Trizol 试剂盒提取RNA 步骤整理
Trizol 试剂盒提取RNA 方法和步骤
◆提取RNA前物品准备
1、玻璃和金属器皿：180℃烘8h或250℃烘3h或用1%的DEPC水浸泡。（用超
纯水洗净→于1mol/mL NaOH溶液浸泡6h左右→用超纯水洗净，并用锡箔纸包好→置于烘箱中烘烤→-80摄氏度超低温保藏）。
2、塑料制品：放入可灭菌容器中→注入DEPC水溶液浸泡→室温下处理过夜→
倒掉EDPC水溶液→用锡箔纸包好并高压蒸气灭菌至少30分钟→80-90℃烘烤至干燥→置于干净处待用（通常EP管、枪头等塑料制品都开新的，并一次性使用）。
3、电泳槽：用去污剂洗干净→用水冲洗→用乙醇干燥→灌满3%的H2O2溶液→
室温放置10分钟→用0.1% DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。
4、移液器：一般情况下用DEPC配制的70%乙醇擦洗移液器的内部和外部，基
本达到要求。移液器金属退头器是RNA酶的一个重要来源，实验前最好取下它。
注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因此不能用来处理含有Tris一类的缓冲液，可存几瓶新的，未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
5、研究人员：在准备分离和分析RNA的材料和溶液时，以及在涉及RNA的一
切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“脏的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
◆提取总RNA
1、将准备好的样品置于处理过的研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，如此反复，
直至样品被磨为均匀白色粉末。
2、按50~100mg组织/mL Trizol 的量加入Trizol（注：Trizol一定要足量），继续
研磨2min左右。
3、室温静置至软化成红色溶液。
4、将溶液分装到新的EP管中，每管装1mL（此时可-80℃长期保存）。
5、于超净工作台中按200μL/mL Trizol 的量（既200μL）加入氯仿。
注：此处氯仿要用新开的，并且新开之后立即分装或配置，防止污染。
6、振荡混匀20秒，室温放置5min至分层（上层无色，下层红色）。
7、4℃，1200 rcf (注：不要用rpm)，离心15min。
8、取出，将上层水相小心地吸取至另一新的EP管中。
注：该步骤比较关键，千万不能吸到中间层，否则RNA将被污染。其次，如需同时提取DNA和蛋白质，则将下层酚相保存于4℃冰箱中即可。
9、向EP管中加入等体积（通常为500μL左右）的异丙醇，并轻轻上下颠倒混
匀，于室温放置5~10min充分反应。
注：异丙醇应为新开或专用，防污染；混匀时切不可剧烈振荡，轻轻上下颠倒数次即可。
10、4℃，1200 rcf，离心10min。
11、取出，弃上清，管底沉淀即为RNA。
12、按1mL 75%乙醇/mL Trizol 的量（既1mL）加入75%的乙醇，温和振荡离
心管，悬浮沉淀。
注：此处75%的乙醇的是用DEPC水配置的，既每3mL无水乙醇加入1mLDEPC水溶液，而DEPC水溶液是自己事先配置好的。
13、4℃，7600 rcf，离心5min，尽量弃上清。
14、快速离心，再弃上清（该步是为了将上清尽量弃尽）。
15、室温晾干5~10min，但RNA也不要过于干燥，否则很难溶解。
16、加入30μL RNA free H2O（该水是购买的），于冰水混合物中放置30min, 再
65℃金属浴5min，使RNA充分溶解，取出冰浴5min待检测。
17、测OD值，检测RNA浓度及纯度。
18、核酸电泳，180v，5min, 进一步检测RNA提取情况。
microRNA快速提取试剂盒
◆RNAmisi microRNA快速提取试剂盒◆目录号1105 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外
RNAmisi microRNA快速提取试剂盒 目录号：1105 目录编号包装单位 110501 50次 适用范围： 适用于快速提取各种细胞组织miRNA和其它各种小RNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次 Lysis/Binding buffer 4°C避光50 ml 70%乙醇室温9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Wash Solution 1 室温12 ml 第一次使用前加入28ml无水乙醇 Wash Solution 2/3 室温10 ml 第一次使用前加入42ml无水乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 吸附柱RA和收集管室温50套 microRNA吸附柱MA 和收集管 室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响使用效果。
储存事项 1.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后，可以在常温保存一个月， 如果要更长时间保存，请存放在4°C，但是使用前，应该先回复到室温。 2.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接 不吸晶体，吸上清使用就可以。 3.运输在常温下进行，不影响使用效果。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及 时盖紧盖子。 产品介绍： 近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除，最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
RNA试剂盒提取步骤
常规植物样品总RNA小量抽提 1. 植物样品的研磨。 ?收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。 注：研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。 ?快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。 注：在加入裂解液之前，不要让样品解冻。初次使用时，推荐先使用50mg，待取得理想结果后， 再酌情提高用量。 2. 立即加入500μlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60 秒 充分打散样品，室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。 注：使用前分装适量的Buffer RL，每1ml Buffer RL 加入20μl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。 若植物用量增加超过100mg，按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。 3. 室温下，14,000 x g 离心5 分钟。 4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 x g 离心1 分钟。 5. 弃去gDNA 过滤柱。加入0.5倍体积无水乙醇(~250μl)至滤液中。用移液枪吸打3-5次混匀。 6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。转移第5 步的混合液至RNA柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。 7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。(请另外订购DNase On Column Kit 进化 膜上DNase 消化)。 8. 倒弃滤液，把柱子装在收集管中。加入500μl Buffer RW1 至柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。加入600μl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g 离心30-60 秒。 注：在使用Buffer RW2 之前，必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。 10. 倒弃滤液，把柱子重新装回收集管中。加入600μl Buffer RW2(已用乙醇稀释)至柱 子中。10,000×g 离心30-60 秒。 11. 倒弃滤液，把柱子套回空的收集管。10,000 ×g 离心空柱2 分钟甩干柱子。 12. 将柱子转移至新的1.5ml 离心管。加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 13. (可选)再加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 注：HiPure RNA Column 最小的洗脱体积是30μl，小于30μl 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果RNA 产量超过30μg，推荐按第13 步进行第二次洗脱。 14. 弃去柱子，把RNA 保存于-80oC。
DNA提取试剂盒步骤--最新
组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型） 储存条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。 注意事项 1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。 操作步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1. 处理材料 用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织，体积约两个绿豆大小，放入DNAase-free的1.5ml EP中。向EP管中加入等体积的磁珠，以及加入200 μl缓冲液GA，振荡悬浮。置于组织破碎仪中运行5mins/次，共3次。每破碎一次，需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠，使其在下次破碎时更好的接触。可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数，目标是“碾磨均匀”，不能有较大体积的组织块（>2mm的组织块）。 如果需要去除RNA，需加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。 2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置1~3 h，直至组织溶解，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。将上清转移至新的EP管中。 3. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 4. 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。 6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 8. 重复操作步骤7。
总RNA提取试剂盒使用说明
总RNA提取试剂盒使用说明 货号：R1200 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤： 1.样品处理： a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm 离心2min，弃废液。 7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。 8.向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。 9.12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 10.将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得 到RNA。 注意事项： 1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
植物RNA提取步骤
植物RNA提取步骤（附图） 实验步骤 1. 在eppendorf管中加入700ul 提取液（配方见后面）和10 ul巯基乙醇（在有褐化现象的时候再加就行，否则推荐不加），65度预热（可选）。 2. 研钵液氮预冷，取适量材料加入过量液氮，迅速研磨成均匀的粉末（有滑腻感），加入到预热的eppendorf管中水浴6min（可选）.取出后加入氯仿、酚各350ul，振荡20min。 3. 4℃13000rpm 离心15min，同时在另外的eppendorf管加入氯仿、酚各350ul。 4. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10 min。 5. 4℃13000rpm 离心8min。同时在另外的eppendorf管加入氯仿700ul。 6. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10min。 7. 4℃13000rpm 离心8min。同时在另外的eppendorf管加入350ul的75％乙醇、350ul的8MLiCl。 8. 吸取上清，加入到上述离心管中，－20℃沉淀30min，13000rpm离心20min。 9. 弃上清，75％乙醇清洗两次。 溶于30ul 的水（DEPC水），直接进行测定浓度和电泳，CTAB结果如下(左侧四个）：0.155ug/ul 260/280=2.11 260/230=2.20 SDS结果如下（右侧四个） 0.102ug/ul 260/280=1.78 260/230=2.05 电泳结果如下： 加入DNase和buffer（promega）,37度消化30min,氯仿抽提两次,用1/10体积NaAc 和二倍体积无水乙醇沉淀15min,13000rpm离心10min.75%酒精洗两次, 溶于30ul 的水（DEPC水）中.
高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/4d8411859.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号：PL03 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存 50次 （PL0301） 100次 （PL0302） 200次 （PL0303） 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA（10mg/ml）-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管（2ml）室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14-16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－
提取细胞RNA的步骤
提取细胞RNA的步骤 提取细胞RNA的步骤： 1) 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。 2) 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12，000g，15min）。 3) 离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中。 4) 加入等体积异丙醇，0.4－0.5ml，混匀，15-30℃下孵育10－30min，离心（4℃，12，000g，10min）。其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。 5) 去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩涡振荡30s，离心（4℃，7，500g，5min）。 6) 小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。最好是用枪头吸取上清，尽量除去。 7) 加入20ul DEPC水溶解，分装5ul/管，-70℃冰箱保存。 8) 细胞总RNA的鉴定：0.9-1.2％琼脂糖电泳鉴定细胞总RNA，观察出现条带及各条带亮度。紫外分光光度计测定：分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的光密度值(OD),并计算RNA的含量和纯度。 1、实验目的 提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂 1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件， 2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂， 3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管, 4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇， 5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN。
细菌总RNA提取说明-生工
细菌总RNA快速抽提试剂盒 产品编号：SK8625/SK8626 包装规格：50次/100次 试剂盒组成 组分 SK8625，50次 SK8626，100次 Buffer Rlysis-B 50 ml 100 ml DEPC-treated ddH2O 30 ml 60 ml 操作手册1份1份 保存方法及注意事项 试剂盒于常温运输，4°C保存。有效期见包装。 产品介绍 本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种细菌总RNA快速抽提试剂盒。因为细菌RNA半衰期很短，RNA很容易发生降解。针对这一难题，本试剂盒采用溶菌酶与裂解液Buffer Rlysis-B共同作用，快速裂解样品，再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤，可获得浓度高、完整性好的RNA。适合于从各种来源的细菌（革兰氏阳性或阴性菌等）培养液中快速提取RNA。 使用本试剂盒，从1 ml对数生长期的细菌菌液中提取5~15 μg总RNA，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。 本产品具有以下特点： 1. 操作简单，全过程可在40分钟内完成。 2. 完整性好，纯化的RNA几乎不会发生降解。 3. 纯度高，OD260/280一般为2.0。 试剂准备 自备试剂：无水乙醇、75%乙醇、溶菌酶、氯仿等。 标准抽提步骤 4. 取1 ml对数生长期的细菌，8,000 rpm 4°C离心1 min，彻底弃掉培养基，加100 μl溶菌酶，振荡混匀。（G-菌使用的溶 菌酶浓度为400 μg/ml，室温酶解3~5分钟；G+菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml，室温酶解5~10分钟。） ?收集菌体后可用500 μl DEPC-treated ddH2O漂洗一次，10,000 rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。 5. 立即加入900 μl Buffer Rlysis-B震荡混匀，室温放置3 min。 6. 向裂解样品中加入200 μl 氯仿，充分混匀。12,000 rpm 4°C离心5 min，取上清。 7. 向上清液中加入1/3 体积无水乙醇，混匀，室温放置3 min，12,000 rpm 4°C离心5 min，小心倒掉上清。 ?离心后，在离心管底部，可能无肉眼可见的沉淀产生，属正常现象，请继续以下操作。 8. 用700 μl的75%乙醇（请用DEPC-treated ddH2O配制）洗涤沉淀，12,000 rpm 4°C离心3 min, 小心倒掉上清。 9. 重复步骤5一次。 10. 室温倒置10 min，尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入30-50 μl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀，立即使用或 -70°C长期保存。 ?如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5~10分钟至残留的乙
TransZol法rna提取试剂盒说明
TransZol法RNA提取步骤 准备试剂：氯仿、无水乙醇。 1.菌体处理 (1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中，用纯水冲洗菌体，12000rpm离心2min，仔细去除培养基上清。 (2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。 (3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。 (4)室温静置5min。 2. 每使用1ml TransZol TM Up，加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚)，剧烈震荡30s，室温孵育3min。 3. 10000×g 4℃离心15min。此时溶液分成三层，无色的水相（上层）、中间层，粉红色有机相（下层）。RNA分布在水相中，水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%（为了避免吸到中间层导致DNA污染，可以适当留下一部分水相）。 4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中，加入等体积的无水乙醇（此时可能会出现沉淀），轻轻颠倒混匀。 5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液（如果体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。 6. 加入500ul CB9，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。 7. 重复步骤6一次。 8. 加入500ul WB9（使用前请先检查是否加入无水乙醇），12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。 9. 重复步骤8一次。 10．12,000×g 室温离心2min，彻底去除残留的乙醇，在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。 11.将离心柱放入RNase-free Tube（试剂盒已配）中，加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央，室温静置1min。 12. 12,000×g 室温离心1min，洗脱RNA。 （可选步骤：为获得更多的RNA，建议重复步骤11和12进行二次洗脱）。
(完整版)总RNA提取的原理、步骤
总RNA提取的原理、步骤 1.原理及方法（异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法） TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。 2.简易步骤 细胞或组织，加入0.4ml TRIZOL试剂后匀浆 ↓ 室温静置5分钟 ↓ 加入1/5 TRIZOL试剂体积量的氯仿，剧烈震荡混匀 ↓ 室温静置5分钟，12000g 4℃离心l5分钟 ↓ 将上清液转移至新的离心管中，加入与上清液等体积的异丙醇，颠倒混匀 ↓ 室温静置10分钟，12000g 4℃离心l0分钟，弃上清 ↓ 向沉淀中加入1ml的75%乙醇清洗沉淀，12000g 4℃离心5分钟 ↓ 弃上清保留沉淀，干燥 ↓ 沉淀物溶解于11μl的DEPC处理水中 ↓ 注意：以上操作应在生物安全柜内完成，以防止污染。 注意事项 ①全程配戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。 ②使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。
③在TRIZOL中，RNA是隔离在RNA酶污染之外的。而对样品的后续操作会要求用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C的烘箱中烘烤4小时。塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。 ④用TRIZOL抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，所有的操作应该在15 -30°C的条件下完成，试剂亦在 15 -30°C的条件下。 ⑤75%乙醇(用DEPC处理过的水配制：将水加入无RNA酶的玻璃瓶中，加入DEPC至 0.01% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。) ⑥每50—100 mg组织加1ml的TRIZOL。匀浆化时组织样品容积不能超过TRIZOL容积的10%。 ⑦单层生长的细胞直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TRIZOL溶解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIZOL 量（每10 cm2加1 ml）。当TRIZOL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。 ⑧在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在–60—–70°C保存至少一个月。RNA沉淀（RNA 洗脱）溶于75%的乙醇在2—8°C至少可以保存一周，在–5—–20°C下至少可保存一年。 逆转录cDNA及注意事项 如果cDNA当天不使用，则要保存在-20℃或-70℃。 RNA逆转录成cDNA操作流程简图如下：（在冰盒上操作） 1.将提取的RNA溶解于11 μl DEPC-t净化水中，加入1ul引物，1ul模板RNA，1uldNTP 轻微震荡后离心3-5秒。 2.在PCR扩增仪上70℃ 5分钟。 3.冰上冷却1分钟，并短暂离心，向反应体系中加入5×reaction buffer 4μl，RibolockTM Ribonuclease inhibitor (20 u/μl) 1μl，10 mM dNTP mix 2μl。 4.轻微震荡后离心3-5秒，在PCR扩增仪上37℃ 5分钟。 5.向反应体系中加入RevertAidTM M-MuLV Reverse Transcriptase (200u/ul) 1μl，在PCR 扩增仪上42℃ 60分钟进行逆转录，70℃ 10分钟灭活逆转录酶。 6.收集反应产物，冰上冷却
OMEGArna提取试剂盒中文说明
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤 A ． 真核细胞和组织 自己需要的材料： β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。 材料的最佳量 想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug 的RNA 。TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。 细胞的步骤 1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用 枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。 a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。 b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器 里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。 c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK 裂解液，漩涡振荡混匀。 2． 匀浆化裂解产物 “裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。 a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。 b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除 RNase 。 3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min, 室温。将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。转到总RNA 分离中第4步。 组织的步骤： 1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg ），使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入 20ul 的β－巯基乙醇。 500ulTRK 裂解液最大裂解能力30mg ，难破碎的组织大于20mg 就用700ul 的TRK 裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg 。 组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮， 2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。 3． 转移上清至，Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收 集的流出液转移到新的EP 管中。 总RNA 分离： 4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul －350ul ）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振 荡20s 。 5． 样品转移到Hibind RNA Mini column 上，离心管的最大容量为750ul ，加完乙醇后可能 会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,1min 。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。 生物秀-专心做生物 w w w .b b i o o .c o m
RNA提取步骤
1. 组织样品：称取20mg-50mg 样品，使用液氮研磨或者匀浆器匀浆，加入RNA-Solv ? Reagent裂解 2. 室温静置2-3 分钟。 3. 加入200μl 氯仿(氯仿的使用量为1/5 RNA-Solv ? Reagent 的使用量），涡旋混匀15 秒，冰浴10 分钟。 4. 4℃，12,000×g 离心15min。 5. 小心转移不大于80%的水相层至新的离心管，加入1/3 倍体积的无水乙醇，涡旋混匀15 秒。 6. 将HiBind RNA 结合柱套在2ml 离心管中，转移不大于700μl 混合液至HiBind RNA 结合柱中。 室温下10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。 7. 重复步骤六，直至所有的混合液全部离心，结合到HiBind RNA 结合柱上。 8. 将HiBind RNA 结合柱套在新的2ml 离心管中，加300μl RNA Wash Buffer I 至HiBind RNA 结合柱中，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液； 9. （选做）DNase I 消化: a. 配制DNase I(Digestion Buffer, 73.5μl; RNase-Free DNase I,1.5μl),混匀。 b. 将上述75μl DNase I 溶液转移至HiBind RNA 结合柱膜的正中央，不要将消化液转移至柱子内 壁。 c. 室温静置15 分钟。 10. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入400μl RNA Wash Buffer I 洗涤，如做了DNase I 消化，需室温静置 5 分钟，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。 11. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入500μl RNA Wash Buffer II 洗涤，10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。 12. 重复步骤11 一次，＞10,000xg 离心空甩2min 干燥HiBind RNA 结合柱基质。 13. 将HiBind RNA 结合柱套在干净的1.5ml 离心管中，加30-50μl DEPC Water，室温静置2min。≥10,000xg 离心1min 洗脱RNA。
大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号：DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围： 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不 能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点： 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500μg），OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。 4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 （20μl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒说明书 货号：R1200 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年 RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年 RNase free吸附柱50个100个RT一年 RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤： 1.样品处理： a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。 e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)
Trizol法使用步骤 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。 二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。 RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理 尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品
的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1)液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。 （液氮既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。终止细胞内外一切生物反应，防止RNA酶的降解反应） 2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol。另外，组织体积不能超过Trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 五、从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。 六、操作步骤 1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。
EASYspin Plus 骨组织RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
EASYspin Plus Bone Tissue RNA Kit EASYspin Plus骨组织RNA快速提取试剂盒 目录号：RN54 适用范围： 适用于快速提取骨组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次(RN5401) 裂解液CLB 室温50 ml PLANTaid 室温 5 ml 裂解液RLT Plus 室温25 ml 去蛋白液RW1 室温40 ml 漂洗液RW 室温10 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 基因组DNA清除柱 和收集管室温 50套 RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项 1.所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm
的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2.需要自备乙醇，研钵或者其它合适的破碎骨组织装置。 3.样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造 成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 4.裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手 套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 5.关于DNA 的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 1)选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与 扩增反应。 2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后 的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。 4)在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购 买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： ?第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! ?取1ml裂解液CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入100μl PLANTaid，颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。 1.液氮研磨法: a. 骨钳夹碎骨组织后放入研钵（研钵在180度干烤2小时），加入液氮后反复研 磨成细粉，注意液氮蒸发后不断补加保存液氮一直存在。