细菌标本片的制备及染色
一、细菌标本片的制备
1.抹片
（1）固体培养物：取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，取1-2环无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。接种环用后需要灭菌。
（2）液体培养物：可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环，在玻片上作直径1cm涂面。
（3）液体病料（血液，渗出液，腹水）：取一张边缘整齐的载玻片，用一端蘸取血液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上，一45°角均匀推成一薄层的涂面。
（4）组织病料：以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和观察
2.干燥
涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂片涂面向上，置于火焰高处微加热干燥。
3.固定
（1）火焰固定。是常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
（2）化学固定。有的血片，组织触片用姬姆萨染色时，要用甲醇固定3-5min
二、常用的细菌染色法
1.美蓝染色法：在经火焰固定的涂片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2-3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干镜检，结果，菌体呈蓝色
2.革兰氏染色法。
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1-
3min，水洗
（2）加革兰氏碘液媒染，作用1-2min，水洗
（3）加95%酒精脱色约30s至1min，水洗
（4）加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检
3.瑞士染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本，1-3min后，再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上，轻轻摇晃使染色液混合均匀，5min左右水洗，干后镜检，菌体呈蓝色，组织细胞的胞浆呈红色，细胞核呈蓝色
4.姬姆萨染色法。血片或组织触片自然干燥后，用甲醇固定3-5min，干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色数小时或24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色
核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择_张富军
第31卷第2期2010年3月西安交通大学学报(医学版) J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Scie nces )V ol.31No.2Mar.2010 ◇技术方法◇ 核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择 张富军,任 娟,王飞苗,吕社民,李冬民 (西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,陕西西安 710061) 摘要:目的 探讨不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。方法 应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。结果 DA.1U 大鼠肝组织内核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。结论 在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。关键词:核受体;免疫组织化学;抗原修复 中图分类号:R329233 文献标志码:A 文章编号:167128259(2010)022******* Selection of antigen retrieval methods in immunohistochemical staining of nuclear receptors ZHAN G Fu 2jun ,REN J uan ,WAN G Fei 2miao ,L ΒShe 2min ,L I Dong 2min (Depart ment of Genetics and Molecular Biology ,Medical School of Xi πan Jiaotong University ,Xi πan 710061,China ) ABSTRACT :Objective To explore t he eff ects of diff ere nt met hods of antige n ret rieval on t he results of immunohist ochemical staining of nuclear recep t ors. Methods A ntige ns were ret rieved by using microwave oven , aut oclave ,e nzyme and aut oclave plus e nzyme ,respectively ,in liver sections f rom DA.1U rats ,f ollowed by immunohist ochemical staining. Results Af ter a ntige n ret rieval wit h aut oclave ,t he p ositive staining inte nsity of nuclear recep t ors L XR 2 α,L XR 2β,PPAR 2γa nd F XR in t he liver sections f rom DA.1U rats was enhanced obviously ,a nd t he location of nuclear recep t ors was better by using t his met hod t han t he ot hers. Conclusion In t he immunohist ochemical staining of nuclear recep t ors ,using aut oclave t o ret rieve a ntige ns is t he best met hod. KE Y WOR DS :nuclear recep t or ;immunohist oche mical staining ;a ntige n ret rieval 收稿日期:2009202224 修回日期:2009203229 基金项目:国家自然科学基金(No.30400249,30571725,30630058); 陕西省国际合作项目(No.20072kw 206);陕西省自然科学基金项目(No.2004C256) Supported by t he National Natural Science Foundation of China (No.30400249,30571725,and 30630058),Interna 2tional Cooperation Foundation of Shaanxi Province (No.20072kw 206)and t he Natural Science Foundation of Shaanxi Province (No.2004C256). 通讯作者:李冬民.E 2mail :lidongm @https://www.360docs.net/doc/3911590792.html, 作者简介:张富军(19632),男(汉族),实验师. E 2mail :zfj @https://www.360docs.net/doc/3911590792.html, 核受体在生物体内广泛分布,与配体结合后活化,调控基因的表达,在机体生长发育、新陈代谢等生 理过程中发挥重要作用。核受体L XR 2α、L XR 2 β、PPAR 2γ和FXR 在糖、脂代谢调控中起重要的作用,参与2型糖尿病的发生发展。 免疫组织化学染色是根据抗原与抗体特异性结合的原理,用标记的特异抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量研究。甲醛溶液固定导致许多抗原决定簇被掩盖,不能与抗体很好结合。核受体位于核 内,镜下观察染色结果时,若隐若现,抗原表达不均匀。为了解决该问题,使抗原决定簇能很好的暴露出来,我们采取了微波修复法、高压热修复法和酶修复法等。抗原修复方法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复;比较分析不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体免疫组化染色结果的影响。1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 Olymp us DP71图像分析仪。 L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 抗体购自Abcam 公司;免疫组化(SP 法)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.2 组织材料 病理切片来自DA.1U 大鼠糖尿病 模型肝组织,经40g/L 多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,5μm 厚,每个蜡块各切5片。 1.3 抗原修复 组织切片常规脱蜡至水,3%(体积 分数)H 2O 2灭活内源性过氧化物酶,0.02mol/L
实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色
实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色 生物111班杨明轩1102040128 一、实验目的 1、学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法。 2、学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法。 二、实验原理 （一）细菌的芽孢染色 芽孢通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含水量极低而抗逆性极强的内生休眠体。 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现出不同的颜色而加以区别。芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。 （二）细菌的荚膜染色 荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来。 三、实验材料 1、菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26~28℃培养2~3天； 钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28℃培养3天。 2、染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤） 3、其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具 四、实验方法 （一）细菌的芽孢染色 1、制片：将枯草芽孢杆菌涂片、干燥固定。 2、染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和。加热使染液微冒蒸汽后，保持5min。加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥。 3、水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 4、复染：用番红染液染色2~3min。 5、镜检：涂片干燥后，置油镜下观察。 6、清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。 （二）细菌的荚膜染色 1、制片：在洁净的载玻片的中央滴加1滴无菌水，取少许钾细菌制成涂片，在空气中风干。 2、染色：用石炭酸复红在涂片处染色4~5min，水洗，稍风干。 3、滴加一滴墨汁在载玻片的一侧，左手持此玻片，右手拿一干净玻片作推片用。将推片边缘凭证的一端与混合菌液成30°胶接触，顺势将菌液推开（不要太用力），使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥。 4、镜检：玻片自然干燥后，置油镜下观察。
细菌的常用染色技术
细菌的常用染色技术 简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。例如番红。 1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。 2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。 3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。 4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。 6．干燥 7．镜检 复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。例如革兰氏染色法。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。 碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。 1.载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 2.草酸铵结晶紫染1分钟。 3.自来水冲洗，去掉浮色。 4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 6.用番红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。
细菌芽孢染色
姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3 【实验题目】 细菌芽孢染色 【实验目的】 1.学习并掌握芽孢染色法 2.了解芽孢的形态特征 【实验器材】 1、菌种： 枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。 2、溶液和试剂： a) 5％孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、无菌水 b) 香柏油、二甲苯 3、仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、试管夹等 【实验原理】 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。 与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 【实验内容及步骤】 2、具体步骤： 1)洗片、干燥 取一块载玻片，用水浸湿，用手使用去污粉洗净玻片，竖立在一边自然干燥。干燥后在玻片的一面用记号笔做好标记。方便以后水洗染料，避免洗去细菌。 2)涂片 取一块载玻片，在上边用胶头滴管加半滴无菌水，用接种环无菌操作将沾有菌的接种环置于载玻片上的无菌水种涂抹，待看到微弱的浑浊即可；（注意取菌不要太多） 3)加热固定
做好免疫组化染色必须注意的问题
做好免疫组化染色必须注意的问题 一、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。 在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的抗原由于机体的作用，可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质，这是抗原发生弥散的一种方式。另一种抗原弥散的方式就是，由于组织没有及时的固定所引起的。离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散，这是一非常普通的常识，但要做好却是极不容易。标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间，在这段时间里，有的抗原就可以发生扩散。虽然已浸入了固定液，但标本较大，固定液的量又不足，当然由于固定液的渗透需要时间，当渗入到组织之中时，中间的细胞已发生了变化，抗原也随着发生扩散，这种现象在产酶多的器官是比较明显的，如胃癌，当切除后标本较大，虽然在手术室期间已放入了固定液，但固定液要透过肌层达到胃粘膜面起码需要几个小时的时间，当固定液发挥作用时，组织已经发生变化。因此，这了达到免疫组织化学染色的要求，对于离体的组织尽量快的进行固定，有条件的应将其剖开，早取材，早固定。 二、组织脱水必须彻底干净 组织块取材不能太大过厚，才能较好地完成脱水的过程。如果取材太厚，在较短的时间内脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败，或者由此反复操作，造成年人力物力的浪费，造成病理报告的延期发出等。因此，对取材的要求是除了要求要有艺术性外，即平整、外观好看，还要求适中。 三、切片必须完整、均匀、平展、无邹折 应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附贴。如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染色不均匀的现象，颜色深浅不一，不平。如果切片有汽泡切片在烘烤时，由于汽泡的破裂影响了汽泡周围的组织，在其周围可观察到深浅不一的染色。如果切片有邹折，免疫组化染色后，在邹折的地方有深浅不一的颜色，这是一种假阳性，容易引走混淆。 四、切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂。 免疫组织化学染色前的前期准备工作，就是必须对新的载玻片进行处理，新的载玻片表面看起来很干净，有人认为不需要进行任何的处理，都能够适合使用，这是一种错误的想法。新出厂的载玻片，表面复盖着开一层油脂样的物质，如果不加以处理，对切片的附贴是极为不利的。我们的做法是：新的载玻片，放于玻璃清洗液中浸泡4小时甚至过夜，然后取出，经自来水彻底冲洗后，浸入酒精中达2小时以上，取出擦干备用或烘干也可。然后再将载玻片浸入了－氨基－三乙氧基－硅烷（3－Aminopropyl triethoxy-silane）的稀释液（1：50用丙酮或无水乙醇稀释都可以）中硅化10分钟，后经无水乙醇洗2次，烘干即可使用。 五、切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片，又不至于破坏抗原。 应用于免疫组化染色的切片。由于整个过程需经几个阶段的处理，如抗原修复时抗原修复液的沸腾且需持续十几分钟，PBS的反复冲洗，有的甚至于4℃冰箱中孵育达十几小时。因此，
实验四 细菌的芽孢染色
实验四细菌的芽孢染色 生物112 周泓兆1102040226 一、目的 学习并掌握细菌芽孢染色的原理及方法。 二、原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而加以区别。芽孢具有厚而致密的壁，因此想要将芽孢染色需要在较高的温度（煮沸）的条件下，用强染色剂（孔雀绿）将菌体和芽孢同时染色。而同时，实验利用了孔雀绿可经水洗脱色的特点，通过水洗将菌体的着色洗脱，而芽孢因具有致密的壁而不会被水将染色洗脱。接下来用番红染色，将菌体染为红色，而在常温下品红无法将芽孢着色，因此在显微镜下形成了芽孢为绿色而菌体为红色的现象。而实验中如果要观察芽孢在菌体中的着生位置，一定要根据各菌的特点来确定培养时间。 三、材料 1.菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26℃-28℃，培养2-3天。 2.染色剂：孔雀绿染液，番红染液。 3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，酒精棉球，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，接种环，酒精灯，镊子。 四、实验步骤 1.制片：将枯草芽孢杆菌涂片并干燥固定。 2.染色：撕取一块比载玻片略窄的吸水纸，覆盖在涂片出，在吸水纸上滴加孔雀绿直至饱和。用酒精灯加热是染液保持微沸，其间不断添加适量孔雀绿染液，保持吸水纸湿润，染色5min。 3.水洗：待玻片冷却后，用镊子出去吸水纸，再用水瓶轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 4.复染：用番红染液染色1-2分钟，水洗。 5.镜检：涂片干燥后，滴加香柏油置于油镜下观察。 6.清理：用二甲苯与干净擦镜纸擦净镜头，将涂片放入废片缸，将固体垃圾放入垃圾桶，液体垃圾倒入废液缸，无腐蚀性毒性液体可倒入下水道，用酒精棉球擦洗器材将溅出的染料擦除。 五、结果与讨论： 这个实验成功率很高，主要原因是步骤简单，染色效果明显而且影响因素少，洗脱时间对结果影响要比革兰氏染色中酒精脱色时间的影响小很多。最后结果的小遗憾是孔雀绿绿色的着色较浅，我觉得可以通过适当增加涂片的菌体密度和增加染液煮沸时间，可能会获得更好地效果。 六、思考题： 1.为什么在孔雀绿加热染色时，要待玻片冷却后才能冲洗？ 答：我推测的原因如下：①菌体在突然遇冷之后会变形甚至破裂，影响观察。②在沸腾的情况下染料能更方便地进入芽孢，那么高温下染料也应该更容易从芽孢中被洗出，所以等到冷却使得孔雀绿尽可能留在芽孢内。③防止载玻片在高温下突然遇冷而炸裂。
实验五 细菌芽孢染色法
细菌的芽孢染色法 09级生命基地林剑锋（200900140065） 周三下午第四排 摘要 细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。通过芽孢染色和复染色，使细菌的菌体和芽孢呈现不同颜色，在显微镜下，我们就能够跟容易观察到芽孢，并对其特征进行识别，从而达到区分菌种甚至鉴定菌种的目的。 关键词 芽孢Schaeffer-Fulton氏染色法梭状芽孢 前言 芽孢又叫内生孢子（endospore），是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。由于芽孢壁厚、透性低上不易着色，当用石炭酸，番红，结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颇色，很难观察。 1．实验材料与方法 1.1 实验材料 枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌（Clostridium Prazmowski），5%孔雀绿，0.5%番红，酒精灯，酒精，木夹，香柏油，二甲苯。 1.2实验方法 1.2.1 ．制片 按常规涂片、下燥、固定。 1.2.2 ．染色 加数滴5%孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时。维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片干涸。 1.2.3 ．水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，直至流出的水无色为止。 1.2.4 ．复染 用0.5%番红染液复染2min 。 1.2.5 水洗 用缓流水洗后，吸干。 1.2.6 ．镜检 先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察。
2．实验结果与分析 2.1 实验结果 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色。枯草芽孢杆菌芽孢呈椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，菌体基本无大变化；梭状芽孢杆菌芽胞呈圆形，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。 图一枯草芽孢杆菌芽孢染色（x~400）图二梭状芽孢杆菌芽孢染色（x~400） 2.2 实验分析 由于芽孢壁厚、透性低上不易着色，当用番红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圈。但是用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进人菌体也可进人芽孢内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经染色便难以被水洗脱。当用对比度大的复染色剂番红染色后，芽孢仍保留初染剂孔雀绿的绿色，而菌体和芽孢囊被染成复染色剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 3．实验小结 此次芽孢染色实验，首先，收获到的当然是芽孢的染色方法。其次，对芽孢有了一个系统的认识。芽孢不仅仅是生物的休眠体而已。芽孢的各种特性还是进行生物物种鉴定和分析的重要依据。对细菌的芽孢的描述方法也有了一定的了解。 参考文献 【1】詹火元生物学通报1995年底30卷第2期p34 【2】沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006 【3】沈萍，陈向东.微生物学实验.第4 版.北京:高等教育出版社，2007 【4】Madigan, MT; Martinko J, Parker J (2004). Brock Biology of Microorganisms (10th ed.). Lippincott Williams & Wilkins ISBN 0-13-066271-2.
细菌芽孢染色
微生物学实验报告 题目：细菌芽孢染色 姓名：学号：组别：年级班级： 同组者：时间： 【实验器材】 1．菌种：枯草芽孢杆菌。 2．染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 3．仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。 【实验目的】 1．学习并掌握细菌的芽胞染色法，初步了解芽孢杆菌的形态特征。 2．巩固显微操作技术及无菌操作技术。 【基本原理】 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子(endospore)，通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦被着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石碳酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进如芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两者区别开来。 【操作步骤】 1．制片。 按常规方法涂片、干燥及固定。 2．加热染色。 向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热染液冒蒸气计时并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸。3．脱色。 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 4．复染。 用0.5%番红水溶液复染2min。 5．水洗。 用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。 6．镜检。 将载玻片晾干后油镜镜检。 【实验结果】
免疫组织化学及HE染色实验步骤复习过程
免疫组织化学及H E 染色实验步骤
免疫组织化学（ immunohistochemistry） 1组织脱水、包埋及切片 （1）将剥离出瘤组织切成合适大小的组织块放于4%多聚甲醛中固定2天，固定时间最长不能超过1个月； （2）将组织块从固定液中取出，PBS漂洗1h，然后开始进行组织脱水，程序如下：70%乙醇浸泡30min—80%乙醇浸泡30min—90%乙醇浸泡30min—95%乙醇浸泡30min—95%乙醇浸泡30min—无水乙醇浸泡30min—无水乙醇浸泡30min—无水乙醇浸泡30min—二甲苯 浸泡30min—二甲苯浸泡30min； （3）将组织块完全浸泡在蜡液中60℃过夜； （4）打开包埋仪器，设置相应参数，2h后将蜡液中的组织块取出放入包埋机的蜡缸中，将包埋所用铁槽清理干净放入蜡缸，用镊子将组织块放于铁槽正中央，取出铁槽接取少量蜡液使凹槽填满，将包埋盒倒置卡在铁槽上，放于低温工作台上冷却凝固，待其完全凝固后，取下包埋好的蜡块； （5）在切片前，先将蜡块表面修平，切成连续的厚度为5μm的切片，放入冷水中展片，用刀片将连续蜡带分开，然后放入40℃水浴锅中，用防脱载玻片捞出目的蜡带，放入烤片机上过夜，组织切片4℃保存。 2免疫组化染色 （1）首先，用二甲苯脱蜡，然后用梯度酒精和水使切片充分复水，详细流程为：二甲苯浸泡10min—二甲苯浸泡10min—无水乙醇浸泡5min—无水乙醇浸泡5min—90%乙醇浸泡5min—80%乙醇浸泡5min—自来水冲洗5min； （2）抗原修复：微波炉中火预热配制好的枸橼酸缓冲液3min，将切片浸入修复液内，用微波炉中火加热3min，在此过程中注意不要让修复液溢出，以免切片变干，加热
实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色
实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。 革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。 2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载 玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。 6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。 7.用滤纸吸干，油镜镜检。 五、注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。 六、实验内容 1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色 2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。 七、实验报告
细菌标本片的制备及染色
一、细菌标本片的制备 1.抹片 （1）固体培养物：取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，取1-2环无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。接种环用后需要灭菌。 （2）液体培养物：可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环，在玻片上作直径1cm涂面。 （3）液体病料（血液，渗出液，腹水）：取一张边缘整齐的载玻片，用一端蘸取血液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上，一45°角均匀推成一薄层的涂面。 （4）组织病料：以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。 无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和观察 2.干燥 涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂片涂面向上，置于火焰高处微加热干燥。 3.固定 （1）火焰固定。是常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。 （2）化学固定。有的血片，组织触片用姬姆萨染色时，要用甲醇固定3-5min 二、常用的细菌染色法 1.美蓝染色法：在经火焰固定的涂片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2-3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干镜检，结果，菌体呈蓝色 2.革兰氏染色法。
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1- 3min，水洗 （2）加革兰氏碘液媒染，作用1-2min，水洗 （3）加95%酒精脱色约30s至1min，水洗 （4）加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检 3.瑞士染色法 细菌抹片自然干燥后，滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本，1-3min后，再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上，轻轻摇晃使染色液混合均匀，5min左右水洗，干后镜检，菌体呈蓝色，组织细胞的胞浆呈红色，细胞核呈蓝色 4.姬姆萨染色法。血片或组织触片自然干燥后，用甲醇固定3-5min，干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色数小时或24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色
实验四.细菌芽孢染色
实验四.细菌芽孢染色 一. 目的要求： 目的：掌握细菌芽孢染色方法 内容：１．学习并掌握芽孢染色法 ２．初步了解芽孢杆菌的形态特征 二. 基本原理： 芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。 三. 器材 1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃） 2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液 0.05%碱性复红蒸馏水 3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等 二甲苯.香柏油 四. 操作步骤： 一）方法1： 1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。 2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液 3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料 4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗. 6.制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体呈红色。 二）方法2： 1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。 2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min . 4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。 5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 6.加复染液染2-3分钟，水洗。 7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。 五.实验报告： 1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。 2.芽孢染色的操作要点？ 资料介绍： 1、菌种培养：37℃、18-24小时为宜。 2、染色剂的配制： A.5%的孔雀绿水溶液 孔雀绿 5g 蒸馏水 100ml
细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法
一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。 二、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点： 高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速—流速为0.1~10.0 ml/min。 高效—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高—可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收—样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 三、色谱法分类 按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC 应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。 按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。(此外还有电泳。) 按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。 四、色谱分离原理 高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。
实验 二 细菌的芽孢染色
实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节 一、实验目的 1 学习细菌的芽孢染色法 2 学习细菌的鞭毛染色法 3 学习细菌的荚膜染色法 二、实验原理 1 芽孢染色的原理: 细菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则；除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 2 鞭毛染色的原理: 细菌的鞭毛极细，直径一般为0.01～0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 3 荚膜染色的原理: 荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质,通常是多糖和多肽类物质. 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定。以免荚膜皱缩变形。 三、实验器材 1菌种：培养24h的枯草杆菌（Bacillcus subtilis）、培养12-16h的变形杆菌斜面,培养3d的固氮菌。 2染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、番红水溶液, 鞭毛染色液A液与B液，蒸馏水，香柏油，显微镜擦拭液,绘图墨水或黑色素溶液． 3器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。 四、实验方法 （一）芽孢染色： 1涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 2晾干固定；待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过3次。 3 染色： A 加染色液。加5％孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片用试 管夹夹住，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽对开始计算时问，约维持４～５min。加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水，切勿让标本干涸（加热时温度不能太高）。 B 水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。
免疫组织化学实验之常用染色方法 百度文库
免疫组化的相关知识！ 一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) 免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性和特异性，其特点是将形态学改变与功能、代谢变化结合起来，直接在组织切片，细胞涂片或培养细胞爬片上定位一些蛋白质和多肽类物质的存在，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析系统或激光扫描共聚集显微术等技术，对被检物质进行定量分析。 二、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？ 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。 三、石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法？ 石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。 常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。 四、免疫组化实验用抗体的选择 1、一抗选择要点 (1)选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。 (2)种属来源。一般家兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，但也有另外。这条主要要与后面的二抗来源相匹配。 (3)实验目的是检测什么种属的抗原，即species reactivity。这一点很重要，一般说明书
12.形态学检查.
教学活动设计方案十二 学习情境四：微生物的鉴定总学时44学时 授课日期 1101班项目十二：形态学检查学时2学时1102班 教学要求教学 目标 能力目标： 1.知道对可疑培养物进行细菌形态学检查的方法及意义。 2.会做细菌不染色标本的检查：悬滴法、压滴法。 3.会做细菌染色标本的检查：革兰染色、抗酸染色。 4.会使用暗视野、明视野显微镜观察细菌动力。 知识目标： 1.明确细菌不染色标本检查的原理、方法、结果及意义。 2.明确革兰染色原理、方法、结果判断及意义。 3.明确抗酸染色原理、方法、结果判断及意义。 态度目标： 1.严格按照操作规程进行操作。 2.具有团队合作意识，培养分析问题及解决问题的能力。 3.具有高度的质量意识，养成良好的操作行为习惯。 4.对处理后的培养物妥善处理，注意生物安全。 重点 难点 1.针对可疑培养物选择形态检查方法。 2.暗视野显微镜的使用。 教学 资源 培养基、接种环、酒精灯、超净工作台、显微镜、各种细菌培养物、革兰染液、抗酸染液等 教学 环境 医学检验实训中心、一体化多媒体教室 教学 方法 问题导入、多媒体展示、现场教学、全程参与式教学 教学步骤问题导入： 问题1：尿液标本在血平板上长出圆形、光滑、湿润、灰白色略扁平的菌落，怎样进行后续检测呢？ 问题2：粪便标本在SS琼脂上长出无色小菌落，疑似志贺氏菌，用怎样一个简单的方
法大致判断呢？ 引入学习内容： 1.针对不同的可疑培养物选择正确的细菌形态检查方法,明确形态学检查在细菌鉴定中的意义。 2.运用革兰染色或抗酸染色检查细菌的形态。 3.用暗视野显微镜、明视野显微镜检查细菌动力。 教师多媒体授课 1.可疑培养物的细菌形态学检查方法： 【不染色标本】不染色标本检查法：压滴法、悬滴法、暗视野检查法；不染色标本检查的意义：主要用于检查细菌动力。 【染色标本】染色标本检查法有：革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法；染色标本检查的意义：主要是鉴别细菌 2. 不染色标本检查法的技术要点： 【材料准备】不染色标本检查法所用材料：洁净的玻片、盖玻片、凡士林、无菌生理盐水、酒精灯、接种环 【技术要点】1.标本新鲜 2.高倍镜观察 3.鉴别运动形式，正确判断结果 4.暗视野显微镜的使用要点 压滴法、悬滴法学生实训 1.将学生分成8组，每组4人。 2.发放各种疑似培养物标本。 3.进行疑似培养物的涂片染色镜检，并记录结果。 4.进行疑似培养物的动力观察，并记录结果。 5.在操作过程中可以相互探讨，及时纠正操作训练中出现的问题。 教师现场指导： 1.悬滴法和压滴法技能训练。 悬滴法、压滴法方法步骤；悬滴法、压滴法注意事项 2.运用革兰染色检查细菌形态。 革兰染色在形态学检查中的地位；染色关键步骤；染色方法类型与运用 学习效果评价