BCA蛋白定量

凯基BCA蛋白含量检测试剂盒

Cat Number：KGPBCA For Research Use Only

Store at -20℃ for one year

Expire date：

一、试剂盒说明

BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。

二、试剂盒组份

三、操作步骤

A．酶标板操作

1.标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂

2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA

工作液，充分混匀；

3.各孔加入200μL BCA工作液；

4.把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以

蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；

5.稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，

充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记

录吸光值；

, 6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。

B．分光光度计测定

1.标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂

2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA

工作液，充分混匀；

3.各管加入1000μL BCA工作液；

4.各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）

为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；

5.稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，

充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，

记录吸光值；

6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品

稀释液总体积（100μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。

四、注意事项

1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋

白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果

浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。

3. 待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。

4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%

的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的

影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适

用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

5. 操作时要带手套。