第一章 输血科项目标准操作规程

第一章输血科项目标准操作规程

第一节血样采集和送检、标本核收、血型复查及血源组织标准操作程序

一、血样采集、送检、核收和血型复查标准操作程序

采集血样

1．采血护士:采集配血血样，护士要求必须有初级以上护士职称，实习/进修护士不得单独进行。

2.明确病人用血申请，核对病人信息：姓名、性别、年龄、住院号、科别、床号等信息。

3.准备采血材料，并明确以下内容。

①正确的标本：取材正确；

②正确的标本量：血型复查（血交叉）标本抽取3ml；

③正确的标识：条形码号标签或手工书写标签，但必须明确标明姓名、科室床号、住院号。

4．采集血样过程：

①确保在采集血样时，床边正确的核对患者；

②正确地给血样试管贴标签：血样采集后，在床边给血样贴标签，而不应该事先贴好标签或到护士站后贴标签；

③第一次输血，应同时采集输血前五项检测血样，并记录抽取时间入病历。

5.采血样完成后，再次核对血样标识与申请单信息，无误后送输血科，并进行护理记录。

6.质量标准要求：

①正确完整的血样标识，与申请单一致；

②正确地核对与采血过程；

③标本无溶血、不能在输液处采集血样；

④正确地记录。

送收血样

1．送血样人员必须是医护人员，严禁患者家属送血样。

2．血样送到输血科后应由送血人员和输血科人员一起核对以下信息：

①血样信息与申请单信息是否一致；

②核对查看申请单的完整性（必须有血常规+血型结果）、血样标识的完整性（必须内容齐全、文字清楚）；

③血样标本量、有无溶血；

④双方核对，无误后签字交接。

3.有以下情况，输血科拒绝收血样：

①血样标识不完整；

②血样无标识；

③标本量不足、血样质量有问题；

④无输血申请单或申请单上无血常规+血型的结果。

4.质量标准要求

①血样信息完整无误；

②血样质量符合要求及采集量正确。

血型复查核收

核对：按要求核对输血申请单与血标本上的全部内容，并在标本接收簿中作记录；

核收：在检验之星中，进行血型复查医嘱的核收；

3．血型复检及不完全抗体测定（具体操作详见有关章节）；

4．核对输血申请单、血标本、病历中的姓名、住院号、血型（如与原始血型不相符时，必须重新抽取病人标本检测），正确无误后，报告其血型复查和抗筛结果，作记录；

5．输血申请单按血型类别在文件夹中放置；血型复查后的标本，按先后次序放在试管架中。

二、血源组织

1．对临床医师申请用血种类、用血量进行了解核实，提前备好相应血源；

血库存量组织，要求每日存量必须保持在周用血量的1/2；

当发生重大事件急需大量血液时，按照急诊用血应急预案执行

3．特殊血液组织

①紧急用血时，血库人员在接到特殊用血申请单时，应在第一时间先向市中心血站报告用血种类、用血量和用血时间等；

②非紧急用时，按规定须提前1天预约，由血库值班人向血站报告；

③Rh(D)阴性和其他稀有血型患者的输血

择期手术病人输血：当临床遇到稀有血型患者后，应对患者家庭成员、兄弟姐妹进行筛

选，符合者到血站体检献血，并填写《稀有血型用血申请单》。组织到血源后，临床再择期手术用血；

急诊抢救病人紧急输血：按卫生部《临床输血技术规范》第十五条Rh（D）检查可除外。也可采用自身输血、同型输血或配合型输血。对紧急输用配合型血液时，由经管医师向患者或其家属（代理人）讲明，征得同意后方可输用，由医患双方共同签字并载入病历；

具体实施可按照稀有血型及应急用血管理条款执行

④特殊血液预约的信息反馈与记录。

注：特殊血液是指：单采血小板、洗涤红细胞、冷沉淀、辐照血、Rh(D)阴性和其他稀有血型血液等

第二节ABO＆Rh（D）血型复检标准操作规程

抗A、抗B、抗D血清定型（试管或玻片法）标准操作程序

【方法原理】

1．ABO血型：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，进行红细胞凝集试验。正定型，是用已知抗－A和抗－B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。

2．Rh（D）血型：用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh（D）阳性，不带D 抗原者称为Rh（D）阴性。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。

2．标本保存：室温放置不超过8小时，4℃保存不超过72小时，无溶血现象。

【试剂】

抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体长春博德）

Anti-D (IgM) Biotest。

3．5%及0型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附注。

【操作步骤】

1．取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明抗A、抗B、抗D，用滴管分别加抗A、抗B、抗D分型血清各1滴，再以滴管分别加受检者5%红细胞（取1滴压积红细胞

加16滴生理盐水）悬液1滴，混和。

2．另取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴，再分别滴加A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。

3．立即以1000r/min离心1min（或将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min）。

4．将试管轻轻摇动，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低培镜检查。

5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB 的发现。

6．凝集强度判断标准：

4+：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+：红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+：=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF：混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

－：表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。见表2－1

表2－1 ABO血型正反定型结果

注：＋：凝集；－：不凝集。

7．“AB”注意冷凝集或自身凝集，可以在37℃水浴中鉴别。

8．血型复查结果输入检验之星中，核对后审定报告。

第三节RhD血型鉴定标准操作程序

RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。

一、RhD血型鉴定标准操作程序

【原理】

应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。D 抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。

【试剂】

RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）

【操作】

1．盐水法取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。

2．对照管用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）1滴，阳性对照管加Rh 阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。3．结果判定如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。

【附注】

1．单克隆IgM Rh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7℃水浴1h，观察凝集反应。

2．如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。

3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。

4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5% D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。

5．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。

【假阳性反应原因分析】

1．试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员意识到有进一步试验的必要。

2．多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。

3．当用未经洗涤的细胞做试验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。

4．试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。

【假阴性反应原因分析】

1．搞错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。

2．试管中漏加抗血清，在加人细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。

3．未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞间的比例以及温育的温度和时间不正确。

4．抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。

二、弱D（weaK D）型鉴定标准操作程序

【原理】

根据美AABB技术手册第12版(1996)规定：D“这术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D（weaK D）”。原称之“D”红细胞一部分具有与正常D 阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原“D”红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表位。

弱D型红细胞与某批或几批抗D血清在盐水介质及酶试验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白试验中均发生凝集。因此，当用酶试验检查发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除弱D型的可能。

【试剂】

抗D血清不同生产单位或批号不同的抗D血清3～5个。

抗人球蛋白血清。

3．1%菠萝酶溶液。

4．5%受检红细胞悬液。

【操作】

1．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作间接抗人球蛋白试验(方法见本章第四节)。

2．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作酶试验(方法见本章第五节)。

【结果判定】

受检红细胞与各批抗D血清在酶试验中都不凝集或只与其中1批或数批抗D血清凝集，但在间接抗人球蛋白试验中都凝集者，都属弱D型细胞。

【附注】

1．在临床输血中，弱D型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体。所以受血者若为弱D型，应作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者。

2.弱D型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可能发生新生儿溶血病。

第四节红细胞血型抗体筛查标准操作规程

红细胞血型抗体检查适用于下列情况：

1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；

2．供血者血清抗体筛检；

3．输血前受血者血清抗体检查；

4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；

5．孕妇血清的抗体检查；

6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；

7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。

筛查方法

一、盐水介质法：

【方法原理】

有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。

【试剂】

1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分

装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。

因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。

筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。

每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。

如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。

合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。

2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。因为：

①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；

②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；

③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。

血清标本的采取时间应注意：例如，受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。

每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。

【操作步骤】

1．取受检者血清2滴于标好的试管中。

2．取2%试剂（筛查）红细胞悬液l滴于每个试管中，混和。

3．1000r/min离心1min（离心速度和时间应按质控规定）。

4．观察溶血和凝集反应，记录结果。

5．按需要置室温（22～24℃）温育15～30 min。

6．离心，观察溶血和凝集，并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。

7．报告结果于检验之星中。

二、凝聚胺法

【方法原理】

利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。

2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。

3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。

【试剂】

1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。

2．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM ）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending）。

3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。

【操作步骤】

1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。

2．取小试管2支，各加被检血清（浆）2滴，分别加入3～5%筛检红细胞1滴或Ⅰ和Ⅱ细胞50ul（0.8%）。

3．各加入LIM0.7ml，混合后，加凝聚胺Polybrene2滴，并混合。

4．以3400rpm，离心10秒，把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。

5．最后加入悬浮液Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开，表示由凝聚胺引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开，则红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。

6．报告结果于检验之星中。

三、微柱凝胶法

【方法原理】

利用凝胶过滤技术和离心技术，抗体筛查细胞上有特定的抗原，抗原可以和相应的抗体结合。当待检血清（浆）样本中有不完全抗体时，抗体筛查细胞和待检血清（浆）中不完全抗体可专一性的结合。抗人球蛋白可结合抗体，通过桥介作用使细胞凝集。凝集发生说明血清（浆）中有不完全抗体。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。

2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。

3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。

【试剂】

1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。

2．抗人球蛋白检测卡。

3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。

【操作步骤】

1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。

2．标记抗人球蛋白检测卡、姓名、住院号、标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

3．微柱中加50ul待检样本血清（浆）。

4．加抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞各50ul（0.8%）。

5．37℃ 15分钟，离心10分钟。

6．读结果和记录。离心时，凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应。未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

7．报告结果于检验之星中。

【附注】

1．判读试验结果常用的代号是:

4+：一个结实的凝集块。

3+：几个大的凝集块。

2+：中等大的凝块，背景清晰。

1+：小凝集块，背景混浊。

士：微小凝集块，背景混浊。

O：无凝集或溶血。

PH：表示部分溶血，有一些细胞残留。

H：表示完全溶血，无残留细胞。

2．抗体筛查试验结果的解释

抗体筛检试验是很有价值的，但也有其局限性。一个阴性试验不一定意味着这一血清中没有抗体，而只是在使用这些技术时，缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料和其他实验室所见提供了另外的线索，就应扩大常规筛查方法。例如，如果ABO正反定型不符，就应在室温下做抗体筛查。如疑为溶血性输血反应、新生儿溶血病或自身免疫性溶血性贫血，有必要做酶试验或以放散液做筛查，以证明引起疾病的抗体。

第五节抗人球蛋白试验

【方法原理】

抗人球蛋白试验(antiglobulin test, AGT)又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法、将抗人球蛋白血清(antiglobulin serum, AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗人球蛋白血清除可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C3、C4)。所谓广谱AGS，即包括抗IgG和抗C3抗体。

【标本采集和处理】

标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。

【试剂】

1. 1%标准A/B/O型红悬。

2．抗人球蛋白检测卡。

3. 0.9%生理盐水。

【操作步骤】

一、ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验：

(1）在微柱凝胶新生儿血型卡的6个孔中分别加入1%的样本红细胞50ul；

（2）血型卡直接放入专用离心机离心，观察结果。

二、释放试验

(1）取压积红细胞0.2 ml洗涤三次，再加0.2 ml生理盐水，56℃水浴10分钟，2000转/ min离心3 min，吸取上清液备用；（即放散液）

（2）根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul上清液，置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。

患者ABO血型为“A”型的，加入标准A型、O型红细胞悬液；

“B”型的，加入标准B型、O型红细胞悬液；

“AB”型的，加入标准A型、B型、O型红细胞悬液；

“O”型的，加入标准O型红细胞悬液。

三、游离抗体测定

（1）根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul样本血清；（原则同上）

（2）置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。

结果判断：

ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验结果判断：

第1-5孔为血型检测；

第6孔Ctl为阴性对照管；

第7孔为兔多克隆抗IgG；

第8孔AHG为抗人球蛋白试验结果。

游离、释放试验结果判断：

凝集有80%的红细胞在微柱管下端2/3以下者（即1+以上）为阳性。

第六节血液交叉配血试验标准操作规程

交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供血者红细胞相配的一管称为“主侧”；供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。

交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作规程应包括：①查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因；②对收到的受血者血样应作ABO正反定型，Rh血型和其他血型检查以及血型抗体检测和鉴定；③选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。

一、配血要求

受血者配血试验的血样（血型复查）必须是输血前三天之内的；

2．核对病人资料：核对输血申请单、受血者血样、病历三者，其内容包括：患者姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型（原始血常规血型和血型复查中血型）、用血品种、用血量等，必须正确无误；

3．核对血液：血液完整性、血液标签、血液质量；

4．核对取血凭证：按临床（取血凭证）实际用血品种、量进行配发血；

5．配血前，先复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型）、Rh（D）血型和抗筛，并报告其结果；

6．在电子病历或急诊医生工作站中，检查临床输血五项的执行情况；

7．输注全血、浓缩红细胞、洗涤红细胞、浓缩白细胞等患者应进行交叉配血试验，其方法：采用盐水配血试验、凝聚胺法。

二、盐水配血试验标准操作程序

【方法原理】

本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。当受血者血清（浆）和供血者红细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。

2．标本采取时间：要求受检者血样一定要在输血前48h（抗筛是48h）内采集，血样必须是新近的，无溶血现象。

【试剂】

1．抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体长春博德）

2．Anti-D (IgM) Biotest。

3．0.9%生理盐水

【操作步骤】

1．从贮血冰箱中取出所需血液，取试管一支，贴上小标签，在血袋配血管中剪下配血管于试管内。

2．取试管二支，标明主次侧，主侧管加受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴。混匀，以1000r/min离心1min。

3．观察结果：轻轻侧动试管，冬季应注意冷集素干扰。ABO同型配血，“主侧”和“次侧”均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。

三、凝聚胺配血试验标准操作程序

【方法原理】

利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺（Polybrene）溶液后，可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending）具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。

2．标本采取时间：要求受检者血样一定要在输血前48h内采集，血样必须是新近的，无溶血现象。

【试剂】

1．抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体长春博德）

2．Anti-D (IgM) Biotest。

3．0.9%生理盐水

4．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液 (Resuspending)。

【操作步骤】

1．从贮血冰箱中取出所需血液，取试管一支，贴上小标签，在血袋配血管中剪下配血

管于试管内。

2．取试管二支，标明主次侧，主侧管加受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴。

3．各加LIM0.7ml，混匀，再各加Polybrene溶液2滴，并混匀。

4．用离心机1000g离心力（普通离心机以3400rpm），离心10秒，然后把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，无凝集，则必须重做。

5．最后加入Resuspending 2 滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果，如在30秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

6．血液交叉合格后，应在医院血库管理软件中进行配血、出库操作，打印血液交叉报告单和患者输血不良反应反馈单。然后，保存。

【附注】

血液样本的保留和贮存：受血者和供血者的血液样本必须密封或盖紧，在每次输血之后，应在2～6℃保存至少7天以上。

第七节血液出库（发血）标准操作规程

一、核对、签字

1．严格执行“三查”、“八对”制度（见输血科“三查”、“八对”制度）。

2．输血科（血库）发血时，应当认真检查申请单的填写项目，合格后方可发血。未按卫生部《医疗机构临床用血管理办法》第十一条规定办理申报手续的不得发血。

3．配血合格后，由医务人员凭取血凭证到血库取血，领血时，收发双方共同核对患者（姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型、用血品种、用血量）和血站名称、许可证号、血型、血袋编号、血品种、血量、血液质量、血袋完整性、血液有效时间以及配血试验结果等，准确无误时，双方共同签字后方可发血。

二、血液出库

1．发血在医院血库管理软件中进行（详见医院血库管理软件操作细则），并打印交叉配血报告单和患者输血不良反应反馈单。

2．收发双方共同核对无误后，由取血者把血液放入专用的血液保温箱内送至所需科室输注（要求血液出库后30分钟内输入患者体内）。

3．在血液出库登记本中，记录血液发出时间、受血者姓名、科室床号、住院号、血品种栏记录血量、血费、用血互助金、检查费、血袋号、发（取）血者签名。

4．血液发出后，患者与供血者血样保存于2～6℃冰箱至少7天。

5．血液发出后不得退回，以保证下一个用血者的安全。如临床对发出的血液要求退回时，应由医院主管（医务部）领导，输血科主任签字同意“报废处理”后，方可退还血费等。

6．每日17：00下班前进行出库统计，并记录于血液出入库表格内。次晨8时再统计夜班出入库情况，并加以修正。每月进行出入库统计并作保存。

三、血袋回收

回收后的血袋进行记录时间，并保存于2～6℃冰箱7天，后按医疗废弃物焚烧处理。

第八节血液申领、入库、核对、贮存标准操作规程

1．每日进行血液库存量的检查，及时对存量的补充（要求日存量为周用血量的1/2）。

2．对特殊血液的申领，应遵循先报告血站的原则，血站回复结果必须及时与临床医师沟通，并记录于记事本中。

3．血液到库后，值班人必须核对和验收，其内容：血袋（外观、封闭及包装）是否合格、标签是否清楚齐全（供血机构名称、许可证号、供血者姓名、编号、血型、血品种、血量、采血日期及失效日期）、血液质量是否良好、是否按要求配发血等。

4．严禁不合格血液入库。

5．核对验收无误后，按不同类型、品种、采血日期的先后次序整齐排列入库，存放于血库专用冰箱内的相应位置。

6．血液入库数量登记在血液出入库表格内，每日、月进行统计。

7．全血、红细胞保存温度为2～6℃，并每天监测和记录（晨8时、上午11时、下午4时、晚8时）冰箱温度各一次；血浆、冷沉淀保存温度为－30℃以下，每天监测和记录（晨8时、上午11时、下午4时、晚8时）冰箱温度各一次，单采血小板保存温度为20～24℃。

第九节血液报废（失效）标准操作规程

严禁对不能输入人体的血液输入人体

1．对过期血液的处理：按要求进行登记（可在医院血库管理软件的电脑内登记），由科室主任同意后报废。

2．对血袋破损的处理：非人为造成的，可退回血站的，由血站按退血处理，不能退回的由科主任同意，登记后按血库报废处理；对人为造成破损的由当事人按原价赔偿。

3．对变质血液的处理：应查明发生变质的原因，措施的落实，因责任性不强而造成的，按差错处理。

4．对已出库而没有输入人体内血液的处理：因疾病或有其他原因未输者，需要报废的，由医务处或科主任批准同意后，方可报废处理。

5．对发生有输血反应血液的处理：按输血反应处理标准操作程序进行操作，血液费用由病人承担。

6．对废弃血液进行登记，24h后集中统一焚烧。

血液报废（失效）处理流程

报废血液→输血科当班人

↓

核准←科室主任

↓

记录

(血液报废登记、出入库表)

↓

库血管理报废处理

↓

焚烧

（按医疗废物）

第十节输血反应处理标准操作规程

出现异常情况应及时处理：

1．减慢或停止输血，用静脉注射生理盐水维持静脉通路；

2．立即通知值班医师和输血科值班人员，及时检查、治疗和抢救，并查找原因，做好

记录。

3．疑为溶血性或细菌污染性输血反应，应立即停止输血，用无菌操作封闭血袋并妥善保存好。在积极抢救的同时，做以下核对与检查：

①核对用血申请单、血袋标签、交叉配血试验记录。

②核对受（供）者ABO血型、Rh(D)血型。用保存于冰箱中的受（供）者血样、新采集的受血者血样、血袋中血样，重测ABO血型、Rh(D)血型、不规则抗体筛选及交叉配血试验。

③立即抽取受血者血液，检测血清胆红素含量等

④检测血常规、尿常规。

⑤如怀疑细菌污染性输血反应，抽取血袋中血液做细菌学检验。

4．临床对有输血反应的应填写患者输血反应反馈单，并返还输血科保存，血库值班人把反应记录在输血反应记录薄上，并进行处理分析和记录细菌学检验结果。

5．输血科每月统计并上报医务部。

输血反应处理流程

观察输血过程→当班护士

↓

输血告之、咨询、观察、不良反应记录→当班护士

↓

有输血反应者通知医师

（观察、处理、抢救）

↓↓

血袋保存7天后按医←输血科当班人←

疗废物处理条例执行（复核供、受双方血液）

第十一节实验室消毒和污物处理标准操作规程

一、实验室消毒

1．空气消毒：每日紫外线消毒，一般在20：00～21：00进行。每周用95%无水乙醇擦拭紫外线灯管后测试其灯管强度，并做好记录。

2．工作台面消毒：用消毒灵（含有效氯500mg/L）每天擦洗工作台面，物体表面及地

面，并记录。

3．手指消毒：用聚维酮碘，含有效碘0.5%作用3min或75%乙醇溶液擦拭。

4．每月进行手指、台面、空气的培养，并作记录。

二、污物处理

1．实验室内污物应按规定放置，应区分污染物和非污染物。

2．废血、用过的一次性医疗用品等，应放置在污染物筒内，每日清理统一焚烧。

3．用过的血袋统一登记，存放七天后与污染物一起焚烧。

4．废弃血样试管的处理：当供受血样保存7天后与污染物一起焚烧。

5．报废（失效）的血液及制品、用过的血袋经登记后与污染物一起焚烧处理，并记录。

第十二节血库交接班标准操作规程

一、血库血液日存量交接

1．日班者于18：00下班前进行当日血液进出情况的统计，并把血液存量的总数和不同类型、品种记录在交接班薄上，便于接收者核对。

2．存量不足时应及时补充。

二、仪器运转情况交接

对仪器运转情况交接，如遇不良情况应及时通知设备科。

三、日班未能处理事项交接

日班者至下班前还未能处理完的事项，记录在交接班薄上，并及时同接班者交接签字，共同做好衔接工作。

第十三节血液质量管理标准操作规程

1．严格执行卫生部《临床输血技术规范》、《医疗机构临床用血管理办法》、《浙江省医疗机构临床用血管理考核标准》和输血科标准操作程序进行操作。

2．血液的运输工具必须用专用的血液转运冷藏箱，炎热季节时应在转运箱内安放置冰块，确保温度在规定范围内。

3．严格检查入库的血液，收发双方共同核对验收，认真核查血袋包装，检查内容如下：

①血站的名称及其许可证号；

②血袋条形码、血型；

③血液品种、数量；

④采血日期及时间；

⑤有效期及时间；

⑥储存条件。

血袋包装不符合国家规定的卫生标准和要求应拒领拒收。禁止不合格血液入库。

4．验收合格的血液，按不同血品种、血型和采血日期（或有效期）分别贮存于贮血专用冰箱内，血液的摆放要为冷空气的流通留有空间。

保存温度和保存期如下：

品种保存温度保存期

全血 4±2℃ ACD：21天，CPD：28天，CPDA：35天

悬浮红细胞 4±2℃保存期同全血

悬浮少白细胞红细胞 4±2℃保存期同全血

洗涤红细胞 4±2℃ 24小时内输注

冰冻去甘油红细胞 4±2℃解冻后24小时内输注

单采血小板 22±2℃ 5天（轻振荡、专用袋制备）

新鲜冰冻血浆 -20℃以下一年

普通冰冻血浆 -20℃以下四年

冷沉淀 -20℃以下一年

其他制剂按相应规定执行

5．每天检查贮血质量，发现异常情况，如血浆层变色（变灰、变黑等）或出现气泡及絮状物，红细胞色泽变紫色等，不能发出使用。严重脂浊、黄疸的血浆不能发于临床使用。

6．病房已启封的或输剩的血液及成分禁止再次使用。

7．过期的血液及成分禁止使用。

8．及时了解输血及输血感染相关疾病情况，并作详细记录，发现较严重的输血反应要追踪查因，发现输血后感染相关疾病要及时上报血液质控中心处理。

9．每天定时观察贮血冰箱温度，当温度自动控制记录和报警装置发出报警信号时，要立即检查原因，及时解决并记录。确保冰箱正常运行及贮血安全。

10．贮血冰箱内严禁存放其他物品；每周消毒一次；冰箱内空气培养每月一次，无霉菌