实验二 杀菌剂生物活性测定-生长速率法
实验二杀菌剂生物活性测定-生长速率法
一、实验原理将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。
二、实验目的通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。
三、实验材料
1．供试药剂：70%甲基托布津
2．供试病原菌：苹果炭疽病菌
3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）
配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水1000 mL；pH自然偏酸（5-6）制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。
4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。
四、方法与步骤
1．菌种准备
实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。
在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。
2．药液准备
将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。800mg/L药液的配制：称取1g药剂，用无菌水溶解后，定容至875mL。称取20mg药剂，用无菌水溶解并定容至17.56mL。
3．打制菌饼
在超净工作台上，用直径0.4cm打孔器（预先醮75%乙醇灼烧3次以灭菌）在培养好的供试菌种菌落外缘切下带菌培养基块-菌饼，这种来自菌落外缘的菌饼在新的培养基上生长速度的差异较小。
4．带药培养基的制备
采用混毒法制备带药培养基。将培养基于微波炉中溶化（约需7-10min）。从低浓度到高浓度顺序处理。用1mL移液管吸取1mL药液放入10mL刻度试管中，然后将热好的培养基（要冷却至50℃左右）倒入试管至10mL刻度，振荡混匀，立即倒入培养皿、放平，冷却后即成薄厚均匀的平板。所有浓度处理设三个重复。以无菌水代替药液作对照。
注意事项：
①配制药液及浇制带毒培养基的一切用具均应事先灭菌，操作最好在无菌室内进行，以防污染； ②在设计药剂浓度时应考虑到药液和热培养基混合对药液的稀释及对培养基的稀释（如药液加入后将培养基稀释过多，则培养基不能凝固），一般以1mL 药液加入9mL 热培养基为宜，这样的比例不会影响培养基的凝固而药剂的真实浓度被稀释了10倍；
③对一些挥发性强的或易受热分解的药剂，应注意培养基的温度，最好冷至45-50℃左右再将药液加入；
④药液和培养基必须保证在凝固前充分混匀。热的带毒培养基倒入培养皿内应保持水平，否则将会造成皿内带毒培养基厚薄不匀，产生误差。 5．接菌饼
用接种针或消毒的镊子将菌饼反向（有菌丝的一面向下和培养基贴合）移植到带毒的培养基上。每浓度药液处理重复3次（3个培养皿），每个培养皿最好是在中心放置1个菌饼。也可以在直径9cm 的培养皿中呈三角形放3个菌饼，但应注意病菌的生长速度及3个菌饼的间距和它们离皿壁的距离，否则得不到圆的菌落。 6．检查结果及统计
一般培养3d 即可检查，对于生长缓慢的菌种可适当延长培养时间。
每个菌落用直尺以十字交叉法测量两个直径，每菌饼两个数据，可根据实际情况，取菌饼长短直径量取数据，取其平均值代表菌落大小。根据以下公式计算菌丝生长抑制率：
菌落生长直径（mm ）=两次直径平均值—4.0（菌饼直径）
表1 杀菌剂毒力试验记载表
五、作业
将供试药剂的离体活性测定结果记入表中，以浓度的对数值为横坐标，以生长抑制率的机率值为纵坐标，求出供试药液对供试病原菌菌丝生长的毒力回归方程、抑菌中浓EC 50，并完成实验报告。
%
100?-=
对照菌落生长直径
处理菌落生长直径
对照菌落生长直径菌丝生长抑制率
化学反应速率及活化能测定实验报告
实验名称：化学反应速度与活化能的测定 一、实验目的 1、测定Na2SO3与KIO3反应的速率、反应级数，速率系数和反应的 活化能； 2、了解浓度、温度、催化剂对化学反应速率的影响。 二、实验原理 （NH4）2S2O8+3KI=(NH4)2SO4+K2SO4+KI3 S2O3^2-+3I^-=2SO4^2-+I3^- 五、数据结果 1、表3-1 2、表3-2 浓度对化学反应速率的影响 实验编号 1 2 3 4 5 试液的体积V/mL 0.2mol/L(NH4)2S2O8 20 10 5 20 20 0.2mol/LKI 20 20 20 10 5 0.01mol/LNa2S203 8 8 8 8 8 0.2%淀粉 4 4 4 4 4 0.2mol/LKNO3 0 0 0 10 15 0.2mol/L(NH4)2SO4 0 10 15 0 0 反应物的起始浓度c/mol/L (NH4)2S2O8 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 KI 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 Na2S2O3 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 反应开始至溶液显蓝色时所需时间 △t/s 76 172 324 178 300 反应的平均速率v/mol/L*S 0.000066 0.000029 0.000015 0.000028 0.000017 反应的速率常数k k=10140 反应级数 m=1 n=1 m+n=2 温度对化学反应速率的影 响 实验编号 反应温度T/℃ 反应时间△t/s 反应速率v/mol/L*S 反应速率常数 k Lgk 1/T 4 18.9 178 0.000028 10140 4.01 0.05 6 29 74 0.000068 22984 4.36 0.03
(完整版)农药生物测定复习题
农药生物测定复习题 名词解释 农药生物测定：是指运用特定的试验设计，利用生物的整体或离体的组织、细胞对农药（或某些化合物）的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量（判断或鉴别）某种农药的生物活性。 负温度系数的杀虫剂：在一定温度范围内，杀虫剂的毒效随温度的降低而升高，称为负温度系数的杀虫剂。如溴氰菊酯对伊蚊幼虫的毒力在10℃时比30℃时大7倍。 正温度系数的杀虫剂：在一定温度范围内，杀虫活性随温度升高而增强。如敌百虫。 标准目标昆虫：指被普遍采用的、具有一定代表性和经济意义以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。 杀虫剂内吸毒力：药剂可通过植物根、茎、叶等部位吸收到植株内部，随着植物体液输导，当害虫取食植物或刺吸汁液时，药剂进入虫体并将之杀死。 熏蒸毒力：在适当气温下，利用有毒气体、液体或固体挥发产生的蒸气来毒杀害虫（或病菌）。熏蒸毒力测定：测定杀虫剂从昆虫气孔或气门进入呼吸系统而引起试虫中毒致死的熏杀毒力。化学保护：用药剂处理植物和植物环境，在病菌侵入寄主植物前发挥药效，保护植物不受病菌侵染的措施。 化学治疗：在病原菌侵入植物之后使用杀菌剂消灭病菌，使植物不再发病。将药剂内吸到植物内部起作用。 化学免疫：植物通过药剂的作用，使植物具有对病菌的抵抗能力，避免或减轻病菌的侵害。杀菌剂的离体活性测定：只包括病原菌和药剂而不包括寄主或寄主植物的培养皿内测定方法，通常根据病菌与药剂接触后的反应，如孢子不萌发、不长菌丝等来作为毒力评判的标准。 杀菌剂的活体活性测定：包括病原菌、药剂和寄主植物在内的活性测定，通常以寄主植物的发病情况（普遍程度、严重程度）来评判药剂的毒力。 致死中量(LD50)(medium lethal dosage)：指杀死供试昆虫群体内50%的个体所需要的药剂剂量。指一定条件下，可致供试生物半数死亡机会的药剂剂量，表示单位：mg/kg、μg/g或μg/头。 致死中浓度(LC50)(medium lathal concentration)：指杀死供试昆虫群体内50%的个体所需要的药剂浓度。 校正死亡率：采用Abbort(1975)校正死亡率公式，以去除自然死亡对结果的影响。校正死亡率（%）=（处理组死亡率—对照组死亡率）/（1—对照组死亡率）
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
v1.0 可编辑可修改 1 实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。灭菌蒸馏水为对照。2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中，水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取5 mL带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径6.0mm、高10mm），每皿内按合适的间隔放置6个不锈钢小管，其中1个小管为对照，其余5管为5种不同浓度的药液（药液加至在管口形成凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。
农药生物测定复习题
农药生物测定复习题 名词讲明 农药生物测定：是指运用特定的试验设计，利用生物的整体或离体的组织、细胞对农药（或某些化合物）的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量（判定或鉴不）某种农药的生物活性。 负温度系数的杀虫剂：在一定温度范畴内，杀虫剂的毒效随温度的降低而升高，称为负温度系数的杀虫剂。如溴氰菊酯对伊蚊幼虫的毒力在10℃时比30℃时大7倍。 正温度系数的杀虫剂：在一定温度范畴内，杀虫活性随温度升高而增强。如敌百虫。 标准目标昆虫：指被普遍采纳的、具有一定代表性和经济意义以及抗药力稳固平均的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。 杀虫剂内吸毒力：药剂可通过植物根、茎、叶等部位吸取到植株内部，随着植物体液输导，当害虫取食植物或刺吸汁液时，药剂进入虫体并将之杀死。 熏蒸毒力：在适当气温下，利用有毒气体、液体或固体挥发产生的蒸气来毒杀害虫（或病菌）。熏蒸毒力测定：测定杀虫剂从昆虫气孔或气门进入呼吸系统而引起试虫中毒致死的熏杀毒力。化学爱护：用药剂处理植物和植物环境，在病菌侵入寄主植物前发挥药效，爱护植物不受病菌侵染的措施。 化学治疗：在病原菌侵入植物之后使用杀菌剂消灭病菌，使植物不再发病。将药剂内吸到植物内部起作用。 化学免疫：植物通过药剂的作用，使植物具有对病菌的抗击能力，幸免或减轻病菌的侵害。杀菌剂的离体活性测定：只包括病原菌和药剂而不包括寄主或寄主植物的培养皿内测定方法，通常依照病菌与药剂接触后的反应，如孢子不萌发、不长菌丝等来作为毒力评判的标准。 杀菌剂的活体活性测定：包括病原菌、药剂和寄主植物在内的活性测定，通常以寄主植物的发病情形（普遍程度、严峻程度）来评判药剂的毒力。 致死中量(LD50)(medium lethal dosage)：指杀死供试昆虫群体内50%的个体所需要的药剂剂量。指一定条件下，可致供试生物半数死亡机会的药剂剂量，表示单位：mg/kg、μg/g或μg/头。 致死中浓度(LC50)(medium lathal concentration)：指杀死供试昆虫群体内50%的个体所需要的药剂浓度。 校正死亡率：采纳Abbort(1975)校正死亡率公式，以去除自然死亡对结果的阻碍。校正死亡率（%）=（处理组死亡率—对比组死亡率）/（1—对比组死亡率）
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
直线运动中速度的测量实验报告
实验题目：直线运动中速度的测量 实验目的：利用气垫技术精确地测定物体的平均速度、瞬时速度、加速度以及当地的重力加速度，通过物 体沿斜面自由下滑来研究匀变速运动的规律和验证牛顿第二定律 实验器材：气垫导轨、滑块、垫块、砝码、砝码盘、细线、游标卡尺、米尺、挡光片、光电门、计时器、 托盘天平 实验原理：1、平均速度和瞬时速度的测量 作直线运动的物体Δt 时间的位移是Δs ，则t 时间内的平均速度为t s v ??= ，令Δt →0，即是物体在该点的瞬时速度t s v t ??=→?0lim ，在一定的误差范围内，用极短时间内的平均速度可 代替瞬时速度。 2、匀变速直线运动 滑块受一恒力时作匀变速直线运动，可采用将气垫导轨一端垫高或通过滑轮挂重物实现， 匀变速运动的方程如下： at v v +=0 202 1at t v s + = as v v 22 2+= 让滑块从同一位置下滑，测得不同位置处速度为v 1、v 2、……，相应时间为t 1、t 2、……， 则利用图象法可以得到v 0和a 。 3、重力加速度的测定 如右图 图一：导轨垫起的斜面 若通过2测得a ，则有L h g g a ==θsin ，从而解得：a h L g =。 4、验证牛顿第二定律 将耗散力忽略不计，牛顿第二定律表成F=ma 。保持m 不变，F/a 为一常量；保持F 不变， ma 为一常量。因此实验中如果满足以上关系，即可验证牛顿第二定律。 实验内容：1、匀变速运动中速度与加速度的测量 （1）气垫导轨的调平，将一段垫起一定高度 （2）组装好相应的滑块装置 （3）让滑块从距光电门s=20.0cm,30.0cm,40.0cm,50.0cm,60.0cm 处分别自由滑下，记录挡光 时间，各重复三次 （4）用最小二乘法对as v 22 =直线拟合并求a 的标准差 （5）作出s v 22 -曲线 2、验证牛顿第二定律 每个砝码质量5.00g ，托盘质量1.00g （1）在1的实验前提条件下，确保系统总质量不变，导轨水平放置
微生物细胞大小地测定方法
微生物细胞大小测定 一、实验目的 了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造和使用原理，掌握微生物细胞大小的测定方法。 二、实验原理 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。 用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺（图-1 ）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50 等分，或把10 mm长度刻成 100 等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上( 此处正好与物镜放大的中间像重叠) 来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际 表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正， 以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。 镜台测微尺（图20-2 ）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为 100 格，每格长 l0 μ m（即 0.0lmm ），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上， 图 1 目镜测微尺图2镜台测微尺 由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野， 镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真 实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺 每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大 倍数下测量微生物大小。 即 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母( Saccharomyces cerevisiae) 、枯草杆菌(Baccillus subtilis) 染色标本片。 2．器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。 四、实验方法 1．目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板 上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微 尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再 使两尺的“ 0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度 之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长l0 μ m，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
乙酸乙酯皂化反应速率常数的测定实验报告
学号：201114120222 基础物理化学实验报告 实验名称：乙酸乙酯皂化反应速率常数的测定应用化学二班班级 03 组号 实验人姓名： xx 同组人姓名：xxxx 指导老师：李旭老师 实验日期： 2013-10-29 湘南学院化学与生命科学系
一、实验目的：
1、了解测定化学反应速率常数的一种物理方法——电导法。 2、了解二级反应的特点，学会用图解法求二级反应的速率常数。 3、掌握DDS-11A 型数字电导率仪和控温仪使用方法。 二、实验原理： 1、对于二级反应：A+B →产物，如果A ，B 两物质起始浓度相同，均为a ，则反应速率的表示式为 2)(x a K dt dx -= (1) 式中x 为时间t 反应物消耗掉的摩尔数，上式定积分得： x a x ta K -= ·1 (2) 以 t x a x ~-作图若所得为直线，证明是二级反应。并可以从直线的斜率求出k 。 所以在反应进行过程中，只要能够测出反应物或产物的浓度，即可求得该反应的速率常数。 如果知道不同温度下的速率常数k (T 1)和k (T 2)，按Arrhenius 公式计算出该反应的活化能E ??? ? ??-?=122112)() (ln T T T T R T K T K E a （3） 2、乙酸乙酯皂化反应是二级反应，其反应式为： OH -电导率大，CH 3COO -电导率小。因此，在反应进行过程中，电导率大的OH -逐渐为电导率小的CH 3COO -所取代，溶液电导率有显著降
低。对稀溶液而言，强电解质的电导率
L 与其浓度成正比，而且溶液的总电导率就等于组成该溶液的电 解质电导率之和。如果乙酸乙酯皂化在稀溶液下反应就存在如下关系式： a A L 10= （4） a A L 2=∞ （5） x A x a A L t 21)(+-= （6） A 1，A 2是与温度、电解质性质，溶剂等因素有关的比例常数，0L ， ∞L 分别为反应开始和终了时溶液的总电导率。t L 为时间t 时溶液的总 电导率。由(4)，(5)，(6)三式可得： a L L L L x t ·0 0??? ? ??--=∞ 代入(2)式得： ??? ? ??--= ∞ L L L L a t K t t 0·1 （7） 重新排列即得： ∞+-= L t L L k a L t t 0·1 三、实验仪器及试剂 DDS-11A 型数字电导率仪1台（附铂黑电极1支），恒温槽1台， 秒表1只，电导池3支，移液管3支；0.0200mol ／L 乙酸乙酯(新配的)，O.0200mol ／L 氢氧化钠(新配的) 四、简述实验步骤和条件：
生物量测定方法
生物量测定方法1树木生物量测定方法 1.1树木生物量的组成 一木树的生物量可以分为地下及地上两部分，地下部分是指树根系的生物量（WR）；地上部分主要包括树干生物量（WS）、枝生物量（WB）和叶生物量（WL）。在生物量的测定中，除称量各部分生物量的干重量外，有时还要计算它们占全树总生物量干重的百分数，此百分数称为分配比。树干占地上部分的分配比最大（一般为65～70%），而枝叶部分的分配比约各占15%左右。 与材积测定相比，生物量测定的对象更为复杂，测定的部分也多，因而使得生物量的测定工作即复杂又困难。但是树木生物量与树木胸径、树高等测树因子之间也有着密切的关系，这些关系也为树木生物量测定提供了依据。在树木生物量测定中，树冠量的大小与形状对枝、叶量的多少有着显著的影响，因此，在实际工作中，要研究反映冠形和冠量的因子，常用的因子有冠长率、树冠圆满度、树冠投影比等因子，这些因子的意义如下： ⑴冠长率是冠长与树高之比 ⑵树冠圆满度是冠幅与冠长之比。用以表明树冠的圆满程度，此值愈大愈圆满，反之而树冠狭长。 ⑶树冠投影比是冠幅与胸径之比。用以表明树木营养面积的相对大小，此值愈大则树木占有的相对空间愈大。 上述这些因子在枝叶生物量测定、估计及分析比较中起着较大的辅助作用。而且，这些因子与胸径、树高等测树因子之间有着密切的相关关系，这为利用测树因子直接估测树木生物量提供了依据。 1.2树木生物量鲜重和干重的测定 树体在自然状态下含水时的重量称为鲜重，它是砍伐后立即称量的重量。干燥后去掉结晶水的重量称为干重。在外业中只能测得树木的鲜重，然后采用各种方法将鲜重换算为干重，最常用的换算方法是计算树木的干重比（），即， 而（11-8） 式中可用取样测定获得。 （1）树干干重的测定方法 ①木材密度法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.doc
v1.0可编辑可修改实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑 制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对 数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出 结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方 式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般 为外径 8 mm，内径 6 mm，高 10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7 个浓度。灭菌蒸馏水为对照。 2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL 灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动 5 min ，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15× 20 倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野 80-100 个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中， 水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50 ℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取 5 mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在 底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径 6.0mm、高 10mm），每皿内按合适的间隔放置 6 个不锈钢小管，其中 1 个小管为对照，其余 5 管为 5 种不同浓度的药液（药液加至在管口形成 凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价 杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。 1
测定反应速度实验报告单.doc
生物实验报告单 姓名时间班级实验内容测定反应速度 实验目的测定自己的反应速度，比较不同学生间的反应实验用材学生用的直尺 实验过程1.同学4人一组 2.一同学手握直尺刻度最大的一端，受测者拇指和食指对准 尺子刻度为0的一端，但不要接触尺子 3.测试者一旦松开手，被受测者尽快用拇指和食指夹住尺 子，记下夹住尺子的刻度，刻度越小说明反应速度越快。 4.小组4人轮流测试 实验结果刻度为cm 分析讨论 结果和重复的次数有一定关系；结果和人的某种状态也有一定关系。
赠送资料 青花鱼（北京）健康产业科技有限公司 2018年财务分析报告 1 .主要会计数据摘要 2 . 基本财务情况分析 2-1 资产状况 截至2011年3月31日，公司总资产20.82亿元。 2-1-1 资产构成 公司总资产的构成为：流动资产10.63亿元，长期投资3.57亿元，固定资产净值5.16亿元，无形资产及其他资产1.46亿元。主要构成内容如下： (1)流动资产：货币资金7.01亿元，其他货币资金6140万元，短期投资净值1.64亿元，应收票据2220万元，应收账款3425万元，工程施工6617万元，其他应收款1135万元。 (2)长期投资：XXXXX2亿元，XXXXX1.08亿元，XXXX3496万元。 (3)固定资产净值：XXXX净值4.8亿元，XXXXX等房屋净值2932万元。 (4)无形资产：XXXXXX摊余净值8134万元，XXXXX摊余净值5062万元。 (5)长期待摊费用：XXXXX摊余净值635万元，XXXXX摊余净值837万元。 2-1-2 资产质量
(1) 货币性资产：由货币资金、其他货币资金、短期投资、应收票据构成，共计9.48亿元，具备良好的付现能力和偿还债务能力。 (2) 长期性经营资产：由XXXXX构成，共计5.61亿元，能提供长期的稳定的现金流。 (3) 短期性经营资产：由工程施工构成，共计6617万元，能在短期内转化为货币性资产并获得一定利润。 (4) 保值增值性好的长期投资：由XXXX与XXXX的股权投资构成，共计3.08亿元，不仅有较好的投资回报，而且XXXX的股权对公司的发展具有重要作用。 以上四类资产总计18.83亿元，占总资产的90%，说明公司现有的资产具有良好的质量。2-2 负债状况 截至2011年3月31日，公司负债总额10.36亿元，主要构成为：短期借款(含本年到期的长期借款)9.6亿元，长期借款5500万元，应付账款707万元，应交税费51万元。 目前贷款规模为10.15亿元，短期借款占负债总额的93%，说明短期内公司有较大的偿债压力。结合公司现有7.62亿元的货币资金量来看，财务风险不大。 目前公司资产负债率为49.8%，自有资金与举债资金基本平衡。 2-3 经营状况及变动原因 扣除XXXX影响后，2011年1-3月(以下简称本期)公司净利润605万元，与2010年同期比较(以下简称同比)减少了1050万元，下降幅度为63%。变动原因按利润构成的主要项目分析如下： 2-3-1 主营业务收入 本期主营业务收入3938万元，同比减少922万元，下降幅度为19%。其主要原因为：(1)XXXX收入3662万元，同比增加144万元，增长幅度为4.1%，系XXXXXXXXXXX 增加所致。
土壤微生物测定方法 (2)
土壤微生物测定 土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态,可以反映自然或农田生态系统的微小变化。土壤微生物活性的表征量有:微生物量、Ｃ／Ｎ、土壤呼吸强度与纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。 测定指标: 1、土壤微生物量(Ｍiｅｒoｂia lBiomａｓｓ,MＢ) 能代表参与调控土壤能量与养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量,一般指土壤中体积小于５Χ１０3um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。 目前,熏蒸法就是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎,它就是将待测土壤经药剂熏蒸后,土壤中微生物被杀死,被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CＯ2,根据释放出的CO２:的量与微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。 此外,还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大,不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等,均可用来测定土壤微生物量。 熏蒸提取-容量分析法 操作步骤: (1)土壤前处理与熏蒸 (2)提取 将熏蒸土壤无损地转移到２０0mL聚乙烯塑料瓶中,加入１00mＬ0、5mol·L－１K2SO4(图水比为１:4;w:v),振荡3０ｍiｎ(3０0ｒｅv·min-1),用中速定量滤纸过滤于12５mL 塑料瓶中。熏蒸开始的同时,另称取等量的3份土壤于20０ｍL聚乙烯塑料瓶中,直接加入100mｌL0、5mol·L-1Ｋ2ＳO４提取;另作3个无土壤空白。提取液应立即分析。 (3)测定 吸取10ｍL上述土壤提取液于150mL消化管(24mmх295mｍ)中,准确加入10mL0、018 mｏｌ·L－1K2Cｒ２O7—12ｍol·L－1H2SＯ4溶液,加入2～３玻璃珠或瓷片,混匀后置于１75±1℃磷酸浴中煮沸１０min(放入消化管前,磷酸浴温度应调至１７9℃,放入后温度恰好为１７5℃)。冷却后无损地转移至１5０mL三角瓶中,用去离子水洗涤消化管３~5次使溶液体积约为80mL,加入一滴邻菲罗啉指示剂,用０、05mol·L-1硫酸亚铁标准溶液滴定,溶液颜色由橙黄色变为蓝色,再变为红棕色,即为滴定终点。 (４)结果计算
生物量测定方法
生物量测定方法 1树木生物量测定方法 1.1树木生物量的组成 一木树的生物量可以分为地下及地上两部分，地下部分是指树根系的生物量（WR）；地上部分主要包括树干生物量（WS）、枝生物量（WB）和叶生物量（WL）。在生物量的测定中，除称量各部分生物量的干重量外，有时还要计算它们占全树总生物量干重的百分数，此百分数称为分配比。树干占地上部分的分配比最大（一般为65～70%），而枝叶部分的分配比约各占15%左右。 与材积测定相比，生物量测定的对象更为复杂，测定的部分也多，因而使得生物量的测定工作即复杂又困难。但是树木生物量与树木胸径、树高等测树因子之间也有着密切的关系，这些关系也为树木生物量测定提供了依据。在树木生物量测定中，树冠量的大小与形状对枝、叶量的多少有着显著的影响，因此，在实际工作中，要研究反映冠形和冠量的因子，常用的因子有冠长率、树冠圆满度、树冠投影比等因子，这些因子的意义如下： ⑴冠长率是冠长与树高之比 ⑵树冠圆满度是冠幅与冠长之比。用以表明树冠的圆满程度，此值愈大愈圆满，反之而树冠狭长。 ⑶树冠投影比是冠幅与胸径之比。用以表明树木营养面积的相对大小，此值愈大则树木占有的相对空间愈大。 上述这些因子在枝叶生物量测定、估计及分析比较中起着较大的辅助作用。而且，这些因子与胸径、树高等测树因子之间有着密切的相关关系，这为利用测树因子直接估测树木生物量提供了依据。 1.2树木生物量鲜重和干重的测定 树体在自然状态下含水时的重量称为鲜重，它是砍伐后立即称量的重量。干燥后去掉结晶水的重量称为干重。在外业中只能测得树木的鲜重，然后采用各种方法将鲜重换算为干重，最常用的换算方法是计算树木的干重比（），即， 而（11-8） 式中可用取样测定获得。 （1）树干干重的测定方法 ①木材密度法
(完整版)重力加速度的测定实验报告
重力加速度的测定 一，实验目的 1，学习秒表、米尺的正确使用 2，理解单摆法和落球法测量重力加速度的原理。 3，研究单摆振动的周期与摆长、摆角的关系。 4，学习系统误差的修正及在实验中减小不确定度的方法。 二，实验器材 单摆装置，停表（精度为0.01s），钢卷尺（精度为1mm），游标卡尺（精度为0.02mm) 三，实验原理 单摆是由一根不能伸长的轻质细线和悬在此线下端体积很小的重球所构成。在摆长远大于球的直径，摆球质量远大于线的质量的条件下，将悬挂的小球自平衡位置拉至一边（很小距离，摆角小于5°），然后释放，摆球即在平衡位置左右作周期性的往返摆动，如图2-1所示。 f =F sinθf θ T=F cosθ F= mg L 单摆原理图
摆球所受的力f 是重力和绳子张力的合力，f 指向平衡位置。当摆角很小时（θ<5°），圆弧可近似地看成直线，f 也可近似地看作沿着这一直线。设摆长为L ，小球位移为x ，质量为m ，则 L x = θsin f=θsin F =-L x mg - =-m L g x 由f=ma ，可知a=- L g x 式中负号表示f 与位移x 方向相反。 单摆在摆角很小时的运动，可近似为简谐振动，比较谐振动公式：a = m f =-ω2 x 可得ω=l g ，即02 22=+x dt x d ω，解得)cos(0?ω+=t A x ，0A 为振幅，?为初相。 应有[])2cos())((cos )cos(000?πω?ω?ω++=++=+=t A T t A t A x 于是得单摆运动周期为：T =ωπ 2=2πg L 即 T 2=g 2 4πL 或 g=4π22 T L 又由于细线不是完全没有质量，他在外力作用下也不可能完成伸长，所以，单摆的重力加速度公式修正为 22 21 4T d L g +=π 四，实验步骤 1，数据采集 （1）测量摆长L 用米尺测量摆球支点和摆球顶点或最低点的间距l ，用游标卡尺测量小球的直径d,则摆长 d l L 2 1+= （2）测量摆动周期 用手把摆球拉至偏离平衡位置约? 5放开，让其在一个铅直面内自由摆动，当小球通过平衡位置的瞬间，开始计时，连续默数100次全振动时间为t ，再除以100，得到周期T 。 （3）将所测数据列于下表中，并计算出摆长、周期及重力加速度。
旋光法测定蔗糖转化反应的速率常数实验报告记录
旋光法测定蔗糖转化反应的速率常数实验报告记录
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旋光法测定蔗糖转化反应的速率常数 实验报告 院（系） 生化系 年级 10级 专业 化工 姓名 学号 课程名称 物化实验 实验日期 2012 年 9 月 9 日 实验地点 3栋 指导老师 一、实验目的： 1·测定蔗糖转化放映的速率常数k ，半衰期t1/2,和活化能Ea 。 2·了解反应的反应物溶度与旋光度之间的关系。 3·了解旋光仪的基本原理，掌握旋光仪的正确使用方法。 二、实验原理： 1、 蔗糖在水中转化成葡萄糖和果糖，器反应为： C 12H 22011+H 2O C 6H 12O 6+C 6H 12O 6 （蔗糖） （葡萄糖） （果糖） 这是一个二级反应，但在H+浓度和水量保持不变时，反应可视为一级反应， 速率方程式可表示为： ，积分后可得： 由此可知：在不同时间测定反应物的相对浓度，并以㏑c 对t 作图，可得一直线，由直线斜率即可求得反应速率常数 k 。 当c=0.5c 0时 T1/2=ln2/K 2、本实验中的反应物及产物均有旋光性，且旋光能力不同，在溶剂性质、溶液浓度、样品管长度及温度等条件均固定时，旋光度与反应物浓度呈线性关系，即： kc dt dc =-kt c c -=0 ln
。 反应时间 t=0，蔗糖尚未转化： ； 反应时间为 t ，蔗糖部分转化： ； 反应时间 t=∞，蔗糖全部转化： ， 联立上述三式并代入积分式可得： 对ｔ作图可得一直线，从直线斜率可得反应速率常数k 。 三、仪器与试剂： WZZ-2B 型旋光仪 1台 501超级恒温水浴 1台 烧杯100ml 2个 移液管（25ml ） 2只 蔗糖溶液 （分析纯）（20.0g/100ml) Hcl 溶液（分析纯）（4.00mol/dm -3) 四、实验步骤： ①恒温准备： ②旋光仪调零： 1）、 2）、 5分钟稳定后 将4mol/L Hcl 和 蔗糖50ml 分别 调恒温水浴至45o c 开启旋调开关至 c βα=00c 反βα=）（生反c t -+=0c c ββα0c 生βα=∞) ln()ln(0∞∞-+-=-ααααkt t )ln(∞-ααt 以洗净 向管内装满蒸 用滤纸擦干打开光源，调节目镜聚焦，使视野清晰 再旋转检偏镜至能观察到三分视野均匀但较暗为止 记下检偏镜的旋光度，重复测量数次， 取其平均值即为零点 洗净样向管内装满蒸馏水，盖
实验报告-极化曲线测量金属的腐蚀速度
课程 实 验 者 名 称 页数（ ） 专业 年级、班 同组者姓名 级别 姓 名 实验 日 期 年 月 日 一、目的和要求 1、 掌握恒电位法测定电极极化曲线的原理和实验技术。通过测定Fe 在NaCl 溶液中的极化曲线，求算Fe 的自腐蚀电位，自腐蚀电流 2、论极化曲线在金属腐蚀与防护中的应用 二、基本原理 当金属浸于腐蚀介质时，如果金属的平衡电极电位低于介质中去极化剂（如H +或氧分子）的平衡电极电位，则金属和介质构成一个腐蚀体系，称为共轭体系。此时，金属发生阳极溶解，去极化剂发生还原。在本实验中，镁合金和钢分别与0.5mol/L 的NaCl 溶液构成腐蚀体系。 镁合金与NaCl 溶液构成腐蚀体系的电化学反应式为： 阳极： Mg= Mg 2++2e 阴极： 2H 2O+2e=H 2+2OH - 钢与NaCl 溶液构成腐蚀体系的电化学反应式为： 阳极： Fe= Fe 2++2e 阴极： 2H 2O+2e=H 2+2OH - 腐蚀体系进行电化学反应时的阳极反应的电流密度以 i a 表示， 阴极反应的速度以 i k 表示， 当体系达到稳定时，即金属处于自腐蚀状态时，i a =i k =i corr （i corr 为腐蚀电流），体系不会有净的电流积累，体系处于一稳定电位c ?。根据法拉第定律，即在电解过程中，阴极上还原物质析出的量与所通过的电流强度和通电时间成正比，故可阴阳极反应的电流密度代表阴阳极反应的腐蚀速度。金属自腐蚀状态的腐蚀电流密度即代表了金属的腐蚀速度。因此求得金属腐蚀电流即代表了金属的腐蚀速度。金属处于自腐蚀状态时，外测电流为零。 极化电位与极化电流或极化电流密度之间的关系曲线称为极化曲线。测量腐蚀体系的阴阳极极化曲线可以揭示腐蚀的控制因素及缓蚀剂的作用机理。在腐蚀点位附近积弱极化区的举行集会测量可以可以快速求得腐蚀速度。在活化极化控制下，金属腐蚀速度的一般方程式为： 其中 I 为外测电流密度，i a 为金属阳极溶解的速度，i k 为去极化剂还原的速度，βa 、βk 分别 为金属阳极溶解的自然对数塔菲尔斜率和去极化剂还原的自然对数塔菲尔斜率。 令?E 称为腐蚀金属电极的极化值，?E ＝0时，I ＝0；?E>0时，是阳极极化，I>0,体系通过阳极电流。?E<0时，I<0， 体系通过的是阴极电流，此时是对腐蚀金属电极进行阴极极化。因此外测电流密度也称为极化电流密度 测定腐蚀速度的塔菲尔直线外推法：当对电极进行阳极极化，在强极化区，阴极分支电流i k =0, )]ex p()[ex p(k c a c corr k a i i i I β??β??---=-=c E ??-=?)]ex p()[ex p(k a corr E E i I ββ?--?=)ex p(a corr a E i i I β?==
反应速度心理实验报告
反应速度心理实验报告 实验时间：XXXX年XX月XX日星期X 实验地点：计算机实验楼XXX教室 学生姓名： XXX（班级学号） 指导老师：普通心理学XXX老师 一、引言 对外界各种刺激（如光、温度、声音、食物、化学物质、机械运动、地心引力等）所发生的反应即应激性是生物体的7个基本特征之一，不论是简单反应还是复杂反应都是生物体对外界刺激的回应。 反应速度是指人体对各种信号刺激（声、光、触等）快速应答的能力。我们无时无刻都暴露在各种外界的刺激下，针对个体反应速度的研究，不仅有利于发现寓于特殊性中的普遍性，而且能帮助个体更好地处理外界刺激，提高学习能力和生活质量。 二、实验目的 （一）了解自身的简单反应能力和复杂反应能力，以自身为个例深入学习反应速度在时间和空间上的不同，探讨更多反应速度的规律性。 （二）以计算机为平台学好相关心里测量数据的整合和总结，强化自己的观察能力和动手实践能力。 三、步骤和方法 （一）步骤 1.打开实验室里的计算机中的测试软件，点击“反应测试”，出现“简单模式”和“复杂模式”。 2.每组测试开始前会有3次练习，而后进入10次真正的训练。以反应速度为最优成绩，电脑会提示训练者是否打破自己的最高纪录，
并予以相应的鼓励或是表扬。 3.“简单模式”和“复杂模式”两个实验测试各测试20次，并记录实验结果。 （二）方法 1.“简单模式”：实验者要求在电脑屏幕中看到“红色方块”时以最快速度按下“L”键。 2.“复杂模式”:实验者要求在电脑屏幕中看到“黑色方块”以最快速度按下“A”键；在看到“白色方块”按下“L”键。 四、实验结果及处理 反应速度测试报告(单位：秒)
杀菌剂开发中的室内生物测定_杨晓凡
杀菌剂开发中的室内生物测定 杨晓凡1,吴祥为2,黄德智2,花日茂2 (1.安徽工程科技学院,安徽芜湖241000;2.安徽农业大学资源与环境学院,安徽合肥230036) 摘要 针对杀菌剂开发中的室内生物测定,探讨了活体和离体的相互关系,生物测定类型的选择问题,同时从多角度阐述了杀菌剂生物测定的创新途径。 关键词 杀菌剂开发;生物测定 中图分类号 S482.2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2006)01-0087-02 Summ ary of Bioassay in the P rocess of Discovering and Developing N ew Fungicide YANG X iao2fan et al (Anhui University of T echn ology and Science,W uhu,Anhui241000) Abstract Bioassay plays an im portant role during the process of discovering and developing new classes of fungicides.In this paper,traditional fungicidal bioassay was summ arized.In addition,the fungicidal bioassay selection and its inn ovation way were als o elab orated as tw o focal points.And the research herein was provided as the useful reference for fungicides discovery in China. K ey w ords Fungicides;Bioassay 在农用杀菌剂研发过程中,药剂、病原菌和寄主及其相互影响始终是关注的重点,而室内生物测定是联系三者的纽带之一。杀菌剂在其早期的开发中,无论是初筛还是复筛,都必须不断地对化合物进行生物测定,从而确定研究的效果及下一步的筛选方向。 1 传统的生物测定 1.1 活体和离体 在目前杀菌剂的研究、开发中,应用最普遍的是离体(In vitro)和活体(In viv o)两大传统室内生物测定技术。传统离体生物测定技术,即病原菌脱离寄主(感菌植物等)在人工培养基或无培养基的条件下,直接和药剂接触,观察药剂生物活性大小和类型。离体生物测定主要有附着法、抑菌圈法、孢子萌发法、最低浓度法、生长速率法和干重法等[1]。离体条件下反映的仅是供试药剂和病原菌的关系。所以观察的指标(菌丝生长速率、抑菌圈大小和孢子萌发率等)是供试药剂对病原菌直接毒力的表现。 20世纪60年代,日本理化研究所研究并开发了防治水稻纹枯病及其他真菌性病害的多氧霉素(P oly oxin),它的发现在很大程度上取决于“植株喷洒法”的建立。自此,活体成为农用杀菌剂研究的传统生物测定技术。活体生物测定,即在室内控制条件下,于病原菌和活体寄主共存体系中观察药剂生物活性大小和类型。活体测定法按测试材料主要有器官接种试验、种子杀菌剂药效试验、果实防腐剂生物测定等;按作用方式又可分为先接种后药剂处理的治疗作用试验和先药剂处理后接种的保护作用试验。活体条件下,环境因素易于控制,主要反映的是特定环境下病原菌、寄主和药剂三者关系,病原菌活性受药剂和寄主生物双重影响,所观察的指标(病斑大小、发病率等)是病原菌、寄主和药剂的综合表现。 1.2 离体和活体的关联及选择 离体反映的是药剂对病原生物的直接毒力大小,活体反映特定环境条件下药剂在活体上的药效大小。离体生物测定快捷、灵敏、易操作;活体生物测定相对耗力、耗物、周期长,程序复杂。如果离体和活体所反映的杀菌剂生物活性一致,人们更希望用离体代替活体, 基金项目 安徽省高等学校青年教师科研资助计划项目(2005jq1063)。作者简介 杨晓凡(1978-),男,安徽寿县人,硕士,讲师,从事生物农药研究。 收稿日期 2005208228但事实上,有些杀菌剂应用离体有效,活体测定无效,而有些杀菌剂采用活体有效,离体测定却不表现毒力。20世纪70年代以前开发的稻瘟病防治药剂如灭瘟素(Blasticidins)、春日霉素(K asugamycin)、异稻瘟净(I BP)、克瘟散(E DDP)等无论离体、活体试验都具有较强的活性。但70年代后开发的防治药剂如噻菌灵(thiabendaz ole)、三环唑(T ricyclaz ole)、四氯苯酞(Fthalide)、灭瘟唑(S21901)等在离体条件下几乎不表现活性,但是在稻株上却显示极高的防治效果。所以正确选择生物测定方式在杀菌剂开发中往往具有决定性作用。 (1)作用方式。药剂不是直接杀死或抑制病原菌,而是提高植物抗病性或诱导植物抗病性,以达到防治病害的目的,应考虑活体生物测定[24]。 (2)作用机理。如开发黑色素合成抑制剂(M BI)类杀菌剂,这类非杀菌性杀菌剂,由于其不阻碍分生孢子萌发,但抑制附着壁的黑色素的形成而使侵入能力下降,所以研究中应选用活体生物测定;20世纪70年代后开发的作用点单一的内吸性杀菌剂离体表现大都不如活体显著,所以开发内吸性杀菌剂,应以活体测定为主。 (3)药剂开发类型。日用防腐剂、仓储防霉剂、铲除剂类杀菌剂的生测应优先考虑离体,判断其直接毒力的大小;土壤类杀菌剂的开发,如苯基酰胺类CG A8000应以离体测定为主[5];开发保护性杀菌剂可采用离体抑制孢子萌发测定法。 (4)同一生物测定类型,存在不同的选择方法。离体测定中,有的抑制孢子萌发,有的抑制菌丝生长或导致异常芽管的形成,抑制菌丝生长的不宜用抑制孢子萌发法测定,如春日霉素只能抑制菌丝蛋白质的合成,不能抑制孢子萌发。活体测定中要考虑活体对药剂的吸收方式不同,有的要叶面喷洒,有的应考虑土壤处理或营养液处理。 在杀菌剂的开发过程中,对筛选化合物的理化性质及作用机制不明,会给筛选过程中的生测选择带来困难。对于随机合成筛选,发现活性化合物很大程度上依靠机遇,化合物的活性及作用机制是不可预测的[6],应考虑“活体优先”原则。从天然产物筛选杀菌活性成分,初筛时活性含量、成分、稳定性等未明,离体测定相对敏感,复筛及下一步的分离纯化过程中应采用活体、离体相结合的方式共同追踪活性物 安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.S ci.2006,34(1):87-88 责任编辑 孙红忠 责任校对 孙红忠