高效液相色谱-紫外检测器串联荧光检测器分离制备多环芳烃
高效液相色谱-紫外检测器串联荧光检测器分离/制
备多环芳烃1，2
徐恒振 宣秋江 周传光 姚子伟
国家海洋环境监测中心，辽宁大连 116023
hzxu@https://www.360docs.net/doc/4f4781117.html,
摘要：建立了高效液相色谱-紫外检测器串联荧光检测器（HPLC-UVD-FLD）分离/制备多环芳烃(PAHs)的 技术方法。16种PAHs混合液经HPLC-UVD-FLD分离后的6个洗脱馏分样品，前处理后，分别用HPLC-UVD和毛细管气相色谱-质谱-选择离子监测模式(GC-MS-SIM)测定，结果表明，HPLC-UVD-FLD对16种PAHs进行分离及不同馏分的分段截取，可得到单体PAHs或2～3个单体PAHs的混合物；HPLC-UVD对PAHs的最小制备浓度在0.005ng/mL～0.088ng/mL 之间；HPLC-FLD对PAHs的最小制备浓度在0.001ng/mL～0.026ng/mL之间。
关键词：高效液相色谱, 紫外检测器，荧光检测器，串联，分离/制备, 多环芳烃。
中图分类号：O657.7
1.引言
多环芳烃（PAHs）是一类持久性有机污染物（POPs）。PAHs由于长久赋存于环境中，具有很强的致毒性、致突变与致癌等特性，而成为环境优先控制污染物，因此，一直受到广泛关注。美国国家环保局把16种PAHs列入到优先监测污染物的行列之中。我国也加强了对环境中PAHs的污染监测。目前，环境样品中PAHs的测定，主要有气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱/质谱法、液相色谱质谱法等[1-11]，其中气相色谱的氢火焰检测器（FID）和质谱属于破坏性检测器，难以用于待测物PAHs的接收和制备，而液相色谱配带的光学检测器（如紫外检测器和荧光检测器），不改变待测物的组成性能，其馏分宜于接收和制备[12-14]。
对此，本文采用高效液相色谱（HPLC）分离PAHs，对分离后的馏分进行截取再处理，再用气相色谱/质谱仪进行定性检测，探讨运用高效液相色谱分离制备PAHs的可能性，以期形成一个高效液相色谱-紫外检测器串联荧光检测器（HPLC-UVD-FLD）分离制备PAHs的技术方法。
2.材料和方法
2.1 仪器
HITACHI-7100高效液相色谱仪，配带紫外检测器（HITACHI L-7420）和荧光检测器（HITACHI L-7480）；spherisorb ODS2色谱柱（150mm×4.6mm×3μm）；微量进样针（50μL）；Agilent 6890/5973气相色谱-质谱联用仪，EI源，配带Agilent 7683 Series自动进样器；毛细管
1国家高技术研究发展计划（863 计划）资助项目：典型海洋有毒有机污染物标准物质制备技术(课题编号：2006AA09Z164）
2国家科技支撑计划资助项目：水上溢油事故应急处理技术（课题编号：2006BAC11B03）.
色谱柱为DB-5MS (0.25μm×0.25mm×30m，Agilent)；氮吹仪（Organomation Associates
https://www.360docs.net/doc/4f4781117.html,A）。
2.2 试剂与处理
甲醇：色谱纯（天津科密欧）；亚沸蒸馏水：在全石英亚沸水蒸馏器中，依次加入5g
高锰酸钾、3L自来水和50mL H2SO4，混匀，在水温未达到沸点的温度（变阻器电压小于70V
下加热）下缓慢蒸馏，收集而得。
16种PAHs标准溶液（浓度为10μg/mL）：萘、苊烯、芴、苊、菲、蒽、芘、苯并（a）
蒽、屈、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽、苯并（a）芘、二苯并（a,h）蒽、苯并（g,h,i）
北、茚并(1,2,3-cd)芘，由美国CHEMSERVICE 公司提供。
2.3液相色谱条件
选用甲醇和水作为HPLC的流动相， HPLC紫外检测器和荧光检测器串联，同步检测PAHs。其紫外检测器的波长为254nm，荧光检测器的激发和发射波长分别为254nm和
390nm，流动相流速为1.0mL/min，柱温18℃～20℃，PAHs的进样浓度皆为10μg/mL，进
样量为10μL。HPLC流动相的梯度洗脱程序见表1。
表1 HPLC流动相的梯度洗脱程序
Tab.1 The mobile phase conditions of schedule of HPLC
时间（min）甲醇（%）水（%）保持时间（min）
0 70 30 5
10 82 18 0
30 98 2 0
35 70 30 5
2.4 气相色谱/质谱（GC/MS）条件
色谱柱的程序升温为：初始温度为60℃，保持0min，以30℃/min速率升温到150℃，保
持3min，以8℃/min速率升温到200℃，保持5min，再以15℃/min速率升温到250℃，保持5min，
然后再以30℃/min速率升温到280℃，保持10min。进样量为1μL；进样口温度为280℃；离
子源温度为230℃；四极杆温度为150℃；扫描离子碎片范围为35～500；溶剂延迟时间为3min；
载气为氦气，采用恒流模式，流速为1mL/min；质谱监测器进口温度为300℃；电子碰撞能量
为70ev；质谱监测模式为选择离子模式（SIM）。
3.结果与讨论
3.1 PAHs馏分的分段接收
图1为16种PAHs的HPLC-UVD谱图（波长254nm， PAHs浓度为10ug/mL，进样量
为20μL，柱温为18℃～20℃）。根据色谱图（见图1）中PAHs的分离度和出峰时间，把
响应值较高的12个色谱峰分成6个馏分接收。设定的馏分接收时间见表2。按照表2的馏
分接收时间进行分段馏分截取，可得到PAHs的6个馏分样品。由于流动相流速一定（皆为
1.0mL/min），因此，可以根据馏分接收时间计算出馏分接收量，再由馏分接收量可计算出
PAHs的最小制备浓度。
图1 PAHs标准溶液的HPLC-UVD谱图
Fig.1 The chart of PAHs in the standard solution with HPLC-UVD
表2 PAHs的HPLC-UVD馏分的截取
Tab.2 The fractions of PAHs with HPLC-UVD
馏分馏分截取时间段（min）色谱峰号接收的馏分体积（mL）
馏分1 1.6～4.0 1 2.4 馏分2 7.0～11.4 2、3、4 4.4
馏分3 12.4～14.8 5、6 2.4
馏分4 16.6～18.2 7 1.6 馏分5 20.0～23.0 8、9、10 2.4
馏分6 24.0～26.6 11、12 2.6
3.2 PAHs馏分的验证
3.2.1 PAHs馏分的HPLC-UVD检测验证
为了验证接收PAHs的HPLC馏分与拟接收的PAHs馏分是否一致，分别从所接收的6
个HPLC馏分中吸取50μL接收液，重复进样（色谱条件完全一致），将每个馏分的重复进
样的HPLC-UVD谱图与PAHs标准溶液的HPLC-UVD谱图进行比较，由HPLC-UVD色谱
峰的保留时间和形状可初步验证馏分的接收是比较准确的。图2～图7为接收的6个HPLC
馏分在同样色谱条件下的重复进样的HPLC-UVD谱图。
比较图2～图7的6个馏分的HPLC-UVD谱图与PAHs标准溶液的HPLC-UVD谱图（图
1），可以看出，每个馏分中PAHs的HPLC-UVD谱图中的色谱峰与PAHs标准溶液的
HPLC-UVD谱图中对应的色谱峰的保留时间很接近，对应的峰形状亦相似，只有第6个馏
分中第11号峰消失，分析其原因，一种可能是由于在截取馏分时，在接收时间上出现误差，
导致第11号峰对应的PAHs没有被接收；另一种可能是由于11号峰响应值本身就较低，再经过馏分接收液对该PAHs浓度的进一步稀释，导致再次进样时响应值低于最小检测限而未出峰。说明在相同的HPLC-UVD色谱条件下，依据各标准PAHs的保留时间，即可分离制备出各种不同的多环芳烃单体或混合物。
图2 馏分1 中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.2 The chart of PAHs in the first fraction with HPLC-UVD
图3 馏分2中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.3 The chart of PAHs in the second fraction with HPLC-UVD
图4 馏分3 中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.4 The chart of PAHs in the third fraction with HPLC-UVD
图5 馏分4中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.5 The chart of PAHs in the fourth fraction with HPLC-UVD
图6 馏分5中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.6 The chart of PAHs in the fifth fraction with HPLC-UVD
图7 馏分6中PAHs的HPLC-UVD谱图
Fig.7 The chart of PAHs in the sixth fraction with HPLC-UVD
3.2.2 PAHs馏分的气相色谱/质谱检测
表3为17种PAHs的毛细管气相色谱-质谱-选择离子监测模式(GC-MS-SIM)检测参数。图8为17种PAHs的GC-MS-SIM谱图。
将所接收的6个HPLC馏分经过样品处理后（蒸干各馏分样品中的甲醇，用正己烷提取
溶液中的PAHs），按照同样的GC-MS-SIM条件，进行GC-MS-SIM检测，分别得到6个馏
分的GC-MS-SIM谱图，见图9～图14。
分别将17种PAHs的GC-MS-SIM谱图（图8）和6个馏分的GC-MS-SIM谱图（图9～
图14）进行比较，可以看出，馏分1中没有检测到任何PAHs，主要为溶剂峰（见图9）；馏
分2中主要含有萘、苊烯、苊、芴、菲和蒽(见图10-a和图10-b)；馏分3中只含有荧蒽、
芘（见图11）；馏分4中只含有屈和苯并（a）蒽(见图12)；馏分5中只含有苯并（b）荧蒽、
苯并（k）荧蒽和苯并（a）芘(见图13)；馏分6中只含有二苯并（a,h）蒽、茚并(1,2,3-cd)
芘和苯并（g,h,i）北(见图14)。
表3 PAHs的GC-MS-SIM检测参数
Tab.3 Some parameters of GC-MS-SIM
序号 PAHs名称英文名称保留时间min 特征离子
1 萘Naphthalene 4.067
128
152
2 苊烯Acenaphthylene 7.171
153
3 苊Acenaphthene 7.662
166
4 芴Fluorine 9.187
178
5 菲Phenanthrene 12.155
178
6 蒽Anthracene 12.318
7 咔唑Cabazole 12.944
167
202
8 荧蒽Fluoranthene 17.492
202
9 芘Pyrene 18.581
228
10 苯并（a）蒽benzo(a)anthracene 22.965
228
11 屈Chrysene 23.101
252
12 苯并（b）荧蒽benzo(b)fluoranthene 27.431
13 苯并（k）荧蒽benzo(k)fluoranthene 27.513
252
252
14 苯并（a）芘benzo(a)pyrene 28.493
276
15 茚并(1,2,3-cd)芘indeno(1,2,3-cd)pyrene 33.313
16 二苯并（a,h）蒽dibenzo(a,h)anthracene 33.585
278
276
17 苯并（g,h,i）北benzo(g,h,i)perylene 34.674
A bundance
T i m e-->
图8 17种PAHs的GC-MS-SIM谱图
Fig.8 The chromatogram of GC-MS-SIM of seventeen kinds of PAHs A bundance
T i m e-->
图9 馏分1的GC/MS-SIM谱图
Fig.9 The chromatogram of GC-MS-SIM of the first fraction
A bundance
T i m e-->
图10-a 馏分2中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.10-a The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the second fraction A bundance
T i m e-->
图10-b 馏分2中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.10-b The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the second fraction
A bundance
T i m e-->
图11 馏分3中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.11 The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the third fraction
A bundance
T i m e-->
图12 馏分4中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.12 The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the fourth fraction
A bundance
T i m e-->
图13 馏分5中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.13 The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the fifth fraction
A bundance
T i m e-->
图14 馏分6中PAHs的GC/MS-SIM谱图
Fig.14 The chromatogram of GC-MS-SIM of PAHs in the sixth fraction
3.3 精密度和最小制备浓度
3.3.1 精密度实验
精密度是指重复测定若干次其测定值的接近程度。在上述HPLC-UVD色谱条件下连续两次进样（紫外波长为254nm，PAHs的进样浓度10μg/mL，进样量为10μL），用当日2次的HPLC-UVD各色谱峰的保留时间和峰面积响应值的相对标准偏差表征其精密度。HPLC-UV D的PAHs峰保留时间的重复性实验结果见表4，HPLC-UVD的PAHs峰面积响应值的重复性实验结果见表5。
由表4可以看出，12个峰的HPLC-UVD保留时间的相对标准偏差非常小，其相对标准偏差都在1%以下。说明在该HPLC-UVD色谱条件下，PAHs峰保留时间的平行性较好。
由表5可以看出，12个HPLC-UVD峰面积响应值的相对标准偏差绝大多数小于2%，第一
个溶剂峰响应值的相对标准偏差较大（6.8%）。说明在该HPLC-UVD色谱条件下，PAHs的
HPLC-UVD峰响应值的重复性较好。
表4 HPLC-UVD的PAHs保留时间的精密度
Tab.4 The precision of the retain time of PAHs with HPLC-UVD
峰号平行样1保留时间（min）平行样2保留时间（min）相对标准偏差（%）
1 2.21 2.19 0.64
2 8.24 8.17 0.60
3 9.5
4 9.4
5 0.67
4 10.67 10.61 0.40
5 13.21 13.21 0.00
6 14.0
7 14.0
8 0.05
7 17.33 17.3 0.12
8 20.81 20.67 0.48
9 21.19 21.04 0.50
10 21.98 21.81 0.55
11 24.37 24.13 0.70
12 25.78 25.52 0.72
表5 PAHs的HPLC-UVD色谱峰响应值的精密度
Tab.5 The precision of the peak intensities of PAHs with HPLC-UVD
峰号平行样1的峰面积(μv·s) 平行样2的峰面积(μv·s) 相对标准偏差（%）
1 45620668 41418827 6.8
2 350018 358181 1.6
3 1105315 1120825 1.0
4 1779909 1806114 1.0
5 286584 288110 0.4
6 26422
7 264754 0.1
7 1355531 1366774 0.6
8 846635 820480 2.2
9 441997 483462 6.3
10 581912 591675 1.2
11 134933 138368 1.8
12 991081 1000938 0.7
3.3.2 PAHs 的最小检测限及其最小制备浓度
3.3.2.1 PAHs 的紫外检测器最小检测限及最小制备浓度
表6列出了图1标示的除第一个溶剂峰外的其余的11个峰（即不考虑保留时间在1.6min ～4.0min 的溶剂色谱峰）的紫外最小检测限，其计算公式为：）
（i i n
V C H H M ?=
min 。式中M min
为最低检出限，H n 为3倍噪音峰响应值（本方法反复测定后的3倍噪音峰响应值的平均值为321μV·S ），H 为标样峰响应值（平均值，n =2），C i 为PAHs 标准溶液的浓度，V i 为PAHs 标准溶液的进样体积。当日对同一PAHs 样品连续进样2次（样品浓度为10ug/mL ，进样皆为10μL ），求得每个峰响应值的平均值，计算每个峰的紫外最小检测限。由表2中各馏分对应的接收体积和PAHs 的最小检测限，即可计算出每个PAHs 的最小制备浓度（最小制备浓度=最小检测限/馏分接收体积），列于表6。
从表6可见，HPLC-UVD 对PAHs 的最小检测限在0.02ng ～0.23ng 之间，最小制备浓度在0.005ng/mL ～0.088ng/mL 之间。
表6 HPLC-UVD 对PAHs 的最小制备浓度
Tab.6 The minimum concentrations of preparation of PAHs with HPLC-UVD
峰号
平行样1的峰面积
响应值(μV·S)
平行样2的峰面积
响应值(μV·S) 平均峰面积响应
值(μV·S)
最小检测限
（ng ） 最小制备浓度
（ng/mL ） 2 350018 358181 354099.8 0.09 0.020 3 1105315 1120825 1113070 0.03 0.007 4 1779909 1806114 1793012 0.02 0.005 5 286584 288110 287347 0.11 0.046 6 264227 264754 264490.6 0.12 0.050 7 1355531 1366774 1361153 0.02 0.013 8 846635 820480 833557.5 0.04 0.017 9 441997 483462 462729.8 0.07 0.029 10 581912 591675 586793.9 0.05 0.021 11 134933 138368 136650.7 0.23 0.088 12 991081
1000938
996009.3
0.03
0.012
3.3.2.2 PAHs 的HPLC-FLD 最小检测限及其最小制备浓度
图15为16种PAHs 的HPLC-FLD 谱图（激发波长为254nm ，发射波长390nm ，PAHs 浓度皆为10ug/mL ，进样量为20μL ，柱温为18℃～20℃）。参照16种PAHs 的HPLC-UVD 谱图（图1）和毛细管GC/MS-SIM 检测馏分1的验证结果（图9），看以判断图15中的峰1和峰2为溶剂峰（二
者的保留时间在4min内，此处不考虑峰1和峰2）。仿照上述HPLC-UVD的最小检出限的计
算方法，计算出HPLC-FLD对于PAHs的最小检测限（3倍噪音峰响应值的均值为756μV·S）
在0.002ng～0.066ng之间，列于表8。再由个馏分对应的接收体积（见表7），计算出图16中
标示的HPLC-FLD色谱峰3～色谱峰10之间的8个PAHs的最小制备浓度列于表8。
可以看出，HPLC-FLD对于PAHs的最小检测限在0.02ng～0.066ng之间，最小制备浓度
在0.001ng/mL～0.026 ng/mL之间。
进一步地分析比较HPLC-UVD和HPLC-FLD对PAHs的检测结果，可知HPLC-FLD比
HPLC-UVD的灵敏度高，但HPLC-UVD对PAHs的响应属于通用性的检测器，尤其是在254nm
的波长下，几乎所有的PAHs都有响应值，而HPLC-FLD对所有PAHs的检测，却很难找到全
部的激发波长和发射波长。因此，HPLC-UVD-FLD为检测/分离制备PAHs提供了强有力的技
术支持。
图15 PAHs标准溶液的HPLC-FLD谱图
Fig.15 The chart of PAHs in the standard solution with HPLC-FLD
表7 HPLC-FLD 的PAHs馏分
Tab.7 The fractions of PAHs with HPLC-FLD
馏分馏分截取时间段（min）峰号馏分体积（mL）
馏分1 1.6～4.0 1、2 2.4
馏分2 7.0～11.4 3、4 4.4
馏分3 12.4～14.8 5 2.4 馏分4 16.6～18.2 6 1.6 馏分5 20.0～23.0 7、8 2.4
馏分6 24.0～26.6 9、10 2.6
表8 HPLC-FLD对PAHs的最小制备浓度
Tab.8 The minimum concentrations of preparation of PAHs with HPLC-FLD
峰平行样1的峰面平行样2的峰面平均峰面积最低检测限馏分接收最小制备浓度
号积响应值(μV·S)积响应值(μV·S)响应值(μV·S)（ng）体积（ng/mL）
3 4302069 4270606 4286337 0.018 4.
4 0.004
4 31835840 32339229 3208753
5 0.002 4.4 0.001
5 548750
6 5341920 5414713 0.014 2.4 0.006
6 1963102
7 1976026
8 19695647 0.004 1.6 0.003
7 9374920 9473213 9424067 0.008 2.4 0.003
8 7986924 7953060 7969992 0.009 2.4 0.004
9 1847851 1850399 1849125 0.041 2.6 0.016
10 1172685 1133807 1153246 0.066 2.6 0.026
4.结论
（1）使用HPLC-UVD和HPLC-FLD串联检测PAHs，有利于正确定位各PAHs的出峰位置，可减小HPLC馏分收集时的误差。
（2）运用优化后的色谱条件，对16种PAHs混合物进行分离及馏分分段截取，能得到单体PAHs或2～3个单体PAHs的混合物。
（3）HPLC-UVD对PAHs的最小制备浓度在0.005ng/mL～0.088ng/mL之间；HPLC-FLD对PAHs的最小制备浓度在0.001 ng/mL～0.026ng/mL之间。
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[13]冯惠华,周怀东,刘晓茹等.16种有机标准物质的研制[J].化学分析计量,2004,13(6):5-7.
[14]杨淑丽,赵志鸿,张玉龙.浅谈有机标准物质的制备和定值[J].化学分析计量,2000,9(1):37-39.
Preparation and Separation of PAHs by HPLC-UVD-FLD Xu Hengzhen, Xuan Qiujiang, Zhou Chuanguang, Yao Ziwei
National Marine Environmental Monitoring Center，Dalian，116023
Abstract
A technique for preparation and separation of 16 kinds of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in mix standard solution by high performance liquid chromatography with connection of ultraviolet detector and fluorescent detector in series (HPLC-UVD-FLD) and the determination of six separated fractions by gas chromatography coupled with mass spectrometry-selected ion monitoring (GC-MS-SIM) with capillary column had been established. It was showed that monomer of PAHs and mixtures of the monomer from two to three kinds could been obtained by collecting of the different fractions and separating of 16 kinds of PAHs in the mix standard solution by HPLC-UVD-FLD. The results indicated that their ranges of the minimum concentrations of preparation of PAHs with HPLC-UVD and with HPLC-FLD were from 0.005 ng/mL to 0.088 ng/mL and from 0.001 ng/mL to 0.026 ng/mL, respectively.
Keywords: high performance liquid chromatography, ultraviolet detector, fluorescent detector, in series, separation, preparation, polycyclic aromatic hydrocarbons.
高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含 量 一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。 二、实验原理 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。 三、实验内容 （一）实验仪器与材料 1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。 （二）实验内容 1、色谱操作条件的制定： 色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL 2、标准溶液配制 精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立 （1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤
荧光分析法检测原理及应用举例
1 荧光定义 某些化学物质从外界吸收并储存能量而进入激发态，当其从激发态回到基态时，过剩的能量以电磁辐射的形式放射出去即发光，称之为荧光。可产生荧光的分子或原子在接受能量后引起发光，供能一旦停止，荧光现象随之消失。 2 荧光分类 由化学反应引起的荧光称为化学荧光，由光激发引起的荧光称为光致荧光，课题主要研究光致荧光。按产生荧光的基本微粒不同，荧光可分为原子荧光、X 射线荧光和分子荧光，课题主要研究分子荧光。 3 光致荧光机理 某一波长的光照射在分子上，分子对此光有吸收作用，光能量被分子所吸收，分子具有的能量使分子的能级由最低的基态能级上升至较高的各个激发态的不同振动能级，称为跃迁。分子在各个激发态处于不稳定的状态，并随时在激发态的不同振动能级下降至基态，在下降过程中，分子产生发光现象，此过程为释放能量的过程，即为光致荧光的机理。光致荧光的过程按照时间顺序可分为以下几部分。 分子受激发过程 在波长为10~400nm的紫外区或390~780nm的可见光区，光具有较高的能量，当某一特征波长的光照射分子时，是的分子会吸收此特征波长的光能量，能量由光传递到分子上，此过程为分子受激发过程。分子中的电子会出现跃迁过程，在稳定的基态向不稳定的激发态跃迁。跃迁所需要的能量为跃迁前后两个能级的能量差，即为吸收光的能量。分子跃迁至不稳定的激发态中即为电子激发态分子。 在电子激发态中，存在多重态。多重态表示为2S+1。S为0或1，它表示电子在自转过程中，具有的角动量的代数和。S=0表示所有电子自旋的角动量代数和为0，即所有电子都是自旋配对的，那么2S+1=1，电子所处的激发态为单重态， 用S i 表示，由此可推出，S 即为基态的单重态，S 1 为第一跃迁能级激发态的单重 态，S 2 为第二跃迁能级激发态的单重态。S=1表示电子的自旋方向不能配对，说明电子在跃迁过程中自旋方向有变化，存在不配对的电子为2个，2S+1=3，电子 在激发态中位于第三振动能级，称为三重态，用T i 来表示，T 1 即为第一激发态中 的三重态，T 2 即为第二激发态中的三重态，以此类推。
通则0512高效液相色谱法
高效液相色谱法： 系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测， 由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。 色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。 超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、 高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 （1）色谱柱 反相色谱柱： 以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱： 用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶 和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。 （2）检测器 最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器， 其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器， 其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关； 蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用型检测器， 对所有物质均有响应，结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一 定范围内呈线性关系， 但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。 不同的检测器，对流动相的要求不同。 紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外－可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求； 采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。 蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 （3）流动相
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案 1、仪器与试药 1.1 仪器 1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国） 1.2 药品与试剂 16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。 脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。批号：2013、2013、2013. 乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。2、方法与结果 2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
时间 (min) 流速 (ml/min) % A % B 曲线 起始 1.0 100 0 * 0.5 1.0 98 2 6 15.0 1.0 93 7 6 19.0 1.0 90 10 6 32.0 1.0 65 35 6 33.0 1.0 65 35 6 34.0 1.0 0 100 6 37.0 1.0 0 100 6 38.0 1.0 100 0 6 42.0 1.0 100 0 6 2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表 所示的混合溶液。 名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）门冬氨酸 4.80 苏氨酸 1.20 异亮氨酸 1.10 丝氨酸 2.60 丙氨酸 2.50 亮氨酸 2.70 谷氨酸 6.20 脯氨酸 2.00 苯丙氨酸 1.20 甘氨酸 2.40 缬氨酸 1.60 色氨酸0.40 组氨酸0.90 甲硫氨酸 1.00 精氨酸 1.20 赖氨酸 3.45 取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。 衍生剂配制将水浴锅设置55℃，加热，待温度稳定, 取AccQFluor衍生剂2A，轻轻弹击,确保AccQFluor 衍生剂2A粉末全落在瓶底，吸取AccQFluor衍生稀释剂2B 1ml并放掉，清洗移液器管，再吸取AccQFluor 衍生稀释剂2B 1ml，加入AccQFluor衍生剂2A的瓶中，振荡10秒钟，在恒温水浴锅中溶解，保持10分钟。于干燥器中室温保存一周,于干燥器中4℃保存二周。 2.3测定方法分别取20ul对照品溶液和供试品溶液加入衍生专用管底部，加入60uLAccQFluor硼酸
LED荧光粉的分析测试方法分析
评估方案 一、荧光粉的分析测试方法 1、发射光谱和激发光谱的测定 把样粉装好后，放到样品室里，选定一个激发波长，作发射光谱扫描，读出发射光谱的发射主峰。给定发射光谱的发射主峰，作激发光谱扫描，读出激发光谱峰值波长。重新装样，测试3次，各次之间峰值波长的差值不超过±1nm，取算术平均值。 2、外量子效率的测定 把样粉装好后，放到样品室里，选定一个激发波长，激发荧光粉发光，利用光谱辐射分析仪测试得到荧光粉的发射光谱功率分布。计算荧光粉在该激发波长下的外量子效率。重新装样，测试3次，各次之间的相对差值不大于1%，取算术平均值。 3、相对亮度的测定 将试样和参比样品分别装满样品盘，用平面玻璃压平，使表面平整。用激发光源分别激发试样和参比样品。用光电探测器将试样和参比样品发出的光转换成光电流，并记录数值。试样和参比样品连续重复读数3次，各次之间相对差值不大于1%，取算术平均值。 4、色品坐标的测定 把试样装好放入样品室中。选定激发光源的发射波长，使其垂直激发样品室里的荧光粉样品。利用光谱辐射分析仪按一定的波长间隔（不大于5nm）测试得到荧光粉的发射光谱功率分布。按GB 3102.6-1993中“6.39 色品坐标”的公式求出荧光粉的色品坐标。 重复测试3次，各次之间x、y的差值均不超过±0.001，取算术平均值。 5、温度特性的测定 把试样装好放入样品室中，于室温下测试其激发、发射主峰波长，相对亮度及色品坐标等。每一试样按测定步骤平行测3次，各次之间激发、发射主峰波长的差值均不超过±1 nm，相对亮度的差值不超过±1%，色品坐标的差值不超过±0.001。启动加热装置，将被测的荧光粉试样加热并稳定在设定的温度值10min。稳定在预定的温度下，测定荧光粉试样的激发、发射主峰波长，相对亮度及色品坐标等。每一试样按测定步骤平行测3次，各次之间激发、发射主峰波长的差值均不超过±1nm，相对亮度的差值不超过±1%，色品坐标的差值不超过±0.001。冷却荧光粉试样至室温，测试其激发、发射主峰波长，相对亮度及色
荧光检测器技术规格
荧光检测器技术规格 一、采购内容 *2.1灵敏度：蒽（LOD）为10fg，Ex 250nm/Em 400nm Raman（水），单波长模式：Ex 350nm/Em397nm Raman（水），双波长模式：Ex 350nm/Em397nm和Ex 350nm/Em450nm 2.2光源：闪烁氙灯 2.3脉冲模式：单一模式296Hz; 经济模式74Hz 2.4激发光柵：凹型全息光柵, 200~1200nm波长范围, 狭缝宽度20nm 2.5发射光柵：凹型全息光柵, 200~1200nm波长范围, 狭缝宽度20nm 2.6实时信号：可同时输出4个激发或发射波长的实时检测信号 2.7时间编程参数：响应时间，PMT增益，基线归零，光谱参数 2.8光谱采集：激发和发射光谱，扫描速度28ms/数据点 2.9最快采样速率：74Hz 2.10步进：10nm 2.11波长重现性： 2.12波长准确性： 2.13流通池：8μL，最高耐压20bar（2MPa），石英材质 2.14离线荧光光谱采集流通池：8μL，选配1mL注射器 2.15 能与安捷伦（Agilent）的高效液相色谱（HPLC1290）联用，和安捷伦MassHunter软件 B06版本兼容 三、技术服务要求 3.1设备安装调试 在采购人指定的地点完成安装调试，并配合采购人进行测试验收。 3.2技术培训
卖方须到买方提供的现场免费安装调试，并进行操作试验，直到运转正常，为买方的使用操作人员提供免费的操作及维护培训。 3.3质保期 整机保修1年终身维修。保修期自验收签字之日起计算。 3.4维修响应时间 接到维修通知后，2小时内作出响应，24小时内到场排除故障。 注：该设备办理免税，如不能办理免税，所有费用由中标厂家承担。
高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯
高效液相色谱（HPLC ）法测定邻苯二甲酸酯 一、实验目的： 1. 了解高效液相色谱仪原理； 2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法； 3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。 二、实验原理： ① 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC ）是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R ）的计算公式为： R ＝ 2[t (R2)-t (R1)] /1.7*(W 1＋W 2) //式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间；t (R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1 及W 2为此相邻两峰的半峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5。 ② 本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE ，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。 但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。 如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC 分离检测。 三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul 微量注射器。 2、试剂 甲醇（色谱专用） ，高纯水，样品。 出峰次序 样品组成 1 邻苯二甲酸二甲酯（DMP ） 2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)
X荧光分析仪的检测器的种类及原理
X荧光分析仪的检测器的种类及原理 X射线检测器又称探测器，是种能量转换器，能对光子进行计数。在与光电子作用时，它可以储存每次入射光子的全部能量。光子流越弱，检测器工作的精度越高。目前常用的Ⅹ射线检测器有气体能量转化器、半导体能量转换器和闪烁计数器。 一、气体能量转化器 气体能量转化器也称充气型正比计数器（gas proportion counter ，PC），分为气流型和封闭型两种，气流型适用于轻元素的检测，而封闭型常用于高原子序数的元素，探测波长较长。以波长色散谱仪为例，气流型和封闭型充Xe气的正比计数管常常串联使用以提高Ti ~ Cu的K系线和La ~ W的L系线的灵敏度。气流型正比计数管通常用90%氩气和10%甲烷混合气体，其中甲烷起猝灭作用。对于原子序数很低的元素也可以用96%氦气和4%丁烷混合气体。封闭型正比计数管则可分别充氖、氪和氙气。 二、闪烁计数器 闪烁计数器适用于重元素的检测。闪烁计数器结构是由一片用tuo激活的且密封于Be窗口的dianhuana晶体和光电倍增管组成。当一入射X射线光子被Na晶体吸收时，便产生若千个数量的可见光子（闪烁），可见光子轰击光电倍增管，产生光电流。因此，每个入射X射线光子能在光电倍增管的输出端形成一个很大的脉冲电流。 闪烁计数器用于测量大于6kcV的X射线，对于低于6keV的X射线光子，由于光电倍增管极的噪声脉冲较大，对弱光子脉冲的检测会很困难。在闪烁计数器前附加一个气体正比计数器构成复合检测器，这时长波长的X射线用正比计数器检测，短波长的X射线则由闪烁计数器检测。闪烁计数器装在气体正比计数器旁边，缩短了它与晶体之间的距离达三倍，有效地提高了灵敏度， 三、半导体能量转换器 能量色散荧光光谱仪通常采用半导体能量转换器。硅中掺入少量的其他元素可形成晶体二极管。当探测器加上300~400V的电压时，无电流通过。当一个X射线光子射
高效液相色谱仪常用检测器的种类及分析
高效液相色谱仪常用检测器的种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供 检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。 1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD) 紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。 (1)紫外吸收检测器 紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽 (190nm～800nm)。它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。 (2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD) 也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。 单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。 2．荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测
高效液相色谱法测定有机化合物的含量
实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。 液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。 反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置 待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作 （1）样品与流动相的处理 配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。 水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。 （2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液 流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。 如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液 洗液一般为：50%的甲醇。
荧光粉通用测试方法
荧光粉通用测试方法 1 水溶性氯化物的测定 1.1仪器 架盘天平：感量为0.1g； 烧杯：100m1； 比色管：25m1或50m1。 1.2 试剂和溶液硫酸锌溶液：5%，称取5.0g分析纯硫酸锌，用去离子水稀释至100m1，摇匀。 硝酸：5N，按GB 603—77《化学试剂制剂及制品制备方法》配制。 硝酸银：0.1N，按GB 603—77配制。 氯化物标准液：见GB 602—77《化学试剂杂质标准液制备方法》。 1.3 测定 称取2.0g试样，放人烧杯中，加入20m1去离子水及l一2滴5%硫酸锌溶液，加热至沸，冷却至室温。然后用定性滤纸过滤，乳液盛于比色管中，并用少量热去离子水洗涤滤渣2或3次，洗液并人滤液中，用去离子水稀释至25ml。加0.5ml 5N硝酸及2ml 0.1N硝酸银，摇匀，放置10min，所呈浊度不应大于标准。 标准是按产品技术标准要求取一定数量的氯化钠标准液，加入1—2滴5%硫酸锌溶液，用去离子水稀释至25m1后，与试样同时同样处理。 2 机械杂质的测定 称取10g试样，在白色瓷板上摊开，用目测或放大镜观测。 3 密度的测定 3.1 定义 单位体积荧光粉的质量，称作密度。 3. 2 仪器分析天平：感量不小于0.00lg； 温度计：分度不大于0.5℃， 比重瓶：25m1或50ml。
3.3 测定步骤3.3.1 称量比重瓶。 3.3.2 将3-5g干燥的试样，放入比重瓶中，称量。 3.3.3 往瓶中注入约2/3体积的去离子水，排除气泡，再注满水，并擦干瓶的外表面，称量。然后测量瓶中的水温t 。 3.3.4 将比重瓶洗净，用相同温度的去离子水注满比重瓶，擦干瓶的外表面，称量。 3.4 计算 荧光粉密度按式(1)计算： 计算结果取至小数点后两位。 每个试样做两次，平行结果之差不应大于0.02，取算术平均值。 4 粒度分布的测定4.1 定义 荧光粉颗粒的数目或团粒的重量按粒径的分布，称作粒度分布。 4.2 测定方法 4.2.1 观察法 取少量试样，分散在载片上，用显微镜按垂直投影法依次测量单个颗粒的尺寸。每批试样的颗粒读数不应少于300粒。 4.2.2 沉降法 4.2.2.1 仪器 粒度分布测定仪： 要求测定范围从l—100μ，误差不大于3%。 4.2.2.2 测定 按仪器规定的要求将一定量的试样放人搅拌器内，按产品技术标准的要求加入不同的分散溶液，搅拌一定时间后，立即用仪器进行测定(具体操作按不同仪器测定方法的要求进行)，记录试样在不同粒径的累积重量曲线。 4.3 粒度分布的表示方法 4.3.1 百分比表示法一定粒径间隔内荧光粉的重量(或颗粒数)对总量之比，用百分数表示。 4.3.2 对数正态分布参数表示法
荧光检测器更换电池
2475荧光检测器更换CPU Board 电池 如果2475主板的电池没电，开机会报错，提示诸如PMT not calibrated 或者Units not normalized。与2487主板电池没电不同，2475电池没有电以后，仪器是无法正常工作的。所以要尽快更换之。 更换所需要的工具有：T20，小扳手，十字螺丝刀。事先购得的电池。 步骤如下： 1. 关闭检测器。并拔下电源线。 2. 用十字螺丝刀将检测器两侧的4个螺丝拧开，将检测器顶盖稍后推数厘米，然后上移，取下顶盖，置 于平稳之处。 3. 更换电池。此时有两种方式可选： i. 直接将手深入检测器内部，从板上将电池拔下，直接更换。此方法直接，但是对操作人员的技 术有较高要求。稍有不慎，可能会将新电池的插脚折断，或者用力过猛时导致碰到电路板的其 他地方。 ii. 将电路板(CPU board)拆下后更换电池，具体操作： l将检测器后部的I/O信号连接器拔下。 l用小扳手将固定IEEE接口的两个螺丝（黑色六角形）拧下。 l用T20 将固定电路板的两个螺丝拧松。注意，这两个螺丝是固定在机壳底部的，不必拆下，拧松即可。 l沿着电路板底部的螺丝固定槽方向后推，直至可以完全将电路板取出。此时注意电路板上的连线，如果觉得取出有困难，可以适当拔下几个插槽上的连线。可能需要拔下在电路板的靠 近检测器后部的风扇插头。 l观察电池的摆放方向。将电池取下，必要时可以借助其它工具，轻轻将其撬动后拔下。 l将新电池从外包装内取出，注意方向――错了将不能装上，并且可能将插脚折断――安装到电路板上，并用手将其压紧，防止接触不良。 l恢复拔下的连线，将电路板复位，拧紧固定螺丝，接上仪器后部的I/O信号连接器，并用小扳手将固定IEEE接口的两个螺丝装好拧紧。 4. 将机盖复位。插上电源线。 5. 开机。 6. 拆下色谱柱，用洁净、脱气过的水做流动相，以1ml/min的流速冲洗至少15min。 7. 按面板上的Diag 键，进入诊断菜单中的service模式，选择“calibrate PMT”。稍后在液晶屏上出 现PMT校正结果。相关系数应至少大于0.999，然后转到步骤8。如果未能达到，继续用水冲洗流动池。 8. 开机并冲洗约1小时以后，在Diag菜单中选择“Normalize Units”，注意此时继续保持流速。如 果归一化的结果无误，则出现以下画面，进入步骤9。
最新高效液相色谱法测定维生素C
高效液相色谱法测定维生素C的含量 【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。 【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量 1、引言 维生素 C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc 在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。同时，由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc 在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。 溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代 HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。 2、HPLC测定维生素C的含量 2.1、仪器试剂 2.1.1、仪器 高效液相色谱仪（Agilent1260），色谱柱：C18 柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm)；平头进样器。 2.1.2、试剂 乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素 C，磷酸二氢钾等均为分析纯，实验用水为超纯水。
HPLC检测器大全
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。 1.紫外可见吸收检测器（ultraviolet－visible detector，UVD） 紫外可见吸收检测器（UVD）是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。 （1）紫外吸收检测器 紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽（190nm～800nm）。它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。 局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。 （2）光电二极管阵列检测器（photodiode array detector，PDAD） 也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。 单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。 2．荧光检测器（fluorescence detector，FD） 荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外检测器宽。近年来，采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。 3. 示差折光检测器（differential refractive Index detector，RID） 示差折光检测器是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有响应，某些不能用选择性检测器检测的组分，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等，可用示差检测器检测。示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。只要样品组分与流动相的折光指数不同，就可被检测，二者相差愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。
高效液相色谱法的主要类型及其分离原理
高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 特点 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型： 1 ．液—液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式： 式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm--溶质在流动相中的浓度；Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。 a. 正相液—液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。 b. 反相液—液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。
高效液相色谱法测定水样中的苯酚
实验三高效液相色谱法测定水样中的苯酚 一、实验目的 1.1熟悉HPLC仪器的各个部件及熟悉操作方法； 1.2掌握应用高效液相色谱法对苯酚的定性、定量分析； 1.3掌握水样中苯酚的测定。 二、实验原理 HPLC原理 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。特点 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～ 350×105Pa。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。 高效液相色谱仪一般分为四个部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还可以根据一些特殊的要求配备一些附属装置，如梯度洗脱、自动进样及数据处理装置等，如图1所示。
荧光分析法检测原理及应用举例
1荧光定义 某些化学物质从外界吸收并储存能量而进入激发态，当其从激发态回到基态时，过剩的能量以电磁辐射的形式放射出去即发光，称之为荧光。可产生荧光的分子或原子在接受能量后引起发光，供能一旦停止，荧光现象随之消失。 2荧光分类 由化学反应引起的荧光称为化学荧光，由光激发引起的荧光称为光致荧光，课题主要研究光致荧光。按产生荧光的基本微粒不同，荧光可分为原子荧光、X 射线荧光和分子荧光，课题主要研究分子荧光。 3光致荧光机理 某一波长的光照射在分子上，分子对此光有吸收作用，光能量被分子所吸收，分子具有的能量使分子的能级由最低的基态能级上升至较高的各个激发态的不同振动能级，称为跃迁。分子在各个激发态处于不稳定的状态，并随时在激发态的不同振动能级下降至基态，在下降过程中，分子产生发光现象，此过程为释放能量的过程，即为光致荧光的机理。光致荧光的过程按照时间顺序可分为以下几部分。 3.1 分子受激发过程 在波长为10~400nm的紫外区或390~780nm的可见光区，光具有较高的能量，当某一特征波长的光照射分子时，是的分子会吸收此特征波长的光能量，能量由光传递到分子上，此过程为分子受激发过程。分子中的电子会出现跃迁过程，在稳定的基态向不稳定的激发态跃迁。跃迁所需要的能量为跃迁前后两个能级的能量差，即为吸收光的能量。分子跃迁至不稳定的激发态中即为电子激发态分子。 在电子激发态中，存在多重态。多重态表示为2S+1 o S为0或1,它表示电子在自转过程中，具有的角动量的代数和。S=0 表示所有电子自旋的角动量代数和为0,即所有电子都是自旋配对的，那么2S+仁1,电子所处的激发态为单重态，用S i 表示，由此可推出，S0 即为基态的单重态，S1 为第一跃迁能级激发态的单重态，S2为第二跃迁能级激发态的单重态。S=1表示电子的自旋方向不能配对，说明电子在跃迁过程中自旋方向有变化，存在不配对的电子为2个，2S+仁3,电子在激发态中位于第三振动能级，称为三重态，用T i 来表示，T1 即为第一激发 态中的三重态，T2即为第二激发态中的三重态，以此类推。 分子跃迁至各个激发态中，状态不稳定，随时会释放出能量，释放能量的类型有两种：一种是辐射跃迁，另一种是非辐射跃迁，释放能量会回到稳定的基态。
高效液相色谱法测定手册
高效液相色谱法测定手册 一目的：制定高效液相色谱法，规范高效液相色谱法的测定操作。 二适用范围：适用于高效液相色谱法的测定。 三责任者：品控部。 四正文 1 简述 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705—90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。