甘露聚糖酶的测定方法
甘露聚糖酶活性测定方法
一．原理
样品中的甘露聚糖酶对底物－半乳甘露聚糖进行水解，用DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸）分光光度法测定水解所产生的还原糖量。
二．定义
一个甘露聚糖酶活性单位（MNU）被定义为：在测定条件下，1秒钟内从甘露聚糖中产生1 nmoL相应还原糖－甘露糖所需的酶量（1 MNU=1 nkat）。
三．适用范围与安全性
本方法适用于来源于木霉属（Trichoderma）的甘露聚糖酶样品的测定。当检测其它来源的酶活时，本测定方法的直线性需要校正。
本测定方法中的DNS试剂在吸入后，接触皮肤和眼睛，或被误服后，对人体有害。四．试剂与仪器
所有试剂溶液均用去离子水配制。
1. 柠檬酸缓冲液（0.05M,pH5.3）
溶解10.5 g柠檬酸（C6H8O7·H2O）于800mL水中，并用1M氢氧化钠调节pH至5.3（消耗约110mL），再用水定容至1000mL。
2. 底物－0.3%
称取0.6 g刺槐豆胶（Sigma G-0753），溶于约80℃的柠檬酸缓冲液中，磁力搅拌，加热至沸腾，继续搅拌冷却至室温，加盖缓慢搅拌过夜。将不溶的沉淀物离心（1000rpm离心10min），并用柠檬酸缓冲液定容至200mL。将此底物溶液在-20℃下冰冻保存。临用前，将底物溶液在沸水浴中缓慢溶解至80℃左右后使用。
3. DNS试剂
溶解50.0 g3,5-二硝基水杨酸（Sigma D-0550）于4000mL水中，不断磁力搅拌，缓缓加入80.0 g氢氧化钠，使之完全溶解，再继续磁力搅拌，分数次少量加入1500 g四水合酒石酸钾钠，并小心加热，溶液最高温度不超过45℃。冷却至室温后定容至5000mL。如果溶液不澄清，用Wheatman 1号滤纸过滤，然后室温保存于棕色瓶中。
4．仪器
恒温水浴锅50℃
恒温水浴锅100℃
试管旋涡磁力搅拌器
分光光度计
五．测定条件
底物半乳甘露聚糖
pH 5.3
温度50℃ 0.5℃
保温时间5min
六．样品处理
用柠檬酸缓冲液稀释被检样品。调整稀释倍数使测定时产生的吸光度在0.10～0.40之间。
七．操作步骤
分别向2支试管中加入1.8mL底物溶液，置50℃水浴中保温5min。在其中一支试管中加入200μL稀释酶样，磁力旋转搅拌均匀，置于50℃水浴中准确保温5 min。加入3.0 mL DNS试剂至两支试管中，搅拌均匀。在另一支试管（空白管）中加入200μL稀释酶样，同时将两支试管放入沸水浴中准确保温5min，取出置入冷水中冷却至室温。于540 nm处测量酶样对空白的吸光度，在酶活标准曲线上读取酶活，再乘以酶样稀释倍数。
八．标准曲线制作
配制20mM甘露糖储备液。将360 mg甘露糖[1]
（Sigma M-6020）溶解于柠檬酸缓冲液
中，并用缓冲液定容至100mL。（葡萄糖标准品应置于干燥器内保存）。储备液可等分成少量在-20℃下冰冻，使用前，融解并混合均匀。用缓冲液稀释储备液配制以下标准稀释液：
储备液（mL）缓冲液（mL）甘露糖μmoL/mL 酶活[2]
MNU/mL
1.5 8.5 3 10
3 7 6 20
5 5 10 33.3
7 3 14 46.7
每种标准稀释液做2次重复测定。向2支试管中分别加入1.8 mL底物溶液，50℃水浴保温5min。加入3.0 mL DNS试剂和200μL标准稀释液，加入200μL柠檬酸缓冲液以代替标准稀释液配制试剂空白。在沸水浴中准确保温5min，冷却后在540nm处测量样品对试剂空白的吸光度。每批样品制备一次标准曲线。
注：
[1] ------------应保存在干燥器中。
[2] ------------甘露聚糖酶活性（MNU/mL）=甘露糖浓度（μmoL/mL）×1000/水
解时间（300s）
标准曲线：Y = a + bX
式中：
Y------------吸光度
X------------甘露糖浓度（μmoL/mL）
a------------截距
b------------斜率
九．计算公式
样品酶活（U/g）＝————————————————————请麦总转交黄小文老师!
GM试验----半乳甘露聚糖的临床检测频率
GM试验----半乳甘露聚糖的临床检测频率 近十几年来，随着有报道的真菌感染发病率逐渐升高，各种针对真菌的检测手段也逐渐出现并被商业化。半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM）抗原的检测，是特异性针对侵袭性曲霉菌（Invasive Aspergillosis , IA）感染的有效检测手段。 半乳甘露聚糖（Galactomannan，GM）是存在于曲霉细胞壁的一种热稳定的多糖，于1978年Lehmann和Reiss等发现并命名，1随后被用于侵袭性曲霉病（Invasive Aspergillosis , IA）的诊断，并被法国Bio-Rad公司商业化生产（曲霉菌抗原检测试剂盒（Platelia TM Aspergillus Ag））。 GM试验检测的病人样本主要是血清和支气管肺泡灌洗液，近来也有人使用尿液和脑脊液等标本检测。由于GM量的多少与组织中真菌含量密切相关，因此检测GM抗原不仅可以对治疗效果进行监测和评估，还可以提示疾病的预后。 2001年，Maertens J等人组织了一项大规模前瞻性临床试验，依照欧依照欧洲癌症研究和治疗组织和真菌病研究组（European Organization for Research and Treatment Cancer and Mycoses Study Group, EORTC/MSG）推荐的诊断标准，通过连续检测血清半乳甘露聚糖（Galactomannan, GM）抗原诊断成人中性粒细胞减少患者中侵袭性曲霉菌（Invasive Aspergillosis , IA）的发病情况，第一次验证了GM试验是成人IA发病检测指标的金标准。2在随后的是十几年中，GM试验在IA的诊断中得到了广泛的应用和认可。 然而，尽管在侵袭性曲霉菌（Invasive Aspergillosis , IA）感染高危患者中开展GM试验已经得到了广泛认可，但仍然存在许多问题困扰临床医生，比如什么时间点是理想的起始检测点？2012年发表的第一个专门针对儿科中性粒细胞减少伴发热的指南提出，对于中性粒细胞减少伴发热的高危侵袭性真菌感染（Invasive Fungal Infection , IFI）患者，支持临
甘露聚糖酶作用原理
β-甘露聚糖酶（endo-1,4-β-mannanase）是一种新型的酶制剂，属于一种半纤维素酶类，它除具有一般非淀粉多糖（NSP）酶类的作用——降解NSP，降低肠道粘度，促进营养物质的消化和吸收外；近来很多研究表明，β-甘露聚糖酶还是一种多功能的促生长剂，因为它可以促进类胰岛素生长因子IGF-I的分泌，促进蛋白质的合成，提高瘦肉率；同时，它还可消除豆类中富含的β-甘露聚糖对葡萄糖吸收的干扰，极大提高饼粕尤其是豆粕的能量消化率。实际使用中还可看出，添加了β-甘露聚糖酶后动物的抵抗力及整齐度都有提高。 NSP的其中一种组分是β-甘露聚糖（半乳甘露聚糖），其在豆粕中的含量高于其它常用的饲料原料。β-甘露聚糖除了消化率低之外，还对家禽具有多方面负面的生理影响。研究表明，即使是低浓度的β-甘露聚糖也可通过干扰胰岛素分泌和胰岛素样生长因子（IGF）生成而降低从肠道中吸收葡萄糖的速率和碳水化合物的代谢过程（Nunes和Malmlof,1992）。其它负面影响包括降低氮存留量、脂肪吸收率和氨基酸摄入量以及减少水的吸收而导致排泄物水分过多（Kratzer等，1967）。 -甘露聚糖在畜禽肠道细胞发育不完全，或在应激环境下，会过度刺激免疫反应，造成对生长性能的的伤害，引起不良免疫反应，摄食量下降，生长更加迟缓，造成体重轻的数量增加，群体均匀度变差。 表1 常见原料的β-甘露聚糖含量 β-甘露聚糖酶作用特点： ◆β-甘露聚糖酶是一种多功能的促生长剂，可以促进类胰岛素生长因子IGF-I的分泌，促进蛋白质的合成，提高瘦肉率，促进生长。 ◆消除饲料中甘露聚糖对葡萄糖吸收的干扰，极大提高豆粕的能量消化率，能给玉米豆粕型日粮提高100-150kcal/kg的代谢能。 甘露聚糖分解产生的甘露寡糖，可被动物肠道中的有益菌吸收，改善菌群组成，减少大肠杆菌、沙门氏菌的感染。减少肉鸡球虫病的危害，提高肉鸡均匀度。 ◆降低肠道粘度，促进能量、蛋白、纤维素的消化和吸收。
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法（滴定法、比色法）【原理】 过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。 R(Fe+2)+H2O2==R(Fe+3+OH－) R(Fe+3OH－)2+ H2O2==R(Fe+2)2+2H2O+O2 据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 5 H2O2+2 KMnO4+4H2SO4-------- 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 即可求出消耗的H2O2的量。 【仪器和用具】 研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。 【试剂】 10% H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液pH7.8； 0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定； 0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定； 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4?2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。 【方法】 1.酶液提取取小麦叶片 2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入高温灭活酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。 3.用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。 4.结果计算： 酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示： 酶活(mg H2O2/gFW?min)= 式中A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）; W—样品鲜重（g）；
酶活力测定方法
蛋白酶活力测定: 参照中华人民共和国专业标准SB/ T10317-1999蛋白酶活力测定方法( Asha 等, 2007)。 纤维素酶DNS酶活力测定方法 DNS, 活力, 纤维素酶, 测定 1 定义" |0 `. y6 t9 b" ^ 2 x 1g固体酶粉在40℃和pH值4.2条件下，每分钟水解纤维素生成1微克葡萄糖的量为1个酶活力单位，以u/g表示。 2 原理 纤维素酶分解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将3，5二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量，表示酶的活力。! Y" m& p' q; I& K B& e$ T( B4 } 3.试剂和溶液 3.1 1％葡萄糖标准溶液（同β－葡聚糖酶酶活测定） 3.2 羧甲基纤维素钠(CMC)溶液 取1g羧甲基纤维素钠（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液(甲液414ml和乙液586ml并用pH计校正至pH为4.2)混合均匀,水浴加热至溶,冷却后用2M 盐酸或氢氧化钠调节pH到4.2,定溶至100ml,再用二层纱布过滤，此溶液在4℃冰箱贮存，有效期3天。取滤液100ml，20ml，蒸馏水40ml，混匀，贮冰箱备用。4 C) c+ }( l2 R( M( p! L 3.3 DNS 试剂（同β－葡聚糖酶酶活测定）; h1 a. l3 Z3 k6 t2 | 4仪器和设备 4.1恒温水浴锅(40℃±0.2℃) 4.2分光光度计 含10mm比色皿，可在550nm处测量吸光度。$ ]1 h& A) p) K 5测定步骤 5.1 标准曲线绘制. [* |! P6 u* G& u2 ^6 J4 Q 分别吸取1%葡萄糖标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水制成每ml分别含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀标准液。各取不同浓度的稀标准液0.5ml于试管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS试剂3.0ml，于沸水浴中沸腾7min，取出后立即加入蒸馏水10ml混匀。冷却后，用10mm比色皿，在波长550nm处用分光光度计分别测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，相对应的葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。1 H, `% F/ `7 X/ U. W 5.2待测酶液的制备（同β－葡聚糖酶酶活测定） 1 L- {5 h8 W; q+ V4 u2 Y 5.3 比色测定 精确吸取经待测稀释酶液0.5ml，40℃预热5min，加入经40℃预热的CMC液1.5ml（每个样品同时作3支平行试管），于40℃水浴精确反应10min，立即加入DNS试剂3.0ml终止反应，以后按标准曲线制作步骤测定样品吸光度。 同时进行空白对照测定，取稀释酶液0.5ml，先加入DNS试剂3.0ml，再加入CMC液1.5ml，其余步骤同于样品测定。 6.计算0 W+ i$ S: }( _1 o7 ], R5 m( N
百度文库---甘露聚糖肽特性
甘露聚糖肽 一甘露聚糖肽发现 甘露聚糖肽(Mannatide)，曾用名多抗甲素(Polyactin A，PAA)。是我国首创的一种新型免疫增强剂，是从健康人口腔分离的一株α-溶血性链球菌(α-hemolytic Streptococcui)33#菌株经深层培养，发酵提取而得到的一种具有免疫活性和抗肿瘤作用的多糖类物质。它是由原西安医科大学方亮教授在克山病的研究中发现的，于1976年从链球菌的代谢产物中提取的多糖类物质，初步试验有抗肿瘤作用，临床预期有一定效果。1976年国家医药管理局安排四川抗菌素研究所，在方亮教授的指导下和初步工作的基础上，开展了菌种筛选获得了α－甘露聚糖肽产生菌33#菌株，并对菌种生理生化特性、血清型分类、深层培养和提取工艺、理化特性、化学组成、毒性和药理用量标准等方面进行了系统的研究、试验。 二甘露聚糖肽的化学构造及理化特性 α－甘露聚糖肽的化学结构式如下： 分子量为71,700kD，是具有一定均一性的混合物，不存在单糖、双糖等小分子糖类和游离氨基酸，完全由不同链长的甘露聚糖肽分子构成。α－甘露聚糖肽的总糖含量为87.7～90.3％，主要为甘露糖以及少量的葡萄糖残基，二者之比约为39∶1；蛋白质含量为4.5～6.2％主要的构成氨基酸为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸和亮氨酸，其比例为1∶2∶2∶1∶1∶1；此外还有少量的甘氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸等。 甘露聚糖以β-(1-4)键连接组成甘露聚糖肽的糖主链, 且甘露聚糖肽的糖链还存在1-6、1-2等支链结合方式和还原末端。甘露聚糖肽中糖链与肽链的连接有两种方式: N-糖苷键连接和O-糖苷键连接。在O-糖苷键连接的结构中, 主要是糖链还原末端的甘露糖基, 以糖苷键形式通过肽键上的羟基氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或羟赖氨酸)的羟基氧与甘露聚糖连接, 组成聚糖肽。N-糖苷键连接的结构中, 糖链还原末端可以与肽链中的赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的氨基连接。
甘露聚糖酶
Q/JCSW W 甘露聚糖酶 桂林精成生物科技有限公司发布
前言 本标准按GB/T 1.1- 2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》进行编写。 本产品适用于作饲料添加剂用。 本标准由桂林精成生物科技公司提出。 本标准起草单位：桂林精成生物科技公司。 本标主要起草人：李志双、王海珍、梁艳 本标准于2007年3月10日首次发布。
甘露聚糖酶 1 范围 本标准规定了饲用甘露聚糖酶的要求、试验方法、检验规则、以及标志、包装、运输、贮存、保质期。 本标准适用于本公司生产的作饲料添加剂用的甘露聚糖酶。 2 规范性引用文件 下列文件中的条文通过本标准中的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准大成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 601 化学试剂滴定分析用标准溶液的制备 GB／T 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 5917 配合饲料粉碎粒度测定法 GB/T 6435 饲料水分的检测 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 饲料标签 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 14699.1 饲料采样方法 GB/T 18823 饲料检测结果判定的允许误差 NY/T722 饲料用酶制剂通则 QB/T1803 工业酶制剂通用试验方法 国家质检总局[2005]75号令：定量包装商品计量管理办法 3 定义 3.1 甘露聚糖酶活力单位定义 在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖溶液中降解释放1 mol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u。 4 要求 4.1外观和性状 粉酶为浅黄色粉末状；颗粒酶为浅黄色均匀颗粒状。 4.2 水份含量：粉酶≤12.0% ；颗粒酶≤12.0% 4.3 粒度: 粉酶：95％以上通过孔径为420μm40目的分析筛； 颗粒酶：95％以上通过孔径为420μm 30-80目分析筛。 粗灰分：≤8% 4.4 产品成分分析保证值: 见表1
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。 仪器药品 氧电极仪记录仪 电磁搅拌器超级恒温水浴 注射器、微量注射器容量瓶 反应杯亚硫酸钠 过氧化氢酶 50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。 50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。 标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶 (Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液 (pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。 操作步骤 1.仪器的标定 按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
2.绘制酶活性标准曲线 (1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。 (2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。 (3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。 (5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。 3.样品测定 (1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。 (3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。
甘露聚糖酶的测定方法
甘露聚糖酶活性测定方法 一．原理 样品中的甘露聚糖酶对底物－半乳甘露聚糖进行水解，用DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸）分光光度法测定水解所产生的还原糖量。 二．定义 一个甘露聚糖酶活性单位（MNU）被定义为：在测定条件下，1秒钟内从甘露聚糖中产生1 nmoL相应还原糖－甘露糖所需的酶量（1 MNU=1 nkat）。 三．适用范围与安全性 本方法适用于来源于木霉属（Trichoderma）的甘露聚糖酶样品的测定。当检测其它来源的酶活时，本测定方法的直线性需要校正。 本测定方法中的DNS试剂在吸入后，接触皮肤和眼睛，或被误服后，对人体有害。四．试剂与仪器 所有试剂溶液均用去离子水配制。 1. 柠檬酸缓冲液（0.05M,pH5.3） 溶解10.5 g柠檬酸（C6H8O7·H2O）于800mL水中，并用1M氢氧化钠调节pH至5.3（消耗约110mL），再用水定容至1000mL。 2. 底物－0.3% 称取0.6 g刺槐豆胶（Sigma G-0753），溶于约80℃的柠檬酸缓冲液中，磁力搅拌，加热至沸腾，继续搅拌冷却至室温，加盖缓慢搅拌过夜。将不溶的沉淀物离心（1000rpm离心10min），并用柠檬酸缓冲液定容至200mL。将此底物溶液在-20℃下冰冻保存。临用前，将底物溶液在沸水浴中缓慢溶解至80℃左右后使用。 3. DNS试剂 溶解50.0 g3,5-二硝基水杨酸（Sigma D-0550）于4000mL水中，不断磁力搅拌，缓缓加入80.0 g氢氧化钠，使之完全溶解，再继续磁力搅拌，分数次少量加入1500 g四水合酒石酸钾钠，并小心加热，溶液最高温度不超过45℃。冷却至室温后定容至5000mL。如果溶液不澄清，用Wheatman 1号滤纸过滤，然后室温保存于棕色瓶中。 4．仪器 恒温水浴锅50℃ 恒温水浴锅100℃ 试管旋涡磁力搅拌器 分光光度计 五．测定条件 底物半乳甘露聚糖 pH 5.3 温度50℃ 0.5℃ 保温时间5min 六．样品处理 用柠檬酸缓冲液稀释被检样品。调整稀释倍数使测定时产生的吸光度在0.10～0.40之间。
试验七过氧化氢酶活力的测定
实验七过氧化氢酶活力的测定 一、实验目的 掌握过氧化氢酶活力测定的原理和方法 二、实验原理 过氧化氢酶（catalase,CAT,EC1.11.1.6）普遍存在于植物的各种组织中，其活力大小与植物的代谢强度和抗寒、抗病能力有一定的联系，故常需进行测定。 过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵作催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。其反应为： 过氧化氢酶 2H2O2-------------------------2H2O+O2 钼酸铵 H2O2+2KI+H2SO4------------------------I2+K2SO4+2H2O I2+2Na2S2O3-------------2NaI+Na2S4O6 反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。 三、仪器、试剂和材料 1、仪器：天平，研钵，容量瓶，恒温水浴，移液管，三角瓶，滴定管。 2、试剂： （1）0.01mol|L的过氧化氢溶液； （2）1.8mol|L的硫酸溶液； （3）10%钼酸铵溶液； （4）0.02mol|L硫代硫酸钠溶液； （5）1%的淀粉溶液； （6）20%的碘化钾溶液； （7）碳酸钙粉末。 四、操作步骤 1、酶液提取：称取新鲜油麦菜0.25g，剪碎置研钵中，加入0.1g碳酸钙和2mL水研磨成匀浆，用漏斗移入50mL的容量瓶，研钵用少量的水冲洗，冲洗液也一并移入容量瓶中， 然后用水定容。摇荡片刻，静置澄清后吸取20.0mL上清液至100ml容量瓶中，加水定容，摇匀后备用。 2、取三个100mL三角瓶编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10.0ml，随即在3号瓶中加入1.8mol|L硫酸5.0ml以终止酶的活力，作为空白溶液。各瓶均加入5.0mL0.01mol|L过氧化氢溶液，每加一瓶即摇匀并开始记时。5min（必须准确）后立即向1、2号瓶各加5.0mL1.8mol|L硫酸溶液。 3、各瓶分别加入1.0mL20%的碘化钾溶液和3滴钼酸铵溶液，然后依次用0.02mol|L的硫代硫酸钠滴定，滴定至溶液淡黄色后加入5滴1%的淀粉溶液，再继续滴定至蓝色消失即到终点，记下各瓶消耗的硫代硫酸钠的体积。
半乳甘露聚糖检测用于侵袭性曲霉菌早期感染诊断的研究
半乳甘露聚糖检测用于侵袭性曲霉菌早期感染诊断的研究 目的评价酶联免疫吸附试验（ELISA）检测半乳甘露聚糖（GM）抗原在侵袭性曲霉菌（IA）早期感染诊断和疗效监测中的临床价值。方法以62例呼吸内科、重症医学科及血液内科造血干细胞移植（HSCT）患者为研究对象，针对患者连续检测，共检测标本188份。采用ELISA法测定患者血清中GM含量，测定浓度可达0.5ng/ml。同时对所选病例进行G实验检测和真菌培养，所得结果与GM结果联合分析。结果以1.0为阳性界值，GM检测的敏感性为53.8%，特异性100%，诊断符合率88.7%；以0.5为阳性界值，敏感性为84.6%，特异性96.7%，诊断符合率95.2%。G实验显示以GM0.5为阳性界值GM阳性患者血浆（1-3）-β-D-葡聚糖含量为（68.58±12.76）pg/ml，GM阴性患者血浆（1-3）-β-D-葡聚糖含量为（3.18±1.25）pg/ml，两组数据经t-检验比较具有统计学意义（P＜0.05）。GM检测可早于真菌培养方法9d预测曲霉感染。曲霉菌感染患者GM的连续监测显示抗曲霉菌治疗前GM水平保持在较高水平，抗真菌治疗有效患者的GM 含量呈下降趋势，无效死亡患者仍保持较高水平。结论血清GM检测是侵袭性曲霉菌早期感染诊断和疗效监测的有用指标，与G实验联合应用判断效果更好。 标签：半乳甘露聚糖；曲霉菌；早期感染 近年来侵袭性曲霉菌感染（IA）发病率逐渐增多，已经成为免疫功能低下患者致死率高的主要原因。有报道称在造血干细胞移植（HSCT）患者中IA的发病率为2%～26%，实体器官移植患者中的发病率为1%～15%，死亡率可达到74%～92%。在中性粒细胞减少的患者（抗肿瘤治疗后）和使用免疫抑制剂（干细胞移植、器官移植特别是骨髓抑制）或皮质类固醇的患者，患者一旦发生曲霉菌感染，死亡率高达50%～90%。研究开发早期、快速、准确的诊断方法对疾病的预后具有决定性的意义。半乳甘露聚糖（GM）是曲霉菌丝壁上的热稳定多糖抗原，有一个非免疫原性甘露聚糖核心和含半乳呋喃糖基的免疫反应性侧链。其半乳糖残基具有抗原性，目前检测该成分快速诊断曲霉菌病受到广泛关注，被称为最有前景的检测曲霉菌感染的血清学方法。 1资料与方法 1.1一般资料取自2012年1月～12月皖南医学院弋矶山医院呼吸内科、重症医学科、血液内科住院患者送检的血液、肺泡灌洗液等标本62例。实验组32例，其中男20例，女12例，入选实验组均符合以下标准：发热（T>37.5℃），经广谱抗生素治疗4d后无效；长期中性粒细胞减少；胸部影像学检查出现新发病灶或出现肺部感染症状。对照组30例，其中男19例，女11例，为相应科室同时期住院患者，均无深部真菌感染临床症状。 1.2诊断标准IA分3类：第1类确诊IA，第2类高度怀疑IA（也称临床诊断），第3类可疑IA，诊断标准均符合欧洲癌症治疗组织真菌病研究组（EORTC/MSG）制订的IA诊断标准[5]。
_甘露聚糖酶的研究及应用进展
第24卷第6期2010年12月 白城师范学院学报 Journal of Baicheng Normal College Vol．24，No．6Dec．，2010 β－甘露聚糖酶的研究及应用进展 王兆淼 （白城师范学院生物系，吉林白城137000） 摘要：β－甘露聚糖酶是重要的饲用酶制剂之一，是一种新型饲料添加剂．应用于猪、 鸡、鸭和水产动物日粮，可提高饲料的利用效率，促进动物生长，减少养殖业环境污染等作用．作者从β－甘露聚糖酶的来源、作用机理、在生产中的应用等方面阐述了饲用β－甘露聚糖酶的研究及应用情况． 关键词：β－甘露聚糖酶；作用机理；应用 中图分类号：O629文献标识码：A 文章编号：1673-3118（2010）06-0064-03收稿日期：2010－10－08 作者简介：王兆淼（1981———），男，白城师范学院生物系助教，在读硕士，研究方向：动物营养与饲料学． β－甘露聚糖酶是近年来饲料用酶制剂研究 的热点之一，也是近10年来在美国应用最广泛的饲用酶制剂之一．中国饲用甘露聚糖酶的研究始于2006年，是对玉米/豆粕型日粮最有效的饲用酶制剂，畜禽和鱼类的消化酶系不含β－甘露聚糖酶，添加β－甘露聚糖酶主要有促进动物生长，控制、预防动物疾病，提高动物的饲料转化效率；促进养分消化，改善动物肠道微生物生态，改善动物机体的健康状况；降低肠道内容物的黏稠度，减少粪便排泄，减轻环境污染；提高微量元素的生物利用率等作用．目前，β－甘露聚糖酶在北美和欧洲市场已得到广泛的应用． 1β－甘露聚糖酶的来源 β－甘露聚糖酶（endo －β－1， 4－mannanase ）属于半纤维素水解酶类，以内切方式降解β－1，4糖苷键，作用底物为甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳 甘露聚糖等，近来很多研究也表明，甘露聚糖酶还是一种多功能的促生长剂．β－甘露聚糖酶来源广 泛， 包括植物、真菌、放线菌甚至软体动物，其中，微生物是产生β－甘露聚糖酶的主要来源，但哺乳动物体内不含此酶． 2 β－甘露聚糖酶的作用机理 2．1 去除β－甘露聚糖的抗营养作用 甘露聚糖是植物性饲料原料中除纤维素、木聚 糖之外，分布最广泛、含量最高的一类半纤维素，而且在许多植物中大量积累，如玉米、小麦、菜籽粕及麦麸中含量占非淀粉多糖（NSP ）比例分别达12%、11%、20%和34%．特别是β－半乳甘露聚糖和β－葡甘露聚糖是所有豆科（如豆粕）植物细胞壁的组成成分，在豆粕中含量最高（15－18g /kg ）．它与其他非淀粉多糖围绕或缚住细胞中的养分（蛋白质、淀粉和脂肪等），动物的内源性消化酶难于消化这些细胞壁成分，从而降低了日粮的养分利用率．由于畜禽和鱼类的消化酶系中不含此酶，在饲料中添加β－甘露聚糖酶可水解β－甘露聚糖 高分子中的β－1，4糖苷键，释放出与之结合的养分、微量元素等，促进营养物质的消化和吸收，降低 肠道粘度，预防动物腹泻，同时促进畜禽生长，减少养殖污染． 2．2提高动物肠道粘膜的完整性 β－甘露聚糖酶可以直接作用于肠黏膜，切断肠上皮细胞与病原菌的结合点，即碳水化合物核心基座、 蛋白质和蛋白糖；又因－甘露聚糖酶的反应产物甘露寡糖，可以竞争性地与某些病原菌结合，从而减少了这些有害菌与肠粘膜上皮细胞的连接，进而减少了发病的几率，达到防病抗病和治病的目的． 4 6
测量酶方法
氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力 一、原理 超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料；水稻或小麦叶片 （二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。 （三）试剂 :1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至 100ml(现用现配)； 3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml， (避光保存)； 4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至 1000ml； 5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml(避光保 存)。 三、实验步骤 1. 酶液提取 取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。 2. 显色反应 取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液 1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。 3. SOD活性测定与计算 至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。 四、结果计算 已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。
治疗湿疣的常用药品大全
治疗湿疣的常用药品大全 国家食品药品监督管理局数据查询https://www.360docs.net/doc/29695041.html,/WS01/CL0001/ 1、注射液用重组人干扰素α2b 2、重组人干扰素α2b乳膏或凝胶 3、注射用胸腺肽或胸腺五肽 4、鬼臼毒素酊 5、斑蝥素乳膏 6、咪喹莫特乳膏 7、转移因子胶囊或口服液 8、酞丁安搽剂 9、溶菌酶肠溶片 10、香菇菌多糖片 11、甘露聚糖肽片 12、白细胞介素，简称白介素 13、更昔洛韦注射液 14、盐酸伐昔洛韦片 15、阿昔洛韦片 16、膦甲酸钠氯化钠注射液 17、氟尿嘧啶注射液 18、疣迪搽剂 以上药品排名不分先后 一、注射液用重组人干扰素α2b （国药准字号药品） 【功效主治】 1.用于治疗某些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣。 2.用于治疗某些肿瘤，如毛 细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡 波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌、表面膀胱癌等。 二、重组人干扰素α2b乳膏或凝胶（国药准字号药品） 【功效主治】主要用于治疗由人乳头瘤病毒引起的尖锐湿疣，也可用于治疗由单纯性疱疹病毒引起的口唇疱疹及生殖 器疱疹。 【用法用量】涂患处，每日4次。尖锐湿疣用药6-8周，或遵医嘱。口唇疱疹及生殖器疱疹连续用药1周，或遵医嘱。 三、注射用胸腺肽（国药准字号药品） 【功效主治】用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病，某些自身免疫性疾病，各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤 的辅助治疗。包括：1．各型重症肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎及肝硬化等；2．带状疱疹、生殖器疱疹、尖 锐湿疣等；3．支气管炎、支气管哮喘、肺结核预防上呼吸道感染等；4．各种恶性肿瘤前期及化疗，放疗合用并用；5 ．红斑狼疮、风湿性及类风湿性疾病、强直性脊柱炎、格林巴利综合症等；6．再生障碍性贫血、白血病、血小板减少 症等；7．病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎等；8．老年性早衰、妇女更年期综合
木聚糖酶检测方法
木聚糖酶活力的测定 分光光度法 1 原理 木聚糖酶能将底物木聚糖（本实验采用Xylan from oat spelt，燕麦木聚糖，Sigma NO. :X0627）降解成寡糖和单糖，具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算待测木聚糖酶的活力。 2 木聚糖酶活力单位（U）的定义 在40℃、pH值为5.0的条件下，1.0 min从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1 μmol还原糖（以木糖表示）所需要的酶量为一个酶活力单位（U）。其中样品的酶活力以U / g（固体酶）或U / mL（液体酶）表示。 桦木木聚糖（Xylan from birch wood）山毛榉木聚糖（Xylan from beechwood） 3 主要仪器 3.1 分光光度计 3.2 精密电子天平 精确至0.0001 g。 3.3 恒温水浴锅 30-60℃可调，精度为0.1℃。 3.4 酸度计 精确至0.01。 3.5 秒表 每小时误差不超过5s。 3.6 刻度试管（15mL） 带玻璃塞，10支以上。 3.7 移液管（0.5、1、2、5、10mL） 3.8分样筛 孔径为0.25 mm（60目）。
3.9 分析天平 精确至0.001 g。 3.10 磁力搅拌器 附加热功能。 3.11 电磁振荡器 3.12烧结玻璃过滤器 孔径为0.45 μm。 3.13 离心机 3000 r/min 3.14 冰箱 4 试剂与溶液配制 除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的二级水。 4.1 氢氧化钠（NaOH）溶液（浓度为200 g/L） 称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容至100mL。 4.2 乙酸（CH3COOH）溶液（浓度为0.1 mol/L） 吸取冰乙酸0.60mL，加水溶解，定容至100mL。 4.3 乙酸钠溶液（CH3COONa）（浓度为0.1 mol/L） 称取三水乙酸钠1.36g，加水溶解，定容至100mL。 4.4 乙酸——乙酸钠（CH3COOH — CH3COONa）缓冲溶液（浓度为0.1 mol/L，pH为 5.0） 称取三水乙酸钠19.17 g，加入冰乙酸3.60 mL。再加水溶解，定容至2000 mL。测定溶液的pH值。如果pH值偏离5.0，再用乙酸溶液（4.2）或乙酸钠溶液（4.3）调节至5.0。用精密pH试纸检定。 4.5 木糖（C5H10O5）溶液（浓度为10.0 mg/mL） 称取无水木糖1.000 g，加乙酸——乙酸钠缓冲溶液（4.4）溶解，定容至100 mL。 4.6 木聚糖溶液（浓度为10.0g/L） 称取木聚糖（Sigma X0627）1.00 g，加入0.32g氢氧化钠，再加入90 mL水，磁力搅拌，同时缓慢加热，直至木聚糖完全溶解。然后停止加热，继续搅拌30 min，加入0.8 mL冰乙酸。继续磁力搅拌，测定其pH值。如果pH值为5.0，用乙酸——乙酸钠缓冲溶液（4.4）定容至100 mL。如果pH值偏离5.0，再用乙酸溶液（4.2）或乙酸钠溶液（4.3）调节至5.0，
酶活力的测定 国标
木瓜蛋白酶活力的测定 一、试剂与溶液 1. 三氯乙酸 称取三氯乙酸6.54g，用水溶解并定容至100mL。 2. L-酪氨酸标准储备溶液（100μg/mL） 精确称取L-酪氨酸0.1000g，用1mol/L盐酸溶液60mL溶解后定容至100mL，即为1mg/mL酪氨酸溶液。 吸取1mg/mL酪氨酸溶液10.00mL，用0.1mol/L盐酸溶液定容至100mL，即得到100μg/mL的L-酪氨酸标准储备溶液。 3. 氢氧化钠溶液（20g/L） 称取氢氧化钠2g，加水搅拌溶解。待溶液到室温后，以水定容至100mL，搅拌均匀。 4. 盐酸溶液 1mol/L:取22.5ml的浓盐酸溶液，加水定容至250ml。 0.1mol/L：取1.8ml的浓盐酸溶液，加水定容至200ml。 5. 酪蛋白溶液（10.0g/L） 称取标准酪蛋白1g，用少量氢氧化钠溶液润湿，加入相应的缓冲溶液约80mL，在沸水浴中100℃加热回流30min。冷却到室温后转入100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。此溶液在冰箱内贮存，有效期为3d。使用前重新确认并调整pH至规定值。
二、分析步骤 1. 标准曲线的绘制 L-酪氨酸标准溶液：按表1配制。L-酪氨酸稀释液应在稀释后立即进行测定。 表1 L-酪氨酸标准溶液 分别取上述所配的溶液，以0管为空白，利用紫外分光光度计于波长275nm下测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度c为横坐标，绘制标准曲线。利用回归方程，计算出吸光度为1时的酪氨酸的量（μg），即为吸光常数K值。其K值应在130~135范围内，如不符合，需重新配制试剂，进行实验。 2. 样品的测定 待测酶液的制备：称取酶样品1g。然后用磷酸缓冲溶液充分溶解，定容至50ml。 测定：先将酪蛋白溶液置于（40±0.2）℃恒温水浴中，预热5min，
(完整版)低聚半乳甘露聚糖市场调研
低聚半乳甘露聚糖市场调研 半乳甘露聚糖概念：半乳甘露聚糖（Galactomannan，简写GM）或称半乳糖甘露聚糖，是一种包含了甘露糖骨干与半乳糖旁基的多糖，更准确的一点来说，半乳甘露聚糖是直线状(1-4)-连结的β-D型甘露糖（(1-4)-linked beta-D-mannopyranose ）骨干于它们6-连接点连接到α-D型半乳糖（alpha-D-galactose）的多糖，即1-6-连结的α-D型吡喃半乳糖（1-6-linked alpha-D-galactopyranose）。部分的植物与真菌都含有半乳甘露聚糖的成分。 刺槐豆胶或角豆胶甘露糖:半乳糖=4:1 半乳甘露聚糖生理功能：（1）抑制肠道病原菌，促进有益菌的繁殖 （2）调节营养物质代谢，降低血糖 （3）调节机体肠道功能，改善便秘 （4）增强免疫力和抗氧化能力 （5）作为饲料添加剂具有抗生素的功能 （6）提高动物生长，育肥和泌乳量
市场价格：220元/kg 半乳甘露聚糖的生物学功能和生物合成 半乳甘露聚糖发现于种子粘液中，用于植物体的营养贮存与种子保持水分，沉积在原生质膜外侧，是以细胞壁加厚物质形式在胚乳细胞中不断积累的。 半乳甘露聚糖的生物合成是由转化酶、变位酶、糖基转移酶等多种类型的酶组成的多酶体系完成的。Singh等人提出了瓜尔豆种子发育过程中蔗糖转化为半乳甘露聚糖和棉子糖的模型。蔗糖在转化酶作用下生成果糖和葡萄糖，葡萄糖磷酸化后与核普酸作用生成UDP flu。再异构形成VDP teal,参与半乳甘露聚糖的合成!2。一2l]o Reid JSG和Ed-wands ME等经过多年研究，提出了一种合成模型，认为在半乳甘露聚糖的合成过程中，新合成的甘露糖基是否被取代与大分子中其邻位、次邻位残基的取代有关。合成系统中酶的专一性及活力，底物的量等因素共同决定了甘露聚糖残基被取代的概率。同种植物的半乳糖和甘露糖比值保持不变，不同的植物种子有各自固定的比值含半乳甘露聚糖种子胚乳中存在与半乳甘露聚糖分解有关的酶，即a一半乳糖贰酶、内切一a一甘露聚糖酶和a 一甘露糖贰酶。种子萌发过程中这三种酶参与半乳甘露聚糖的降解。 半乳甘露聚醣应用：提炼自豆类的半乳甘露聚糖于食物中经常被当作安定剂（stabilizer）与增黏剂（thickening agent）使用。关华豆胶与刺槐豆胶广泛地被添加在冰激凌中，用来提升冰激凌的外观质感，并且减少冰激凌的溶化状况。刺槐豆胶也被延伸应用在奶油奶酪、水果制备与沙拉酱之中。把塔拉胶当作食品成分的接受度逐渐成长，但是使用量仍然远小于关华豆胶与刺槐豆胶。关华豆胶
芽孢杆菌产甘露聚糖酶酶活稳定的提高
目录 摘要 0 ABSTRACT (1) 第一章绪论 (2) 1.1β-甘露聚糖酶的研究现状 (2) 1.1.1β-甘露聚糖酶的来源 (2) 1.1.2β-甘露聚糖酶的性质 (3) 1.1.3β-甘露聚糖酶的诱导 (3) 1.2β-甘露聚糖酶的纯化 (4) 1.2.1 纯化的意义 (4) 1.2.2 分离纯化工艺 (5) 1.3β-甘露聚糖酶的稳定性及稳定化 (6) 1.4β-甘露聚糖酶的应用 (7) 1.4.1石油钻采 (7) 1.4.2饲料添加剂 (7) 1.4.3食品保健 (7) 1.4.4造纸工业 (8) 1.4.5纺织工业 (8) 1.4.6工具酶 (8) 1.5研究目的和研究内容 (8) 1.5.1研究目的 (8)
1.5.2研究内容 (9) 第二章枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的产生及性质 (9) 2.1实验仪器与材料 (9) 2.1.1实验仪器与设备 (9) 2.1.2试剂 (10) 2.1.3菌种 (10) 2.1.4培养基 (11) 2.2实验方法 (11) 2.2.1粗酶液的制备 (11) 2.2.2酶活的测定 (11) 2.2.3温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (13) 2.2.4不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 (13) 2.2.5反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (13) 2.2.6激活剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (14) 2.2.7防腐剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (14) 2.2.8金属离子螯合剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (14) 2.3实验结果与分析 (14) 2.3.1温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (14) 2.3.2不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 (15) 2.3.3反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (16) 2.3 反复冻融情况下酶的稳定性 (16) 2.3.4保护剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 (16)
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶（POD ）活性测定 【实验原理】 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。 【实验试剂】 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中] 【方法步骤】 （1）、粗酶液的提取 称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。 （2）、酶活性的测定 取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。 表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表 4.结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。 POD 总活性[u/g(FW)]= 式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。其中 △470=ACK-AE 比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。 ACK ——照光对照管的吸光度。 AE ——样品管的吸光度。 Vt ——样品液总体积，mL 。 FW t V . V A T ? ? ? ? 1 470 01 0 ?