PPO和POD测定方法

2.7.7.1 测定过氧化物酶（POD ）的原理及其方法

酶液的制备：取洗净去皮的约2g 荔枝干果肉，切碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液（pH=6.8）在冰浴环境研磨成匀浆，一共加入6mL 缓冲液全部转入离心管，以9000r/min 的转速冷冻离心20min ，低温下保存备用。

过氧化物酶活性的测定：测定酶活性的反应体系包括1.8mL 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH=6.8）、1.0mL 2%H 2O 2溶液、1.0mL 0.05mol/L 愈创木酚溶液和0.2mL 酶液。用在沸水中加热5min 的酶液为对照，做三组重复实验。反应体系加入酶液后计时，并立即放入紫外分光光度计后，在反应0.5min 时开始在波长470nm ，每隔0.5min 进行吸光度测定，并记录下来以备计算。

计算方法：以 A 470nm 每1 min 增大0.001为1个POD 活力单位，以此计算出荔枝干果肉POD 的比酶活力。公示如下：

（2.7）

其中，ΔA 为反应时间内吸光值的变化；W 为荔枝干果肉的质量（g ）；t 为反应时间（min ）；D 为稀释倍数，即提取的总酶液为反应系统内酶液的倍数。

2.7.7.2 测定多酚氧化酶（PPO ）原理及其方法

酶液的制备：同POD 酶处理方法，缓冲液换为pH=5.8的磷酸缓冲盐。 多酚氧化酶活性的测定：测定酶活性的反应体系包括1.5mL 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH=7）、1.0mL 0.05mol/L 邻苯二酚溶液和0.5mL 酶液。用在沸水中加热5min 的酶液为对照，做三组重复实验。反应体系加入酶液后计时，并立即放入紫外分光光度计后，在反应0.5min 时开始在波长410nm 下每隔0.5min 进行吸光度测定，并记录下来以备计算。

计算方法：以 A 410nm 每1min 增大0.001为1个PPO 活力单位，以此计算出荔枝干果肉PPO 的比活力。公示如下：

（2.8）

其中，ΔA 为反应时间内吸光值的变化；W 为荔枝干果肉的质量（g ）；t 为反应时间（min ）；D 为稀释倍数，即提取的总酶液为反应系统内酶液的倍数。 D W A U t ???=01.0g /）比酶活力（D W A U t ???=01.0g /）比酶活力（