百合快速繁殖条件的优化
福建农业大学学报
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
1999年 第28卷 第2期 Vol.28 No.2 1999
百合快速繁殖条件的优化
王家福 陈振光
摘要 百合的9个优良品种快速繁殖条件优化的研究表明,不同百合品种的鳞片分化小鳞茎能力有一定差异,高者达86.0％,低者仅13.0％；低温处理可大大提高鳞片的分化率；不同部位的百合鳞片分化小鳞茎的能力不一，分化能力大小依次为下部、中部、上部；生长调节剂组合对百合鳞片分化能力和小鳞茎增殖也有较大的影响，最适宜鳞片分化的组合为BA 0.5 mg.L-1+NAA 0.5mg.L-1,最佳的小鳞茎增殖的组合为BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1;适当提高蔗糖质量浓度对鳞茎的形成有促进作用,以100 g.L-1效果最好.
关键词 百合; 鳞片; 小鳞茎; 离体快速繁殖
中图分类号 S682.29
Optimization of conditions for rapid propagation of lily
Wang Jiafu Chen Zhenguang
(Institute of Subtropical Fruits，Fujian Agricultural University，Fuzhou 350002)
Abstract By means of in vitro culture，optimization of conditions for rapid propagation of nine excellent lily varieties was carried out and the results showed that high differentiation frequencies could be obtained under the following conditions．(1) Different lily varieties，from the lowest differentiation frequency of only 13.0% to the highest 86.0%; (2) Low temperature treatment; (3) Different parts of a bud scale，the lower parts，the higher differentiation frequencies; (4) Growth regulator，the most adaptable combination for bud scale differentiation was BA 0.5 mg.L-1 + NAA 0.5 mg.L-1，the optimal combination for bulblet subculture was BA 1.0 mg.L-1 and NAA 0.1 mg.L-1; (5) Adaptable high mass concentration of sucrose，the most ideal as 100 g.L-1.
Key words lily; bud scale; bulblets; in vitro culture for rapid propagation
百合是观赏价值较高的花卉，花色、花型各异，许多种类香味幽雅，是名贵的切花和盆花.百合约有80余种，其中有39种原产我国，但某些种类已濒临绝灭.随着百合在国内外鲜切花市场走俏，百合花生产和消费逐年递增.但由于百合商品球繁殖率低，病毒侵染造成种球退化，难于满足切花生产需要.目前主要采用组织培养进行百合脱毒和快繁，以促进了百合商品种球的生产（王爱勤等,1998;龚学坤等,1996;王月芳
等,1991,1987; Panizza et al,1990;杨增海等,1987;新美芳二,1985,1984;陈为民,1983;黄济
明,1983;陈为民等,1982; Paek,1982）.但是百合试管苗小鳞茎较小，结鳞茎时间较长，移植成活率低，制约了工厂化商品生产.因此，有必要寻找最适宜的条件，以改善试管苗
的质量，提高移植成活率.本试验在前人研究的基础上，对福建9个百合优良品种进行离体快速繁殖的条件优化研究.
1 材料与方法
试验材料为福建南平市百合试验场提供的9个品种：宝莲、卡萨布兰卡、竹鹿、黄色火焰、高鹿、阳光、矮鹿、卷丹和红骑士.取健康的百合鳞片，先用洗涤剂清洗干净，再用体积分数为0.70的酒精处理30～60 s后，用1.0 g.L-1升汞消毒10 min，最后用无菌水冲洗3次.在无菌条件下，将鳞片切成0.5 cm2左右的小块，接种在附加不同质量浓度的NAA、IAA、BA、2,4-D等生长调节剂的MS基本培养基上,蔗糖质量浓度为30～150 g.L-1，pH调整到5.6.培养室温度为(25±1) ℃，每日光照12～16 h，光照度为1000 lx.
2 结果与分析
2.1 百合小鳞茎的诱导
接种后3～5周在切块的边缘上诱导出淡黄色的不定芽原基呈环状突起.每块一般有2～4个，多的可达8个.再经过4周后，这些不定芽原基继续生长形成绿白色小鳞芽.如果把这些小鳞芽转移到新的分化培养基上，2周后便可形成小苗.
2.1.1 不同品种的差异 供试9个品种的百合鳞片，除宝莲外，均可分化出鳞芽,但各个品种差异较大(表1).在相同的培养条件下，矮鹿分化率最高，达86.0％，其次为卷丹，高鹿最差，仅为1
3.0％;每块鳞片分化鳞茎数也是矮鹿、卷丹为最高，分别为
4.2和4.0个芽,高鹿、红骑士比较低，仅为1.7和1.8.这说明不同百合品种的分化能力有较大差异.其分化能力从大到小依次为矮鹿、卷丹、卡萨布兰卡、阳光、黄色火焰、竹鹿、红骑士、高鹿.在相同条件下,不同品种分化小鳞茎的能力有较大差异,其原因有二:一是不同品种的内源激素水平不同,因此在离体培养中所需要的外源生长调节剂也不一样，这与杨增海等（1987）报道相似;二是有些材料对消毒处理有不同的反应，例如供试的宝莲百合鳞茎球，在相同的消毒条件下，损伤严重，故其诱导率为0.
表1 不同品种百合鳞片形成小鳞茎的能力1)
Table 1 Effect of different varieties on the bulblet formation
品种接种数分化数分化率/％平均每块鳞片 分化小鳞茎数
宝莲50000卡萨布兰布522650.0 2.8竹鹿602033.3 1.9黄色火焰451840.0 2.5高鹿68913.0 1.7阳光522141.0 2.8矮鹿534686.0 4.2卷丹514180.0 4.0
红骑士601016.6 1.8
1)培养基为MS＋NAA 0.5 mg.L-1＋BA 0.5 mg.L-1，蔗糖30 g.L-1，琼脂7 g.L-1;材料为鳞片
基部的切块.
2.1.2 低温处理对百合鳞片分化小鳞茎的影响 百合鳞片接种后，一种按常温条件培养，温度为(25±1) ℃;另一种先经过低温处理2周（温度为4 ℃），然后在25 ℃常温条件下培养.结果发现经低温处理的百合鳞片分化率提高50.0％（表2）.
表2 低温处理对百合鳞片分化小鳞茎能力的影响1)
Table 2 Effect of low temperature treatment on the differentiation frequencies
of lily
处理方式接种数分化数分化率/%平均每块鳞片 分化小鳞茎数
低温处理482450.0 2.5
未经低温处理401025.0 1.1
1)品种为竹鹿;培养基为MS＋BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1.
本试验接种时间是7月中旬，其时百合鳞茎开始休眠越夏，低温处理可能打破其休眠，从而提高其分化子球的能力．Scaramuzzi et al(1988)在鳞片离体培养中用4 ℃低温处理百合鳞片4～6周，可提前12～20 d分化小鳞茎，并提高分化率，但不同品种对低温处理反应不同.本试验的结果也证实了这一点.
2.1.3 不同部位的百合鳞片分化小鳞茎能力差异 把矮鹿百合的鳞片切成上、中、下3段，分别接种在MS＋BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1的培养基上．3周后，下段鳞片开始出现乳黄色突起，8周后检查各个部位的鳞片分化小鳞茎的数量（表3）.
表3 不同部位的百合鳞片对小鳞茎形成的影响1)
Table 3 Effect of different parts of a bud scale on the bulblet formation
鳞片部位接种数分化数分化率/%平均每块鳞片 分化小鳞茎数
上部50510.0 1.2中部401640.0 2.7下部454294.0 4.1
1)品种为矮鹿;培养基为MS＋BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1.
从表3可以看出不同部位的百合鳞片形成小鳞茎能力有较大差异，上部最差仅为10.0％，中部中等为40.0％，下部最好为94.0％.平均每块鳞片分化小鳞茎数也是上部最少，下部最高.王季林等（1987）、王月芳等（1987）认为各个部位鳞片对同一培养条件的反应顺序为基部＞中部＞上部,本试验的结果与此一致．Panizza et al （1990）认为基部的鳞片比上部的鳞片生长快，形成鳞茎大，因此在百合鳞片快速繁殖时，为节省人力、物力，宜采用鳞片中、下部为外植体.
2.1.4 不同激素组合对百合鳞片分化小鳞茎能力的影响 本试验共设4个组合：(1) MS ＋BA 0.2 mg.L-1＋IAA 1.0 mg.L-1；(2) MS＋BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1；(3)MS＋BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1；(4)MS＋BA 2.0 mg.L-1＋2,4-D 0.1 mg.L-1.结果表明，4个组合的激素均可诱导百合鳞片分化小鳞茎，但各个组合的分化率不同（表4）.
表4 不同激素组合对百合鳞片分化小鳞茎的影响1)
Table 4 Effect of different hormone combinations on the differentiation frequencies
激素组合接种数分化数分化率/%
BA 0.2 mg.L-1＋IAA 1.0 mg.L-1401436.0
BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1614981.0
BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1402972.0
BA 2.0 mg.L-1＋2,4-D 0.1 mg.L-1632946.0
1)品种为矮鹿.
从表4可见，不同激素组合对百合鳞片的分化小鳞茎能力有明显影响．BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1组合最适于矮鹿鳞片的分化，其分化率可达81.0％;其次是BA 1.0 mg. L-1＋NAA 0.5mg.L-1组合.因此,对于矮鹿鳞片诱导适宜的BA质量浓度大约在0.5 mg.L-1左右.对各种百合鳞片的诱导的最佳的激素组合将有待于进一步探讨.杨增海等(1987)认为MS＋BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5(1.0) mg.L-1有利于兰州百合鳞片分化小鳞茎.新美芳二(1985) 认为MS＋NAA 0.1 mg.L-1＋BA 0.5 mg.L-1对姬早百合鳞片离体培养的效果最好．Rybczynski et al (1989)证明MS＋NAA 0.1mg.L-1＋BA 0.5 mg.L-1适于欧洲百合鳞片分化小鳞茎.因此可以认为不同的培养基及激素的组合对百合鳞片诱导分化小鳞茎的能力有不同影响，但普遍认为MS培养基较适于各种百合离体培养，生长素和细胞分裂素以BA与NAA配合为佳.
2.2 百合小鳞茎的继代培养
2.2.1 不同激素对百合小鳞茎继代培养的影响 将诱导的小鳞茎切块，接种到不同生长素和细胞分裂素组合的MS培养基上培养1个月左右，每块小鳞茎即可分化出2～5个新的小鳞茎(表5).
表5 不同激素对百合小鳞茎继代培养的影响1)
Table 5 Effect of different hormone combinations on the bulblet subculture
激素组合接种数分化数繁殖系数
BA 2.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-140204 5.1
BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-150215 4.3
BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-140105 2.1
1)培养基为MS.
表5表明，BA 2.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-1的组合繁殖系数高为5.1，增殖的小鳞茎多呈丛生状态，长出的苗较矮小瘦弱; BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-1的组合繁殖系数次之为4.3，但苗长势良好，整齐度也较高；BA 0.5 mg.L-1＋NAA 0.5 mg.L-1的组合繁殖系数最低，仅为2.1，苗生长较缓慢，大部分有长根现象.因此,从工厂化育苗的角度来考虑，拟使用BA 1.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-1组合.由此可见.每个小鳞茎1个月至少可增殖成4个新的小鳞茎.如果每年平均继代培养10次，则1个小鳞茎在1年内即可繁殖410个小鳞茎．这虽然是理论数字，但由此可以看出，通过组织培养进行百合的工厂化生产是可行的.
2.2.2 蔗糖质量浓度对百合小鳞茎继代培养影响 蔗糖质量浓度对百合小鳞茎继代培养有一定的影响.蔗糖质量浓度为30、50和80 g.L-1时，小鳞茎的直径分别为2.0、2.4和
3.0 mm，也就是说蔗糖质量浓度逐渐提高时,百合小鳞茎直径也随着增加.当蔗糖质量浓度为100 g.L-1时，鳞茎的直径最大为
4.5 mm;蔗糖质量浓度为120和150 g.L-1时，小鳞茎直径均为4.0 mm.可见蔗糖质量浓度再提高时，鳞茎的直径增加不明显.因此,蔗糖质量浓度为100 g.L-1时效果最好.
3 讨论
通过9个百合优良品种的离体快速繁殖条件优化研究表明，百合鳞片的离体繁殖在工厂化育苗中有很好的应用前景.影响百合鳞片的诱导的因素是多方面的，与激素种类及用量、品种、材料部位和蔗糖质量浓度均有密切关系.不同品种的百合鳞片分化能力有一定差异，这是由于各个品种的内源激素水平不同而异.因此，在供试的品种快速繁殖中应考虑到这一点，使用激素质量浓度应略有差别.鳞片不同部位的分化小鳞茎能力也有较大差异.鳞片基部分化能力最强，中部次之，上部最差,因此工厂化育苗拟采用鳞片中下部培养.在激素组合的优化选择中，BA和NAA是首选的常用激素，它们效果好，价格相对便宜.试验结果表明，最适宜百合鳞片分化小鳞茎的激素组合为BA 0.5 mg.L-1 +NAA 0.5 mg.L-1;小鳞茎的继代培养的最佳激素组合为BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1.虽然BA 2.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1组合的繁殖系数最高，可达到5.1，但是小鳞茎呈丛生状态，长出的苗较矮小瘦弱;而最佳组合的繁殖系数尽管只有4.3，但试管苗长势良好，整齐一致，有利于成活.因此,在工厂化生产中，宜适当控制激素的质量浓度，太高影响苗木质量，太低影响繁殖系数.鉴于百合鳞茎在生长过程中有休眠期，因此在休眠期间接种，应进行低温处理以打破休眠，可大大提高鳞片的分化率.蔗糖质量浓度对百合小鳞
茎继代培养有较大影响.在一定范围内适当提高蔗糖质量浓度，有利于增加小鳞茎的直径.当蔗糖质量浓度为100 g.L-1时，小鳞茎的直径最大，但若再继续提高蔗糖质量浓度时，鳞茎直径增加不明显，甚至不增加了.因此，小鳞茎的继代培养最适蔗糖质量浓度为100 g.L-1.
作者简介：王家福,男,1947年出生,副研究员.研究方向:园艺植物生物技术.
作者单位：福建农业大学亚热带果树研究所,福州 350002
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收稿日期：1999－03－22
百合快速繁殖条件的优化
作者：王家福， 陈振光， Wang Jiafu， Chen Zhenguang
作者单位：福建农业大学亚热带果树研究所,福州,350002
刊名：
福建农业大学学报
英文刊名：JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
年，卷(期)：1999,28(2)
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66.刘伟亚洲百合‘布耐罗’抗病和抗衰老基因转化的研究[学位论文]硕士 2006
67.刘岚百合遗传转化体系建立及转ACC合酶反义基因的研究[学位论文]硕士 2006
68.杨勋东方百合鳞片扦插繁育技术的研究[学位论文]硕士 2005
69.朱旭东东方百合主栽品种优质种球繁殖技术研究[学位论文]硕士 2005
70.路艳大百合组织培养植株再生技术研究[学位论文]硕士 2005
71.周斯建百合幼苗高温胁迫反应及辐射鳞片对其扦插苗耐热性影响[学位论文]硕士 2005
72.朱旭东东方百合主栽品种优质种球繁殖技术研究[学位论文]硕士 2005
73.左志锐百合耐盐机理及其遗传多样性研究[学位论文]博士 2005
本文链接：https://www.360docs.net/doc/4d1651125.html,/Periodical_fjnydxxb199902005.aspx