RP-HPLC 法同时测定12 种植物油中的3 种甾醇含量
RP-HPLC 法同时测定12种植物油中的3种甾醇含量
王梦丽,冯亚男,谢红英,陈芙蓉,孙嘉茵,李宇茜,徐小平
（四川大学华西药学院，
四川成都610041）摘要:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)建立同时测定植物油中菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇含量的方法。
采用C8柱(250mm×4.6mm×5μm)为色谱柱,流动相A 相为乙腈,B 相为水,通过梯度洗脱方式,以流量为1mL/min,紫外检测波长210nm 对植物油中菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇进行分离检测。结果表明,菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的质量浓度范围分别为5.12~101.4,5.08~101.6,5.09~101.8μg/mL 时,3个甾醇的线性关系良好(线性方程分别为y =3699x -5454,y =4951x +8889,y =3994x -3800;相关系数r 2分别为0.9989,0.9999,0.9994),检测限为2.5μg/mL,平均回收率分别为99.79%~100.6%,98.17%~99.80%以及97.76%~102.24%,进样精密度(n =6)分别为2.29%,1.66%,2.12%,重复性RSD 分别为2.49%,1.78%,2.72%,稳定性RSD 分别为1.95%,2.56%,2.40%。通过对12种植物油中3种甾醇含量进行同时测定,表明相对于气相色谱法(GC),采用HPLC 法具有更稳定、更准确、更简便等特点,是同
时检测植物油中菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的较好方法。关键词:植物油；菜油甾醇；豆甾醇；β-谷甾醇；反相高效液相色谱文献标志码:A
文章编号:1674-5124(2016)04-0060-05
Determination of three sterols in vegetable oils by RP-HPLC
WANG Mengli ，FENG Ya ’nan ，XIE Hongying ，CHEN Furong ，SUN Jiayin ，LI Yuqian ，XU Xiaoping
（West China School of Pharmacy ，Sichuan University ，Chengdu 610041，China ）
Abstract:A RP-HPLC method is established to determine the contents of campesterol ，stigmasterol
and β-sitosterol in 12types of vegetable oil.A C8column （250mm×4.6mm×5μm ）is used as chromatographic column ，acetonitrile was used as mobile phase A ，and water as phase B for gradient elution.Three sterols are detected simultaneously under the conditions of 1mL/min flow rate and 210nm -detection wavelength.The results show that the concentration ranges of campesterol ，stigmasterol and β-sitosterol are 5.12-101.4μg/mL ，5.08-101.6μg/mL and 5.09-101.8μg/mL
It indicates a good linear relationship （linear equations ：y =3699x -5454，y =4951x +8889and 994x -3800；correlation coefficients ：0.9989，0.9999and 0.9994）.The limit of detection is μg/mL;the recovery of the three components is 99.79%-100.6%，98.17%-99.80%and 97.76%-102.24%respectively.Sampling precision （n =6）is 2.29%，1.66%and 2.12%；repeatability RSD is 2.49%，1.78%and 2.72%;and stability is 1.95%，2.56%and 2.40%.Compared to gas chromatography ，HPLC method is more accurate ，more stable and much simpler.It is a better method to determine campesterol ，stigmasterol and β-sitosterol in vegetable oil.Keywords:vegetable oil ；campesterol ；stigmasterol ；β-sitosterol ；RP-HPLC
收稿日期:2015-11-10;收到修改稿日期:2015-12-27
作者简介:王梦丽（1991-），女，湖北松滋市人，硕士研究生，专业方向为药物质量控制。通讯作者:徐小平（1962-），男，四川宜宾市人，副教授，硕士，主要从事药物质量控制研究。
中国测试
CHINA MEASUREMENT &TEST
Vol.42No.4April ，2016
第42卷第4期2016年4月doi :10.11857/j.issn.1674-5124.2016.04.013
第42卷第4期成分甾醇质量浓度/(μg ·mL -1)菜油甾醇 5.12,10.24,20.48,40.96,81.92,101.40豆甾醇
5.08,10.16,20.32,40.64,81.28,101.60β-谷甾醇 5.09,10.18,20.36,40.72,81.44,101.80
表1系列混合对照品溶液质量浓度
0引言
植物甾醇是一类植物活性成分,具有调节免疫、降低血脂和胆固醇、抗肿瘤、抗氧化以及护肤等功能。Sriraman 等[1]研究发现,竹叶中的植物甾醇具有很大的雌激素活性。Cynthia T.Srigley 等[2]测定了市场上一些食品以及食品添加剂中5种主要植物甾醇的含量,从而为美国食品药品监督管理局(FDA)对于植物甾醇治疗冠心病的疗效提供了数据支持。目前研究已鉴定出200多种植物甾醇[3],包括β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇等;其中β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇是植物中含量最多的甾醇[4]。总之,植物甾醇具有十分独特的生理活性,在医药[5]、化妆、食品[6]等行业中应用广泛。
植物甾醇是一类以环戊烷全氢菲为骨架的三萜类化合物,多数甾醇双键在C-5位上,而在C-3位存在羟基,且羟基是其主要的活性基团[7]。由于甾醇的化学结构非常相似,而且部分以甾醇酯(脂肪酸酯和酚酸酯)的形式存在[8],因此需要对甾醇样品进行特殊处理且配合适合的检测方法,才能对甾醇含量进行完整的分析测定。
目前,植物甾醇分析的主要流程通常是脂质分离,加碱皂化,甾醇衍生化[9]等。在前处理方法中,最早使用溶剂结晶[10]、超声波辅助萃取、皂化等方法,随着科技的发展,超临界流体萃取[11]、分子蒸馏法[12]等新兴手段也逐渐运用到了甾醇的提取中。对于甾醇的检测方法来说,运用薄层色谱法、气相色谱法以及高效液相色谱法对甾醇的研究取得了重大进展。薄层色谱法由于操作繁琐,显色后不稳定,仍难以满足现代分析的要求。气相色谱法虽分辨率高,热稳定性好[13],但需要进行衍生化,同时操作温度较高,测量过程中可能会破坏样品分子结构[9],因此对于甾醇的测量会产生一定影响。而高效液相色谱法操作简便,结果可靠,稳定性好,能够与不同的检测器联用从而对不同物质中的植物甾醇进行分析[14],且不需要对甾醇进行衍生化即可直接进样。
本文首次采用反相高效液相色谱法对常见的12种植物油中菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇含量进行了测定,以期对植物油中植物甾醇的研究提供参考。
1实验部分
1.1
仪器与试药
LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津公司);CPA225D 型电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);B-220型恒温水浴锅(上海雅荣生化设备仪器有限公司);KL10260D 型超声波清洗机;TGL-16G
型离心机(上海安亭科学仪器厂)。标准品:菜油甾醇和β-谷甾醇(成都市普思生物科技股份有限公司,纯度:>98.5%);豆甾醇(北京世纪奥科生物技术有限公司,纯度:>95%)。乙腈(广东光华化学试剂有限公司,色谱纯),其他试剂均为分析纯。亚麻籽油、紫苏油、小麦胚芽油、沙棘油、火麻籽油、青刺果油、橄榄油、杏仁油、葡萄籽油、山茶籽油以及月见草油样品经市售获得,清脉油由成都悟道科技有限公司提供。1.2溶液配制
1)对照品溶液。分别称取菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇对照品适量于10mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,于4℃下冷藏备用。
2)供试品溶液。取约1.0g 样品油于锥形瓶中,加入2.0mol/L 氢氧化钾-乙醇溶液10mL [7],在沸水浴中皂化30min,冷却后加入水10mL,并移入分液漏斗中,用10mL 正己烷分两次萃取,合并萃取液,精密量取萃取液2mL,挥干,用甲醇定容于10mL 容量瓶中,用0.2μm 微孔滤膜过滤,用于HPLC 进样。1.3色谱条件
色谱柱:Agilent C8(250mm×4.6mm×5μm);流动相:A 相为乙腈,B 相为水,采用梯度洗脱,0~120min 75%~85%A 相,120~160min 85%A 相;流量:1mL/min;检测波长:210nm;柱温:35℃;进样量:20μL。在上述条件下,对照品以及样品色谱图见图1。结果表明,此条件下菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的分离度均大于1.5,拖尾因子均在1.0左右,达到了定量分析的要求,故该方法可用于上述3种成分的含量测定。
2方法与结果
2.1线性关系试验
分别量取1.2项下3种甾醇对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,2.0mL 于10mL 容量瓶中,加甲醇稀释成一定梯度的系列混合对照品溶液,如表1所示。分别精密量取系列对照品溶液20μL,按照1.3项下色谱条件进行测定,分别以3种植物甾醇质量浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标进行回归分析,得出回归方程以及相关系数见表2。2.2精密度试验
分别取菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇对照品溶液,重复进样,记录峰面积,计算RSD 值。结果表明
王梦丽等:RP-HPLC 法同时测定12种植物油中的3种甾醇含量
61
中国测试2016年4月
编号样品总甾醇/(mg ·g -1)菜油甾醇/(mg ·g -1)豆甾醇/(mg ·g -1)
β-谷甾醇/(mg ·g -1)
1小麦胚芽油 5.689 1.421±2.30.395±1.93.873±0.92火麻籽油 1.8980.604±2.10.552±3.20.742±2.33亚麻籽油 1.5210.824±1.70.315±2.10.382±1.84清脉油
1.3500.358±0.70.209±
2.9
0.783±2.75山茶籽油 1.169-- 1.169±2.66沙棘油 1.047-- 1.047±2.57月见草油0.9140.182±1.50.292±2.50.440±3.48葡萄籽油0.9080.137±3.40.150±1.30.621±1.69
橄榄油0.5690.284±1.8
-0.285±4.210杏仁油0.4670.096±3.70.025±2.1
0.346±3.111紫苏油0.455-0.202±2.80.253±1.912青刺果油0.25
--0.250±1.7表4
12种植物油中3种植物甾醇的含量(n =3)
成分回归方程r 2菜油甾醇Y =3699X -54540.9989豆甾醇
Y =4951X +88890.9999β-谷甾醇Y =3994X -3800
0.9994
线性范围/(μg ·mL -1
)
5.12~101.45.08~101.65.09~101.8检出限/(μg ·mL -1
)
2.52.52.5
表23种植物甾醇的线性回归方程
菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇峰面积RSD 值分别为
2.29%,1.66%,2.12%,说明该方法精密度良好。2.3重复性试验
称取杏仁油适量,按照1.2项下供试品制备方法进行处理,按照1.3项下的色谱条件进样,平行测定5次,记录峰面积,并计算RSD 值。结果显示菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇峰面积RSD 值分别2.49%,1.78%,2.72%。2.4稳定性试验
称取杏仁油适量,按照1.2项下供试品制备方法进行处理,按照1.3项下的色谱条件,分别于0,2,4,6,8,12h 进样,记录峰面积,计算RSD 值。结果显示供试品中菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇峰面积的RSD 值分别为1.95%,2.56%,2.40%,表明供试品溶液在12h 内稳定。
2.5加样回收率试验
取杏仁油适量,精密称定,加2.0mol/L 氢氧化钾-乙醇溶液稀释,制成9份均分为3组,分别加入3个不同水平的菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇对照品混合液,按照1.2项下供试品制备方法进行处理,1.3项下的色谱条件测定,记录色谱图,计算得加样回收率,如表3所示。
2.6
样品测定
以1.2项下方法制备供试品溶液,测得12种植物油中3种植物甾醇含量结果如表4所示,色谱图见图2。
待测物
原有量/μg
平均加入量/μg
平均测得量/μg
平均回收率/%
RSD/%菜油甾醇117.04102.40220.09100.60.44117.04
128.00245.60100.4117.04153.60270.3199.79豆甾醇
31.1835.5666.0998.170.8331.1843.1874.2799.8031.1850.8081.3598.75β-谷甾醇300.42229.05534.61102.24 2.69
300.42
279.95587.80102.65300.42330.85623.8597.76表3
方法的平均加样回收率(n =3)
时间/min
1.菜油甾醇;
2.豆甾醇;
3.β-谷甾醇。
A.植物甾醇对照品;
B.样品加标;
C.样品。
图1植物甾醇对照品、样品及样品加标色谱图
62
第42卷第4期
时间/min
图212种植物油样品色谱图
3讨论
由于植物中的部分甾醇以甾醇酯的形式存在,要进行色谱检测必须先水解成游离甾醇。同时,由于植物甾醇存在于复杂的植物基质中,许多不皂化物如游离脂肪酸、甘油酸酯、胶质以及蜡质等都会对植物甾醇的分离检测产生影响[15];因此,有必要将样品经过一定的处理后再进行测定。本实验在甾醇提取过程中,确定皂化条件为100℃皂化30min。
菜油甾醇和豆甾醇的化学结构非常接近,豆甾醇仅在支链上比菜油甾醇多出了一个甲基,分子量相差12,是分离中的难点。在等度洗脱下,不同的流动相皆不能有效分离菜油甾醇和豆甾醇,同时也不能分离谷甾醇与附近的杂质。采用梯度洗脱,3种植物甾醇得到了有效分离,分离度达1.5以上,满足含量测定要求。
由表4可知,12种植物油中均含有β-谷甾醇,但3种甾醇含量分布各有不同。其中,小麦胚芽油中无论是总甾醇量还是β-谷甾醇量和菜油甾醇量皆最高,总甾醇量是其他油甾醇量的5倍。甾醇含量最少的为青刺果油,仅含有少量的β-谷甾醇。同时,豆甾醇在12种植物油中含量普遍不高,而沙棘油、山茶籽油以及青刺果油中仅含有β-谷甾醇,山茶籽油中β-谷甾醇含量较多达到1.169mg/g。值得注意的是,清脉油即多种油组成的混合油,其总甾醇量排在表中的第4位,达到1.35mg/g,菜油甾醇和谷甾醇均排在第4位,豆甾醇排在第5位,表现出混合后的清脉油在甾醇的分布上具有较好的均衡性和高品质性。由于β-谷甾醇具有抗氧化、抗感染、免疫调制、退热以及抗肿瘤的作用,对血糖的控制能起到很好的作用[16],豆甾醇对于肝癌细胞也有一定的控制作用[17];因此,以菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇为测量指标来对植物油进行品质评价是十分可行的。
4结束语
综上,本文建立了高效液相色谱法对植物油中的菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的同时定量方法,具有操作简便、灵敏度较高、专属性较强和准确度较高等特点。能够较好地展现出12种常见植物油中3种甾醇的分布规律,显示出不同植物油中甾醇含量不同,进而说明食用植物油营养价值的差异性。本方法可为植物油的质量控制提供甾醇指标的参考,对提高食品质量标准具有现实意义。
参考文献
[1]SRIRAMAN S,RAMANUJAM G M,RAMASAMY M K, et al.Mohankumar.Identification of beta-sitosterol and stigmasterol in Bambusa bambos(L.)Voss leaf extract using HPLC and its estrogenic effect in vitro[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2015(115): 55-61.
[2]SRIGLEY C T,HAILE E A.Quantification of plant sterols/stanols in foods and dietary supplements containing added phytosterols[J].Journal of Food Composition and Analysis,2015(40):163-176.
[3]倪红玉,温超,周岩民.植物甾醇的乳化及其应用研究进
展[J].中国油脂,2012,37(2):72-74.
[4]MOREAU R A,WHITAKER B D,HICKS K B.Phy?tosterols,phytostanols and their conjugates in foods: structural diversity,quantitative analysis and health-pro?moting uses,Prog[J].Lipid Res,2002(41):457-500. [5]KLINGBERG S,ELLEGARD L,JOHANSSON L,et al. Inverse relation between dietary intake of naturally oc?curring plant sterols and serum cholesterol in northern sweden[J].Am J Cli Nutr,2008,87(4):993-1001.
王梦丽等:RP-HPLC法同时测定12种植物油中的3种甾醇含量63
中国测试2016年4月
[4]BERGWERFF A A,SCHERPENISSE P.Determination of residues of malachite green in aquatic animals[J].J Chromato-graphy B,2003(78):351-359.
[5]SRIVASTAVA S,SINHA R,ROY D.Toxicological effects of malachite green[J].Aquatic Toxicology,2004,66(3): 319-329.
[6]李宁.孔雀石绿对健康的影响[J].国外医学:卫生学分册, 2005,32(5):262-264.
[7]李永生,刘艳辉.禁用药物孔雀石绿的毒性、危害及控制
措施[J].吉林水利,2010(5):100-102.
[8]莫利,杨迎春,韩静,等.分散液液微萃取-分光光度法测
定环境水样中孔雀石绿[J].光谱实验室,2011,28(1):205-209.
[9]钱蓓蕾,王媛,蔡友琼.孔雀石绿快速检测试剂盒的比较
研究以及在水产品监控中的应用[J].现代渔业信息,2011, 26(10):19-21.
[10]叶四化,陆超华,谢海平,等.高效液相色谱双波长法同
时测定水产品中孔雀石绿和隐性孔雀石绿[J].分析科学学报,2007,23(1):69-72.
[11]龙朝阳,朱炳辉,许秀敏,等.高效液相色谱柱后衍生法
测定鱼肉中孔雀石绿及隐性孔雀石绿的含量[J].分析测试学报,2010(29):13-15.[12]水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定:GB/T19857———2005[S].北京:中国标准出版社,2005. [13]水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色
谱荧光检测法:GB/T20361——
—2006[S].北京:中国标准出版社,2006.
[14]水产品中孔雀石绿残留量的测定液相色谱法:SC/T3021———2004[S].北京:中国标准出版社,2004. [15]张晓红,呼竞,张新,等.高效液相色谱-库仑电化学法在
维生素E检测中的应用[J].哈尔滨医药,2010,30(3):1-3.
[16]胡江涛,盛毅,方智.分散固相萃取-高效液相色谱法快
速检测猕猴桃中的氯吡脲[J].色谱,2007,25(3):441-442.
[17]European Standard EN15662.Foods of plant origin-Determination of pesticide residues using GC-MS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by dispersive SPE-QuEChERS-Method[S]. European Committee for Standardization Brussels,2008.
(编辑:徐柳)
[6]DAVID K,SHIRLEY C C.Phytosterols-heaalth benefits and potential concerns:a review[J].Nutrition Research, 2005(25):413-428.
[7]杨虹,姜元荣,魏婷婷,等.食用油中植物甾醇测定方法
的优化及含量分析[J].中国粮油学报,2011,26(2):120-124.
[8]寇明钰,阚健全,赵国华,等.植物甾醇来源、提取、分析
技术及其食品开发[J].粮食与油脂,2004(8):9-14. [9]FENG S M,LIU S B,LUO Z S,et al.Direct saponi?fication preparation and analysis of free and conjugated phytosterols in sugarcane(Saccharum officinarum L)by reversed-phase high-performance liquid chromatography[J]. Food Chemistry,2015(181):9-14.
[10]李万林,钟姣姣,杨忆群,等.植物甾醇提取及分析检测
方法研究进展[J].饮料工业,2013,16(12):39-44. [11]ZHAO S,LIANG H.Study of extraction of cinnamon oils from the bark of cinnamomum cassia presl by super?critical carbon dioxide[J].Pol Chem,2006(80):99-105.
[12]MARTINELLO M,HEEKER G,GARMEN P M.Grape seed oil deacidification by molecular distillation:Analysis of operative variables influence using the response surface methodology[J].Journal of Food Engineering,2007(81): 60-64.[13]赵伟,韩敬美,刘春波,等.植物甾醇的分析方法研究进展[J].分析仪器,2012(4):6-11.
[14]CARERI M,ELVIRI L,MANGIA A.Liquid chro?matography-UV determination and liquid chromatogra?phy-atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometric characterization of sitosterol and stigmas?terol in soybean oil[J].Journal of Chromatography A, 2015,935(1-2):249-257.
[15]郑奇,赵伟,刘春波,等.植物甾醇分析检测的前处理方法
研究[J].现代化工,2012,32(12):114-118. [16]IVORRA M D,OCON M P D,PAYA M,et al.Anti?hyperglycemic and insulin-releasing effects of beta-sitosterol3-beta-D-glucoside and its aglycone,Beta-sitosterol.Arch.Int[J].Pharmacodyn,Ther,1998(296):224-231.
[17]张硕,岳旺,王蕾,等.白花蛇舌草豆甾醇对肝癌细胞的体
内外抑制作用及其增殖周期、凋亡的影响[J].现代生物医学进展,2008,11(8):2016-2017.
(编辑:莫婕)
(上接第53页) 64
植物甾醇酯
植物甾醇 来源：植物油是植物甾醇含量较为丰富的食品之一，而其中玉米油中的植物甾醇含量较高。性状：本品为白色粉末，也可有酯状溶于油脂。药理用途：具有防止冠心动脉粥样硬化、促进胆固醇的降解代谢等药用和保健价值；合成维生素D3等甾类药物重要中间体；生发、养发和皮肤营养剂；化纺工业中的分散剂、柔软剂、抗氧剂等。 特点 植物甾醇，是从玉米、大豆中经过物理提纯而得，具有营养价值高、生理 植物甾醇 活性强等特点。植物甾醇可通过降低胆固醇减少心血管病的风险。其广泛应用在食品、医药、化妆品、动物生长剂及纸张加工、印刷、纺织等领域，特别是在欧洲作为食品添加剂非常普遍，广泛用于食品中以降低人体胆固醇。 植物甾醇对人体具有较强的抗炎作用，具有能够抑制人体对胆固醇的吸收、促进胆固醇的降解代谢、抑制胆固醇的生化合成等作用；用于预防治疗冠状动脉粥样硬化类的心脏病，对治疗溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有明显的疗效；可促进伤口愈合，使肌肉增生、增强毛细血管循环；还可作为胆结石形成的阻止剂。此外，植物甾醇还是重要的甾体药物和维生素D3的生产原料。 美国FDA分别对植物甾醇酯和植物甾烷醇酯的正确标识作了具体说明，对植物甾醇酯可作如下标识：“每份食物中至少含有0．65g植物甾醇酯，每天与其他低饱和脂肪酸、低胆固醇膳食一起服用两次，每天总服用量不少于1．3g植物甾醇酯，可降低心脏病发病率。
植物甾醇对皮肤具有很高的渗透性，可以保持皮肤表面水份，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，可防日晒红斑、皮肤老化，还有生发、养发之功效。可作为W/O型乳化剂，用于膏霜的生产，具有使用感好（辅展性好、滑爽不粘）、耐久性好、不易变质等特点。 植物甾醇具有良好的抗氧性，可作食品添加剂（抗氧化剂、营养添加剂）；也可作为动物生长剂原料，促进动物生长，增进动物健康。 作用功效 1、植物甾醇对人体具有较强的抗炎作用，具有能够抑制人体对胆固醇的吸收、促进胆固醇的降解代谢、抑制胆固醇的生化合成等作用。 2、用于预防治疗冠状动脉粥样硬化类的心脏病，对治疗溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有明显的疗效；可促进伤口愈合，使肌肉增生、增强毛细血管循环；还可作为胆结石形成的阻止剂。 3、植物甾醇还是重要的甾体药物和维生素D3的生产原料。美国FDA 分别对植物甾醇酯和植物甾烷醇酯的正确标识作了具体说明，对植物甾醇酯可作如下标识：“每份食物中至少含有0．65g植物甾醇酯，每天与其他低饱和脂肪酸、低胆固醇膳食一起服用两次，每天总服用量不少于1．3g 植物甾醇酯，可降低心脏病发病率。 4、植物甾醇对皮肤具有很高的渗透性，可以保持皮肤表面水份，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，可防日晒红斑、皮肤老化，还有生发、养发之功效。可作为W/O型乳化剂，用于膏霜的生产，具有使用感好（辅展性好、滑爽不粘）、耐久性好、不易变质等特点。 生命钥匙 1、植物甾醇，起着有效维持体内胆固醇平衡的作用，被科学家们誉为生命的钥匙。那么植物甾醇是如何“打败”坏胆固醇的呢？北京大学公共卫生学院李可基教授打了个很有趣的比方。植物甾醇和胆固醇是一对冤家，但老天爷给他俩只安排了一个座位。它们进入人体，见面就打。先是在消化环节，就像我们挤地铁，从”安检“时就开打，在这个过程中，植物甾醇会把坏胆固醇挤出队列，不经安检你就上不了地铁。第二步是进入肠系统，哥俩还会打，有植物甾醇在，坏胆固醇进的就没有那么痛快。等到第三步，在细胞环节，这哥儿俩还在打，打来打去，最终结果是坏胆固醇吸收减少，也就减少了血胆固醇。 2、据专家介绍，坏胆固醇占到座位后不是坐着不动，而是坐一坐，再站一站，是动态的，而植物甾醇的屁股沉，如果占住位置，很少会动。这样，二者在人体内的竞争中，植物甾醇一旦占据坏胆固醇的位置，便能轻松让其无容身之地，离开人体。
植物组织蛋白提取方法
植物蛋白质提取方法总汇 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
三、组织：肠黏膜 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量） 倒转混匀，置室温10min 离心：12000 g，10min，4度，弃上清 加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量） 振荡，置室温20min 离心： 7500g，5 min，4度，弃上清 重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次 沉淀中加入100％乙醇 2ml 充分振荡混匀，置室温20 min 离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀 1％SDS溶解沉淀 离心：10000g，10min，4度 取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。 解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。 四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根 1、200毫克样品置于冰上磨碎 2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清 3、重复离心5min
植物甾醇的开发与利用
《天然产物》课程论文 题目：植物甾醇的开发与应用姓名：张利娟 学号：1108321210005 专业年级：11级食品科学 学院：食品学院
植物甾醇的开发与应用 摘要：植物甾醇是一种天然化学物质，广泛存在于各类植物中，对人体具有重要的生理功能，在预防心血管疾病、防治癌症等方面具有重要的作用。植物甾醇具有降低胆固醇、预防动脉粥样硬化、抗炎和退热作用以及类激素功能，因此近年来，开发功能性甾醇制品受到了越来越多的重视。本文综述了甾醇在国内外的研究现状、生理功能、提取方法，以及在食品、饲料、化妆品等工业中的应用，最后对植物甾醇的利用与开发前景进行了展望。 关键词：植物甾醇生理功能应用 The development and application of Plant sterol Abstract: plant sterol is a natural chemical substances, exist widely in all kinds of plants, it has an important physiological function in human body, it plays an important role in cardiovascular disease prevention, and cancer prevention . Plant sterol can reduce cholesterol content, prevent atherosclerosis, anti-inflammatory and antifebrile action and kind of hormonal function, so in recent years, the development of functional sterol products has gained more and more attention. This paper summarized the research situation of sterol in the domestic and foreign,physiological function and extraction methods, as well as its application in food, feed, cosmetics, finally it give a prospect for the use and development of phytosterol. Keywords: Plant sterol Physiological Function Application 植物甾醇(phytosterol or plant sterol)是植物中的一种活性成分，广泛存在于各种植物油、坚果、植物种子、蔬菜水果中，因此，人们从日常的膳食中就可以得到植物甾醇的补充，它是一种重要天然的甾醇资源。人们通常膳食的植物甾醇水平约为200～400 mg/g，主要供给的食物有植物油、人造奶油、蔬果，在植物油中，以米糠油植物甾醇含量最高[1]。植物甾醇为类固醇化合物，其化学结构及生物功能类似于胆固醇，两者差异之处仅在于侧链，可用于体内胆固醇的降低。此外，植物甾醇还具有抗癌、抗炎、抗氧化等功能，已被广泛的应用于食品、制药、保健品等行业。近年来，通过对食物成分科学分析和植物甾醇有关生理学效应研究的不断发展，特别是对植物甾醇保健功能认识不断深化，使植物甾醇研发渐成热点，功能性植物甾醇食品产业也快速发展。 1 国内外研究现状 植物甾醇在国外的化妆品、食品油脂、保健食品、动物保健品及饲料添加物等行业的应用日益广泛。目前芬兰、美国、荷兰、澳大利亚、英国等多个国家相关机构已认可植物甾醇的安全性，在食品领域应用趋向主要是作为预防心脑血管疾病的功能性活性成分，目前其市场规模已达5000万～6000万美元。据悉，美国食品和药物管理局已推荐植物甾醇为“降低血脂、预防动脉硬化”的天然保健食品新原料，已经有添加植物甾醇的蛋黄酱、甜品、酸奶、牛奶、食用油等产品面世，添加植物甾醇食品在欧美等国家正形成一股新兴的健康热潮[2]。 我国是油料生产和消费大国，油脂工业副产物中蕴藏着极为丰富的植物甾醇资源。随着人民生活水平的提高，油脂精炼工业飞速发展，按精炼能力与植物甾
气相色谱法测定食用菜籽油中植物甾醇的组成及含量(精)
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2006,34(19):4830-4831 责任编辑罗芸责任校对 罗芸 气相色谱法测定食用菜籽油中植物甾醇的组成及含量 彭浩,陈文强,邓百万(陕西理工学院陕西省资源生物重点实验室,陕西汉中723001) 摘要采用毛细管气相色谱法,对不同品种、压榨工艺的3种食用菜籽油中植物甾醇的组成及含量进行了分析。结果表明,3种食用菜 籽油中均含有菜籽甾醇、菜油甾醇和β2谷甾醇,均未检测到豆甾醇;其甾醇总含量以双低脱皮冷榨油最高,脱皮冷榨油次之,最低为普通 2谷甾醇含量最高。成品油。同时,在所有样品中测出的3种甾醇中均以β 关键词气相色谱法;食用菜籽油;植物甾醇;组成;含量中图分类号O657.7+1 文献标识码A文章编号0517-6611(2006)19-4830- 02AnalysisofthePlantSterolComponentandContentofEdibleRapeOilwithGasCheromatog raphy eyBio2resoucesLaboratory,ShaanxiUniversityofTechnology,Hanzhong,Shaanxi723001) PENGHaoetal(ShaanxiK Abstract Theplantsterolcomponentofthreesortsoflocalediblerapeoilsaswellasthesqueezingcraftwas analyzedandthecontentwasdeterminedwithcapillarygaschromatography.Theresultindicat edtheyallhadBrassicasterol,Campesterolandβ2sitosterol,however,andnostigmasterolwas discov2ered.Furthermore,thesterolscontentwasthebiggestindouble2lowremovedseedskin andcoldlyextractedoil;secondaryinremovedseedskinandcoldlyextractedoilandtheminimu minthegene ralrefinedoil.Ofallthethreespeciesanalyzed,thecontentoftheβ2sitosterolmaxi mum.Keywords Gaschromatography;Ediblerapeoil;Plantsterol 植物甾醇是一种三萜醇类化合物,广泛存在于植物中,尤其在植物油不皂化物 和植物油精炼时脱臭馏出物中含量较高,。天然植物甾醇种类繁多,醇以及β2谷甾醇,,发,减轻心血管疾病的发生有显著意义,[2.3]。最近,国际营养学会推荐的未来十大功能性营养成分中就包括植物甾醇[4,5]。
植物甾醇综述
副产物综合利用 植物甾醇的提取与功能研 究进展 学生姓名： 学号： 年级： 授课教师： 专业： 中国·大庆
1植物甾醇的结构、来源与性质 甾醇是甾族化合物中的一种，分子的基本骨架(主体甾核称为环戊烷多氢菲核)有三个六元环 和一个五元环组成。C-3位上连有一个羟基,C-17位连有由8~10个碳原子构成的侧链,多数甾醇C-5位为双键。由于C-17位上的R不同和C-3位上羟基结合的物质不同,甾醇的种类也不同。常见游离甾醇有胆甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇等结构形式]1[，见图1-1。 植物甾醇作为植物细胞的重要组分，在根、茎、叶、果实、中均有存在。已发现甾醇在植物中主要有两种存在形式，即游离甾醇、甾醇酯。植物油脂中以小麦胚芽油、玉米胚芽油、米糠油等含量最高]2[。植物甾醇与胆固醇有着相似的化学结构，然而人类对于胆固醇的吸 收远远多于植物甾醇]3[。 甾醇通常为片状或粉末状白色固体，经溶剂结晶处理的甾醇为白色鳞片状或针状晶体，其中在乙醇溶剂中结晶形成针状或菱片状，在二氯乙烷溶剂中形成针刺状或长棱晶。甾醇分子中，碳原子数一般为27至31，分子量约为386至456。甾醇熔点较高，都在100℃以上最高达215℃。甾醇的相对密度略大于水，不溶于水，可溶于多种有机溶剂。 植物甾醇的物理化学性质主要表现为疏水性，但是因为其结构上带有羟基基团，因而又具有亲水性。在同一个物质结构中同时具有亲水基团和亲油基团意味着该物质具有乳化性。植物甾醇的乳化性可以通过对羟基基团进行化学改性而得到改善。植物甾醇具有两性的特征使得它具 有调节和控制反相膜流动性的能力]4[。 2植物甾醇的提取 从油脂下脚中去除非甾醇类物质提取街醇方法很多，其原理一般基于原料理化性质及生化反应方面差异。如物质在碱存在下可皂化性，有机溶剂中溶解度差异;菌醇和其它物质可络合性及其络合物溶解度差异;表面活性剂存在下亲水性差异;高真空条件下物质蒸气压及分子自由程差异;及物质吸附力差异等。从油脂下脚中提取街醇通常分两步进行，先从原料中提取以幽醇为主的不皂化物(粗甾醇)，然后从不皂化物中精制甾醇。本文中主要介绍两种提取方法，其 中溶剂结晶法属实验室制法，干湿皂化法属工业制法]5[。 2.1 溶剂结晶法 该法为现今油脂工程专业教材上所述的提取方法，可用于直接分离，操作较为简单。 结晶法所用的主要溶剂有:甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮和乙酸乙酯等。使用单一溶剂，
植物提取物白芸豆提取物
T 中国医药保健品进出口商会团体标准 T/CCCMHPIE 1.26—2018 ICS 11.120C 25 植物提取物白芸豆提取物 Plant extract ——White Kidney Bean Extract 中国医药保健品进出口商会 发布 2018-07-01发布 2018-07-15实施
前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20004.1—2016给出的规则起草。 本标准由中国医药保健品进出口商会提出。 本标准由中华人民共和国商务部归口。 本标准由中国医药保健品进出口商会国际商务标准化技术委员会负责解释。 本标准负责起草单位：云南天保桦生物资源开发有限公司。 本标准主要起草人：钟毓、薛佳、孙艳、迟永楠、李丽波、何绍凯、张武松、任英。
植物提取物白芸豆提取物 1范围 本标准规定了白芸豆提取物的技术要求、检验方法、检验规则、包装、运输和贮存要求。 本标准适用于白芸豆的种子经粉碎、水提取、分离、干燥等工序得到的提取物。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数 GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数 GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB4806.1食品安全国家标准食品接触材料及制品通用安全要求 GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定 GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定 GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定 GB5009.11食品安全国家标准食品中总砷的测定 GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定 GB5009.17食品安全国家标准食品中总汞的测定 GB5009.19食品中有机氯农药多组分残留量的测定 GB5749生活饮用水卫生标准 《中华人民共和国药典（2015版）》第四部通则2351黄曲霉毒素测定法 3技术要求 3.1工艺要求 3.1.1植物原料 本品以豆科植物菜豆属多花菜豆种Phaseolus coccineus Linn.白芸豆种子为原料。 3.1.2工艺过程 原料→粉碎→水提取→分离→干燥→产品
植物甾醇报告
植物甾醇国内外市场状况 1.植物甾醇用途 植物甾醇是一种具有生理价值的物质。它对人体具有重要生理活性作用，具有独特的消炎、退热及抗肿瘤等功能，用作临床医药已在许多国家的药典中记载。能够抑制人体对胆固醇的吸收，促进胆固醇障碍代谢，抑制胆固醇的生化合成，对冠心病、动脉粥样硬化、溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有显著的预防和治疗效果。因此植物甾醇在食品饮料、饮食增补剂、药品、化妆品和纺织等众多行业中有着广泛的用途。 目前在欧美广泛使用于蛋黄酱、甜品、酸奶、牛奶、食用油、饮料等；同时以片剂、胶囊直接作为营养保健品使用。在日用化工领域作为W/O型乳化剂，用于膏霜生产，对皮肤有温和的渗透性，可以保持皮肤表面水分，促进皮肤新陈代谢，抑制皮肤炎症、老化；在医药领域应用于甾体原料药关键中间体4-AD(范称)，对甾体激素行业有举足轻重的地位。化纺工业中的分散剂、柔软剂、抗氧剂等。印刷行业作为油墨颜料的分散剂, 纺织工业作为柔软剂,食品工业作为防止煎炸油劣变的抗氧剂。在其他领域如光学产品、饲料、油漆、颜料、树脂、造纸、杀虫剂及除草剂等均有不同程度的应用。 2.植物甾醇法律地位 植物甾醇的安全性已经得到了包括我国在内的世界多个国家和地区的认可。 1999年，美国FDA批准添加植物甾醇及酯的食品可使用“有益健康”标签。 1999年，日本农林省批准植物甾醇、植物甾醇酯、植物甾烷醇、植物甾烷醇酯为调节血脂的特定专用保健食品FOSHU 的功能性添加剂。 2000年，美国FDA发布的健康公告称：“植物甾醇及酯、植物甾烷醇及酯，能通过降低血中胆固醇水平而有助于减少冠心病的危险。每天从膳食中摄入 1.3g 植物甾醇或 3.4g 植物甾烷醇能达到明显降低胆固醇的作用”。 2003年2月，美国FDA 批准了佳吉公司植物甾醇有利于心脏健康的健康声称，正式给予植物甾醇市场“合法地位”。 2004年，欧盟委员会批准植物甾醇和植物甾醇酯在几类特定食品中使用，如黄油涂酱、牛奶类产品及优酪乳类产品。 2006年，澳大利亚颁布两份新的食品标准。第一项标准将允许澳大利亚和新西兰消费者获得各种以植物甾醇强化的食品，另一项标准将使生产商能够在澳大利亚和新西兰制造配
植物甾醇液相检测方法
本方法适用于保健食品中植物甾醇的测定 本方法谷甾醇和豆甾醇的检出限为0.02μg 本方法线性范围为0.1~0.5mg/ml 1.方法提要 试样中的谷甾醇和豆甾醇经提取后在高效反相色谱C18柱分离，用紫外检测器检测，以外标法定量谷甾醇和豆甾醇的含量。 2.仪器 高效液相色谱仪，带紫外检测器。 3.试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 （1）异丙醇：色谱纯。 （2）乙腈：色谱纯 （3）乙醇。 （4）β—谷甾醇对照品：Fluka公司（纯度≥90%） （5）豆甾醇对照品：Fluka公司（纯度≥90%） （6）谷甾醇和豆甾醇混合标准溶液：精度称取β-谷甾醇和豆甾醇对照品0.0100g，移入 10ml容量瓶中，加入乙醇，超声波振荡助溶，并用乙醇定容到10ml，此为浓度1.0mg/ml的标准储备液。 4.测定步骤 （1）样品处理：称取均匀样品0.25g（精确到0.1mg），置于50ml容量瓶中，加入40ml乙醇，超声波振荡60min取出，冷却后用乙醇定容至刻度，摇匀后经0.45μm微孔膜过滤，清液 待分析。 （2）标准工作曲线绘制：精度吸取β-谷甾醇和豆甾醇标准溶液（1.0mg/ml）1.0、2.0、5. 0ml，分别置于10ml容量瓶中，用乙醇定容，摇匀。分别取10μl标准工作系列溶液进样分析，以测得的β-谷甾醇和豆甾醇的峰面积，分别对β-谷甾醇和豆甾醇的浓度绘制标准曲线。 （3）色谱条件 色谱柱：ODSC18液相色谱柱，4.6mm×250mm，5μm。 流动相：乙腈＋异丙醇（70＋30，V/V）。 流速：1ml/min。 柱温：室温。 紫外检测波长：210nm。 （4）样品测定：取样品滤液10μl进液相色谱仪分离测定，根据色谱峰保留时间定性，以外 标峰面积法进行定量。 5、结果计算 根据待测样品色谱峰面积，由标准曲线回归方程式的样液中β—谷甾醇和豆甾醇含量，计算出样品中的含量。 样品中β—谷甾醇和豆甾醇含量按下式进行计算 X
欧洲药典植物甾醇检测方法
PHYTOSTEROL Phytosterolum DEFINITION Natural mixture of sterols obtained from plants of the genuses Hypoxis. Pin us and Picea. Content: minimum 70.0 per cent of p-sitosterol (dried substance). CHARACTERS Appearance : white or almost white powder. Solubility: practically insoluble in water, soluble in tetrahydrofuran, sparingly soluble in ethyl acetate? IDENTIFICATION A.Mix 1 ml of acetic anhydride R with 0.5 ml of solution S (see Tests). After the addition of 0.1 ml of sulphuric acid R a red colour is produced which changes rapidly to violet then to blue and finally to green. B.Examine the chromatograms obtained in the assay. Results: the principal peak in the chromatogram obtained with the test solution is similar in retention time to the peak in the chromatogram obtained with reference solution (b)? TESTS Solution S. Dissolve 1.0 gin tetrahydrofuran R and dilute to 20 ml with the same solvent Appearance of solution. Solution S is clear (227) and not more intensely coloured than reference solution Y6(222、Method II}. Acidity or alkalinity. Shake 0.20 g with a mixture of 4.0 ml of ethyl acetate R and 10.0 ml oi carbon dioxide-free water R for 3 min. Allow the layers to separate? To the aqueous layer add 0」ml of bromothymol bluo solution RI. If the solution is yellow not more than 0.5 ml of 0.01 M sodium hydroxide is required to change the colour to blue? If the solution is blue not more than 0.5 ml of 0.01 Mhydrochloric acid is required to change the colour to yellow. Specific optical rotation (227):■ 15 to -28 (dried substance).
植物提取物分离流程
植物提取物分离流程 一、浸膏： 1．植物样品粉碎, 留样200-500g，将样品直接用氯仿浸提3次，每次7天，抽滤后将溶剂减压回收，得到氯仿部分浸膏； 2．氯仿浸提后的残渣用甲醇浸泡3次，每次7天，然后抽滤回收溶剂得到甲醇部分浸膏； 3．在浸提中，浸提次数至少3次，根据滤液的颜色判断是否需要增加浸提次数，最多浸提4次。 二、粗分离： 1．氯仿部分的分离：氯仿部分视全部浸膏数量决定留取多少，一般留样5g左右，以备活性筛选，如果浸膏大于100g，留样10g左右。 2．留样后，将浸膏用丙酮溶解，以硅胶60-100目拌样，样品与硅胶的比例一般为1：1，但也不绝对，要以样品完全被硅胶吸附，但又不浪费为原则； 3．第一次柱层析使用200-300目的硅胶，硅胶用量与样品比例为30：1，如果样品量很大，则选择10：1左右，采用干法装填柱子 4．装填好硅胶柱后，采用石油醚洗脱，一般洗脱3-5个柱体积（100g硅胶就洗脱300-500ml），但有时因为样品超载也需要经验判断是否加极性。 5．当需要增加极性时，首先选用100：1的石油醚丙酮，依照4中的操作进行，依次改变极性为80：1；60：1；40：1；20：1：10：1；8：2：7：3当溶剂比例达到8：2的时候，就需要TLC检测判断是否再进行7：3的比例了。一般到达10：1的时 候，氯仿部分基本上就可以结束洗脱； 6．甲醇部分也同氯仿部分，需要在拌样前留取样品，然后拌样上200-300目的硅胶柱（干法装填）作同氯仿部分，当完成3-5个柱子体积的洗脱后，根据回收溶剂后回 收瓶中提取物的多少判断改变极性，以100：1氯仿甲醇开始，逐步过度到80：1； 60：1；40：1；20：1；10：1；8：2；7：3；当达到7：3时，需要TLC检测是否 还有样品点； 三、精分离 1．氯仿部分各个回收段用TLC检测判断是否合并，并将合并部分用不同系统的溶剂进行TLC检测选择柱子洗脱所需要的比例，一般是石油醚+乙酸乙酯系统；石油醚 +丙酮系统；系统选择好以后，用60-100目硅胶拌样（比例依旧是1：1，尽可能少 用拌样硅胶），将拌样样品用湿法上硅胶H常压柱子，装填时，硅胶H溶解在石油 醚中，并至少静置12小时。 2．用选择的系统洗脱，每次收集一个柱体积馏分，回收后转移至试管中，经验上，一般洗脱5个柱体积后就需要改变溶剂的极性，极性的改变也是逐步加大。 3．2中柱子洗脱结束后，将回收在试管中的各个样品TLC检测，以荧光、碘显色、硫酸显色判断是否合并为同一馏分，一般荧光和碘显色是辅助检测，以硫酸显色为根 本判断。 4．合并后的馏分TLC检测选择继续分离。此次分离需要用减压柱子，填料依旧是硅胶H，填料与样品比例一般是50：1，样品在TLC中以展开3-4次，rf大小在0.2-0.3 之间最合适，一般只需要洗脱30柱子体积就可以结束分离。 5．减压柱层析中已经接近为单体化合物，有时也可以得到纯品。将减压的各个馏分TLC检测是否可以进行合并，并将合并的部分上Saphdex-LH20，一般用乙酸乙酯、丙酮进行装填凝胶柱，并以装填溶剂进行洗脱，凝胶柱都是以湿法上样。 6．此时，已经在得到纯品化合物。
什么是植物甾醇
植物甾醇是一种结构和生化特性与胆固醇相似的甾醇类物质。这种“类脂肪”广泛存在于植物的根、茎、叶和果实中，在人体内不能合成，唯一的途径是通过膳食摄取。其广泛应用于医学、工业、日化、农业，是一种多用途纯天然的物质。 植物甾醇EPA(E：effect ,P：powerful,A：active)即活化强效的植物甾醇，是国内利用领先的技术活化后的一种溶解性和生物利用性高的植物甾醇，较国外同类产品有大幅提高；另外，也表示植物甾醇和EPA(二十碳五烯酸)的复方。 植物甾醇酯即酯化后的植物甾醇。由于植物甾醇疏水性和疏酯性的物理特征，其很难溶于水和脂类溶剂中，科学家将其酯化后便于作为添加剂加入到脂类饮食中。 一、植物甾醇的理化性特性 化学性质： 植物甾醇从角鲨烯经生物合成衍化而来。四个环（a，b，c，d）成反式连接，形成一个alpha平面系统。侧链和两个甲基（c—18，c—19）与环成一角度并在环平面的上方，即形成beta立体异构。此外，从c—20形成的侧链，使甾醇分子顶部和底部都产生一个平面，这就使得刚性的甾醇核与膜基质之间形成多样化的疏水相互作用。一般来说c—3位羟基具有beta立体异构。 多数甾醇和谷甾醇都有c—5位双键，并且在c—24上有甲基或乙基的取代。
豆甾醇比前两者还多一个侧链上的双键，同时c—24上和谷甾醇一样有乙基的取代。这种取代反应由反式甲基化反应形成，甲基或乙基具有alpha或beta差向（立体）异构体的醇是24alpha差向（立体）异构体，而24一甲基甾醇是alpha和beta差向（立体）异构体的混合物。植物中的这种c—24烷基化反应是特异性的。另一个植物甾醇的特征是反式c—22位双键的大量存在，顺式双键则要少的多。 物理性质： 大部分的植物甾醇是固体，如谷甾醇、菜油甾醇和豆甾醇，它们的熔点分别是140℃，157℃—158℃和170℃。侧链越大，自醇的疏水性越强。带有28或29个碳原子的植物甾醇比27碳的胆甾醇疏水性更强，加溶容量更低。侧链上的双键使甾醇具有亲水性。然而，游离甾醇和甾醇在非极性溶剂如正己烷中是可溶的，而甾醇糖昔更适合用极性溶剂来溶解。游离甾醇3位上的羟基可与脂肪酸或酚酸形成甾醇酯，或是与糖的贝位形成beta连接的甾醇糖苷或酰甾督醇糖苷。在酰基甾醇糖苷的糖的6位上可与长链脂肪酸发生酯化。 甾醇的氧化反应是甾醇在经历加工和贮藏稳定性考验中最重要的化学反应。研究的最彻底的是胆甾醇的氧化机理，5位双键甾醇都遵循这一机理，但植物甾醇的氧化产物并不清楚。 二、植物甾醇的主要生理功能-—调节血脂 1、植物甾醇调节血脂研发历史 早在上个世纪五十年代，人们就已经知道从膳食中摄入植物甾醇越多，胆固醇的吸收率就越低，血清中的胆固醇水平就越低。poollak在1953年使用谷甾醇作为药物，治疗高胆固醇症。由于当时使用的是植物甾醇晶体，溶解性和生物可利用性都比较差，因此使用的剂量很大，每天可高达259。
植物提取物工艺及检测技术
植物提取物技术工艺 编著：魏少东第一部分主要的工业提取技术 一、常规提取物方法 1、煎煮法： 简介--水做溶剂，适用于有效成分能溶于水，但又对有效成分不清楚的，且对热较稳定的药材；缺点—用水煎煮， 浸提液中除有效成分外，往往杂质较多，尚有少量脂溶性成 分，给精制带来不利。 2、浸渍法： 分类--按照提取温度和浸渍次数分为冷浸渍法、热浸渍 法和重浸渍法。缺点—静止状态，不宜用水做溶剂，通常用 不同浓度的乙醇密闭浸渍，此法不能制得高浓度的制剂。 3、渗沥法 4、回流法： 简介—用乙醇等易挥发的有机溶剂提取药材成分，将浸提液 加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷凝，重新流回进出器 中浸提药材，这样周而复始，直至有效成分回流提取完全。 二、超声波提取 三、微波提取（非电离的电磁辐射）
四、酶解细胞壁提取 主要的工业分离技术 1、树脂分离技术 2、工业萃取技术：①有机溶剂萃取技术；②二氧化碳超临界流体萃取技术；③微波萃取；④新型氯氟碳溶剂萃取—例如英国最近发明的Klea惰性溶剂，可以在低压室温下萃取，节省能源，又避免热破坏。 二、功效成分的含量检测方法（2种） 1、分光光度法（例如紫外分光光度法—UV法）：此法在国内普及较早，对于某类物质的检测都有一些经典的方法，如总黄酮的芦丁比色法、总多酚的盐酸-香草醛法、多糖的硫酸苯酚法等等；但是由于分光光度法自身的缺陷，如不能检测出总含量中各具体成分的含量比例，也不能检测出是否添加了化工合成产品，而且易受提取物中其他杂质含量影响等，其应用受到越来越多的限制。 2、高效液相色谱法—HPLC法：是一种正在普及的检测技术，在植物提取物行业的应用已逐渐成为主流手段，特别是近年来指纹图谱概念的兴起，使得更多的厂家把高效液相法作为含量测定手段，并制定HPLC指纹图谱。。
植物甾醇
植物甾醇 植物甾醇：来源：植物油是植物甾醇含量较为丰富的食品之一，而其中玉米油中的植物甾醇含量较高。性状：本品为白色粉末，也可有酯状溶于油脂。药理用途：具有防止冠心动脉粥样硬化、促进胆固醇的降解代谢等药用和保健价值；合成维生素D3等甾类药物重要中间体；生发、养发和皮肤营养剂；化纺工业中的分散剂、柔软剂、抗氧剂等。 特点：植物甾醇，是从玉米、大豆中经过物理提纯而得，具有营养价值高、生理活性强等特点。植物甾醇可通过降低胆固醇减少心血管病的风险。其广泛应用在食品、医药、化妆品、动物生长剂及纸张加工、印刷、纺织等领域，特别是在欧洲作为食品添加剂非常普遍，广泛用于食品中以降低人体胆固醇。 植物甾醇对人体具有较强的抗炎作用，具有能够抑制人体对胆固醇的吸收、促进胆固醇的降解代谢、抑制胆固醇的生化合成等作用；用于预防治疗冠状动脉粥样硬化类的心脏病，对治疗溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有明显的疗效；可促进伤口愈合，使肌肉增生、增强毛细血管循环；还可作为胆结石形成的阻止剂。此外，植物甾醇还是重要的甾体药物和维生素D3的生产原料。 美国FDA分别对植物甾醇酯和植物甾烷醇酯的正确标识作了具体说明，对植物甾醇酯可作如下标识：“每份食物中至少含有0．65g植物甾醇酯，每天与其他低饱和脂肪酸、低胆固醇膳食一起服用两次，每天总服用量不少于1．3g植物甾醇酯，可降低心脏病发病率。 植物甾醇对皮肤具有很高的渗透性，可以保持皮肤表面水份，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，可防日晒红斑、皮肤老化，还有生发、养发之功效。可作为W/O型乳化剂，用于膏霜的生产，具有使用感好（辅展性好、滑爽不粘）、耐久性好、不易变质等特点。 植物甾醇具有良好的抗氧性，可作食品添加剂（抗氧化剂、营养添加剂）；也可作为动物生长剂原料，促进动物生长，增进动物健康。 作用功效 1、植物甾醇对人体具有较强的抗炎作用，具有能够抑制人体对胆固醇的吸收、促进胆固醇的降解代谢、抑制胆固醇的生化合成等作用。 2、用于预防治疗冠状动脉粥样硬化类的心脏病，对治疗溃疡、皮肤鳞癌、宫颈癌等有明显的疗效；可促进伤口愈合，使肌肉增生、增强毛细血管循环；还可作为胆结石形成的阻止剂。 3、植物甾醇还是重要的甾体药物和维生素D3的生产原料。美国FDA分别对植物甾醇酯和植物甾烷醇酯的正确标识作了具体说明，对植物甾醇酯可作如下标识：“每份食
植物甾醇
胆固醇的克星——植物甾醇，获批新资源食品认证 植物甾醇：是一种营养素 植物甾醇是一种活性成分，在植物的根、茎、叶、果实和种子中均广泛存在，是维护血管健康不可缺少的营养素。世界心脏联盟、美国心脏学会、欧洲动脉粥样硬化学会等权威机构认为：植物甾醇可以有效降低血液中坏胆固醇的含量，降低血液粘稠度，进而降低患心脑血管疾病的风险。但如此重要的营养成分人体自身却不能合成，只能从食物中摄取。 植物甾醇：是个好东西 世界卫生组织的调查显示，全球范围内三分之一的心血管疾病均源于高胆固醇。但事实上，胆固醇也有好坏之分：其中的高密度胆固醇被称为“好胆固醇”，可以帮助构筑细胞膜、合成激素、清洁疏通动脉；而低密度胆固醇也就是“坏胆固醇”则刚好相反，是危害血管的杀手。因此，防血脂异常，一个“核心任务”，就是要把血液中的坏胆固醇含量降下来。 植物甾醇在结构上与胆固醇相似，而且它能“识别”血液中的好坏胆固醇。植物甾醇能抢占坏胆固醇在肠道中的位置，并促使其排出体外，从而降低血液中坏胆固醇的含量，但它并不降低血液中好胆固醇和甘油三酯的含量。研究认为，每日摄入2000毫克植物甾醇便可降低坏胆固醇水平近10%。在营养学界，植物甾醇被称为“胆固醇的克星”，“生命的钥匙”。
那么，植物甾醇是如何“打败”坏胆固醇的呢？北京大学公共卫生学院李可基教授打了个很有趣的比方。“植物甾醇和胆固醇是一对冤家，但老天爷给他俩只安排了一个座位。它们进入人体，见面就打。先是在消化环节，就像我们挤地铁，从安检时就开打，在这个过程中，植物甾醇会把坏胆固醇挤出队列，不经安检你就上不了地铁。第二步是进入肠系统，哥俩还会打，有植物甾醇在，坏胆固醇进的就没有那么痛快。等到第三步，在细胞环节，这哥儿俩还在打。打来打去，最终结果是坏胆固醇吸收减少，也就减少了血胆固醇。” 据专家介绍，坏胆固醇占到座位后不是坐着不动，而是坐一坐，再站一站，是动态的；而植物甾醇的屁股沉，如果占住位置，很少会动。这样，二者在人体内的竞争中，植物甾醇一旦占据坏胆固醇的位置，便能轻松让其无容身之地，离开人体。 平衡膳食，促进心脑健康研究显示，正常人每天摄入1.3克植物甾醇，配合合理膳食，可改善血脂异常。问题是膳食中植物甾醇的吸收率很低，仅为5%左右，而胆固醇的吸收率则超过40%。通过天然食品，每天仅能摄入植物甾醇200到400毫克，和1.3克有个差额，无法达到降低胆固醇的效果。怎么办？可考虑利用添加了植物甾醇的食物“进补”。“比如，美国等发达国家在包、牛奶、食用油等食品中间加植物甾醇，就是一个很好的办法。”杨新春说。 在中国，植物甾醇继2007年通过了新资源食品的批准后，2010年又通过了国家新法规下的新资源食品认证。 科学选择，充足摄入，有效改善通过食用富含植物甾醇的功能性食品