微生物2

抗原：凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之结合引起特异性免疫反应的物质称为抗原

半抗原：只具有反应原性而缺乏免疫性的物质称为不完全抗原，亦称为半抗原

抗原决定簇：抗原分子表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团称为抗原决定簇或抗原决定基，也称表位。

ELISA：是在固相载体表面进行的酶标抗体试验，用于可溶性抗原或抗体的定量检测。ELISA基本方法有两种：间接法和双抗体夹心法。ELISA极其敏感、安全、稳定，目前应用最广。间接法用于检测抗体，双体夹心法用于测定抗原。

质粒：是存在于细菌染色体外的共价闭合环状双链DNA分子。

分类：①致育质粒，编码性菌毛；②毒力质粒，编码细菌各种毒力因子；③耐药质粒，细菌对抗菌药或重金属盐的抗性；④细菌毒质粒，控制细菌产生菌素。

质粒作用：质粒DNA包含一些细菌生命非必要的基因，具有控制细菌产生菌毛，霉素，耐药性和细菌素等遗传性状的功能。

外毒素：某些病原菌（主要是革兰阳性菌）在生长繁殖过程中产生并分泌到菌体外的有毒性的蛋白质。

类毒素：外毒素经０.３％－０.５％甲醛溶液处理一段时间后即可脱去毒性，但仍保留良好的抗原性，称类毒素。

抗毒素：类毒素注入动物机体，可刺激机体产生具有中和外毒素毒性作用的特异抗原，称抗毒素。

内毒素：是存在于革兰阴性菌细胞壁最外层的结构成分（脂多糖），只有细菌细胞死亡。自溶或被人为破坏时，才能释放出来。

ADCC：抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用

四型超敏感反应（Ｐ１３６）

Ⅰ型过敏反应

Ⅱ型细胞溶解反应有Ab参与，反应快，称速发型

Ⅲ型免疫复合物反应

Ⅳ型迟发性超敏反应——有细胞完成，反应慢，称迟发型

Ⅰ型过敏反应：①由IgE介导，肥大细胞和嗜碱性粒细胞参与；②发生快，恢复快，一般无组织损伤；③有明显的个体差异和遗传背景。

Ⅱ型超敏感反应由IgG或IgM类抗体与细胞表面的抗原结合，在补体、吞噬细胞及NK细胞等参与下，引起的以细胞裂解死亡为主的病理损伤。

Ⅲ型超敏感反应血液循环中的可溶性抗原与相应的抗体（IgG、IgM类）结合形成可溶性的免疫复合物，在一定条件下沉积于组织，通过激活补体并在血小板、中性粒细胞等其它细胞的参与下，引起组织损伤的过程。

Ⅳ型迟发性超敏反应：以单核C浸润，细胞变性坏死为特征的由TC完的一种超敏反应。特点：由LC参与，与Ab和补体无关。无个体差异，反应迟缓，一般需6~72h出现，具双重性，保护与损伤同时存在

灭菌：杀死物体中所有病原微生物和非病原微生物及其芽孢，霉菌包子。

抗体：由抗原刺激机体的免疫系统（B细胞）分泌产生的能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。

Ｅ花环：人、猪和羊等动物Ｔ细胞膜上有许多绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）受体，简称Ｅ受体。在一定的实验条件下，多个ＳＲＢＣ与一个Ｔ细胞膜上的Ｅ受体结合，形成玫瑰花环状的细胞团，简称Ｅ花环。（Ｐ１４３）

破伤风病毒：致病因素３由两种外毒素(痉挛毒素和溶血毒素构成)。特点：中毒痉挛症状

大肠杆菌在麦康凯培养基上为什么显红色？

大肠杆菌发酵乳糖产酸，PH值降低，麦康凯平板中的显色剂（中性红）显红色，同时有胆盐沉淀而呈红色。

免疫抑制：由某些病原或理化因素造成某些免疫器官损伤而引起的一种病理过程，对所有的抗原都不应答或一一应答。

细胞免疫检测方法：1.E玫瑰花环试验。2.酸性α醋酸萘酯酶测定。3.流式细胞术。4.淋巴细胞转化实验。

补体：存在于人和脊椎动物的血清或组织液中，一组具有酶活性的蛋白质，包括３０余种可溶性蛋白和膜结合蛋白。

低温与高温对微生物的影响：当环境温度低于微生物的最适生长温度时，微生物的生长繁殖会停止。若微生物的结构并未破坏，不会造成死亡并能在较长时间内保持活力，当温度提高时，可恢复正常的生命活动。当温度过低，造成微生物细胞冻结时，有的微生物会死亡。高温下蛋白质不可逆变性，膜受热出现小孔，破坏细胞结构，发生溶菌现象。

抗体分子结构（单体）（P112)

由抗原刺激机体的免疫系统（B细胞）分泌产生的能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。

1.四肽链，两条L，两条H，各自用—S—S---连结，两条L相同，两条H不同

2．分为三个水解片段，两个Fab片段，一个Fc片段

3．分为三个功能区，可变区(V)绞链区，稳定区(C)，V区为抗原结合区，C区为抗体生物效应区和遗传标志区。

油镜：光学显微镜之一，使用时，镜头浸入油中（通常是香柏油），用于观察较细微的结构，是实验室常用的显微镜之一，清晰度略高于普通光学显微镜，用于观察衣原体，细菌，细胞器等。

中枢免疫器官：包括骨髓和胸腺。（禽类有法氏囊）。骨髓的特点：1.发生在胚胎早期，起源于中外胚层连接处，青春期后退化。2.为淋巴上皮结构，是诱导淋巴细胞增殖分化为免疫活性细胞的器官。T细胞产生于骨髓，成熟于胸腺。B细胞产生与成熟均在骨髓。

外周免疫器官：淋巴结、脾脏、黏膜免疫系统和鸡的哈德腺。特点：终生存在，是成熟的B、C细胞定居、增殖，对抗原进行免疫应答的场所。切除后一般不影响免疫功能。（P98）

非特异性免疫应答的作用的免疫分子有哪些

补体，溶菌酶，抗菌肽，干扰素

固有免疫系统包括：组织屏障（皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等）；固有免疫细胞（吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等）；固有免疫分子（补体、细胞因子、酶类物质等)。

费氏完全佐剂（FCA)与不完全佐剂(FIA)（P123)

两种佐剂均是为制备蛋白质抗原或病毒抗原的高免血清。完全佐剂：油+乳化剂+免疫刺激剂; 不完全佐剂：油+乳化剂

参与Ⅰ、Ⅱ型超敏感反应的抗体是？（P137)

Ⅰ型，IgE介导，发生快，恢复快，无组织损伤，有明显个体差异和遗传背景。

Ⅱ型，是IgG、IgM抗体与相应细胞上的抗原特异结合，在补体、单核/巨噬细胞等参与下，造成细胞溶解反应。

免疫荧光技术的应用：直接用荧光素标记抗体检验相应抗原。优点，特异性高，受非特异荧光的干扰少，但每检查一种抗原就必须制备一种相应的抗体。（P150）

细胞内寄生的细菌：结核杆菌、布氏杆菌、麻风杆菌、李氏杆菌

细胞O、H、K抗原代表什么？(P120)

O抗原：菌体抗原，成分为LPS的多糖侧链;H抗原：荚膜抗原，成分多数为多糖;K抗原：鞭毛抗原，成分为蛋白质

食品灭菌方法：加热是最常见的方法--巴氏消毒法，蒸煮，高压高温灭菌。干热灭菌。另外液体食品可以用细菌滤膜过滤除菌。添加抑菌剂防腐剂消毒:盐渍，糖渍，烟熏，山梨醇，亚硝酸钠。白酒浸泡灭菌。

干扰素和抗体性质、作用，有什么不同

动物机体的细胞或组织培养的细胞，在活的或灭活的病毒或其他诱生剂以及某些细胞因子的作用下，由细胞基因组编码而产生的一组低分子量的可溶性蛋白称为干扰素

分类：根据来源和理化性质差异，可分为α、β、γ三种类型 ;主要作用：抗病毒、抗肿瘤、免疫调节

抗体(antibody)由抗原致敏的B细胞分化为浆细胞产生的能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。

抗体作用：识别并特异性结合抗原；激活补体；结合细胞表面FC受体；具有抗原性。

具有IgE的FC受体结合的细胞有哪些：嗜碱性粒细胞，肥大细胞

非特异性与特异性免疫细胞

非特异性免疫细胞：单核细胞，中性粒细胞，自然杀伤细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞肥大细胞，红细胞，皮肤黏膜上皮细胞、吞噬细胞、NK细胞

特异性免疫细胞：T细胞、B细胞

什么是天然主动免疫，天然被动免疫，人工主动免疫及人工被动免疫，举例说明。

天然被动免疫：动物通过胎盘或出生后由初乳，卵黄等从母体被动的获得抗体而形成的一种免疫力。

人工主动免疫：人工接种疫苗或类毒素后动物的免疫能力

天然主动免疫：动物受某种病原微生物感染未发病或患某种传染病康复后而建立的免疫力

人工被动免疫:采用人工方法向机体输入由他人或动物产生的免疫效应物，如免疫血清、淋巴因子等，使机体立即获得免疫力，达到防治某种疾病的目的。

细菌的特殊结构（P12）

荚膜：存在于细胞壁外的一种粘液样的物质，称为荚膜。功能：抗吞噬作用；抗有害物质的损伤；营养物质的贮存与废物排出之地。

鞭毛：某些菌体表面长出的由蛋白质组成的线状物，称为鞭毛。功能：运动器官；有抗原性；与细菌的致病性有关。

菌毛：大多数革兰阴性菌和少数革兰阳性菌，在菌体表面还生有一种比鞭毛数量多、形状较直、较细、短的毛发状细丝，称菌毛。细菌与动物细胞通过菌毛粘附。分普通菌毛和性菌毛两类。普通菌毛更细更短、数量多、细菌特有。性菌毛是由携带一种致育因子（称为F因子）的质粒编码产生的。性菌毛可传递质粒，也是细菌表面与噬菌体吸附的受体。

芽胞：某些菌在生长发育的某一阶段，可以在菌体内形成一个内生孢子，称为芽胞。是细菌的休眠形式，对格兰染色剂不着色。产生芽胞的都是革兰阳性菌。在菌体内有三种存在方式：终端芽胞、偏端芽胞、末端芽胞。有特殊形态：梭状、汤匙状、鼓槌状等。特点：①对高温、干燥、辐射、化学药物有很强的抵抗力；②含水量低、壁厚、致密、通透性差、不易着色·、折光性强；③芽胞内新陈代谢基本停止，处于休眠状态，有潜在萌发力，不是繁殖器官；④一个细菌只能形成一个芽胞，一个芽胞只能变成一个细菌。

T、B细胞的来源与分布（P102）

T细胞：来源于骨髓，成熟于胸腺，分布在淋巴结、脾脏的胸腺依赖区，受抗原刺激发生活化、增殖、分化为效应T 细胞和记忆T细胞并可经血液—组织—淋巴—血液进行再循环流经全身，发挥细胞免疫和免疫调节功能。细胞膜上受体有：抗原受体、绵羊红细胞受体。细胞膜上重要免疫分子：T细胞受体、丝裂原受体、T细胞表面抗原。T细胞免疫功能：①产生淋巴因子，执行细胞免疫，参与迟发型变态反应；②参与宿主对移植物或肿瘤的排斥作用；

③溶解细胞和细胞毒作用，产生的淋巴因子可杀伤靶细胞；④辅助B细胞产生抗体；⑤参与免疫调节应答；⑥缓解免疫应答过程中造成的机体损伤。

B细胞：来源于骨髓，成熟在骨髓，成熟后定居在外周免疫器官。膜上受体：抗原受体、补体受体、抗体FC受体。免疫功能：产生抗体。执行体液免疫。

干扰素的作用特点（P110)

概念：指宿主细胞受病毒干扰后产生的一种非特异性抗病毒因子，化学本质是蛋白质。

作用特点：①活性高、作用迅速、早期抗感染作用；②具有抗病毒的广谱性；③对动物有种属特异性。

细菌基因的转移及重组

细菌从外源取得DNA,并与自身染色体DNA进行重组,引起细菌原有基因组的改变,导致细菌遗传性状的改变,称基因的转移与重组。

方式1.接合作用：当细菌与细菌相互接触时，质粒DNA就可从一个细菌转移到另一个细菌。 2.转化作用：由外源性DNA导入宿主细胞，并引起生物类型改变或使宿主细胞获得新的遗传表型的过程，称为转化作用。 3.转导作用：当病毒从被感染的细胞释放出来，再次感染另一细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组称为转导作用。 4.转座(转位)：转座是指一个或一组基因从一个位置转到基因组的另一个位置。可分为插入序列转座和转座子转座。 5．基因重组:不同DNA分子间发生的共价连接称基因重组。有两种类型：位点特异的重组和同源重组

高压蒸汽灭菌法：在一个大气压下，蒸汽的温度只能达到100度，当在一个密闭的金属容器内是时，继续加热，由于蒸气不断产生而加压，随压力的增高其沸点温度也升至100度以上。一般15磅，121.3度15-20分钟可杀死所有微生物包括芽胞。(P82)

巴氏灭菌法：分低温长时间巴氏消毒法（在63-65℃经过30min），高温短时间巴氏消毒法（71-72℃经过15s).(P81)

免疫球蛋白的分类(P114)

(1)IgG：产生于抗原再次进入机体引起的再次免疫应答期。分布于全身体液，在血液中含量最高，是单体，Ig中最小的一种。具有激活补体，中和病毒或毒素，调理吞噬等作用。唯一通过人胎盘的抗体。兔和人通过胎盘传递，母畜通过初乳传递，母禽通过卵黄传递。

(2) IgM：由5个单体组成的五聚体，分子量最大的Ig，体内产生最早初次应答首先产生IgM在感染的早期，检查IgM可对疾病作出早期诊断，胎儿脐带血检出IgM,可作为胚胎感染的指标。个体发育中最早产生的抗体，存在于血管内，是血管内消除细菌等大颗粒抗原的抗体，同时还有激活补体，中和病毒，凝集作用。

(3) IgA：血清型：骨髓内B细胞受抗原作用后产生，单体。

分泌型：由黏膜免疫系统中的B细胞受抗原作用后产生，二聚体，分布于粘膜表面，是呼吸道，消化道，腺管，泌尿生殖道粘膜表面抗感染的主要抗体。具有特异性中和毒素和凝集细菌的作用。

(4)IgE：由皮肤或粘膜上皮附近的B细胞受某些抗原作用后所产生的单体Ig，局部抗体,血清中含量最少。主要是与肥大细胞和咸粒细胞结合，参与变态反应，其又称亲细胞抗体在抗寄生虫方面有一定作用，主要经肠道的变态反应(如腹泻)将虫排出。

(5)IgD:人血液中存在IgD，动物体中没有。单体，含量极微。性质不稳定。

G+细胞壁的特点、对抗生素的敏感性。(P10)

革兰阳性菌的细胞壁较厚，其主要成分是肽聚糖还有磷壁酸，是革兰阳性菌特有的成分，特异的表面抗原。以及多糖和蛋白质。G+易被药物杀死，对药物敏感，因结构简单。某些抗生素(青霉素，先锋霉素)能抑制肽聚糖的合成，可直接扩散入G+的壁内，G+对这类药物敏感。

抗毒素的作用：中和相对应的外毒素的毒性作用。

构成抗原的条件：一、异源性①异种物质；②同种异体物质；③改变和隐藏的自身物质二、理化特性。如分子大小、物理状态、化学组成、分子结构和立体构象的复杂性。(P117)

免疫应答的结局：1、正免疫应答；2、免疫不应答；3、超免疫应答（过敏反应）(P123)

细菌三种形态：球菌、杆菌、螺旋菌。(P7)

革兰染色的步骤：草酸铵结晶紫染1分钟，自来水冲洗；加碘液覆盖涂面染1分钟，水洗，用吸水纸吸去水分；加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分；复红10s后，自来水冲洗。干燥，镜检。染色的结果，革兰阳性菌都呈紫色，阴性菌都呈红色。

细菌呼吸类型：需氧型、厌氧型、兼性厌氧、微需氧。(P18)

免疫的三大功能、三大特性：功能：能识别自身、非自身；具有特异性；免疫记忆。功能：免疫防御；免疫稳定；免疫监视。

交叉反应生产实际应用的意义

两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应

称为交叉反应。

交叉反应在兽医中的作用——诊断和防治

1.诊断当中出现误诊

（1）牛感染禽结核杆菌或副结核杆菌——牛结核菌;（2）牛感染了肠耶尔森氏菌——牛布氏杆菌

2.诊断疾病

用猪传染性胃肠炎抗原——猫细小病毒感染;用变形杆菌抗原——动物的立克氏体病;用牛心肌酒精提取液作抗原——梅毒患者的血清

3.预防传染病

（1）牛痘苗—人天花;（2）人麻疹苗—犬瘟热;（3）火鸡疱疹病毒—鸡马立克MD

什么是共同抗原:不同种属的微生物间,微生物与其它抗原间,或其它抗原物质间,除具有本身特异性抗原决定簇之外,还可有共同的决定蔟,称共同抗原

抗病毒细菌的免疫机制

炭疽病的免疫诊断，环状ascoli沉淀

在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸仍能与特异性抗体发生反应形成环状沉淀，称为Ascoli 反应。

1.细菌学检查

（１）镜检：大杆菌，两端平截，竹节状;（２）分离培养：用普通琼脂或血琼脂;（３）纯培养:镜检、串珠试验、生化试验;（４）动物试验：将检验材料制成悬液或纯培养物给小鼠注射，24-36h,小鼠死于败血症。

2.血清学检查

（１）Ascoli沉淀反应;（２）间接血凝试验;（３）协同凝集试验;（４）串珠荧光抗体检查;（５）琼脂扩散试验

如何从污染的病料组织中分离致病性葡萄球菌

1.扩增：将污染的病料组织在营养肉汤中进行扩增。

2.接种：将扩增后的病料组织接种于兔子新鲜血液琼脂平板中，经37度，24小时后，挑选呈金黄色，大而突起，圆形不透明，表面光滑，边缘为淡色的，周围有明显溶血环的菌落进行革兰氏染色后进行镜检，挑选呈单个或一连串的球形菌落在接种于兔子鲜血平板上，经37℃，24h后，选取典型的菌落，在进行普通培养基纯培养。

3.生化鉴定：1.V-P试验：将纯化培养的细菌接入葡萄糖蛋白胨水培养基中，经37℃，48h后，各加入甲液（5％α-萘酚无水乙醇溶液)，乙液(40％氢氧化钾溶液）各一滴，充分摇匀，观察结果。

鉴定结果：立即或数分钟内出现橙红色或红色反应者为阳性。不变色者，将培养管放37℃中4h在进行观察，若仍不变色或仅呈淡褐色者为阴性。

2.MR试验：将纯化培养的细菌接入葡萄糖蛋白胨水培养基中，经37℃培养3-4d，加入MR试剂（甲基红溶于乙醇溶液）1-2滴，观察结果。

鉴定结果：红色反应为阳性，无反应为阴性。

3.吲哚试验：将纯化培养的细菌接入胰蛋白胨水培养基中，经37℃培养2-3d，沿试管壁加入溶于酒精的对二甲基氨基苯甲醛溶液，浓盐酸，观察实验结果。

鉴定结果：在培养物与试剂的接触处出现玫瑰红色位阳性，仍为淡黄色者为阴性。

4.血清型鉴定：将纯化培养的细菌注射入小鼠体内，一段时间后，小鼠出现腹腔膨大现象。在洁净的玻片上，滴加从腹腔中抽取的积水和致病性葡萄球菌血清各一滴，混匀，如果抗原抗体相对应，1-3分钟内将出现颗粒抗原凝集现象。

如何从污染的病料组织中分离治病性葡萄球菌

原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可凝固新鲜的人或兔血浆。此种酶的试验，常用于鉴定葡萄球菌的致病力，以区别非致病性葡萄球菌。血浆凝固酶试验有两种方法。

试管法：

用于检测释放到菌体外的游离的血浆凝固酶。

1．实验材料:(1)葡萄球菌培养物。(2)1：4稀释的兔血浆(试管装)。（3）无菌小试管、接种环、水浴箱、酒精灯。

2.实验方法: 吸取1：4稀释的兔血浆放于2支无菌小试管中，每管0．5mL，用灭菌接种环取葡萄球菌一满环，在一小试管内壁徐徐研磨成均匀悬液。另一试管作为对照，将两支试管放在37℃水浴箱中，每30min观察一次结果，观察1～4h；观察时试管倾斜，凡血浆呈现胶胨样凝集者即为阳性，仍呈液体者为阴性。

鸡场发病，瑞士染色发现某种细菌，如何确定是该细菌引发的疾病

答：确定该细菌致鸡引发疾病的方法（科赫法则）：

①一种病原微生物必然存在於患病动物体内,但不应出现在健康动物内；

②此病原微生物可从患病动物分离得到纯培养物；

③将分离出的纯培养物人工接种敏感动物时，必定出现该疾病所特有的症状；

④从人工接种的动物可以再次分离出性状与原有病原微生物相同的纯培养物。

卡介苗：将分歧杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230代传代获得的减毒活疫苗。现广泛用于预防接种，预付人结核。

魏氏梭菌的致病性

A型：人气性坏疽和食物中毒；B型：羔羊痢疾；C型：绵羊猝死；D型：牛场毒血症；E型：犊牛、羔羊肠毒血症

炭疽杆菌：革兰阳性菌，大肠杆菌。菌体平直，两端平截。在组织和血液中单在或呈短链状。经培养后呈长链，竹节状。在组织中或含血液的培养基中可形成荚膜。有氧条件下形成芽胞。

免疫耐受：又称病理性耐受。是指对进入体内的抗原异物或发生异变的细胞，不能识别和清除，造成传染病发生。

包涵体：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化。在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸或嗜碱性染色，大小数量不等的，不规则圆形的团块状结构，称为包涵体。

细胞病变效应（CPE）：由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解脱落或形成合胞体，有些病毒可形成包涵体。

空斑试验：将适当浓度病毒悬液加入单层细胞培养中，当病毒吸附细胞后，在覆盖一层融化的琼脂，病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐渐扩大，肉眼可见，此即空斑。

PFU：空斑形成单位。

缺损性干扰突变株：缺失突变的产物。自身不能复制，只有在亲本野生株作为辅助病毒存在时才能复制，但又干扰亲本病毒的复制，导致后者数量减少。

病毒复制步骤：吸附和穿入，脱壳，生物合成，组装和释放。

病毒三种形态：螺旋体对称；二十面体对称；复合对称。

人工培养病毒方法：鸡胚培养法；细胞培养法；实验动物培养法。