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特异性IFN2α2b多克隆抗体的制备及鉴定

滕利荣　孟庆繁　潘　锋　李　睿　王智勇　付玉芹　刘兰英　(吉林大学生命科学学院,长春130023) 中国图书分类号　R392111 文献标识码　A 文章编号　10002484X(2005)0320215201

干扰素α家族至少有15个亚型,彼此之间有78%～98%的同源性[1],尤其是IFN2α1和IFN2α2亚型之间的差异更小。以不同亚型的干扰素制备的多克隆抗体与抗原之间有很多的交叉反应。本文利用自行设计的亲和层析组合柱从复杂的多克隆抗体中除去与其他干扰素有交叉反应的抗体,得到针对IFN2α2b的特异性抗体。这种纯化IFN2α2b多克隆抗体的方法非常简便快捷。

1　材料与方法

111　主要试剂　重组人干扰素IFN2α2b、IFN2α2a、IFN2α1b。

112　特异性抗体的制备　将IFN2α2b溶于生理盐水中,作为抗原液免疫家兔。当抗体效价大于1∶32时提取分离抗IFN2α2b血清,然后用硫酸铵沉淀并离心得到抗体粗品。将IFN2α2b、IFN2α2a及IFN2α1b 三种干扰素分别与Sepharose4B进行偶联,装入三个层析柱中相互串联组成亲和层析组合柱(分别称为1号、2号、3号柱)。抗体粗品从1号柱上样[2],充分洗涤,然后将亲和层析组合柱分离,分别洗脱3个亲和层析柱,收集蛋白峰[3]。其中从3号柱上洗脱下来的蛋白质为抗IFN2α2b的特异性抗体,对其进行电泳和E LIS A分析。

2　结果

经亲和层析洗脱,3个层析柱分别洗脱出不同量的蛋白,在1号柱上吸附的抗体最多,而在2号和

作者简介:滕利荣(1955年-),男,教授,主要从事生物制药方面的研究;

指导教师:刘兰英(1943年-),女,博士生导师,主要从事多糖与生物制药方面的研究。

3号柱上吸附的蛋白是少量的。经过S DS2PAGE分析,特异性IFN2α2b多克隆抗体轻链和重链分子量分别为24000和50000左右。通过间接E LIS A法,得到的特异性抗体只能与IFN2α2b反应,E LIS A反应呈阳性,并测得其效价为1∶1600。与IFN2α2a和IFN2α1b均无交叉反应,E LIS A反应呈阴性。

3　讨论

IFN2α2b是目前医用最流行的细胞因子之一,具有广谱抗病毒、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用。对IFN2α2b的研究已经趋于完善,但是对它的抗体研究寥寥无几。抗IFN2α2b血清中有大量的抗体与IFN2α2a和IFN2α1b有交叉反应,通过亲和层析组合柱除去了干扰抗体,目的抗体只占多克隆抗体中的一小部分,要从大量的杂质中得到特异性的抗IFN2α2b多克隆抗体是很困难的。本研究创建的亲和层析组合柱的方法可快速、简便地得到高度特异性的多克隆抗体,避免为得到高度特异性抗体而采用单克隆抗体的复杂制备方法。得到的特异性抗体,可以用来鉴定不同的IFN2α家族亚型,在研究干扰素结构与功能关系上开辟了新的应用前景。

4　参考文献

1　Pestka S,Langer J A,Z oon K C et al.Interferons and their action[J].

Annu Rev Biochem,1987;56:727.

2　Sambrook J,Fritsch E F,M aniatis T.M olecular cloning:a laboratory man2 ual[M].2nd ed.New Y ork:C old S pring Harbor Laboratory Press,1989: 852.

3　Ed Harlow,David https://www.360docs.net/doc/3e17167606.html,ing antibodies:a laboratory manual[M].New Y ork:C old S pring Harbor Laboratory Press,1999:188.

[收稿2003209204　修回2003212224]

(编辑　许四平)

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