Leica TCS SP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册

Leica TCS SP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册

打开软件后，默认在Acquire面板的acquisition中，acquisition mode为xyz，Format扫描像素为512x512，average line and frame average 为1。

根据需要选择扫描模式，常用的有以下几种：xyz 层面扫描；xyt 时间扫描；xyλ光谱扫描。扫描像素一般选1024×1024

设置平均一般选择line average 2-3次

保存图像方法

注意：一般在扫描结束后统一保存，为免数据丢失，可以从获取第一张图片后就要开始保存，以后每获取一张图片保存一次。

1、保存Leica .lif 文件

进入Acquire 面板的Experiment 中，右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“Save Experiment “Experiment” as…”，保存lif文件到自己的文件夹中并取名。

2、导出lif文件

右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“Export Experiment as tiff”，选择目标文件夹，选中rawdata导出单通道图片。

如需导出overlay 图片，则再次右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“Export

Experiment as tiff”，选择目标文件夹，选中overlay 导出多通道合成图片。

一、获取单一荧光图像

1、在beam path setting 中的load/save single setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。

2、点击live开始连续扫描，优化图像质量。

调节z position选择需扫描层面，调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。

点击stop，停止扫描。

3、选择像素1024×1024

4、点击capture image获取图像。

5、保存图像。

二、获取多荧光图像

1、点击seq ，出现sequential scan面板。

2、在sequential scan面板中点击scan 1，在beam path setting 中选择所标记的一种荧光的光路设置方法。

点击live开始连续扫描，优化图像质量。

调节z position选择需扫描层面，调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。

点击stop，停止扫描。

在sequential scan面板中点击“+”，点击scan 2，在beam path setting 中选择所标记的另一

种荧光的光路设置方法，点击live开始连续扫描，优化图像质量。

标记了几种荧光就添加几种方法。

选择“between frames ”模式。

3、选择像素1024×1024，点击Start获取图像。

4、保存图像。

三、获取多层荧光图像

1、在beam path setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。

2、打开Z-stack 面板。

3、点击live开始连续扫描，优化图像质量。

调节z position选择需扫描层面，设置begin和end ，调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。

点击stop，停止扫描。

在Z-stack 面板中确定Nr. Of steps （在选择层面中确定需扫描张数）

4、点击start获取图像。

5、如需将扫描图像叠加，选择Process 面板，选择visualization 3D projection ，点击apply ，即可生成叠加图像。

6、保存图像。

四、获取时间序列图像

1、Acquisition mode 改为xyt。

2、根据需要拍摄图像的时间间隔和图像质量调整fomat 和line average值。

3、在beam path setting 中的load/save single setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。

如是多种荧光则选择点击seq，设置序列扫描。

4、点击live开始连续扫描，优化图像质量。

调节z position选择需扫描层面，调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。

点击stop，停止扫描。

5、点击start获取图像。

6、保存图像。