氯霉素ELISA检测试剂盒的研制及其性能测试_郭逸蓉
氯霉素ELISA 检测试剂盒的研制及其性能测试
郭逸蓉
桂文君
王姝婷
朱国念
（浙江大学农药与环境毒理研究所
杭州３１００２９）
摘要
采用包被多克隆抗体直接竞争ＥＬＩＳＡ法建立了氯霉素残留的酶联免疫分析方法，并构建了氯霉素残留
ＥＬＩＳＡ检测试剂盒。研究结果表明，所选用的抗体对氯霉素亲合力强、
特异性高，试剂盒对氯霉素残留检测的线性范围为０．２４￣２５０ｎｇ／ｍＬ，检测限（ＩＣ１０）０．４７ｎｇ／ｍＬ，样品的加标回收率７０％￣１３０％。试剂盒性能测试结果表明，其准确性和重现性较好，保存期至少６个月，可用于虾肉、鸡肉、蜂蜜、鲜奶样品中氯霉素残留的批量快速、廉价检测。关键词氯霉素
酶联免疫吸附分析
试剂盒
文章编号
１００９－７８４８（２００７）０６－０１１８－０６
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ＣＡＰ）是第一个采用化学合成法生产的抗生素，对多种病原菌具有较强的抑制作用。由于其效高价廉，曾被广泛应用于各类家禽、家畜、蜜蜂和水产品的各种传染病的防治。然而，氯霉素存在着严重的毒副作用，能引起人的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺症以及新生儿、早产儿灰色综合症等，对人类健康构成巨大的
潜在威胁［１～
２］
。因此，氯霉素残留问题已引起国际组织和许多国家及地区的高度重视。近年来欧盟、美国等发达国家已相继禁止氯霉素用于动物源性食
品，并明确规定氯霉素残留限量为不得检出［３～４］。
目前，国外采用商品化的氯霉素试剂盒，直接竞争酶联免疫法检测氯霉素。该法灵敏度高、操作方便。国内对氯霉素残留快速检测技术的研究相对滞后，大多停留在间接竞争ＥＬＩＳＡ法，仅少数采用包被羊抗兔ＩｇＧ抗体（二抗）的直接竞争ＥＬＩＳＡ法［５］。普遍使用的试剂盒主要为德国ｒ－Ｂｉｏｐｈａｒｍ公司、英国ＲＡＮＤＯＸ公司及荷兰Ｅｕｒｏ－Ｄｉａｇｎｏｓｔｉ－
ｃａ公司的产品［６］
，价格昂贵。国产氯霉素残留检测
试剂盒的质量和性能不够稳定，市场化范围很小。因此，研究具有我国自主知识产权的氯霉素残留快速检测技术很有必要。
本文选用抗氯霉素琥珀酸单酯（ＣＡＰ－ＨＳ１）多克隆抗体，采用包被抗体－酶标半抗原直接竞争
ＥＬＩＳＡ法构建氯霉素残留酶联免疫检测试剂盒，
并与国内外同类商用试剂盒进行了性能对比试验。
１材料与方法
１．１材料与仪器
１．１．１材料与试剂
９９．１％氯霉素标准品，浙江大
学动物科学学院提供；９９．４％甲砜霉素标准品，浙
江润康药业有限公司；氟甲砜霉素标样、四环素标样、磺胺二甲嘧啶标样、盐酸克伦特罗标样，浙江
省疾病预防控制中心；辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），华美生物工程公司；Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺（ＤＭＦ），杭州双林化工试剂厂；正三丁胺，上海业联联合化工有限公司；氯甲酸乙酯，上海同济微量元素研究所；乙酸乙酯，杭州余杭高晶精细化工有限公司；正已烷，国药集团化学试剂有限公司；氯霉素半抗原ＣＡＰ－ＨＳ１，由本实验室制备；碳酸盐缓冲溶液（ＣＢＳ，０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ９．６）；磷酸盐缓冲溶液（ＰＢＳ，
０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）；洗涤液（ＰＢＳＴ，含０．０５％吐温－２０的ＰＢＳ，ｐＨ７．４）；底物溶液：每２５ｍＬ０．０５ｍｏｌ／Ｌ、
ｐＨ５．０～５．５柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲溶液，临用前加入１０ｍｇ邻苯二胺（ＯＰＤ），溶解后加入１０μＬ３０％Ｈ２Ｏ２，混匀待用；终止液：２ｍｏｌ／Ｌ硫酸。１．１．２
仪器
ＤＥＭ－Ⅲ自动酶标洗板机，北京拓普
分析仪器有限责任公司；氮气吹蒸装置，杭州雪中
收稿日期：２００６－１２－２８
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０３７０９４４）作者简介：郭逸蓉，女，１９８３年出生，硕士生通讯作者：朱国念
Ｖｏｌ．７Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００７
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
中国食品学报
第７卷
第６期
２００７年１２月
第７卷第６期
炭恒温技术有限公司；ＭＭ－１型微量振荡器，江苏省姜堰市康泰医疗器材厂；旋涡混合器ＷＨ－８６１，太仓市科教器材厂；酶标仪（６８０型），ＢＩＯ－ＲＡＤ公司；ＷＨＳ型智能恒温恒湿箱，宁波江南仪器厂；９６孔聚苯乙烯酶标板，美国ＣＯＳＴＡＲ。
１．２方法
１．２．１氯霉素抗体的制备按照黄雅丽等人的方法［７］制备抗ＣＡＰ－ＨＳ１多克隆抗体，经纯化后制成冻干粉。
１．２．２酶标半抗原的制备利用混合酸酐法［８］合成酶标半抗原。将４２．２ｍｇ１００μｍｏｌ半抗原ＣＡＰ－ＨＳ１溶解在１ｍＬＤＭＦ中，然后在该溶液中加入２５μＬ正三丁胺和１２μＬ氯甲酸乙酯，室温下搅拌反应１ｈ。取反应液２５μＬ，缓慢加入到４ｍＬ溶有２０ｍｇＨＲＰ的ＣＢＳ中，室温下搅拌反应２ｈ后装入透析袋，先用蒸馏水透析２次，再用ＰＢＳ透析２ｄ。透析完毕后取出，加入等体积的甘油混匀，分装后于－２０℃保存。
１．２．３抗体－酶标半抗原工作浓度优化采用方阵试验法，对直接竞争ＥＬＩＳＡ法中包被抗体和酶标半抗原的稀释度进行筛选并确定，最终以ＯＤ≈１．０，且对ＣＡＰ抑制率最高时的浓度组合作为最适工作浓度。
用ＰＢＳ将抗体冻干粉溶解并稀释成系列浓度，依次包被到９６孔酶标板（１００μＬ／孔）上，３７℃温育２ｈ，用ＰＢＳＴ洗涤４次；用含２％脱脂牛奶的ＰＢＳ封闭（３００μＬ／孔），３７℃温育０．５ｈ，用ＰＢ－ＳＴ洗涤４次；加入预先用含２％脱脂牛奶的ＰＢＳ稀释成不同浓度的酶标半抗原（１００μＬ／孔），在平板震荡器上混匀，３７℃温育１ｈ，用ＰＢＳＴ洗涤４次；加入底物溶液（１００μＬ／孔），３７℃温育１５ｍｉｎ，再加入终止液（５０μＬ／孔），用酶标仪测定各孔的ＯＤ４９０ｎｍ值。
１．２．４抗体亲合性及检测灵敏度以优化的抗体浓度包被酶标板，加入用ＰＢＳ配制的一系列浓度的氯霉素标准溶液（５０μＬ／孔）（设不加药对照和ＰＢＳ空白对照），再加入预先用含４％脱脂牛奶的ＰＢＳ稀释的酶标半抗原（５０μＬ／孔），余下步骤同１．２．３节。以抑制率为纵坐标、氯霉素浓度的对数为横坐标，绘制氯霉素抑制免疫反应的标准曲线图，并分别求出抑制反应５０％和１０％所需的浓度ＩＣ５０和ＩＣ１０。抑制率计算公式：
Ｉ＝（ＯＤｍａｘ－ＯＤｍｉｎ）－（ＯＤｉ－ＯＤｍｉｎ）
（ＯＤｍａｘ－ＯＤｍｉｎ）
×１００％（１）式中：ＯＤｍａｘ——
—不加药时的吸光值；ＯＤｉ——
—氯霉素浓度为ｉ时的吸光值；ＯＤｍｉｎ——
—空白对照的吸光值。以ＩＣ５０来衡量抗体对氯霉素的亲合性，以ＩＣ１０为该ＥＬＩＳＡ方法的检测灵敏度指标。１．２．５抗体的特异性采用上述方法对氯霉素与甲砜霉素、氟甲砜霉素、四环素、磺胺二甲嘧啶和盐酸克伦特罗等５种药物进行交叉反应，得出各种药物的抑制浓度（ＩＣ５０），然后比较它们对抗ＣＡＰ－ＨＳ１抗体的亲合性。用交叉反应率评价抗体的特异性，交叉反应率越低，抗体的特异性越高。交叉反应率Ｘ计算公式：
Ｘ＝氯霉素ＩＣ５０
其它药物ＩＣ５０
×１００％（２）１．２．６方法的准确性试验在上述确定的线性范围内，分别配制６个不同浓度系列的标样溶液，采用直接竞争ＥＬＩＳＡ法，研究不同浓度标准溶液测定结果的准确性。每个浓度设６个重复，每个重复设２孔平行。
１．２．７样品加标回收率试验
１．２．７．１样品前处理虾肉、鸡肉样品：取捣碎样品２ｇ于各玻璃试管中（虾肉加入２ｇ无水硫酸钠），添加两档不同浓度的ＣＡＰ标准溶液，设空白样品为对照。每管加入４ｍＬ乙酸乙酯，充分混合后超声波提取１０ｍｉｎ，再２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，转移２ｍＬ上层乙酸乙酯至另一洁净试管中，４０℃氮流吹干，残留物溶于０．５ｍＬ正己烷中，加入１ｍＬＰＢＳ稀释液，旋涡振荡１ｍｉｎ，２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，吸取５０μＬ下层ＰＢＳ相用于检测。
蜂蜜样品：分别取１０ｇ样品，添加两档不同浓度的ＣＡＰ标准溶液，设空白样品为对照。与１０ｍＬ蒸馏水充分混合，取２．５ｍＬ转移至各玻璃试管中。每管加入５ｍＬ乙酸乙酯，旋涡振荡２ｍｉｎ，２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，转移２ｍＬ上层乙酸乙酯至试管中，４０℃氮流吹干，残留物中加入１ｍＬＰＢＳ稀释液，旋涡振荡１ｍｉｎ，再２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，吸取５０μＬ用于检测。
鲜奶样品：分别取１０ｍＬ样品，添加两档不同浓度的ＣＡＰ标准溶液，设空白样品为对照。０￣４
氯霉素ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的研制及其性能测试１１９
中国食品学报２００７年第６期
化合物名称
交叉反应率／％
氯霉素１００甲砜霉素０．０４氟甲砜霉素０．１３四环素＜０．０１磺胺二甲嘧啶＜０．０１盐酸克伦特罗
＜０．０１
表１
抗ＣＡＰ－ＨＳ１抗体对氯霉素和其它药物
的交叉反应
Ｔａｂｌｅ１Ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＣＡＰ－ＨＳ１ｔｏＣＡＰａｎｄｏｔｈｅｒｓｅｖｅｒａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
℃、２０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，除去下层脂肪，吸取５０μＬ用于检测。１．２．７．２
样品基质影响试验
取虾肉、鸡肉和蜂
蜜的空白样品，按上述方法制备提取液，再以ＰＢＳ稀释成１、２、５、１０倍等不同处理，每处理分别配制成８个不同浓度的标准溶液，按直接竞争ＥＬＩＳＡ法共建立４条标准曲线（包括不含基质的标准曲线），以影响较小的基质的最小稀释倍数作为样品检测的最佳稀释倍数。
１．２．７．３加标回收率测定将各样品按上述方法
处理后，以直接竞争ＥＬＩＳＡ法测定ＯＤ４９０ｎｍ值，计算ＣＡＰ含量、加标回收率及变异系数。每浓度设８个重复，每个重复设２孔平行，每种样品测试３块板。
１．２．８与其它商用试剂盒性能比对试验选用浙
江台州金芯生物工程有限公司、加拿大Ａｎｔｉｘ
ＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ公司和荷兰Ｅｕｒｏ－Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ公司的３种氯霉素试剂盒，按使用说明书进行蜂蜜样品
加标回收率试验，并与自制试剂盒作比较。设３档加标浓度，每个浓度设５个重复，每个重复设３孔平行。
１．２．９试剂盒保存期试验
１．２．９．１冻融试验酶标半抗原冻融：将新酶标半抗原分装后依次编号（１￣８号），密封，于－２０℃存放２４ｈ。取出１号酶标半抗原置于室温下０．５ｈ后，重新于－２０℃存放１ｈ，然后取出１号和２号酶标半抗原，置于室温下０．５ｈ，再重新于－２０℃存放１ｈ，重复上述操作，每次增加１个酶标半抗原至取到８号后，在酶标半抗原优化浓度条件下分别测定酶标板的ＯＤ４９０ｎｍ值。
包被抗体酶标板的冻融：将优化的抗体浓度新包被的酶标板（可拆卸式）逐条编号，密封，包装，于－２０℃存放２４ｈ。依照酶标半抗原冻融的方法逐条取出，反复冻融，用新酶标半抗原在优化浓度下分别测定ＯＤ４９０ｎｍ值。
１．２．９．２
４℃和－２０℃试剂盒保存期试验将包被
板和酶标半抗原分别在（４±２）℃和（－２０±１）℃避光恒温保存０、９０、１２０、１８０和２４０ｄ后，利用直接
竞争ＥＬＩＳＡ法测定，比较各板标准曲线的线性范围和检测灵敏度的差异。
２
结果与分析
２．１
抗体－酶标半抗原最适工作浓度
通过方阵试验及筛选得到优化浓度组合为：
抗体８０μｇ／ｍＬ、酶标半抗原０．４μｇ／ｍＬ。
２．２抗体亲合性及检测灵敏度
抗体亲合性测定结果表明，氯霉素对抗原、抗
体反应的抑制率曲线为较明显的Ｓ形。在０．２４￣
２５０ｎｇ／ｍＬ浓度范围内，抑制率与浓度呈线性关
系，线性回归方程ｙ＝１３．０４２Ｌｎ（ｘ）＋１９．８２４，Ｒ２＝０．９９１３，抗体的ＩＣ５０＝１０．１８ｎｇ／ｍＬ，方法的灵敏度（ＩＣ１０）＝０．４７
ｎｇ／ｍＬ。其抑制反应标准曲线见图１。
２．３交叉反应与抗体特异性
交叉反应结果见表１。抗ＣＡＰ－ＨＳ１抗体对氯
霉素类似物，如甲砜霉素、氟甲砜霉素的交叉反应率分别为０．０４％和０．１３％；对其它类抗生素，如四环素、磺胺二甲嘧啶和盐酸克伦特罗的交叉反应率＜０．０１％。因此，该抗体对氯霉素有很强的特异性，而其它药物对氯霉素检测的干扰程度很小。
１００８０６０４０２００
０．０１
０．１
１
１０
１００
１０００
抑制率／％
氯霉素标样质量浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
图１氯霉素标准曲线
Ｆｉｇ．１Ｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｏｆｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ
１２０
第７卷第６期
样品添加量／μｇ?ｋｇ－１
平均实测量／μｇ?ｋｇ－１
平均回收率／％
变异系数／％
虾肉
１．００．７２７２．６９１９．７７５．０４．５５９１．１２９．８２鸡肉
２．０１．５１７５．５４１８．９１５．０５．０８１０１．７２２２．８２蜂蜜
２．０２．１２１０５．０２２１．３４１０．０１１．７６１１６．２８１２．４５鲜奶
２．０２．１８１０８．７６８．０２５．０
６．３４
１３０．６４
７．８２
表３
样品加标回收率试验结果
Ｔａｂｌｅ３
ＲｅｃｏｖｅｒｙｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣＡＰｆｏｒｓｐｉｋｅｄｓａｍｐｌｅｓ
２．４方法的准确性
ＥＬＩＳＡ方法准确性试验结果（见表２）表明，按
上述方法得到的实测值平均变异系数为１３．７％（８．２％￣１９．９％），平均相对偏差为±１１．１％（－２．１％￣
２６．０％），说明该方法的准确性较高，能够满足药物
残留分析的基本要求。
２．５样品基质的影响
试验结果见图２￣图４。样品基质被稀释１￣５
倍时，标准曲线有少许变动，但影响不大；样品基质稀释５倍以上时，对标准曲线几乎没有影响。针对虾肉、鸡肉、蜂蜜样品分别选择了１、１、２倍稀释。
２．６样品加标回收率
各样品经前处理后，用直接竞争ＥＬＩＳＡ法
测定，结果列于表３。各样品的ＣＡＰ添加回收率满足一般农药残留分析的要求，变异系数在允许的范围内波动。因此，该检测方法可用于虾肉、鸡肉、蜂蜜和鲜奶中ＣＡＰ的定性、定量分析。
１００８０６０４０２０００．１
１
１０
１００
抑制率／％
无基质
基质５倍稀释基质１倍稀释基质１０倍稀释
图３鸡肉基质对标准曲线的影响
Ｆｉｇ．３Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｃｈｉｃｋｅｎｍａｔｒｉｘｏｎｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅ
氯霉素标样质量浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
１００８０６０４０２００
０．１
１
１０
１００
抑制率／％
无基质
基质５倍稀释
基质１倍稀释基质１０倍稀释
氯霉素标样质量浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
图４
蜂蜜基质对标准曲线的影响
Ｆｉｇ．４Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｈｏｎｅｙｍａｔｒｉｘｏｎｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅ
添加质量
浓度／ｎｇ?ｍＬ－１实测质量
浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
变异系数／％
相对偏差／％
０．７３０．９２１９．９２６．０１．４６１．４３１６．７－２．１２．９３３．０９１４．５５．７５．８６６．８１１２．６１６．２２３．４４２６．１６１０．２１１．６４６．８８
５１．１４
８．２
９．１
表２ＥＬＩＳＡ方法的准确性试验结果Ｔａｂｌｅ２
ＴｈｅａｃｃｕｒａｃｙｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｏｆｔｈｅＥＬＩＳＡ
无基质
基质５倍稀释基质１倍稀释基质１０倍稀释
１００８０６０４０２００
０．１
１１０１００
图２虾肉基质对标准曲线的影响
Ｆｉｇ．２Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｈｒｉｍｐｍａｔｒｉｘｏｎｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅ
氯霉素标样质量浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
抑制率／％
氯霉素ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的研制及其性能测试
１２１
中国食品学报
２００７年第６期
１００８０６０４０２００抑制率／％
０ｄ９０ｄ１２０ｄ１８０ｄ
０．１
１
１０
１００
氯霉素标样浓度／ｎｇ?ｍＬ－１０ｄ９０ｄ１２０ｄ
１８０ｄ
２４０ｄ
１００８０６０４０２００抑制率／％
０．１
１１０１００
氯霉素标样质量浓度／ｎｇ?ｍＬ－１
图６４℃下不同保存时间对标准曲线的影响Ｆｉｇ．６Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｕｎｄｅｒ４℃
图７－２０℃下不同保存时间对标准曲线的影响Ｆｉｇ．７
Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｕｎｄｅｒ－２０℃
２．７
与其它商用试剂盒的性能比较
自制氯霉素ＥＬＩＳＡ试剂盒与其它３种商用试
剂盒的蜂蜜样品加标回收率试验结果见表４。自制试剂盒的实测值稍偏高，特别是低浓度添加的回收率较高，但变异系数都在２０％以下；荷兰产试
剂盒的实测值与添加量基本一致，变异系数均小于１３％，表现出较高的精密度和准确性；台州产试剂盒测定的加标回收率相对偏低，但变异系数基本理想；加拿大产试剂盒的实测定值与实际添加量相差较大，且变异系数较大。
添加
量／
μｇ?ｋｇ－１
自制试剂盒
荷兰试剂盒
台州试剂盒
加拿大试剂盒平均实测值／μｇ?ｋｇ－１平均回收率／％变异
系数／％
平均实测值／μｇ?ｋｇ－１平均回收率／％
变异
系数／
％平均实测值／μｇ?ｋｇ－１平均回收率／％
变异
系数／
％平均实测值／μｇ?ｋｇ－１平均回收率／％
变异
系数／
％ｃｋＮＤ＊－－ＮＤ－－０．１９－２４．５２０．５３－４３．８９０．５０．７６１５０．８１９．５３０．６１１２３．６８．１２０．４２７８．２３１４．０１０．９４１８５．７３７．８１１．０１．３８１３５．２１０．４９１．２８１１８．７１２．９６０．５９６０．６４９．１２２．０８２０２．４３６．１４２．０
２．４７
１２１．４
１４．０７
２．１６
１０９．３
６．８７
１．２１
６４．５８
１１．２１
２．５７
１３０．９
２５．９２
表４４种氯霉素ＥＬＩＳＡ试剂盒的蜂蜜样品加标回收率试验结果
Ｔａｂｌｅ４ＲｅｃｏｖｅｒｙｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣＡＰｆｏｒｓｐｉｋｅｄｈｏｎｅｙｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ４ＥＬＩＳＡＫｉｔｓ
＊注：实测值小于０．１μｇ／ｋｇ的定为未检出，用ＮＤ表示。
２．８试剂盒的保存期
２．８．１冻融试验结果酶标半抗原和包被抗体酶标板的冻融试验结果见图５。在试验设定的冻融
次数内，酶标半抗原活性依然稳定，包被在酶标板
上的抗体的活性随冻融次数的增加略有降低趋势，但变化不明显。因此，建议该氯霉素试剂盒的冻融次数不大于８次。
２．８．２
４℃和－２０℃保存期试验结果试验结果见图６、
图７。将试剂盒分别在４℃和－２０℃条件下保存１８０ｄ和２４０ｄ，氯霉素直接竞争ＥＬＩＳＡ标准
曲线的线性范围和检测灵敏度基本不变。
包被抗体
酶标半抗原
１．６０１．４０１．２０１．０００．８００．６００．４００．２００．００
ＯＤ值
０
１
２３４５６７８
冻融次数／次
图５冻融试验结果
Ｆｉｇ．５Ｒｅｓｕｌｔｏｆｆｒｏｚｅｎ－ｔｈａｗｙｔｅｓｔ
１２２
第７卷第６期
３讨论
采用包被多克隆抗体的直接竞争ＥＬＩＳＡ法建立氯霉素残留的检测方法。该法操作简便、实用性强，据此构建的ＥＬＩＳＡ试剂盒可用于虾肉、鸡肉、蜂蜜、鲜奶等样品中氯霉素残留的快速检测。该试剂盒的检测限（ＩＣ１０）为０．４７ｎｇ／ｍＬ，样品实际检测限为１￣２μｇ／ｋｇ。根据保存期试验结果，氯霉素ＥＬＩＳＡ试剂盒的保存期至少６个月。建议使用试剂盒时尽量减少冻融次数，少量样品频繁使用时保存于４℃左右，长期不用时，于－２０℃下保存。
对试剂盒的性能测试与评价仅完成了部分重要指标的测试。商用试剂盒因购于市场，不排除个别产品在储运或销售环节中质量下降的可能性。
目前发达国家对动物源性食品的安全要求日趋严格，并利用其在检测技术上的优势，不断提高食品质量标准［９］。他们对于兽药残留特别是氯霉素的检测限要求较高，如欧盟规定０．１μｇ／ｋｇ，我国目前的标准１μｇ／ｋｇ。本文研究的试剂盒虽已基本满足国内动物源性食品中氯霉素残留现场快速检测的要求，但其灵敏度与国外产品尚有一定差距。为尽快达到国际先进水平，国产试剂盒的改良还需要在抗体制备及纯化、酶标记物选用和方法优化等方面做进一步的研究。
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ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆＣｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌＥＬＩＳＡＴｅｓｔＫｉｔ
ＧｕｏＹｉｒｏｎｇＧｕｉＷｅｎｊｕｎＷａｎｇＳｈｕｔｉｎｇＺｈｕＧｕｏｎｉａｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｅｓｔｉｃｉｄｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００２９）
ＡｂｓｔｒａｃｔＡｄｉｒｅｃｔｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗｉｔｈｃｏａｔｅｄｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＰＡｂｓ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ（ＣＡＰ）ｒｅｓｉｄｕｅｉｎｆｏｏｄｏｆａｎｉｍａｌｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄｔｈｅｃｈｌｏ－ｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌＥＬＩＳＡｔｅｓｔｋｉｔｗａｓａｌｓｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＰＡｂｓｈａｄｈｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉ－ｔｙｔｏＣＡＰ．ＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｏｆｔｈｅＣＡＰｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｗａｓｆｒｏｍ０．２４ｔｏ２５０ｎｇ／ｍＬ，ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ（ＩＣ１０）０．４７ｎｇ／ｍＬ．ＡｎｄｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆＣＡＰｆｒｏｍｓｐｉｋｅｄｓａｍｐｌｅｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ７０％ｔｏ１３０％．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｍｅａｓｕｒｅ－ｍｅｎｔｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＥＬＩＳＡｔｅｓｔｋｉｔｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｉｔｓｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇｄｕｒａｔｉｏｎｃｏｕｌｄｂｅ６ｍｏｎｔｈｓａｔｌｅａｓｔ．ＴｈｅＥＬＩＳＡｔｅｓｔｋｉｔｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆＣＡＰｉｎａｂａｔｃｈｏｆｓａｍｐｌｅｓｓｕｃｈａｓｓｈｒｉｍｐ，ｃｈｉｃｋｅｎ，ｈｏｎｅｙａｎｄｍｉｌｋｗｉｔｈｉｎａｓｈｏｒｔｔｉｍｅａｔｌｏｗｃｏｓｔ．
ＫｅｙｗｏｒｄｓＣｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌＥｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙＫｉｔ
氯霉素ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的研制及其性能测试１２３
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
elisa试剂盒
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)
仅供科研使用，不得用于临床检验。 人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择） 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA操作步骤
Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物： ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品： ●TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 ●萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。 实验步骤： ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul 萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！ ●盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。 ●孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液 后30分钟内读板。 读板： ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。
人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒说明书
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂 盒,ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2 （Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行 检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合 物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
ELISA试剂盒
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.360docs.net/doc/265586311.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 25pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本表皮生长因子(EGF)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
人白细胞介素ELISA检测试剂盒
人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
人白介素18(IL-18)ELISA分析检测试剂盒使用说明书
人白介素18（IL-18）ELISA分析检测试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（IL-18）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素18（IL-18）水平。用纯化的转化生长因子（IL-18）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（IL-18），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（IL-18）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素18（IL-18）浓度。 试剂盒内容及其配制： 试剂盒成份96孔配置48孔配置 96/48人份酶标板1块板 （96T） 半块板 （48T） 塑料膜板盖1块半块 标准品：100ng/ml 1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 空白对照1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 标准品稀释缓冲液1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 生物素标记的抗OT抗体1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 亲和链酶素-HRP 1瓶 （12ml） 1瓶（5ml） 洗涤缓冲液1瓶 （20ml） 1瓶（10ml） 底物A 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 底物B 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 终止液1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml）
试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μ mol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1 瓶 （20ml×30倍） ×1瓶 2-8℃保存 自备材料： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul 、50ul 、100ul 、200ul 、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g离心10分钟，取上清液。 5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 人白介素18ELISA试剂盒操作注意事项： ●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
人胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒说明书
人胰高血糖素(GC)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：20 pg/ml -400 pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人GC，且与其他相关物质无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中GC含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的另一株单抗，经过彻底洗涤后用底物显色。颜色的深浅和样品中的GC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。 2.标准品（Standard）：4瓶（冻干品）。 3.酶结合物（HRP-conjugate）：1×6ml/瓶。 4.底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。 5.底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。 6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 7.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
人P16ELISA试剂盒使用说明书
人P16ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人P16的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。用纯化的人P16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P16，再与HRP标记的P16抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人P16浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒说明书
人脂多糖结合蛋白（LBP）ELISA试剂盒说明书 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）脂多糖结合蛋白（LBP）ELISA检测试剂盒使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预 先包被脂多糖结合蛋白（LBP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂多糖结合蛋白（LBP）呈正相 关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞 刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟 取上清。 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 -20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，最终结果乘以5 才是样本实际浓度。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注 微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无 标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无
doc_大鼠CD36分子CD36 酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
仅供科研使用，不得用于临床检验。 大鼠CD36分子（CD36 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称：大鼠CD36分子（CD36 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒） 英文名称：Rat Cluster of differentiation 36（CD36 ）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗大鼠CD36分子（CD36 ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入大鼠CD36分子（CD36 ）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗大鼠CD36分子（CD36 ）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中大鼠CD36分子（CD36 ）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品检测范围：0.218-14ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。