载体构建经验
做酶切要注意的问题
重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。在这里将我的心得分享于大家，这也是我本人几年来一线工作时的经验积累，以期能让大家在实验中少走弯路。所涉及内容如下：
1) 克隆基因的酶切位点问题
2) 载体酶切的问题
3) 连接片段浓度比的问题
在阐明上述问题同时，本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。
一、克隆基因的酶切位点问题
1、克隆位点选择的问题。首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析，列出其所含酶切位点清单。然后对照质粒多克隆位点，所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。这是常识，不赘述。
2、保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。
一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN 段上。如NdeI就属这类，需要加入至少6个保护碱基，常用的HindIII也要三个。
下面是我提供这类酶的列表及其所需最少的保护碱基数，相信下列将有助于大这家的实验设计。
NcoI 4
NdeI 6
NheI 3
NotI 8
PmeI 6
SacI 3
SalI 3
SmaI 3
HindIII 3
BstI 8
SphI 4
XhoI 3
XbaI 3
SmaI 4
案例分析一：本人最初曾选用NdeI克隆位点，未注意到保护碱基数目的问题，设计PCR引物时，引入NdeI酶切位点后，只加上两个保护碱基，一个月内没有进展，始终不能成功构建重组载体。后查文献得知症结所在，在NdeI序列后加上六个保护碱基后，迎刃而解。大家引以为戒啊。
现在普通酶我都引入三个保护碱基。现在碱基合成价格也不贵了，为保证酶切充分，连接顺利，不用节约那点钱，再说若一次不成功，重复实验花费时间与金钱更多，孰利孰弊，不言自明。呵呵。
二、载体酶切的问题
1、质粒的单酶切鉴定。这个问题似乎很简单，但我认为很有着重强调之必要。现在大家手头的质粒都是转来转去的，其中的各酶切位点状况如何，是否能被有效地切开，这些问题都是要核实的。因此，在实验开始之前必须对质粒载体进行单酶切鉴定。现在我每次构建之前，对所选择的克隆位点都要作一一鉴定，例如选择NdeI和HindIII作为克隆位点，就先分别对质粒上这两个酶的酶切位点进行单酶切鉴定。单酶切鉴定能有效地切开后，再发出引物合成定单，进行引物合成；若不能，就按“一”中原则进行调换。
2、连接反应的对照。在实验中，这步骤属于质粒载体与外源DN段的连接反应。成功与否，很大程度上取决于与质粒和DN段的酶切效果。一般情况下，都在通用缓冲液中进行双酶切，但这两种酶在通用缓冲液中酶切效率不一样，这可能导致部分的单缺口的质粒片段存在，这样，在连接反应中，即使在外源DN段存在下，这种单缺口的质粒片段能够进行更快速有效自我连接。最终结果是大量假阳性的菌斑生长。对照连接反应中，在不加入外源片段情况下，实验结果如果有菌斑生长，说明双酶切不充分，质粒DNA必须重新进行双酶切。
实验案例分析2：本人曾用XhoI和HindIII酶切位点构建重组质粒，对质粒进行双酶切后，直接就做连接，未上述两步鉴定，每次结果满板的菌斑。但就是没有阳性。后来对质粒进行单酶要鉴定后，发现XhoI酶切位点损坏。又是一个月没有进展，浪费精力和药品。血的教训啊。因为当时没有注意到：单切质粒是一条带，双切质粒也是一条带，电泳行为上是一样
的，分辨不出。如果做上述任何一个鉴定就会知道问题出在那儿，呵呵。
实验案例分析3：本实验室一个号称实验严谨的大博士，用KpnI和HindIII构建重组质粒，一个月未果，只得阴性斑，不得阳性斑，后怀疑KpnI酶失效。迁怒KpnI，在我不知情下扔掉实验室所有KpnI酶。我得知后，问他做过上述两鉴定实验后，他支吾着说没有，后经鉴定HindIII位点失效。最后他责备本人暗中保留一手，没有倾攮相授。呵呵，他不自责自己不思考，只是木着脑袋做实验，反倒咬一口解铃人，再说我在那以前也不知道他遇到什么难题。呵呵，你说冤不冤？这世道啊!也可看出，实验室人员之间相互交流相当重要。
两星期前写了前两问题后，终于能抽时间写第三个问题，在做好前述两个方面工作后，这个问题相对简单。
三、连接时两片段浓度比问题
一般实验指导手册上都说质粒：片段＝1：3（摩尔比），在实际操作中我以为在1：5甚至1：10为宜。做好“一、二”，16℃10小时后，每次都能有效地连接上。当然还有大肠杆菌感受觉态问题，我们以前自己做，现在懒得做了，都用“天为时代公司”的产品，感觉还不错（特别声明我不是天为公司内线，呵呵）。
这里介绍一个估测处DNA浓度的方法：DNA可以用紫外法检测，也可以电泳对比marker估测，在要求不是很精确情况下，大家不妨试试下面方法：
1．取一平皿。
2．薄薄倒一层含有EB的琼脂糖胶，凝固(4 ℃可以存一个星期)。
3．平皿背面可以画成小方格。
4．一小格中点1 ul样品。
5．另一小格格点1 ul DNA标准品(我一般用Takara 2000 DNA lander，1 ul相当60 ng) 6．凉干后，紫外灯下根据亮度就可以估测了。
OK，我连接时这么估测浓度，5分钟就要可以知道两片段浓度。其实连接片段浓度比可以充许在一个范围内，1：5至1：10都可以，所以上述估测方法在这种情况下是行得通的。
让世界充满爱心得体会
让世界充满爱心得体会 让世界充满爱心得体会1 《让世界充满爱》是一本教育青少年不做社会上的不和谐因素，同心共建和谐社会，更说明了爱是和谐社会构建的基础。爱是关心、是理解、是包容、是尊重、是责任。 那么和谐社会是什么呢？读了这本书以后我知道了和谐社会是由6个因素组成的：1民主法治2公平正义3诚信友爱4充满活力5安定有序6人与自然和谐相处。和谐社会的6个特征是相互联系，相互作用的，我们需要发展经济来增强和谐社会的物质基础，需要发展民主来加强和谐社会的政治保障，需要发展先进文化来巩固和谐社会的精神文明。我还知道原来民主法治离我们很近。民主法治，就是社会主义民主得到充分发扬，依法治国的基本方针得到切实落实，各方面积极因素得到广泛调动。邓小平同志曾说要“有法可依，有法必依，执法必严，违法必究”，就是法治的意思。在这本书里让我认识到自己错误的就是诚信友爱，诚信友爱就是全社会互帮互助、诚实守信，全体人民平等友爱、融洽相处。记得有一次，我想和小伙伴去公园玩，但没钱，因为不敢和爸爸妈妈说，所以我骗他们说我要买书，才要到了20元，这是我第一次撒谎也是我最后一次撒谎，现在想起来真是不应该啊！ 建立和谐社会爱心是少不了的，爱是人生活的动力，可以使
人的心灵得到进化。爱自己，你会认真学习，朝气蓬勃；爱他人，你会乐于奉献，不怕吃苦；爱祖国，你会理想远大，服务社会；爱生活，你会勇于挑战，热爱人生。如果人人都能奉献一份爱，世界就是一个美好的人间！ 让世界充满爱心得体会2 “只要人人都献出一点爱，世界将变成美好的人间……”在歌声落幕的时候，我慢慢的合上了《让世界充满爱》读本，这是一本教育青少年不做社会上的不和谐因素，同心共建和谐社会的好书。 读着《让世界充满爱》我思绪万千；合上《让世界充满爱》我心潮起伏。书中用大量事例和数据向我们讲述了爱是构建和谐社会的基础，爱是关心、是理解、是包容、是尊重、是责任，因为有爱才使我们的世界充满朝气和活力。读本通过民主法治、公平正义、诚信友爱、充满活力、安定有序、人与自然和谐相处六个方面来阐述了社会和谐安定的基本要素和特征。我们需要发展经济来增强和谐社会的物质基础，需要发展民主来加强和谐社会的政治保障，需要发展先进文化来巩固和谐社会的精神文明。 在看完了读本后，又有太多太多的事迹让我感动不已。冯艾、林海燕、还有对工作认真负责的小护士的`形象深深的烙入了我的心底，让我知道了原来我们生长的大家庭中处处有温情，处处洋溢着爱。冯艾，一个复旦大学的女大学生，远离繁华热闹的大都市，积极响应国家号召，4年内两度赴西部基层艰苦地区从事
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤 令狐采学 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 （4）P/E 启动子/增强子 （5）Terms 终止信号 （6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点： 【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型：
（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。 （3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。 综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求： （1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载 体）； （2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与
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载体构建的基本步骤
载体构建 一．原理 依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。 二．操作步骤 1．摇菌 取装有液体培养基的3ml试管两支（依情况而定），每管加40-100μl菌种，过夜摇。2．提质粒 依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗1-2次）。 3．酶切 按下表加入试剂。 反应所需试剂体积（单位：ul） 质粒10 所需内切酶反应缓冲液 2 所需限制性内切核酸酶 1 H2O 7 将加好的EP管置于37℃保温1-2h。（依照提酶切的具体步骤操作；为了达到最佳酶切的效果，最好根据所选用的酶确定所需要的反应温度） 4．电泳检测 将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切是否成功。 5．连接 如果电泳检测酶切成功的话，则仔细将所需的片段切割下来，将胶体回收（依照胶回收试剂盒说明书操作）；之后将回收的片段和载体连接，连接体系如下： 双蒸水5μL 10×T4 DNA连接缓冲液1μL 载体2μL 酶切后的目的基因1μL T4DNA连接酶1μL 总体积10μL 置于温箱，12-16℃，保温8-16h 6．转化 依照转化具体操作步骤做感受态，将上述连接产物进行转化实验，涂板培养，37℃，12-16h。 7．单克隆检测 （1）挑单克隆
先将AMP从冰箱中取出，待融化后，在3ml装有LB液体培养基的试管中加入3μL的AMP，用枪头混匀；取1.5 mlEP管5支（依情况可以多挑几管），给每支管中加500μL上述培养液，然后用接种环（或黄枪头）挑单克隆，挑完后用枪吹打；之后，将挑好的菌摇4-5小时，至混浊即可。 （2）单克隆检测 以每管摇好的菌液为模板，以原有的引物进行PCR，然后将PCR产物跑电泳，观察电泳图像中那几管的条带正确，将正确条带相对应管的菌液再抽取100μL，加到3ml（有LB液体培养液，AMP+）试管中，过夜摇；第二天重摇，将摇好的菌取1ml于1.5mlEP管中送测序，并保种。 注：①挑单克隆时，一定要挑单一圆润的菌落，有卫星斑的不挑。 ②别忘记往培养基中加AMP。 ③用接种环挑菌后，要在酒精灯上反复灼烧，然后再进行下一次挑菌。 三．注意事项 1．连接产物可短时间在-20℃保存，使用时可以取出进行后续实验； 2．在细胞转化时，冰浴和热激要严格控制好时间； 3．连接反应是DNA重组过程中的关键步骤，其成败的重要参数之一就是温度，因此要控制好连接温度。 4．进行黏末端连接时，会产生一定数量的载体自身环化分子，导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题，常采用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）去掉载体的5’-磷酸以抑制DNA 片段的自身环化。 参考： 1.刘进元，常智杰，赵广荣,等.分子生物学实验指导[M].北京:清华大学出版社，2002 2.周俊宜.分子生物学基本技能和策略[M].北京：科学出版社，2003：117-120 3.李海英，杨峰山，邵淑丽,等.现代分子生物学与基因工程[M].北京:化学工业出版社，2008:138-142 4.朱旭芬.基因工程实验指导[M].北京：高等教育出版社，2006:134-139
构建社区邻里和谐心得体会
做为一名社区工作人员，我在长期的社区工作中深刻地认识到：邻里关系做为社区人际关系的重要组成部分，邻里和谐是社会和谐的基础。千金买屋，万金择邻。邻里关系，是现代社区里人与人关系中最重要的部分。邻里和谐，文明祥和，才可能让人人心情舒畅，人人有归属感、安全感，生活才能丰富多彩，有了邻里和谐的音符，才能汇集出全社会和谐的交响。构建和谐的邻里关系，必须坚持以人为本，坚持以政府推动为主导，以服务群众为重点，以居民自治为方向，以维护稳定为基础，以文化活动为载体。通过组织内容丰富、形式多样的邻居节活动，打造文明家园、温馨家园、人文家园、平安家园、优美家园等五个家园为主要内容、贴近居民实际生活需求的活动品牌，如社区文化艺术节、社区“百家宴”、“奉献诚挚爱心，传递邻里真情”的捐赠活动、“淡淡茶，浓浓情”邻里聊天茶话会、左邻右舍体育趣味活动、文明礼仪伴我行、好邻居认养和谐树和亲情树等活动项目，沟通、密切邻里关系，从而从构建和谐的邻里关系入手，建设和谐社区、和谐社会。为适应社会进步和发展的需要，我认为，建设和谐的邻里关系，重点要努力构建和谐向上的三个关系。一、倡导讲求大义、顾全大局的邻里关系，为社会稳定出力献策。要以社会和群众的大义、大局为重，引导广大居民以合作的精神、双赢的理念去有异求同、立同存异，使自己的言行真正服从于社会的繁荣和人民的幸福，这是开展好邻居活动的出发点和落脚点。加区财法联合楼坐落于北山公园，这里空气清新，视野开阔，环境优美，居住在这里的人们有着得天独厚的的休闲娱乐条件，但是政府为了北山森林公园的整体布局考虑，2007年时决定对这个居民楼进行拆迁这个楼的24户居民家庭人口状况、经济条件各不相同，所以面队拆迁，有的困难重重，有的说搬就搬。比邻而居十余年，他们中间有很多思想境界较高的居民，主动为政府拆迁做说服教育工作，在做好思想动员的基础上，他们还四处奔走，为困难户找房子、联系搬家车辆，并为人力不足的邻居帮忙搬运物件。在拆迁日期之前，24户居民全部搬离，这24户居民就是摈弃了小我，服务于大我，服从于大局，先进带后进，以一颗包容之心，告别过去，迎接新生活。正是有了这样的居民，城市建设才做到了市容市貌建设和人文环境建设相媲美。二培育互相关爱、彼此理解的邻里关系，为温馨生活营造氛围。只有心中有爱，才能以同情的态度对待他人。只有心中爱，才能消除彼此的敌视、猜忌和误解。社区曾经接待过一对上访的夫妇，他们反应楼栋里面不知道谁家，每天早出晚归，脚步声特大，不顾及邻居休息，他们住在一楼，因此受打扰最重。工作人员经过调查了解到，这个早出晚归又声音特大的人，是一位单身的残疾母亲，她在擦鞋店做记件，为了多赚一元钱，她早出晚归，因为拄拐杖，行动不便，所以开楼栋门和上楼梯时，声音确实比较大。当社区工作者把这个情况反馈给那对上访夫妇时，女人唏嘘落泪，男人低头不语。从此，每晚他们为她点亮门灯，守侯她的特大声音安全上楼后，他们才香甜地入睡。因为有了爱和理解，让冰冷的墙体和灰色的水泥有了暖色，因为有了爱和理解，让比邻而居的人们，不是亲人，胜似亲人。三建立难有所帮、需有所应的邻里关系，为人际和谐奠定基础。社区做为社会的缩影，构成复杂，在构建社会主义和谐社会的今天，面对利益主体的多样性及其利益诉求的差异性和复杂性，就要引导邻里之间相互包容，并且持之以恒。低保户王丽辉身患残疾，和丈夫离异后，和孩子相依为命，她没有工作，孩子还在上学，经济状况相当不好。社区为她办理了低保后，她生活有了改观，但面对邻居们时，却有了很深的自卑。因此，她和邻居形同陌路，过上了较为封闭的日子。看到这种情况，几个邻居一合计，达成了共识，他们今天去她家要求帮助缝补开线的衣物，明天委托她帮忙照看孩子，并不露痕迹地送去一些水果和自家闲置的衣物，住在楼上的老师还以请她女儿和自己孩子做伴为由，义务为她女儿补课。一月、半年……，王丽辉慢慢向邻居们敞开了心扉，她接受了邻居关心，也为邻居们做一些力所能及的小事。在邻居的帮助下，久违的笑容又回到王丽辉脸上，欢声笑语也再回到她的家里。2007年，她的女儿以优异成绩考取了吉林工业大学，邻居们举办了庆祝会，并为孩子凑起了学费。在前不久为 “我是低保户，在我最困难时，四川地震灾区捐款时，王丽辉捐了100元钱送进捐款箱中她说：
载体构建流程
载体构建SOP流程: GenBank查询目的基因序列→根据ORF序列利用引物设计软件设计引物→表达目的基因的组织或细胞总RNA提取→RT-PCR获取目的基因→酶切目的基因和载体→分别纯化酶切的目的基因和载体并建立连接反应→转化→初步筛选阳性克隆→阳性克隆测序→测序正确的质粒保种并重提质粒 I.获取目的基因/序列片段 一.获取序列信息 通过GENBANK数据和生物信息的方法设计目的基因或目的片段引物（shRNA、miRNA）。 PCR引物的设计原则： ①引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 ②产物不能形成二级结构。 ③引物长度一般在15~30碱基之间。 ④G+C含量在40%~60%之间。 ⑤碱基要随机分布。 ⑥引物自身不能有连续4个碱基的互补。 ⑦引物之间不能有连续4个碱基的互补。 ⑧引物5′端可以修饰。 ⑨引物3′端不可修饰。
⑩避免在引物的3’端使用碱基A。 在实际设计引物中由于ORF两末端序列本身的限制，不能完全按照上述理想的设计原则，但也切记引物不能过长或过短。过长的引物不容易打开其二级结构，与模板结合缓慢，也容易形成引物二聚体，通常不超过35bp(不包括酶切位点和保护碱基)。过短的引物特异性差，扩出其它不相关片段，最终很难得到目的片段，通常不短于18bp(不包括酶切位点和保护碱基)。要将目的基因定向克隆至相应载体，需要在上下游引物两端设计不同的酶切位点，由于酶切位点位于线性末端时酶对其识别切割能力大大降低，需依据NEB目录添加相应保护碱基，酶切时可相应增加时间。 二.制备模板 1.分离高质量RNA：成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。现在实验室通常使用Trizol试剂法提取总RNA，可以从多种组织和细胞中提取高质量的非降解RNA。Trizol试剂法可以从最少100个细胞或1mg组织中提取RNA。在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可
关于校园的心得体会范文
关于校园的心得体会范文 心得体会是指一种读书、实践后所写的感受性文字。一般分为学习体会，工作体会，教学体会，读后感，观后感。以下是小编整理的关于校园的心得体会范文，欢迎 阅读参考! 关于校园的心得体会 通过深入学习实践科学发展观的学习，是我认识到科学发展观是指导发展的理论，也是构建和谐校园文化的根本指南。实现学校的和谐发展，必须以科学发展观为指导，把科学发展观贯穿于构建和谐校园的全过程，落实到构建和谐校园的各个方面。 科学发展观坚持全面协调可持续发展，这是构建和谐校园的基本要求。只有坚持 发展的可持续性，才能使和谐校园建设始终充满生机和活力。和谐文化建设是人的全 面发展的前提条件和基本保障，是实现人的全面发展的必由之路和必然结果，人的全 面发展是和谐文化建设的最重要的终极目标。努力建设体现社会主义特点、时代特征 和具有特色的和谐文化，对于构建和谐校园，推进素质教育改革发展，提高学生的综 合素质有着十分重要的意义。 建设和谐的校园文化，必须坚持坚持科学精神与人文精神的统一;坚持理想主义与 现实主义的统一;坚持民族文化与世界文化的统一。建设和谐的校园文化，必须突出重点，用社会主义核心价值观凝聚人心，把加强理想信念教育、爱国主义教育和诚信教 育贯穿始终。 对学生和教职工进行理想教育，要坚持崇高理想与现实理想的统一，因为缺失了 崇高性的理想是庸俗的理想，离开了现实性的理想是空想，失去二者就失去了理想本 身的价值。要坚持个人理想和社会共同理想的统一，因为社会理想指导和制约着个人 理想的形成，个人理想体现着社会理想，要用共产主义的远大理想和共同理想指导教 师学生确立正确的个人理想。 进行弘扬传统文化，加强爱国主义思想的教育。要把弘扬中国传统文化与建设和 谐的校园文化紧密结合在一起，做到古为今用。中华民族在创造文明中形成的博大精深、极具生命力的传统文化，蕴涵着崇高的民族精神、民族气节和优良网道德;尤其是 爱国主义，她是在长期历史发展过程中形成的热爱祖国、忠于人民的思想行为和情感，表现为对自己祖国和人民的深情和眷恋、为国家贡献力量的责任感和为民族命运不惜 牺牲一切的献身精神。
2019年整理--档案工作如何为构建和谐社会服务心得体会
档案工作如何为构建和谐社会服务心得体会 档案工作如何为构建和谐社会服务心得体会 本文作者：闵涛原创投稿 档案工作如何为构建和谐社会服务 闵涛 构建和谐社会是当今社会各界关注的焦点，它是党和国家从全面建设小康社会、开创中国特色社会主义事业新局面出发提出的一项重大任务。档案工作者只有跟上时代发展的步伐，围绕中心，服务大局，在档案工作中不断创新，才能更好地为构建和谐社会，充分发挥档案工作应有的作用。 一、档案工作与和谐社会的关系 构建社会主义和谐社会是我们党顺应历史发展变化，为推进中国特色社会主义伟大事业做出的重大战略举措，是我国处于体制转履、社会转型这一特殊历史时期经济社会发展的必然要求，是满足人民群众不断增长的物质文化需要的必然要求，是全面落实科学发展观、实现全面建设小康社会奋斗目标的必然要求。和谐社会是以人为本的社会，一切活动的根本目的都是为了人的生存和发展。构建社会主义和谐社会是一项系统工程，涉及经济、政治、文化等各个领域，必须依
靠全社会的共同努力。档案工作是一项基本性极强的工作，其主体是档案，即国家机构、社会组织以及个人在社会活动中直接形成的具有保存价值的不同形式的历史记录，它作为社会共享的知识资源，无疑是社会前进和发展中不可或缺的宝贵财富，构建和谐社会离不开这些宝贵的文化资源，充分发挥档案的社会服务功能对构建社会主义和谐社会将起着积极的作用。因此，构建社会主义和谐社会离不开档案事业的发展，而档案事业与其他社会事业的同步、协调发展，也是和谐社会的重要体现之一。 二、推进档案信息化建设，保证档案服务工作与社会同步、协调发展 随着科学技术的飞速发展，电子计算机和现代通信技术等各种科技手段在社会生活的广泛运用，人类社会步入了崭新的信息化时代，其显著标志就是几乎所有信息都可以转化为可被计算机识别和处理的电子文档，这给档案工作带来了巨大的挑战。为了应对挑战，使档案工作与社会同步、协调发展，加强档案信息化建设、构建信息化档案管理系统也就成为历史发展的必然。建设信息化档案管理系统的目标是使信息传递网络化、信息检索智能化、用户使用共享化，即以数字化信息为档案管理内容，以计算机应用为管理手段，以网络传递为利用方式的一种新型档案管理体系。当前，档案部门应当依托电子政务工程，把现行公开文件信息化纳入档案信息化建设，加快档案数字化加工步伐，有计划、有步骤地建设公开文件目录信息和全文信息数据库，逐步实现公开文件计算机查询、触摸屏自助查询和网上查询，同
如何构建和谐校园心得体会
如何构建和谐校园心得体会 当前，我省上下各级机关都在狠抓纪律作风整顿，按照上级安排，我校也组织全校教师认真学习了省委、 ___关于纪律作风整顿的精神，认真进行了作风整顿。 学校是引领社会发展与文明的机构,理应担负起构建和谐社会的重任,建设和谐校园。和谐校园,就是把学校建设成最适宜学生成长发展的“生态系统”,具备民主、科学、人文、开放的育人环境,体现教育对人的终极关怀。人类已经进入一个“文化”的时代,促进人的发展,建设和谐社会逐步成为现代社会的最高追求。因此,建设“和谐校园”,必须从学校文化建设入手,唤起教育者的文化意识,立足于学校实践,着眼于学校未来,积极构建开放、民主、和谐的学校文化,全面提升学校的文化品位。 客观务实的办学理念 和谐是一切事物发展的核心。和谐即美,它是一笔可供开发的精神财富。在学校教育中,通过和谐去寻求一种秩序,使学校与社会、家庭达成默契,形成合力,真正发挥出“育人”的整体效应。 苏霍姆林斯基说过“学校领导首先是教育思想的领导,其次才是行政领导。”办学的“理念”是学校文化的灵魂,它源于这所学校的
“传统”,又不拘泥于它的“传统”。它是在宏观把握教育发展方向的基础之上的微观思考,对学校的教职员工具有一定的凝聚力、感召力和生命力。同时,它又要具体可感,具有可操作性,易成为大家认同的目标,与教师的发展追求、学生的发展需求相融合,贯穿于学校各项工作的过程中,被全体教师认同和追求,逐步积淀为学校文化。蔡元培先生倡导的北大办学方针“思想自由、兼容并包”,影响着所有进入北大的人,历经百年不衰,与时俱进,至今已成为北京大学发展的灵魂,北大也逐渐成为中国一个传播新思想、新文化的中心。 以“和谐”为理念的学校文化,它既要体现学校的个性,又要具备社会发展的时代性,它是学校发展的灵魂,也是学校追求的终极价值。 以人为本的制度文化 “和谐”并非漠视“矛盾”,“和谐校园”同样需要人本科学、和谐民主的制度保障。 学校建设人本民主与科学规范相一致的制度文化,目的是让所有成员工作生活在一个规范有序又富有人文气息的环境中。在这个环境中,领导与教师、教师与教师、学生与老师,相互尊重、相互理解、和谐融洽。其实质是强调以人为本的思想与科学管理手段的结合,建
构建和谐社会心得体会三
构建和谐社会心得体会三 全球化进程的别断加快，别仅促使文化与经济、政治相互交融，而且进一步凸显了国家文化利益的战略地位，各民族国家对文化利益的诉求、争夺与矛盾也日趋激烈，甚至国家利益矛盾在很大程度上表现为国家文化利益的矛盾。为了当代世界的和谐共存及人类和平与进展的美好以后，倡导别同文明的对话，构建以平等互动、多元共存为基础，以互利共赢、和谐进展为目标的公正合理的国际文化新秩序，关于世界文化的交流与别同文明的共存，具有极为重要的意义。 以往，关于国际秩序，人们更多地是从政治经济的角度加以论述，随着全球化进程所带来的文化交往的扩大，文化霸权、文化侵略对民族国家文化主权构成的威胁，构建国际文化新秩序的重要性与紧迫性日益为人们所认同。这别仅关系到人类所制造的多元文化的走向，而且关系到人类将来将营造怎么样的生存环境和以怎么样的生存方式日子下去。构建国际文化新秩序，需要经过别同文明的对话，就一些基本的咨询题达成共识。 首先，以健康的文化心态，认同与尊重别同文化存在的合理性与合法性。人类文明的进展，取决于健康的文化心态，既别应以冷战式的二元对立思维去看待这一切事物；也别应以多元即无元的心态解构一切价值，走向文化民族主义。文化是一具民族共有的精神家园，它深深地熔铸在民族的生命力、制造力和凝结力之中。文化的民族性，构筑了世界文化的多样性；正是文化多样性与差异性的存在，构成了人类文化生态。认同、尊重别同文化存在的合理性与合法性，既是对其他民族文化的存在权、文化个性表达权和文化进展道路挑选权的充分理解与尊重，也是对其他民族国家文化特色的包容与观赏。正如费孝通先生所言，别但能“各美其美”，而且能“美人之美”。尊重和承认世界文化的多样性已成为当今世界大多数国家所普遍同意的国际关系准则。文化多样性是对每个民族国家文化挑选权利的尊重，这并且也给予了他尊重其他民族国家文化挑选的责任。所以，从任何意义上都能够说，人类文化多样性的存在是人类社会的福祉，也是人类生生别息的生机所在。 多样文化的共存是一种包容，是对差异性文化的观赏。惟独平心静气地看待一具多文明并存和文化互动的世界，才干实现求同存异。从对抗到对话，从冲突到融合，从求同到存异乃至尊异，是当今世界文化的进展态势。中国文化算是在与别同文化的对话与融合中进展起来的，在先秦阶段有诸子百家的对话，未来有汉民族文化与其他少数民族文化的对话，以及佛教文化与中华文化的对话等等。近代以来，从被迫打开国门到主动对外开放，中国文化更是在与西方文化的对话中生长起来的。在全球化日益向纵深进展的今天，别同文明间是固守文明冲突论；依然尊重别同民族、别同国家、别同文化的差异性，以“和而别同”的差异思维消解冷战思维，以“和谐”、“对话”取代“冲突”、“斗争”，这别仅是文化挑选咨询题，而且关系人类以后的命运。文化的差异是最全然的差异，别同文化的人，怎么交往，怎么对话，怎么在同一地球村里和睦相处，共存共荣，是新世纪人们最关注的话题。在维护人类共同利益的前提下，社会主义与资本主义之间在经济、文化、环保、反恐等诸多领域的合作，说明别同社会制度与意识形态之间并非惟独你死我活、一方泯灭另一方的对抗与斗争，也能够共存与共同进展。我们尊重其他国家的制度挑选，构建国际和谐社会，算是要在开放的文化语境、多元的文化交流中，经过别同文明的对话，在充分尊重别同民族、别同宗教和别同文明的多样性的基础上，本着尊重差异、理解个性以及和谐相处的精神，进一步匡正偏见，扩大共识，超越异同，推进建设性合作，使世界文化朝着健康的方向进展。 其次，超越民族国家视野，确立全球性文化意识。尽管人类社会已进入了全球化时代，但社会制度与意识形态的差异、经济制度与经济模式的别同还是存在。要实现别同民族和国家之间的互利共赢，构建国际和谐社会，实现和平与进展的人类共同愿望，就必须超越民族国家的视野，超越别同社会制度与意识形态的局限，确立一种全球性的文化意识。假如片面强调国家利益的排他性、社会制度的差异性与意识形态的对抗性，别仅有悖于人类文明进展
校园文化建设的心得体会
校园文化建设的心得体会 6月3日，我以责任督学的身份参加了全区20XX年“创现”学校校园文化建设展示评比活动，现场感受了黄花初中的棋文化，领略了实验初中七彩星文化，欣赏与品味了九四小学、向阳小学等来自全区20xx年11所“创现”学校的文化建设构想蓝图与实施方略，第一次接受了有关学校文化的专题培训，收获很多，感触颇深。 一、主题是灵魂，既源于生活又高于生活 学校文化是社会文化的一部分，它是以校园为主阵地，以教师、学生为主体，以校园精神为主要特征的一种群体文化。优秀文化是学校发展的根，它不是无源之水，是在学校发展的历史过程中逐步积淀而成的。一所学校，要想办出水平，办出特色，提高品位，在狠抓提高教学质量、规范学校管理的同时，更需要打造自己独特的文化品牌，营造文化育人的氛围，这是学校发展的软实力和灵魂所在。纵观本次展示评比活动，无论是“棋”、“七彩星”、“红莲”、“家”、“德”、“雅”、还是“茶”、“惜”、“礼”、“橘”等文化主题，无不来之不易。就拿邓村乡来说，邓村乡是中国最美小镇，也是名茶之乡，具有鲜明地域特色的茶被三所学校确定为文化主题，围绕这主题，各校充分挖掘茶文化内涵，以茶的清、纯、和、礼、苦尽甘来等茶文化主线，结合学校的实际情况，三校均确定茶主题，但又各不相同，邓村初中的“人杰、
地灵、茶香”旨在打造一个传承茶乡精神，培育优秀人才的校园；邓村小学以“新芽”为主题，构建“茶乡新芽系列”校本教材培育新芽，以“芽芽儿都出彩”为办学理念，培养孩子知礼善茶，纯真做人、不屈不挠的品德；江坪小学则以“茶山书苑”为主题，将茶与书苑有机结合，实现“让芽芽们都出彩”的办学理念，既源自茶，又将茶的生长所需阳光、雨露、营养和生产加工要素溶入评价体系，让师生们在实践中体味到茶又感悟人生如茶的哲理。地域特色与主题的有机融合是几经周折，好不容易才找到切入点，全是大家集体智慧的结晶。 二、物化是基础，既赏心悦目又润物无声 学校文化存在于学校的每一个角落，校内所有建筑物，一草一木，一切活动，均是文化主题的载体。黄花初中校门处黑白相间的棋子，校园内的棋韵广场，寝室里的学生个性展示牌，教学楼上“走好每一步，为一生准备”的校训，班级名称，步步为营的评价体系等等，让人一进校园就能感受到学校的特色文化；江坪小学根据学校小的特点，一进校园一目了然的优势，计划将“自信扬善，博学创新”校训，“让芽芽们都出彩”办学理念用镏金大字立于教学楼上，让学生一进校门就见到，时时警醒自己注重自己的言行举止，逐渐养成优秀的品质，校门右手边是具有茶乡书宛特色的文化墙，用茶道、茶德、茶精神、茶艺、茶学、茶画、茶故事等，营造出一个茶乡特色文化氛围，让学
慢病毒载体包装构建过程
慢病毒载体包装构建过程 原理：慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 概念：慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 辅助成分：慢病毒载体辅助成分包括：慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。 基本原理：慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。
包装成分：由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞)，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 载体成分：与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。 一、实验流程（1和2为并列步骤） 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养24和48h后，分别收集富含
构建和谐校园心得体会
精选范文:构建和谐校园心得体会(共2篇)一、学校要负担起新时代历史重任学校的功能在于教化，除传承文化外，还有塑造人的品格，行为、思想、情感等综合素质。任何一个国家，任何一个时代，学校始终是一个主阵地，在中国的历史长河中，学校造就了灿若繁星的风流人物，他们的智慧和才干，引领着人民群众创造了历史，推动着时代的向前发展，学校成了人们心中神圣的殿堂。在二十一世纪，社会主义中国改革开放的今天，要实现中华民族的伟大复兴，关键在人才，而人才的培养在教育，教育的主阵地在学校，教育“金字塔”在基础教育，而基础教育的薄弱环节在农村。所以大力发展农村基础教育让农村基础教育驶入时代的快车道，除国家大力扶持指引外，农村学校更需自身的建设、完善、提高。构建和谐校园，实现农村基础教育的可持续发展，担负起历史赋予的时代使命。二、实现目标的几条途径1、发挥党的灵魂作用自中国共产党创立之日起，其党情与宗旨以前所未有的先进性，给灾难深重的旧中国带来黎明的曙光，经过艰难曲折的发展历程和艰苦卓绝的战斗洗礼，中国共产党以其实际行动证明，让广大人民清醒认识到，只有共产党才能救中国，人民自觉的加入的共产党所领导的革命队伍。以成为一名革命战士为荣，积极加入到共产党队伍，以成为一个共产党员为荣。中国共产党为人民打天下，谋幸福，赢得了广大人民的拥护，崇敬与爱戴，大大的增强了党的影响力、号召力、领导力。新中国成立以后，作为中国唯一执政党，中国共产党始终秉承其党性、宗旨，全心全意搞建设，一心一意谋发展，不断提高综合国力，不断改善人民的生活水平。中国从一个极贫、极若、任人宰割的旧中国，逐渐发展成为一个繁荣昌盛、国际地位日益提高的新中国。在中国的发展中，哪里有艰难，哪里有险阻，哪里就有共产党。立党为公，执政为民，党的威性、地位日益增强，党的队伍日益壮大。学校作为社会主义中国其中一个重要组成部分，共产党员要义不容辞的发挥其核心领导、战斗堡垒作用，发挥其模范先锋作用，战斗在前，改革在先，带领学校稳步、健康、快速发展，成为学校的灵魂。2、发挥领导队伍的领导作用（1）、学校法人代表校长是一所学校的核心人物，必须德才兼备，“一个好校长就是一所好学校”，此言强调了校长在一所学校中的特殊位置，其一言一行影响着一所学校以及这所学校中的师生，所以必须德才兼备，才能建设出一所好学校。校长首先必须具备“德”。率先垂范，为了学校的发展殚精竭虑，替上级负责，为下级负责，以德治校，以德感人，以德育人。其二，必须具备“才”，一要有一定的政治水平，把握办学方向。二要有用人水平，选拔有德有能之士，得其所，尽其才，尽其用，忌任人唯亲，拉帮结派。三要有治校水平，坚决执行国家的各项教育法规、法律、法令条例，结合实际制定全方位一系列的制度，规章。有规矩才能有方圆，以法治校。四要有领导艺术。审时度势，洞微察变，灵活科学、合理处理学校的各项任务，作出正确判断、决策，指导全局运转。（2）领导团队。一个篱笆三个桩，一个好汉三个帮，一个人的智慧和力量毕竟是有限的。校长要选好副手，各挡一面，配合全局，选人应：一要选有德之人。只有品行端正、高尚者才能心中有公、胸怀，处其位，竭其力，尽其智，务其事，那些品行不端者，虽有的也很有才能，但才能都不用在正道，反而于事不利，于校不利。二要选有才之人，唯其有才，才能当有用武之地的英雄，尽才挥洒，兴利除弊，学校兴旺，人的才能各有千秋，要因才授职，因才排活，在各自岗位各尽所能。一群有德有才有识有着共同奋斗目标的领导团队，难道不是一个理想的领导团队？其战斗力不言而喻。3、构建新时代的教师队伍教师是学校的主力军，是各种教育教学目标的具体实施者，事关教育事业的心衰成败，因此，必须时时加强教师队伍的建设。（1）、为人师表。教师必须恪守职业道德，不断提高自身道德修养，要以自己高尚的品德、言行、思想、情感去熏陶濡染下一代。近朱者赤，近墨者黑，身正为范，教师要谨言慎行，到处严格要求自己，树立为人师表的丰碑。（2）、学识渊博。要给学生一杯水，首先自己要有一桶水。学多为师，教师必须有丰富的知识储备，才能胜任“传道、授业、解惑”之重任，还要不断学习，更新知识结构，莫让知识老化，跟上时代的节奏，才能永做时代先锋。（3）、专业水平过硬。教师作为一项特殊事业，其天职是教书育人，必须练就过硬的专业水