension cell lines of Carrots’ callus

Abstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth. Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。中国是农业大国, 胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。因此, 加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。近些年来, 随着生物技术与分子生物学技术的快速发展, 作为生物技术研究的理想材料, 许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展, 特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多, 因此继续深入研究还是很有必要的。本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨, 为其次生代谢产物α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素（维生素A前体）的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础。 1材料和方法 1. 1 材料来源胡萝卜肉质根自农贸市场购买. 1. 2 方法 1. 2. 1 MS培养基的配制1000ml 1)用大烧杯取蒸馏水100-120ml 2)依次用移液管量取加入母液：100ml大量（10x）、100ml大量钙盐（10x）、 10ml微量I（100x）、1ml微量II（1000x）、10ml铁盐（100x）、10ml有机（100x）、100ml有机肌醇（10x）、以及适当含量植物激素。 3)称取30g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解，作为1号溶液备用。 4)称取9g琼脂，用量筒量取500ml蒸馏水一起加入1000ml体积白瓷缸中，放在电炉上一边加热一边搅拌，加热直至清澈无沉淀。将1号溶液加入，继续

胡萝卜愈伤组织诱导实验报告

南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导姓名：学院：专业：班级：学号：

胡萝卜愈伤组织诱导实验一母液的配制与保存一、实验目的 1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。 2.熟悉掌握制备母液的操作。二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。三、实验材料、试剂和仪器设备 1．试剂 NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2O CuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。 2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。计算后制成配方表。2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。 3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。 4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O，H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2O。CuSO4〃5H2O 和CoCl2〃6H2O先稀释后用移液管吸取,按制备母液I的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，

胡萝卜组织培养系统实验

胡萝卜组织培养系统实验 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

Abstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth. Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。中国是农业大国, 胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。因此, 加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。近些年来, 随着生物技术与分子生物学技术的快速发展, 作为生物技术研究的理想材料, 许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展, 特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多, 因此继续深入研究还是很有必要的。本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨, 为其次生代谢产物α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素（维生素A前体）的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础。 1材料和方法 1. 1 材料来源胡萝卜肉质根自农贸市场购买. 1. 2 方法 1. 2. 1 MS培养基的配制1000ml 1)用大烧杯取蒸馏水100-120ml 2)依次用移液管量取加入母液：100ml大量（10x）、100ml大量钙盐（10x）、 10ml微量I（100x）、1ml微量II（1000x）、10ml铁盐（100x）、10ml有机（100x）、100ml有机肌醇（10x）、以及适当含量植物激素。 3)称取30g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解，作为1号溶液备用。 4)称取9g琼脂，用量筒量取500ml蒸馏水一起加入1000ml体积白瓷缸中，放在电炉上一边加热一边搅拌，加热直至清澈无沉淀。将1号溶液加入，继续

胡萝卜愈伤组织诱导培养实验

云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心细胞工程实验实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养实验摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。 1.材料和方法 1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。 1.2方法： 1.2.1愈伤组织的诱导培养（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8 （2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况 1.2.2继代培养从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。用记号笔标注操作者、组别和日期。（3~4周后在相同培养基上继代培养1次）1.2.3愈伤组织再分化的诱导（1）培养基： MS+2，4-D 0.5mg/L+KT 0.2mg/L （2）从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3

胡萝卜愈伤组织诱导

胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养，并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。关键词：胡萝卜；愈伤组织；激素一、引言 19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上，大胆提出要在试管中人工培育植物。他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性，能够发育成为完整的植物体。这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。外植体在培养过程中切口产生的多酚类物质被氧化成褐色的醌类物质,这就是褐变现象。目前已在许多植物组织培养中发现有褐变现象,尤以木本植物组织培养中褐变严重。褐变现象主要发生在外植体,外植体的部位不同,取材时期不同,褐变程度亦不同,如油棕用幼嫩器官或组织,胚等作外植体进行培养,褐变较轻,而用高度分化的叶片作外植体,接种后很容易褐变。选择适当的外植体进行预处理之后,选择适宜的培养基,在黑暗或弱光下进行培养,并在培养基中加入活性碳可以防止细胞褐变的发生和发展;在外植体接种后1-2天既转移到新鲜培养基上,使细胞在褐化之前及时转移可以大大减轻或避免褐化。胡萝卜营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。从20世纪初到近几年，胡萝卜一直是科研人员的主要研究对象。同一基因型的不同外植体其愈伤组织的发生能力有明显差异，这与不同外植体的分化程度和脱分化能力不同有关。近年来的研究表明，以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和贮藏根。植物组织培养首先不仅可以生产大量良性系，而且可以获得人类需要的多种代谢物质；其次，细胞融合可打破种属间的界限，客服远缘杂交不亲和性障碍，在植物新品种的培养和种性的改良中发挥着巨大的作用；再次，还可获得单倍体，三倍体及其他多倍体，非整倍体;最后，组织培养的植物细胞液成为在细胞水平上分析研究的理想材料。二.材料和方法（一）试剂器材

胡萝卜愈伤组织的培养

胡萝卜愈伤组织的培养摘要：实验中的胡萝卜的组织培养实验成功率比较低，主要体现在污染率较高和出芽率低上，在长期的实验中，有些胡萝卜的愈伤组织基本分化不出芽。针对这一问题我们反复实验。通过把培养出来的胡萝卜的愈伤组织进行悬浮培养后，再转接到固体培养基上，从而使得胡萝卜愈伤组织更容易分化出芽来。并使整个过程控制在无菌条件下，现就胡萝卜组织培养的整个实验过程控制作一详细介绍。关键词：胡萝卜；组织培养；无菌控制 1.实验流程（1）实验总流程： MS母液培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配制→胡萝卜愈伤组织诱导→胡萝卜愈伤组织的继代培养→观察记录（2）无菌操作流程：实验员消毒→实验室、无菌台灭菌→实验器材的灭菌→无菌接种→消毒→实验台卫生（3）胡萝卜愈伤组织诱导培养流程：胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的分装→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基灭菌→取材及材料的消毒灭菌→接种与培养（4）胡萝卜愈伤组织的继代培养流程：器械及实验者的消毒灭菌→剥离愈伤组织诱导培养所得的愈伤组织→胡萝卜愈伤组织接种 2.实验仪器及材料胡萝卜(市场购买)、超净工作台、光照培养架、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡器、打孔器、小刀、培养皿、解剖刀、镊子、植物组培试剂盒。 3.实验方法与步骤 3.1胡萝卜愈伤组织的诱导 ①外植体消毒用清水洗干净胡萝卜直根，用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。先用70%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钠溶液消毒10min（或用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍，再用无菌水浸泡30min），放入无菌水中漂洗2~3次，用无菌吸水纸吸干待用。 ②外植体接种。把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm的小长块(如图1a)。为了操作简便、快速，外植体美观，建议使用打孔器切取胡萝卜外植体。具体操作方法: 把消毒好的胡萝卜直根放于无菌培养皿中(建议使用一次性塑料培养皿)，用小刀将其切成2~3cm的小段，用灭过菌的打孔器沿着形成层穿入胡萝卜中，取得一段含有形成层的2~3cm的圆柱体，然后用无菌解剖刀片将其切成厚1mm的小薄片，将切好的胡萝卜外植体接种在MS+2mg/L2,4-D+1.5mg/L KT的固体培养基上，放于黑暗处25℃条件下进行暗培养，50d后长出淡黄色愈伤。 3.2胡萝卜愈伤组织悬浮体系的建立用镊子夹取在固体培养基上继代20d的胚性愈伤组织即分散性好、疏松的愈伤用解剖刀切碎，接种在MS+0.3mg/L 2，4-D+3%蔗糖的液体培养基(pH5.8)中，每100mL的三角瓶中加入MS液体培养基50mL，摇床转速为110r/min，温度为25℃，黑暗培养，每隔7d继代一次，

胡萝卜组织培养导学案

植物组织培养技术教学目标 1.简述植物组织培养的过程 2.理解植物组织培养的原理 3.通过对植物组织培养条件的分析培养学生分析问题、解决问题的能力教材分析重点：植物组织培养的原理难点：植物组织培养的过程学法指导：在讨论基础上，引领学生分析影响组织培养的因素自主学习：通读P34—35 胡萝卜的组织培养实验，思考以下问题一、实验原理和材料 1、该实验的结果是什么？ 2、培养基中应该含有哪些成分？（P36小知识） 3、什么是灭菌？为什么要对培养基灭菌？二、方法步骤（一）取材（外植体定义：由活体植物体上取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等） 1、培养的是胡萝卜的哪一部分? 2、前面提到培养基要严格灭菌，你认为外植体也要严格灭菌吗？（二）接种 1、接种过程要不要严格的无菌操作？ 2、结合材料用具，想一想，接种应该在什么环境操作？（三）培养 1、初步培养得到的是幼苗吗？ 2、愈伤组织细胞是具有什么特征的细胞？（P33第二段） 3、什么叫脱分化？（P33第二段） 4、培养过程需要更换培养基吗？ 5、什么叫再分化？ 6、培养初期需要控制怎样的条件？三、理论基础（P33—34正文部分）

1、为什么通过对组织块的培养能得到完整的小植株？ 2、什么是细胞的全能性？ 3、高度分化的植物体细胞为什么具有全能性？ 4、在生物体的生长发育过程中细胞会不会表现全能性？合作探究 1、从培养基的配制到外植体的处理，再到接种和最后的培养，你最大的感触是什么？ 2、脱分化过程中通常要避光培养是因为更容易诱导出愈伤组织。而再分化过程通常要给以周期性的光照，这是为什么呢？ 3、你认为影响脱分化和再分化的关键因素有哪些？ 4.、在生物体的生长发育过程中细胞不会表现全能性，怎样才能让植物细胞表现出全能性？ 5、请概括出植物组织培养的流程简图。当堂反馈 1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织过程中，下列哪项是不需要的（） A．无菌的培养环境B．适宜的温度C．充足的光照D．适宜的养料和激素 2、用高度分化的植物细胞组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是（）该愈伤组织是细胞经过脱分化形成的 B．该愈伤组织的细胞没有全能性 C．该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成 D．该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状体 3、在下列选项中，没有利用植物组织培养技术的是（） A．利用花药离体培养得到单倍体植株 B．利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株 C．利用胡萝卜形成层培养成胡萝卜幼苗 D．利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到多倍体植株预习指导 1、植物体细胞杂交的目的是什么？ 2、植物体细胞杂交和有性杂家相比有何突破之处？ 3、植物体细胞杂交技术用到了植物组织培养技术吗？ 4、怎么处理得到原生质体？ 5、诱导原生质体融合的方法有哪些？

胡萝卜愈伤组织的诱导培养

实验序号01 实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导培养实验时间2010年4月——5月实验室组培实验室 1．实验目的 1）、通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂。 2）、通过本次实验，使学生能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。 3）、通过本实验，使同学们能够熟练的掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，同时能设计和配制胡萝卜愈伤组织增殖培养基。 4）、通过本次实验，使同学们熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术；设计和配制胡萝卜细胞悬浮培养的培养基。2．实验原理、实验流程或装置示意图 1）、培养基的成分目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 2)、培养基的配制方法 Ⅰ、配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节PH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 Ⅱ、如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制： ①一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。 ②另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母液），贮存在2~4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。 3）、MS培养基母液的配制在配制MS培养基母液时，为减少工作量可以把几种药品（如培养基中的大量元素或微量）配在同一母液中，但应注意各种化合物的组合以及加入的先后顺序，以免发生沉淀。

通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已完全溶解的药品混合，或者待前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序，力求把Ca2+与SO42-和PO43-错开，以免形成硫酸钙或磷酸钙的不溶物；同时，要慢慢地混合，边混合边搅拌。母液的配制有两种方法： ⅰ一种是配制成单一化合物母液。此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液。 ⅱ另一种是配成几种不同化合物的混合母液。此法在大量配制同种培养基时省力。配好的母液应放在试剂瓶中贮存。 3．实验设备及材料 1）、设备：冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（５.４～７.０）、封口膜、橡皮筋、电炉、高压蒸汽灭菌锅、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、50ml三角瓶、1000ml搪瓷杯、50ml量筒、10ml和5ml吸管、PH试纸（5.4～7.0） 2）、药品和试剂：硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2、4—D（2、4—二氯苯乙酸）、6—苄基腺嘌呤（6—BA）、盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。蒸馏水、琼脂、蔗糖、生长调节物、盐酸（1mol·L-1）、氢氧化钠（1mol·L-1）。胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75%酒精、0.1%氯化汞、MS基本培养基和常用试剂母液、蒸馏水。3）、实验材料：胡萝卜储藏根