针刺对大鼠痛域以及血清SOD、MDA的影响
目前，关于针刺镇痛机制的研究多集中在对神经结构、神经递质、内分泌、免疫等方面，而对氧代谢相关物质和氧自由基与针刺镇痛之间的关系则未见报道。笔者通过观察电针对大鼠痛阈和大鼠血清中氧代谢相关指标(SOD、mDA)的影响，试从氧代
谢、自由基的角度探讨针刺镇痛的作用机制。
1．材料与方法
1．1实验动物
健康SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，
清洁级)30只，雌雄各半，体重250—3009，所有动物均在通风及温
度、湿度适宜的条件下饲养，正常进食它gTg。适应性喂养一周。
1．2主要试荆、设备
超氧化物歧化酶(SoD)测定试剂盒(南京建成生物工程研
究所)，丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，
分析纯冰醋酸、75％乙醇。SW一200光热尾痛测试仪(成都泰盟
科技有限公司)，C,6805一II型电针治疗仪(上海医疗器械厂)，
721分光光度计(上海第三分析仪器厂)。
1．3实验方法
1．3．1动物分组
30只SD大鼠按随机分组原则分成正常对照组、电针非经非
穴组、电针穴位组。
(1)正常对照组：不作任何针刺处理，先测定其基础痛阈：
SOD、MDA，30min后再测其痛阈、s0D、MDA。
(2)电针非经非穴组：电针前测基础痛阈、SOD、MDA，电针
左侧“足三里”下2mm旁开3mm，左侧“昆仑”上2mm旁开3mm，
持续30min，电针结束后再检测其痛阈、SOD、MDA。
(3)电针穴位组：电针前测其基础痛阈、SOD、MDA。电针左
侧“足三里”与“昆仑”穴，持续30rain，电针结束后再检测其痛
阈、SOD、MDA。
1．3．2电针方法
电针穴位组取大鼠左侧“足三里”与“昆仑”穴，取穴标准及
针刺深度按照中国针灸学会实验针灸研究会华兴邦等制定的
(g-用动物腧穴图谱》标准而定。。足三里”，膝关节后外侧，在腓
骨小头下约5mm处，直刺7mm；“昆仑”，后肢外踝与跟腱之间的
凹陷中，直刺3mm。采用0．38×13mm不锈钢无菌针进行针刺，
接C,6805一Ⅱ型电针治疗仪，疏密波，频率2-4Hz，强度 以针柄颤动、大鼠后肢肌肉轻微抖动而不嘶叫，保持安静为度， 持续30 rain。电针非经非穴组针刺部位为“足三里”下2mm旁开 3mm，“昆仑”上2mm旁开3mm，其他参数同电针穴位组。 1．3．3标本采集 将清醒鼠装入深颜色的布袋中，将鼠身裹紧，露出尾巴，用 酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张。剪断尾尖后，用手轻轻地 从尾根部向尾尖挤捏，并将肝素抗凝管置于尾尖下部，盛装血 液。取血后，用棉球压迫尾尖止血。 1．4指标检测 1．4．1痛阈测定 以大鼠对伤害性刺激所引起的甩尾反应时间作为痛阈指 标。原理是利用聚光灯发出的辐射热刺激大鼠尾巴，引起大鼠 甩尾。甩尾反应时间缩短代表痛阈降低，甩尾反应时间增加代 表痛阈升高。 将准备实验的老鼠装入固定筒内，尾部暴露于外，实验前先 用75％乙醇擦净鼠尾，墨汁涂于尾部的下1／3处作为光刺激点 的标志；将鼠尾放入导槽内，使光刺激点标志正对发光处，待动物安静后即可进行实验。打开光热尾痛测试仪的电源开关，进 入操作界面。调整并选定光照强度为50的旋钮。确认老鼠尾巴 放置到位后，即可按“起／停”按钮开始实验。此时出光口有耀眼灯光射出。老鼠一旦甩尾后，光热尾痛测试仪状态显示“停止”。表明实验结束，记录“反应时间”。隔3分钟后再测一次，取两次的平均值作为大鼠此时段的痛阕。 1．4．2 SOD、MDA检测 严格按照试剂盒说明书步骤操作，以黄嘌呤氧化酶法检测 SOD，硫代巴比妥酸法检测MDA。以721分光光度计检测两者的吸光值，并依据配置试剂浓度按公式计算出SOD活力、MDA 浓度。 1．5统计方法 计量资料均采用均数4-标准差(i 4-s)表示，数据运用 SPSSl6．0统计软件进行处理，组问比较采用单因素方差分析。 2结果 2．1各组针刺前后痛闲、SOD、MDA的比较(见表1) 表1各组针刺前后痛嗣、SOD、MDA的比较(i 4-B) 表1显示：①各组间的基础痛阈、SOD、MDA等指标均无显 著性差异(P>0．05)②电针穴位组：经电针诱导30rain后，其痛阈、SOD等指标均较电针前显著升高，MDA显著降低，经统计学处理，均有极显著性差异(P 裹2电针后各组大鼠痛阐及血清SOD、MDA含量的比较(i 4-8) 表2显示：①电针穴位组经电针刺激后，大鼠痛阈、血清SOD 含量明显升高、MDA含量明显降低，与正常对照组相比，均有极显著性差异(P<0．01)；②电针非经非穴组SOD含量亦有升高， 与正常对照组相比，有显著性差异(P<0．05)；③电针后，电针穴位组痛阈、SOD升高和MDA降低与电针非经非穴组比较均有显著差异(P<0．05)。 3讨论 现代生理学认为，氧代谢是人体内最基本、最重要的生命现 象和过程，体内任何系统的生理活动都离不开氧代谢，反之，疾病的发生也与氧代谢异常密切相关。没有了氧代谢，生命就无 法延续。 生理情况下，机体内可产生少量的氧自由基，其发挥生理作 用(参与前列腺素及凝血酶原的合成、抗炎)后能够被体内抗氧 化酶迅速消除，保护机体免受损伤。过剩的氧自由基则攻击生 物膜中的不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化作用，并由此形成脂质过氧化物MDA。其含量可以反映机体细胞受自由基攻击的严重 程度，SOD的活性可反映机体清除氧自由基的能力。 大量研究显示：氧代谢过程中产生的氧自由基在体内表达 的上调可能是产生疼痛的原因之一，反之疼痛可以进一步导致 氧自由基代谢紊乱，使血清SOD、MDA含量失去动态平衡。 ，Haquec¨发现慢性原发性头面痛时氧自由基(OFR)生成增 多，他们测定受试者体内·OH的标志物一，3一二羟苯甲酸 )，结果发现头面痛患者血 浆及尿中均有高水平的DHB，推测可能是由于心理紧张造成体 内氧化量增加，引发OFR，尤其是·OH增加，·OH再通过攻击组织引发疼痛。Pascu[21等报道十二指肠溃疡痛与OFR的关系，他们采用强效自由基清除剂如SOD，经内窥镜对12名十二指肠溃疡痛患者作环溃疡注射后，疾病均消失，说明OFR参与了十二指肠溃疡痛。宋氏[31等在OFR致痛方面作了探索，发现OFR在外周和脊髓均有致痛作用，而氧自由基清除剂如SOD、维生紊E 则可拮抗此致痛作用。樊氏㈨等在研究细辛对小鼠组织氧自由 基代谢的影响中发现，细辛能够降低氧自由基的含量，减轻对组织的损伤。 通过本实验观察到，电针穴位组经电针刺激30min后，痛阈 较针刺前显著升高，经统计学处理，有极显著性差异(P<0．01)；血清组织中SOD含量明显升高，MDA含量明显降低，均有极显著性差异(P<0．01)，表明电针穴位提高大鼠痛阈的同时对 OD、MDA含量具有显著的调节作用。 本实验结果表明，电针大鼠“足三里”、。昆仑”等穴具有显著 的镇痛作用；同时也观察到SOD、MDA与针刺镇痛效应有着密切的联系，电针能提高血清组织SOD的含量、降低MDA的含量。提示：针灸对氧代谢自由基的调节可能为针刺镇痛效应的机制 之一，我们正在继续深入这方面的研究。 实验指导 目录 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取－碱裂解法 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验六动物组织细胞基因组 DNA提取 实验七 DNA的定量 实验八 PCR基因扩增 实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组 实验十一动物组织细胞总RNA的提取 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用 事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。 一、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试 离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。 2. 操作程序 （1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。 （2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。 （3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。 （4）按控制面板的运转键，离心机开始运转。在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。 （5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。 （6）按控制面板上的停止键，数码管显示dedT，数秒钟后即显示闪烁的转速值，这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项 （1）离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。 1.1抗氧化肽的研究进展 生物体内具有许多蛋白质类抗氧化活性物质。随着对蛋白酶解技术的深入研究，人们发现，介于蛋白质和氨基酸间的肽类，与其他生物分子如氨基酸、大分子蛋白质等相比较在食品方面安全性更高，且具有极强的活性和多样性，动植物蛋白水解所得的具有一定生理活性的功能性多肽及寡肽产品被广泛开发利用，如具有抑制血压升高的食品，及有特殊氨基酸组成的、可以作为患者营养补剂的寡肽等。随着人们发现某些蛋白质具有清除生物体内过量的游离基，抑制脂质氧化的作用后，肽的抗氧化性的研究成为一大热点。目前对以多种动植物蛋白为原料，制备高效、低毒的天然抗氧化肽的研究，已经取得的一定的成果。 1.1.1 抗氧化肽的种类 人们对抗氧化肽研究的种类有很多，常见的有大豆肽、乳蛋白肽和肌肽，也有一些特殊的蛋白肽，如苜蓿叶蛋白肽等。有些活性肽是直接提取的，也有通过蛋白水解方法获得的。 1.1大豆肽 大豆肽是大豆蛋白水解得到的小肽Wendee Chiang 等采用酶膜反应器连续生产大豆多肽，由于及时分离了酶解生成的多肽，消除了产物反馈干扰，提高了酶解效率，并采用氧化稳定指数（OSI检测了大豆分离蛋白及其水解物的抗氧化活性，结果显示大豆分离蛋白酶解后抗氧化活性明显提高。Hua- Mingchen 等采用 5 种蛋白酶对大豆 7S 球蛋白进行水解，采用硫酸氰铁法检测了不同水解产物的抗氧化活性，并采用G- 25 凝胶层析和反相高压液相色谱对水解产物进行分离、提纯，检测不同大豆多肽的抗氧化活性，得到了6 个抗氧化肽的氨基酸序列。 1.2乳蛋白肽 乳蛋白肽是乳品深加工的理想产品，刘志东等研究乳清分离蛋白（WPI）酶解物对自由基的清除效果，并证明了木瓜蛋白酶酶解物和胰蛋白酶酶解物对 DPPH 自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力和还原能力强于胰凝乳蛋白酶酶解物和胃蛋白酶酶解物。Sandrine G. Rival 等[1]研究了酪蛋白及酪蛋白水解肽的抗氧化活性，认为酪蛋白本身具有抗氧化活性，并不因脱磷酸作用和水解作用而失去这一活性，并使用酪蛋白及酪蛋白水解肽作为抗氧化剂进行研究。 1.3 肌肽 1900 年俄国首次发现肌肽，它是一种水溶性天然二肽。Eun- Kyung Kim 等[2]通过纯化鹿肉酶解物来获得抗氧化肽。AI SAIGA 等利用 2 种酶分别水解猪肌原蛋白来获得抗氧化肽，并对木瓜蛋白酶水解后的产物进行分离纯化，获得5 个具有抗氧化活性的肽片段，表示为 Asp- Ser- Gly- Val- Thr、Ile- Glu- Ala- Glu- Gly- Glu、Asp- Ala- Gln- Glu- Lys- Leu- Glu、Glu- Glu- Leu- Asp- Asn- Ala- Leu- Asn、Val- Pro - Ser- Ile- Asp- Asp- Gln- Gly- Glu- Leu- Met，其中 Asp - Ala- Gln- Glu- Lys- Leu- Glu 抗氧化能力最强。 1.3其他肽 谢正军等对苜蓿叶蛋白抗氧化肽水解用酶进行筛选研究，结果表明碱性蛋白酶Alcalase 是 生物活性肽的研究及其进展 摘要：生物活性肽作为一种来源广泛、种类繁多、功能性良好的生命因子，目前已成为全球范围内的研究热点。研究表明这些肽除具有常规的生物活性,如增加矿物质吸收、调节血压、抗菌、抗氧化、降胆固醇、免疫调节之外还对人类营养有调节作用,因而受到广泛关注。本文综述了生物活性肽的种类、生理功能、吸收、制备研究进展,以期为生物活性肽的进一步研究和应用提供参考。 关键词：生物活性肽，生理活性，吸收 Research and progress of biological active peptide Abstract:Bioactive peptides as one rich sources, wide variety, good functional life factors have been a global research hot spot. Studies have shown that these peptides have some conventional biological activities, such as increase mineral absorption, adjust blood pressure, antibacterial, antioxidant, decrease cholesterol, regulate immune. What’s more, they also have a regulating effect on human nutrition, so they have attracted widely attention. The kinds of bioactive peptides was reviewed in this paper, preparation research progress of physiological function, absorption and biological active peptide in order to provide reference for further research and application. Key words:Biological active peptide, Physiological activity, Absorb 1.功能肽的简介 肽(peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。是由蛋白质中20种天然氨基酸以不同的组合和排列的方式构成的，从二肽到复杂的线性或者环状的多肽的总成。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽( biologically active peptide/ bioactive peptide/ biopeptide) 是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(functional peptide)[1]。肽由氨基酸组成,人体存在20 种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的[2,3]。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10 - 7mol/ L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1 mL 的多肽用60 倍水稀释后,仍然具有生理功能。功能肽是源于蛋白质的多功能化合物，是多样化且来源充足的食品原料，具有多种人体代谢和生理调节功能，如易消化吸收、促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等[4] 现代营养学研究发现，人体摄入蛋白质经消化道中的酶作用后，大部分是以寡肽的形式 目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1 材料与方法 (3) 1.1.1 实验动物与实验药物 (3) 1.1.2 实验动物处理方法、分组及所需实验试剂和器材 (3) 1.1.3 标本收集 (4) 1.1.4 放射免疫实验所需主要试剂、仪器及实验方法 (5) 1.1.5 免疫组化实验所需主要试剂、仪器及实验步骤 (5) 1.2 结果 (8) 1.2.1 三组大鼠在不同给药周期血清E2水平的比较 (8) 1.2.2三组大鼠在不同给药周期血清FSH水平的比较 (9) 1.2.3三组大鼠在不同给药周期血清LH水平的比较 (10) 1.2.4 各组大鼠子宫组织中ER表达强度的比较 (11) 1.2.5 各组大鼠阴道壁组织中ER表达强度的比较 (14) 1.3 讨论 (15) 1.3.1 围绝经期性激素的改变 (15) 1.3.2 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的疗效 (16) 1.3.3 黑升麻提取物的非激素样作用 (17) 1.3.4 黑升麻提取物的作用机制假说 (18) 1.3.5 黑升麻提取物的用药周期 (20) 1.3.6 展望 (21) 参考文献 (21) 第2章综述 (26) 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的作用机制 (26) 2.1 摘要 (26) 2.2 概述 (27) 2.2.1 黑升麻提取物来自欧洲 (27) 2.2.2 引进中国 (28) - V - 华北理工大学硕士学位论文 2.3 黑升麻提取物作用机制假说 (29) 2.3.1 神经内分泌作用假说 (29) 2.3.2 选择性雌激素受体调节剂(SERM)作用机制假说 (30) 2.3.3 抗氧化作用和炎症反应作用机制假说 (30) 2.4 黑升麻提取物临床疗效的评价 (30) 2.5 黑升麻提取物在临床应用时的不良反应 (31) 2.6 黑升麻提取物临床应用的前景 (32) 参考文献 (33) 结论 (36) 致谢 (37) 导师简介 (38) 作者简介 (39) 学位论文数据集 (40) - VI - 157 第19卷 第10期 2017 年 10 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 19 No. 10 Oct .，2017 不孕症是一种临床常见的生育障碍性疾病，[1] 并且随着环境恶化、饮食结构及生活节奏的变化及性传播疾病的蔓延，不孕症的发病率正在以难以想象的速度逐年上升，严重影响家庭和谐与社会稳定。我们不难发现，现如今治疗不孕症的最常见有效手段是辅助生殖技术，临床上个体化的控制性超促排卵方案，实验室胚胎培养、受精技术的不断进步，才使得胚胎质量得到不断地优化，但体外授精（IVF） 胚胎移植的妊娠率仍然只有 20%~30%[2] 。胚胎着床受诸多方面因素的影响，胚胎质量和子宫内膜容受性是胚胎成功着床的两个重要环节，其中2/3原因 是由于子宫内膜容受性不足所导致的[3] 。简单来说具有容受性的内膜加上优质的胚胎，且二者发育同步，胚胎成功着床的几率才会大。因此治疗关键在 于改善子宫内膜容受性，目前我们的治疗上处于探 索阶段，西医最常使用的是雌激素，它不但可以上调子宫内膜雌激素受体表达，而且可以改善子宫发育，使内膜厚度增加，间接来提高子宫内膜容受性。但临床上仍存在有使用大量雌激素时，内膜不适合胚胎着床的情况。此外雌激素在一定程度上存在一定的毒副作用，例如严重的肝肾疾病、激素依赖、肿瘤、血栓性相关疾病等风险。因此我们希望找到安全有效可以充分替代雌激素的药物来改善子宫内膜容受性及提高妊娠率。在大量临床实践中我们发现紫河车用于助孕治疗疗效显著，在改善子宫内膜容受性方面有着一定的优势。因此我们希望通过此项试验来观察它对内膜容受性的影响。本项研究是观察超促排卵大鼠模型在用药前后，测定血清中雌孕激素 紫河车对超排卵大鼠血清雌孕激素及妊娠率影响 邱晨1，施晓玲2，凌娜2 （1.辽宁中医药大学，辽宁?沈阳?110847；2.辽宁中医药大学附属医院，辽宁?沈阳?110032） 摘 要： 目的：了解紫河车对超排卵大鼠模型血清中雌、孕激素、妊娠率对子宫内膜容受性的影响，在辅助生殖过程中制定个体化治疗方案提供指导依据。方法：将80只大鼠随机分为4组，每组各20只，即空白组、模型组、雌二醇对照组、紫河车实验组。复制大鼠超排卵模型，雌雄合笼，在发现精子或阴栓记为pd1，通过测定pd2、pd5、pd12血清中雌、孕激素，剖取子宫，统计胚胎数目及妊娠率。结果：空白组及模型组的雌孕激素均明显低于雌二醇对照组及紫河车实验组。紫河车实验组胚胎数目和妊娠率虽然低于雌二醇对照组，但是不存在明显差异。结论：紫河车可以提高血清中雌、孕激素水平，间接改善子宫内膜容受性，从而提高妊娠率。 关键词：紫河车；超促排卵大鼠；雌孕激素；妊娠率 中图分类号：R282.71 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 10- 0157- 03 收稿日期：2017-02-18 基金项目：辽宁省自然基金资助项目（2014020056）作者简介：邱晨（1992-），女，辽宁沈阳人，硕士研究生，研究方向：中医妇科。通讯作者：施晓玲（1972-），女，辽宁沈阳人，主任医师，学士，研究方向：中西医结合不孕不育及辅助生殖。 凌娜（1977-），女，辽宁沈阳人，主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：中医妇科。 Effection of Human Placenta on Estrogen and Progesterone and the Pregnancy Rate of Superovulated Rats QIU Chen 1，SHI Xiaoling 2，LING Na 2 （1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China；2.Affilliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To study the effection of human placenta on the estrogen and progesterone and pregnancy rate in superovulated rats and the effection of pregnancy rate on the endometrial receptivity. To provide guidance for making individualized treatment plan in the process of assisted reproduction. Methods ：Eighty rats were divided into four groups by random sample，blank group，model group，estradiol control group and human placenta experimental group with twenty rats respectively. Copied rat-superovulation model，male and female are put into the same cage. When finding sperm and vaginal plug，pd1 was denoted，then test the estrogen and progestogen in pd2，pd5 and pd12，and finally cope with the embryo number and pregnancy rate. Results ：The levels of embryo number and pregnancy rate in blank group and model group were obviously lower than those of estradiol control group and human placenta experimental group. At though embryo number and pregnancy rate in human placenta were lower than estradiol control group，but there was no obvious difference. Conclusion ：Human placenta can improve the level of female progestational hormone in serum，indirect improve endometrial receptive，increase pregnancy rate. Keywords：human placenta；superovulated rats；estrogen and progesterone；pregnancy rate DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.10.047 雌鼠的手术过程： 1. 麻醉：先将大鼠采用40mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉，取俯卧位于手术面板上。 2. 备皮：剪去大鼠背部中下部分被毛，碘伏消毒 3. 切口：在无菌条件下在背部中线旁0.5-1.0cm做纵行切口。位置大概位于大鼠肋弓与脊椎边缘夹角的位置稍微向下0.5-1cm，向两侧分离皮肤，筋膜及肌肉，在左右两侧腹后壁肌肉层较薄弱处打开腹腔，切口尽量小。 4. 寻找卵巢：大鼠的活体卵巢呈粉红色，表面呈桑椹状，处于发情周期时可能会充血而呈深红色。刚一开始寻找卵巢比较困难，有以下几个线索：（1）先找到输卵管，输卵管颜色深红，与肠管相比壁厚较饱满，然后沿着输卵管寻找末端的卵巢；（2）卵巢周围有一块脂肪，与其他组织明显不同，从切口视野下也比较容易识别，呈游离状；（3）卵巢因纤维组织牵引脂肪形成一小凹，如果切口位置得当的话能直接看到此小凹，从此处用无齿镊轻提脂肪就可以看到桑椹状黄豆粒大小的卵巢；（4）要注意的一点是右侧卵巢比左侧要高一些，寻找右侧卵巢的时候稍加注意 5. 切除：以无齿镊探入腹腔将卵巢连带输卵管末端轻轻提出体外，小号止血钳在子宫末端与卵巢之间的最细处夹闭，0号手术线结扎后用眼科剪将卵巢全部切除；松开止血钳，将子宫轻轻还纳入腹腔，分别缝合肌肉层和皮肤，对皮后酒精棉球清理手术切口。 手术过程中需要注意动作轻柔，尽量避免对肠管进行过分牵拉和夹捏；卵巢切除前的结扎一定要可靠，避免术后出血造成大鼠死亡（结扎很重要，因为卵巢周围的脂肪组织比较松软，很容易造成结扎线脱落，务必注意，不然老鼠内出血死亡，前功尽弃）。 雄大鼠的去势： 1.麻醉剂的选用。用无巴比妥或乙醚都行。 2.麻醉后，仰卧，露出睾丸，常规消毒等，切一0.5厘米的小口（视情况而定，如果太小可以再切大点，但不要太大），把睾丸挤出，结扎精索，此时可以摘除睾丸，注意消毒处理，缝合即可。 3.去势后的大鼠不能放在温度太低的环境下。注意饲养条件。 微生物试验操作步骤 1.前期准备工作（红色字体需要购买） 10ml离心管（80管）、培养皿（预实验36板，正式试验648板，共计684板）、EP管（预实验36管，正式试验108管，144管）、枪头（5ml、1ml、200ul）、生理盐水现配现用（0.85）2.，灭菌处理 将离心管、枪头、生理盐水、培养基放入高压灭菌锅中灭菌处理后待用。 3.制备不同梯度的样品溶液 预实验 a.梯度稀释试验前一天晚上取置于-80℃盲肠食糜样品于4℃冰箱融化，将需要用到的离心管和EP管分别编号待用。试验期间取盲肠食糜0.5~1g于灭菌后的10ml离心管中，按1：10比例加入生理盐水，制成10-1浓度的样品溶液。然后取0.5ml10-1浓度的样品溶液于下一离心管，按1：10比例加入生理盐水，制成10-2浓度的样品溶液。然后然后取0.1ml10-2浓度的样品溶液于EP管中，按1：1010-3比例加入生理盐水，制成10-3浓度的样品溶液。然后依次如上分别配制10-4、10-5、10-6、10-7、10-8样品溶液。每一次取样前离心管和EP管都要在微型振荡器上震荡混匀。 b.接种和培养：按照平板涂布法进行。分别取各稀释管溶液100μl接种到选择性培养基，大肠杆菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。乳酸菌选择性培养基置5%CO2培养箱，37℃培养48h。双歧杆菌选择性培养基置厌氧发酵罐内，37℃培养48h。沙门氏菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。 c. 微生物计数与鉴定：采用常规微生物平板菌落计数法，选择长有30-300个菌落的平板较为合适，用每克肠道内容物中细菌个数的对数表示( 1gCFU /g) 正式试验 按照预实验操作步骤及适宜梯度进行试验。 4.培养基 总需氧菌营养琼脂（NA）34567 乳酸菌MRS琼脂碱性厌氧234567 双歧杆菌BL琼脂厌氧234567产气袋 大肠杆菌麦康凯需氧234567 沙门氏菌XLD 需氧2345 小分子活性肽的神奇功效 经研究表明，小分子活性肽辅以多种维生素和复合微量元素可诱导和促进T淋巴细胞分化、成熟；调节T淋巴细胞群比例，使CD4/CD8趋于正常。同时，增强巨噬细胞的吞噬能力和红细胞免疫功能。可显着增加淋巴细胞功能，并能有效地防止辐射和放化疗及其他污染中毒后白细胞数量的减少，有效地抑制肿瘤细胞生长，起到改善免疫功能的作用。从间接作用而言，小分子活性肽可促使粪便排泄，降低血清胆固醇浓度，使甾醇排泄增加和肝脏高胆固醇浓度下降，对治疗原发性高血压有一定的功效。能抑制脂肪的积蓄，抑制有害菌，排除毒素，促进其对食物营养的消化吸收，以提高人体对药物有效成分的吸收，具有很高的生理活性，人们经常食用小分子活性肽，在强身保健方面有如下功效： 1、主动吸收，迅速恢复体能 肽是蛋白质与氨基酸的中间物质，由数个氨基酸结合而成。分子大小介于蛋白质与氨基酸之间。但是，比氨基酸分子大的肽在人体内被吸收的速度反而比氨基酸更快，原因就在于：小分子活性肽是数个氨基酸分子集中起来被整体吸收，而氨基酸需要一个一个地 被吸收，小分子活性肽能比氨基酸更迅速地被人体吸收。 在恢复体力方面，小分子活性肽也发挥着优异的功效。人体在进行激烈运动时，为了补给能量就需要消耗肌肉中的氨基酸。就是说，身体需要能量的时候就会从肌肉中获取。肌肉中的氨基酸被消耗掉后，肌肉组织就会受到损伤、肌肉产生疲劳感、难以发挥原有的力量。服用小分子活性肽3分钟进入血液，5分 钟转换为体能，在运动前、运动中补给活性肽可以给身体提供充足的能量，能够抑制肌肉力量的下降、长时间维持充沛的体力。 2、消除疲劳 疲劳是由大脑感知的。当人体感到疲劳的时候，疲劳的机体部位向大脑发出疲劳信息，于是人就感到疲劳。从这个意义上说，感知疲劳的中心就在大脑里。如果没有疲劳这种生理反应，我们就会无休止的劳动下去，直至死亡。 大脑疲劳是由氧化血红蛋白浓度的上升引起的，服用小分子活性肽可以抑制氧化血红蛋白浓度的上升，因而能够缓和大脑的精神压力，使人在学习时保持沉着冷静、清醒的记忆，能够减轻工作造成的大脑疲劳。 1、酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。 2、放射免疫分析（英语：radioimmunoassay，缩写为RIA） 简称放免或放免法，是一种在无须采用生物测定方法的情况下，用于检测抗原（例如血清之中激素的水平）的实验室测定方法。这一方法是由罗莎琳·萨斯曼·耶洛和Solomon Aaron Berson于1950年代创建的。 通过抽取的少量血液或病人标本，利用放射性核素标记的抗原和未标记的抗原（两者的免疫原性相同）对专一抗体的竞争性相结合反应，来分析测定体内抗原的含量。放射免疫分析法具有灵敏性高（可达10－12g~10-15g）。 3、免疫荧光法（免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）FIA） 是标记免疫技术中发展最早的一种。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。 主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。 4、化学发光免疫分析（CLIA） 亦称化学发光标记免疫测定，是用化学发光剂直接标记抗原或抗体（化学发光剂标记物），与待测标本中相应抗体或抗原、磁颗粒性的抗原或抗体反应，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测。 5、时间分辨荧光分析法也叫时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA） 是以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合剂作为示踪物，建立的一种新型的非放射性微量分析技术。自从1983年Pettersso n等采用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）法定量测定hCG以来，TRFIA方法学研究和临床应用发展迅速，成为继RIA之后标记免疫分析发展的一个新的里程碑，国内外相继研制了多种TRFIA仪和配套的商品化试剂盒。 是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10^(-12)g/ml，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。由于其高灵敏度，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。 缺点是E2的线性浓度范围为2.5-200pg/ml. ???正常值 生物实验操作步骤 一、安装显微镜和对光： A 、操作步骤： 1.一手握住镜臂，一手托住镜座，把显微镜轻轻地放在实验台上，镜臂靠近身体略偏左，镜座距实验台边缘约5厘米。安装好目镜和物镜。 2.转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。转动遮光器，使最大的光圈对准通光孔。 3、左眼注视目镜内，同时双手转动反光镜（光强用使用平面镜、光弱使用凹面镜），使光线反射到镜筒里，直到整个视野呈雪白色为止。 4.整理复位：把显微镜的外表擦拭干净。取下镜头放入镜盒内，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，放回原处。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）安装好物镜和目镜（1分） （2）能将显微镜对好光观察（2分） 记录：雪白色或亮白色（1分） （3）整理器材（1分） 二、制作并观察洋葱鳞片叶临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 3、用刀片在洋葱内表面划一个“井”字，用镊子撕下表皮，然后把它放在载玻片中央的水滴中，用解剖针轻轻地将其展平； 4、用镊子夹起盖玻片，使其一边接触载玻片上面的液滴，然后缓缓地盖在液滴上，盖片时要防止装片上出现气泡； 5、在载玻片的一侧滴一滴碘液，在另一侧用吸水纸吸引，重复几次，使染液浸润到整个标本； 6、安装显微镜和对光； 7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上，然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片； 8、用左眼注视目镜，调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升，直到在视野中看到细胞图像，然后旋转细准焦螺旋，使物像更清晰； 9、移动装片，在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察； 10、整理复位：取下玻片标本，平移方式（防止折断盖玻片）取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内，将镜筒下降到最低处，然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）用纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净（1分） （2）在载玻片中央滴一滴清水（1分） （3）用刀片切取一块洋葱鳞片叶，用镊子撕取鳞片叶的内表皮置于载玻片上清水中并用解剖针将表皮展平，盖上盖玻片（1分） （4）将一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从对侧引流使碘液扩散到整个标本（1分） （5）将制作好的临时装片放在显微镜下观察（1分） 记录：气泡（1分） 细胞核（1分） 细准焦螺旋（1分） 左上方（1分） （6）整理器材（1分） 三、制作并观察口腔上皮细胞临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净； 2、用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水； 3、用清水漱口，清除口腔中食物碎屑，用消毒牙签粗的一端在口腔侧壁上轻轻刮几下； 4、将牙签上附着的碎屑放在载玻片的生理盐水中涂抹几下； 用镊子夹起盖玻片让一侧先接触生理盐水在轻轻放平，避免出现 。 你观察到的细胞内染色最深的结构是 如果想让物像更清晰，应转动 。如果物像在视野的左上方，应将玻片标本向 移动，才能使物像移到视野中间。 植物源生物活性肽的研究进展 多肽是由天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，其中可调节生物体生理功能的多肽称为生物活性肽。与蛋白质相比，活性肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能，还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能。此外活性肽还有较好的酸、热稳定性，水溶性及粘度随浓度变化迟钝等优点，易于作为功能因子添加到各种食品中。我国农作物种类品种繁多，利用这些廉价的植物蛋白开发具有高附加值的生物活性肽产品，越来越受到重视。本文重点综述了降血压肽、抗氧化钛、降胆固醇肽这3类生物活性肽的研究进展，将其结构特征与生理功能的关系进行了归纳，同时归纳了活性肽的生理功能，并指出其发展应用前景。 1. 生物活性肽的生理功能 1.1 抗菌活性 抗菌活性肽通常由细菌、真菌产生，或从动植物体中分离。它们尽管在结构上千差万别，但几乎所有的抗菌肽都是阳离子型的，两亲结构是它们的共同特征[1]。国内外研究成果表明，抗菌肽对部分细菌、真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强大的杀伤作用。临床试验也表明，抗菌肽能够增强机体抵抗病原微生物的能力，而且在体内还不容易产生耐药性。 1.2 免疫活性[2] 免疫活性肽能够刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率。从人乳和牛乳的酪蛋白中已检测到具有免疫刺激活性的肽片段，这些肽具有刺激巨噬细胞吞噬能力的作用。另外，乳蛋白、大豆蛋白和大米蛋白等通过适当酶解处理也可产生具有免疫 活性的肽类物质。 1.3 抗高血压活性 血压是在血管紧张素转换酶（angiotensin-convertion enzyme，ACE）的作用下进行调节的，血管紧张素Ⅰ在A C E的作用下可转化为有活性的血管紧张素Ⅱ，使血管平滑肌收缩，引起血压升高。降血压肽是具有抑制ACE活性的肽类， 来源广泛，ACE 抑制肽的主要来源是乳制品和鱼蛋白（沙丁鱼、金枪鱼、 生物活性肽的功能和应用研究 摘要：生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。本文主要介绍目前主要的一些生物活性肽的生理功能及应用研究，介绍生物活性肽在食品中一些简单的应用。简单展望一下生物活性肽以后的研究进展。 关键词：生物活性肽；功能；应用； 生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。它是一类由20种天然氨基酸以不同的组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同的肽类的总称。生物肽与蛋白质没有本质的区别，但又不同于蛋白质，比蛋白质校、生理活性强。根据肽链上氨基酸的数目，通常把具有2~10个氨基酸、分子量<2000Dalton的肽成为寡肽(oligpeptide)，讲氨基酸数目10~50个、分子量2000~10000Dalton的称为多肽（polypeptide）。 这些活性肽小到只有2个氨基酸的双肽,也可以大到复杂的长链或环状多肽,而且常经过糖苷化、磷酸化或酰化衍生,在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用,这些调节作用几乎涉及到人体所有的生理活动,如神经系统、消化系统、循环系统、内分泌系统等。不仅如此,其中许多活性肽还具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的新功能。特别是以数个氨基酸结合生成的低聚肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能,还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能,食用安全性极高。目前人们认同的活性肽的定义是对肌体构成一套高度自动化的物质,是沟通细胞间、血管间联系的信使,为外分泌、内分泌、神经系统行使传递功能,从而使肌体组成了高度严密的系统,促使生物体生长、发育、繁殖正常进行。 生物活性肽的生理功能 1.1抗高血压活性 血管紧张素转化酶(ACE)在血压调节过程中起着非常重要的作用。人体的肾脏可以分泌肾素,作用于血管紧张素释放出无活性的血管紧张素Ⅰ。ACE可以从无活性的血管紧张素Ⅰ的C-末端水解掉2个氨基酸,形成有活性的血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ是已知最强的缩血管物之一,可以导致血管收缩,引发高血压。同时ACE可水解血管舒缓激肽使其失活,而血管舒缓激肽可以舒张血管、使血压降低。因此ACE在肾素-血管紧张素目前主要的活性肽及其应用体系、血管舒缓素-激肽体系中起着重要的作用。已知抗高血压肽大致上有4种来源:来自乳蛋白的肽类;来自酸奶的肽类;来自鱼贝类(沙丁鱼、金枪鱼)的肽类;来自植物的肽类(玉米醇溶蛋白、无花果)等。 1.2抗菌活性 1972年,瑞典科学家在果蝇中首次发现抗菌肽,随后得到第1个真正意义上的抗菌肽天蚕素(cecropins)。后来科学家们在昆虫、被囊动物、两栖动物、鸟类、鱼类、哺乳动物、植物乃至人等多种生物体内发现了至少800多种抗菌肽,并且某些抗菌肽在临床应用中已取得良好的疗效,如Oren等从豹鳎中分离得到一种33肽的抗菌肽,具有比蜂毒素更强的抗菌活性,其抑菌机理是溶解细菌的细 实验名称：观察植物细胞 1、用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 2、把载玻片放在试验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴清水。 3、①用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜内表皮。②把撕下的内表皮浸入载玻片的水滴中，用镊子把它展平。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 5、把一滴稀碘液滴在盖玻片的一侧。染 6、用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。 观察人的口腔上皮细胞 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。 2、把载玻片放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水 3、用凉开水把口漱净。用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下，牙签上就附着了一些碎屑。把牙签放在载玻片的生理盐水滴中均匀地涂抹几下。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放平。 5、在盖玻片的一侧滴加稀碘液（染），另一侧用吸水纸吸引，使染液浸润到标本的全部。 观察鸡卵的结构 1.取一个鸡卵，观察其外部形态。（放大镜，气孔） 2.将鸡卵的钝段轻轻敲出裂纹，将碎裂的卵壳连同紧贴壳的膜除去，观察鸡卵的气室。（镊子，卵壳，外卵壳膜和气室） 3.用剪刀将气室下的内卵壳膜剪破。（剪刀） 4.将卵壳膜内的卵白和卵黄转移到培养皿中，卵黄完整。（培养皿） 5.观察鸡卵的结构。若未见胚盘，可用镊子夹起细系带把卵黄轻轻翻转。 观察种子的结构 1.观察菜豆种子的结构 ⑴取一粒浸软的菜豆种子，观察它的外形[来源:学|科|网Z|X|X|K] ⑵剥去种子最外面的一层薄皮-------种皮，分开合拢着的两片子叶。 ⑶用放大镜仔细观察子叶.胚根.胚轴和胚芽，看看它们各有什么特点？ 2观察玉米种子的结构 ⑵一粒浸软的玉米种子，观察它的外形。 ⑵用刀片将这粒种子从中央纵向剖开。 剖面上滴一滴碘液，在用放大镜仔细观察被碘液染成蓝色的胚乳以及未被染成蓝色的果皮和种皮，胚芽，胚根，胚轴和子叶，看看它们各有什么特点？ 测定某种食物中的能量 1．取一只锥形瓶（50毫升），量筒量取30毫升水注入其中，再将它固定在铁架台上。 2.再锥形瓶里放入一支温度计（温度计下端要浸入水中，但不要接触锥形瓶的瓶底） 3.参照右图安装好试验装置，并测定水温。 4.称出一粒干燥花生种子的质量，将这粒种子放倒火焰上点燃， 5.将刚刚燃烧的花生种子尽快放倒锥形瓶底部。待这粒花生种子完全燃烧后，测量水温。 6.计算：Q=CM△T=30×4.2×（t2－t1）(把测量的温度代入，得出数据) 生物 一、A类实验操作练习题 1.用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 实验器材及设置：显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、清水、稀碘液、解剖针、小块木板、洋葱鳞片叶、擦镜纸（备用）。 [附]显微镜状态:目镜已安装好，最大光圈对准通光孔，转换器上两个物镜位于通光孔两侧，呈外八字形，镜筒降到最低处。 实验要求：（1）制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片； （2）用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞。 方法步骤： （一）、制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片 1. 准备用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净；用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水。 2. 取材用刀片切取一块洋葱鳞片叶（大约0.5cm2），用镊子撕取洋葱鳞片叶的内表皮；把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中，并展平。 3.盖盖玻片用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上 的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 4.染色把一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本全部。 （二）、用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 1.取镜与安放一手握镜臂，一手托镜座，把显微镜放在实验台中央略偏左，距实验台边缘约7cm。 2.对光上升镜筒，转动转换器，使低倍物镜对准通光孔；一只眼注视目镜，另一只眼睁开，同时转动反光镜，使视野明亮。 3.安放玻片将玻片轻放载物台上，标本正对通光孔的中心，用压片夹压住玻片的两端。 4.调焦双手转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，同时眼睛从侧面看着物镜下降，直到物镜接近玻片；一只眼注视目镜，同时转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升至视野中出现物像，微调细准焦螺旋使物像清晰。 5.观察移动玻片，将物像移到视野中央，在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞。 2.用显微镜观察人的口腔上皮细胞 实验器材及设置：显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴 生物活性肽研究现况和进展 李 勇 (北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系,北京,100083) 摘 要 生物活性肽指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,包括内源性和外源性生物活性肽;其吸收机制优于游离氨基酸,且具有氨基酸不可比拟的生理功能和改善食品感官效应。海洋生物活性肽资源丰富,有增强免疫、抗氧化、抗高血压、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等活性,开发利用前景广阔。关键词 肽,生物活性肽,海洋生物活性肽,生理功能 收稿日期:2006-01-03 1 肽和生物活性肽基本概念 肽(peptides )是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使 蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。氨基酸是其基本构成单位,由2个或3个氨基酸脱水缩合而成的肽分别叫二肽和三肽,以此类推为四肽、五肽。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽(biologically active peptide /bioactive peptide /biopeptide )是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(func -tional peptide )。肽由氨基酸组成,人体存在20种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10-7mol /L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1m L 的多肽用60倍水稀释后,仍然具有生理功能。而且生物体可依据生理状态来合成和降解活性肽,因此,具有调节功能的活性肽的半衰期均很短。1975年Hughes 等首先报道从动物组织中发现了具有类吗啡活性的小肽;1979年Brantl 等从酶解的酪蛋白水解产物中分离到1个七肽物质(Tyr -Pro -Phe -Pro -Gly -Pro -Ile ),为β-酪蛋白的第60～66氨基酸残基片段,具有阿片活性。阿 片样肽(opioidpeptide )具有类阿片受体配体活性,能够作为激素和神经递质与体内的受体相互作用,具有镇痛和调节人体情绪、呼吸、脉搏、体温的功能。内源性阿片肽包括脑啡肽、内啡肽、强啡肽、孤啡肽。目前 已经从小麦谷蛋白和大米蛋白中提取出了外源性阿片样肽。它们与普通镇痛剂的不同点是经过消化道进入人体后无任何副作用,不会有成瘾性,这方面已成为药理学、功能食品学研究的热点。目前已经从动、植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽。生物活性肽的结构可以从简单的二肽到较大分子的多肽(数百个氨基酸)。生物活性肽的生物学意义主要体现在其吸收机制优于氨基酸和具有氨基酸不可比拟的生理功能两个方面,其生理功能主要有类吗啡样活性、激素和调节激素的作用,对生物体内的酶具有调节和抑制功能,免疫调节,抗血栓,抗高血压,降胆固醇,抑制细菌、病毒,抗癌作用,抗氧化和清除自由基作用,改善元素吸收和矿物质运输,促进生长,调节食品风味、口味和硬度等。因此,生物活性肽是筛选药物、制备疫苗和食品添加剂的天然资源宝库。 2 生物活性肽分类 2.1 按来源分———内源性生物活性肽和外源性生物活性肽 目前,生物活性肽尚无较为一致的分类方法。按其来源可分为内源性的生物活性肽和外源性的生物活性肽两类。内源性生物活性肽即机体内存在的天然的生物活性肽,主要包括体内一些重要内分泌腺分泌的肽类激素,如促生长激素释放激素、促甲状腺素、肝脏合成的类胰岛素生长因子、胸腺分泌的胸腺肽、脾脏中的脾脏活性肽、胰腺分泌的胰岛素等;由血液或组织中的蛋白质经专一的蛋白水解酶作用而产生的组织激肽,如缓激肽、胰激肽;作为神经递质或神经分子生物学实验室常用仪器及使用方法
抗氧化肽的研究进展
生物活性肽的研究及其进展汇总
黑升麻提取物对去势大鼠血清性激素及相关靶器官ER表达水平的影响
紫河车对超排卵大鼠血清雌孕激素及妊娠率影响-邱晨
大鼠去势术
微生物实验操作步骤
活性肽的神奇功效
大鼠血清雌激素水平测定方法总结
生物实验操作步骤
植物源活性肽研究进展
生物活性肽的应用综述
初中生物实验操作步骤
生物实验操作步骤
生物活性肽研究现况和进展_李勇