Miscibility and Molecular Orientation of Carbazole in Mixed Langmuir and Langmuir--Blodgett
CHIN.PHYS.LETT.
Miscibility and Molecular Orientation of Carbazole in Mixed Langmuir and
Langmuir–Blodgett Films?
Md.N.Islam,D.Bhattacharjee,S.A.Hussain??
Department of Physics,Tripura University,Suryamaninagar-799130,Tripura,India
(Received10April2007)
We report the miscibility and molecular orientation of carbazole(CA)molecules in the mixed Langmuir and Langmuir–Blodgett(LB)?lms of CA in polymethyl methacrylate(PMMA)and stearic acid(SA)matrices.The π-A isotherm con?rms the formation of stable Langmuir?lms of CA mixed with either PMMA or SA at air–water interface.Characteristics of area per molecule versus molefraction and collapse pressure versus molefraction reveal complete demixing of CA and the matrix PMMA/SA molecules in the mixed?lms.Absorption spectroscopy certainly con?rms the fact that CA molecules have preferred orientation on the substrate of the LB?lms.
PACS:68.37.?d,68.18.?g,68.47.Pe
Mixed Langmuir–Blodgett(LB)?lms are of cur-rent interest because they can provide a way to make thin?lms for materials which individually do not form stable LB?lms.Also by changing di?erent LB pa-rameters and ratios of the components within the mixed?lms,the molecular organization,orientation and structure property of such?lms can be easily controlled.[1?4]
Carbazole(CA)groups are one of the most attrac-tive chromophores in photochemistry due to their ex-tensive industrial and commercial applications in the manufacture of organic photoconductors[5]and elec-troluminescent devices.[6?8]Various derivatives of CA in LB?lms have been studied by several authors.[9?17] However,the orientation of CA molecules in the re-stricted geometry of LB?lms has never been studied before.In this Letter,we report a unique observation of orientation of CA molecules in the mixed LB?lms.
Carbazole(99%pure)purchased from Aldrich Chemical Co.,USA was puri?ed under vacuum subli-mation followed by repeated re-crystallization before use.Stearic acid(SA)(purity>99%)purchased from Sigma Chemical Company and isotactic PMMA from polyscience were used as received.Spectroscopic grade chloroform(SRL,India)was used as solvent and its purity was also checked by?uorescence spectra before use.A Langmuir–Blodgett(LB)?lm deposi-tion instrument(Apex-2000C,India)was used for the study of isotherm characteristics and monolayer.Sur-face pressure at the air–water interface was monitored using a Wilhelmy plate attached to a microbalance, whose output was interfaced to a microcomputer,to control the movement of the barrier.Triple distilled deionized water was used as subphase and the tem-perature was maintained at24?C.Solutions of CA, PMMA,SA as well as CA-PMMA and CA-SA mix-
ture at di?erent molefractions were prepared in chlo-roform solvent and spread on the water surface.
Ten bi-layered LB?lms were prepared onto quartz substrates by transferring the Langmuir monolayer via Y-type deposition technique.[1]UV–vis absorption spectra were recorded using a UV–vis absorption spec-trophotometer(Lambda-25,Perkin
Elmer).
Fig.1.Isotherm characteristics of0.5M of CA mixed
with(a)PMMA and(b)SA matrix along with pure CA,
PMMA and SA isotherm.
Figure1shows surface pressure(π)vs area per molecule(A)isotherm of0.5M of CA mixed with PMMA and SA along with the pure CA,PMMA and h153@https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html, or tuphysic@sancharnet.in
c 2007Chinese Physical Society an
d IOP Publishing Ltd
No.7Md.N.Islam et al.2045
2046Md.N.Islam et al.Vol.24
No.7Md.N.Islam et al.2047
脐带干细胞综述
脐带间充质干细胞的研究进展 间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC S ）是来源于发育早期中胚层 的一类多能干细胞[1-5]，MSC S 由于它的自我更新和多项分化潜能，而具有巨大的 治疗价值 ,日益受到关注。MSC S 有以下特点：(1)多向分化潜能，在适当的诱导条件下可分化为肌细胞[2]、成骨细胞[3、4]、脂肪细胞、神经细胞[9]、肝细胞[6]、心肌细胞[10]和表皮细胞[11, 12]；(2)通过分泌可溶性因子和转分化促进创面愈合；(3) 免疫调控功能，骨髓源（bone marrow ）MSC S 表达MHC-I类分子，不表达MHC-II 类分子，不表达CD80、CD86、CD40等协同刺激分子，体外抑制混合淋巴细胞反应，体内诱导免疫耐受[11, 15]，在预防和治疗移植物抗宿主病、诱导器官移植免疫耐受等领域有较好的应用前景；(4)连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于组织工程和细胞替代治疗。1974年Friedenstein [16] 首先证明了骨髓中存在MSC S ，以后的研究证明MSC S 不仅存在于骨髓中，也存在 于其他一些组织与器官的间质中：如外周血[17]，脐血[5]，松质骨[1, 18]，脂肪组织[1]，滑膜[18]和脐带。在所有这些来源中，脐血(umbilical cord blood)和脐带(umbilical cord)是MSC S 最理想的来源，因为它们可以通过非侵入性手段容易获 得，并且病毒污染的风险低，还可冷冻保存后行自体移植。然而，脐血MSC的培养成功率不高[19, 23-24]，Shetty 的研究认为只有6%，而脐带MSC的培养成功率可 达100%[25]。另外从脐血中分离MSC S ，就浪费了其中的造血干/祖细胞(hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells,HSCs/HPCs) [26, 27]，因此，脐带MSC S (umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC S )就成 为重要来源。 一．概述 人脐带约40 g, 它的长度约60–65 cm, 足月脐带的平均直径约1.5 cm[28, 29]。脐带被覆着鳞状上皮，叫脐带上皮，是单层或复层结构，这层上皮由羊膜延续过来[30, 31]。脐带的内部是两根动脉和一根静脉，血管之间是粘液样的结缔组织，叫做沃顿胶质，充当血管外膜的功能。脐带中无毛细血管和淋巴系统。沃顿胶质的网状系统是糖蛋白微纤维和胶原纤维。沃顿胶质中最多的葡萄糖胺聚糖是透明质酸，它是包绕在成纤维样细胞和胶原纤维周围的并维持脐带形状的水合凝胶，使脐带免受挤压。沃顿胶质的基质细胞是成纤维样细胞[32]，这种中间丝蛋白表达于间充质来源的细胞如成纤维细胞的，而不表达于平滑肌细胞。共表达波形蛋白和索蛋白提示这些细胞本质上肌纤维母细胞。 脐带基质细胞也是一种具有多能干细胞特点的细胞，具有多项分化潜能，其 形态和生物学特点与骨髓源性MSC S 相似[5, 20, 21, 38, 46]，但脐带MSC S 更原始，是介 于成体干细胞和胚胎干细胞之间的一种干细胞，表达Oct-4, Sox-2和Nanog等多
脐带血造血干细胞库管理办法(试行)
脐带血造血干细胞库管理办法（试行） 第一章总则 第一条为合理利用我国脐带血造血干细胞资源，促进脐带血造血干细胞移植高新技术的发展，确保脐带血 造血干细胞应用的安全性和有效性，特制定本管理办法。 第二条脐带血造血干细胞库是指以人体造血干细胞移植为目的，具有采集、处理、保存和提供造血干细胞 的能力，并具有相当研究实力的特殊血站。 任何单位和个人不得以营利为目的进行脐带血采供活动。 第三条本办法所指脐带血为与孕妇和新生儿血容量和血循环无关的，由新生儿脐带扎断后的远端所采集的 胎盘血。 第四条对脐带血造血干细胞库实行全国统一规划，统一布局，统一标准，统一规范和统一管理制度。 第二章设置审批 第五条国务院卫生行政部门根据我国人口分布、卫生资源、临床造血干细胞移植需要等实际情况，制订我 国脐带血造血干细胞库设置的总体布局和发展规划。 第六条脐带血造血干细胞库的设置必须经国务院卫生行政部门批准。 第七条国务院卫生行政部门成立由有关方面专家组成的脐带血造血干细胞库专家委员会（以下简称专家委
员会），负责对脐带血造血干细胞库设置的申请、验收和考评提出论证意见。专家委员会负责制订脐带血 造血干细胞库建设、操作、运行等技术标准。 第八条脐带血造血干细胞库设置的申请者除符合国家规划和布局要求，具备设置一般血站基本条件之外， 还需具备下列条件： （一）具有基本的血液学研究基础和造血干细胞研究能力； （二）具有符合储存不低于1 万份脐带血的高清洁度的空间和冷冻设备的设计规划； （三）具有血细胞生物学、HLA 配型、相关病原体检测、遗传学和冷冻生物学、专供脐带血处理等符合GMP、 GLP 标准的实验室、资料保存室； （四）具有流式细胞仪、程控冷冻仪、PCR 仪和细胞冷冻及相关检测及计算机网络管理等仪器设备； （五）具有独立开展实验血液学、免疫学、造血细胞培养、检测、HLA 配型、病原体检测、冷冻生物学、 管理、质量控制和监测、仪器操作、资料保管和共享等方面的技术、管理和服务人员； （六）具有安全可靠的脐带血来源保证； （七）具备多渠道筹集建设资金运转经费的能力。 第九条设置脐带血造血干细胞库应向所在地省级卫生行政部门提交设置可行性研究报告，内容包括：
细胞线粒体毒性的检测(Molecular Devices)
如何借助于具有SpectraMax MinMax300 细胞成像系统的SpectraMax i3多功能微孔板检测平台进行细胞线粒体毒性的检测 简介 优势 Application Highlight 评价待选新药对细胞线粒体产生的毒性作用一直被认为是药物筛选过程中的关键步骤，目前可轻松通过不同颜色的荧光染料来标记细胞线粒体后来检测其活性的变化，整个检测过程中通常也需要结合细胞核复染色法，例如使用DAPI染料，这样就可以在图像中轻松识别出所有细胞。可以利用成像系统的一个荧光通道识别被染核的细胞，而细胞线粒体活性检测可以通过特定的线粒体染料标记后，来分析第二个荧光通道中每个标记后细胞的荧光信号强度值。然而，细胞核复染色过程会增加一系列额外的操作步骤，使得实验过程变得繁琐、拖延检测时间。来自于Molecule Devices公司的StainFree ?技术(无标记分析技术)可以解放研究人员，使其无需借助于繁琐的细胞核复染色法来识别细胞，可以直接利用SpectraMax ? MiniMax ? 300 细胞成像系统的透射光通道来直接识别出单个细胞。此篇应用文献重点介绍如何利用SpectraMax ? i3多功能微孔板检测平台的细胞成像功能来检测细胞线粒体毒性，缬氨霉素，一种离子型抗生素，可对PC12细胞线粒体功能造成损伤，使用MitoTracker Deep Red FM来标记线粒体后对整个过程进行检测，然后分别使用StainFree方法和细胞核荧光染料标记法对细胞计数，SoftMax Pro软件分析比较两组结果。SpectraMax MiniMax 300细胞成像系统和SoftMax Pro软件组合后，可以帮助研究人员获取图像信息和进行数据分析，准确、快速的给出潜在化合物对细胞线粒体毒性的浓度效应学曲线。 基于细胞检测试验方法的设置 使用含有2.5%胎牛血清、15%的马血清和1%青霉素/链霉素的F-12K培养基来培养PC12(大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞)细胞，在黑色底通的96孔板中每孔加入100ul配好的培养基，细胞的密度为10,000/孔，培养过夜。隔天，细胞孔内加入缬氨霉素，其浓度范围是1μM至1nM并按12浓度梯度关系进行稀释，然后将处理后的微孔板放入37度二氧化碳培养箱中培养24小时。完成孵育处理后，将混有化合物的培养基去除，随后加入含有100nM 的MitoTracker Deep Red FM(MTDR)染料的新鲜培养基。此试剂可以标记活细胞中的线粒体，可以利用MinMax 细胞成像系统的远红外荧光通道检测其在远红外波段下的荧光强度值。 细胞孵育30分钟后，去除混有染料的培养基，使用4%多聚甲醛固定细胞，固定后的细胞核使用EarlyTox Dead Green 染料来标记(Molecular Devices cat. #R8216)。虽然固定后是无需使用StainFree方法来分析细胞数目、形态的，但是此目的是比较这次实验中所有细胞在不同通道下获得数据的一致性。利用MinMax 细胞成像系统的透射光通道对细胞进行成像，获取细胞数目和分析其形态变化，利用其红色荧光通道检测其线粒体活性。同样利用系统的绿色荧光通道对染核细胞进行计数分析后与使用透射光通道下StainFree方法计数的细胞进行比较。 使用SoftMax Pro软件，设置两种不同的成像分析方法，第一种分析，单个细胞的识别是通过StainFree方法，可在透射光通道下识别单个细胞而无需利用细胞核荧光染料分子进行标记。为识别每个细胞，在软件中将测量的线粒体的红色荧光信号以一定形式参数输出。 ???StainFree技术无需利用细胞核复染方法就可以对细胞进行成像分析 利用SoftMax Pro软件所具有的细胞成像分析功能，可以检测出基于每一个细胞线粒体荧光信号强度值可更快的获得细胞线粒体毒性检测结果
The neutral theory of molecular evolution分子进化的中性理论
The neutral theory of molecular evolution Introduction I didn’t make a big deal of it in what we just went over,but in deriving the Jukes-Cantor equation I used the phrase“substitution rate”instead of the phrase“mutation rate.”As a preface to what is about to follow,let me explain the di?erence. ?Mutation rate refers to the rate at which changes are incorporated into a nucleotide sequence during the process of replication,i.e.,the probability that an allele di?ers from the copy of that in its parent from which it was derived.Mutation rate refers to the rate at which mutations arise. ?An allele substitution occurs when a newly arisen allele is incorporated into a popula-tion,e.g.,when a newly arisen allele becomes?xed in a population.Substitution rate refers to the rate at which allele substitutions occur. Mutation rates and substitution rates are obviously related related—substitutions can’t happen unless mutations occur,after all—,but it’s important to remember that they refer to di?erent processes. Early empirical observations By the early1960s amino acid sequences of hemoglobins and cytochrome c for many mam-mals had been determined.When the sequences were compared,investigators began to notice that the number of amino acid di?erences between di?erent pairs of mammals seemed to be roughly proportional to the time since they had diverged from one another,as inferred from the fossil record.Zuckerkandl and Pauling[8]proposed the molecular clock hypothesis to explain these results.Speci?cally,they proposed that there was a constant rate of amino acid substitution over time.Sarich and Wilson[6,7]used the molecular clock hypothesis to propose that humans and apes diverged approximately5million years ago.While that c 2001-2012Kent E.Holsinger
卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范(试行)
卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规 范(试行)》的通知 【法规类别】采供血机构和血液管理 【发文字号】卫办医政发[2009]189号 【失效依据】国家卫生计生委办公厅关于印发造血干细胞移植技术管理规范(2017年版)等15个“限制临床应用”医疗技术管理规范和质量控制指标的通知 【发布部门】卫生部(已撤销) 【发布日期】2009.11.13 【实施日期】2009.11.13 【时效性】失效 【效力级别】部门规范性文件 卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》的通知 （卫办医政发〔2009〕189号） 各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局： 为贯彻落实《医疗技术临床应用管理办法》，做好脐带血造血干细胞治疗技术审核和临床应用管理，保障医疗质量和医疗安全，我部组织制定了《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 二〇〇九年十一月十三日
脐带血造血干细胞 治疗技术管理规范（试行） 为规范脐带血造血干细胞治疗技术的临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为技术审核机构对医疗机构申请临床应用脐带血造血干细胞治疗技术进行技术审核的依据，是医疗机构及其医师开展脐带血造血干细胞治疗技术的最低要求。 本治疗技术管理规范适用于脐带血造血干细胞移植技术。 一、医疗机构基本要求 （一）开展脐带血造血干细胞治疗技术的医疗机构应当与其功能、任务相适应，有合法脐带血造血干细胞来源。 （二）三级综合医院、血液病医院或儿童医院，具有卫生行政部门核准登记的血液内科或儿科专业诊疗科目。 1.三级综合医院血液内科开展成人脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件： （1）近3年内独立开展脐带血造血干细胞和（或）同种异基因造血干细胞移植15例以上。 （2）有4张床位以上的百级层流病房，配备病人呼叫系统、心电监护仪、电动吸引器、供氧设施。 （3）开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应至少有1名具有副主任医师以上专业技术职务任职资格的儿科医师。 2.三级综合医院儿科开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件：
检测细胞活性或毒性(Molecular Devices)
Application Highlight 在SpectraMax MiniMax 300细胞成像系统上应用 EarlyTox细胞完整性试剂 盒检测细胞活性或毒性 图1. EarlyTox细胞完整性试剂盒检测原理 Live Red Dye Dead Green Dye Live Cell Dead Cell EarlyTox ?细胞完整性试剂盒由一系列易于识别活细胞和死细胞的优化试剂组成。可用于检测不同处理对细胞活性的影响，也可评估不同机制产生的细胞毒性，包括凋亡和坏死。该试剂盒设计工作于多种细胞类型，贴壁和悬浮均可。简单的操作流程和优异的试剂表现使其能应用到高通量扫描上。试剂盒中使用了两种结合DNA的荧光染料，一种为细胞膜可穿透的活细胞红色染料，一种为细胞膜不可穿透的死细胞绿色染料。红色染料可进入所有细胞的细胞核，细胞膜是否完整对其无影响，并可被激发产生亮红色荧光信号。绿色染料只能进入死细胞并产生亮绿色荧光，此类细胞的细胞膜已不完整(图1)。因此，活细胞和死细胞能通过成像系统拍摄到的荧光信号被轻易区分和识别到。 SpectraMax ? MiniMax ? 300细胞成像系统和SoftMax ? Pro软件为EarlyTox细胞完整性试剂盒的应用提供了成像和数据分析的整套硬件软件工具。使用仪器的双通道荧光成像功能以及软件的单细胞分析功能，可在5分钟内分析一块96孔板细胞活性。 方法 HeLa细胞以5000个/孔的密度接种到黑壁底透384孔板，培养24小时使其贴壁并生长，然后孔中加入具细胞毒性的药物。药物处理24小时候，按照试剂盒说明书加入染料标记后检测细胞活性。操作方法应尽量均一，以减少移除培养基、冲洗步骤造成的细胞损失和结果不准确性。可选的遮蔽试剂能用于减少培养基或待测药物产生的背景值。 特点 ? ? ? 信号强，缩短曝光时间，成像速度更快 适用于各种细胞类型，应用广泛拍照和分析一体完成，流程简化 通过试剂盒中两种不同特性的染料区分出活细胞和死细胞。红色染料进入所有细胞并将其细胞核标记为红色，另外绿色染料能进入具有不完整细胞膜的细胞中，并将其细胞核标记为绿色。只带红色荧光的细胞被成像和识别为活细胞，同时那些既发绿光又发红光的细胞被识别为死细胞。
卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知
卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知 发文机关：卫生部(已撤销) 发布日期： 2001.01.09 生效日期： 2001.02.01 时效性：现行有效 文号：卫医发(2001)10号 各省、自治区、直辖市卫生厅局： 为贯彻实施《脐带血造血干细胞库管理办法（试行）》，保证脐带血临床使用的安全、有效，我部制定了《脐带血造血干细胞库设计管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 附件：《脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行）》 二○○一年一月九日 附件： 脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行） 脐带血造血干细胞库的设置管理必须符合本规范的规定。 一、机构设置 （一）脐带血造血干细胞库（以下简称脐带血库）实行主任负责制。 （二）部门设置 脐带血库设置业务科室至少应涵盖以下功能：脐带血采运、处理、细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、脐带血档案资料及独立的质量管理部分。 二、人员要求
（一）脐带血库主任应具有医学高级职称。脐带血库可设副主任，应具有临床医学或生物学中、高级职称。 （二）各部门负责人员要求 1．负责脐带血采运的人员应具有医学中专以上学历，2年以上医护工作经验，经专业培训并考核合格者。 2．负责细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、质量保证的人员应具有医学或相关学科本科以上学历，4年以上专业工作经历，并具有丰富的相关专业技术经验和较高的业务指导水平。 3．负责档案资料的人员应具相关专业中专以上学历，具有计算机基础知识和一定的医学知识，熟悉脐带血库的生产全过程。 4．负责其它业务工作的人员应具有相关专业大学以上学历，熟悉相关业务，具有2年以上相关专业工作经验。 （三）各部门工作人员任职条件 1．脐带血采集人员为经过严格专业培训的护士或助产士职称以上卫生专业技术人员并经考核合格者。 2．脐带血处理技术人员为医学、生物学专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 3．脐带血冻存技术人员为大专以上学历、经培训并考核合格者。 4．脐带血库实验室技术人员为相关专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 三、建筑和设施 （一）脐带血库建筑选址应保证周围无污染源。 （二）脐带血库建筑设施应符合国家有关规定，总体结构与装修要符合抗震、消防、安全、合理、坚固的要求。 （三）脐带血库要布局合理，建筑面积应达到至少能够储存一万份脐带血的空间；并具有脐带血处理洁净室、深低温冻存室、组织配型室、细菌检测室、病毒检测室、造血干/祖细胞检测室、流式细胞仪室、档案资料室、收/发血室、消毒室等专业房。 （四）业务工作区域应与行政区域分开。
脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定
脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定 【摘要】目的分离培养脐带血间充质干细胞并检测其生物学特性。方法在无菌条件下用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞，接种含10%胎牛血清的DMEM培养基中。单个核细胞行贴壁培养后，进行细胞形态学观察，绘制细胞生长曲线，分析细胞周期，检测细胞表面抗原。结果采用Percoll(1.073 g/mL)分离的脐血间充质干细胞大小较为均匀，梭形或星形的成纤维细胞样细胞。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期，至第9天后数量减少;流式细胞检测表明50%～70%细胞为CD29和CD45阳性。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定，可作为组织工程的种子细胞。 【关键词】脐血;间充质干细胞;细胞周期;免疫细胞化学 Abstract: Objective Isolation and cultivation of mesenchymal stem cells (MSCs) in human umbilical cord in vitro, and determine their biological properties. Methods The mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation from human umbilical cord blood in sterile condition, and cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum. After the adherent mononuclear cells were obtained, the shape of cells were observed by microscope, then the cell growth curve, the cell cycle and the cell surface antigens were obtained by immunocytochemistry and flow cytometry methods. Results MSCs obtained by Percoll (1.073 g/mL) were similar in size, spindle-shaped or star-shaped fibroblasts-liked cells. Cell growth curve analysis indicated that MSCs were in the exponential stage after 5d and in the stationary stages after 9d. Flow cytometry analysis showed that the CD29 and CD44 positive cells were about 50%～70%. Conclusions The human umbilical cord derived mesenchymal stem cells were grown stably in vitro and can be used as the seed-cells in tissue engineering. Key words:human umbilical cord blood; mesenchymal stem cells; cell cycle; immunocytochemistry 间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)在一定条件下具有多向分化的潜能，是组织工程研究中重要的种子细胞来源。寻找来源丰富并不受伦理学制约的间充质干细胞成为近年来的研究热点[1]。脐血(umbilical cord blood, UCB)在胚胎娩出后，与胎盘一起存在的医疗废物。与骨髓相比，UCB来源更丰富，取材方便，具有肿瘤和微生物污染机会少等优点。有人认为脐血中也存在间充质干细胞(Umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells，UCB-MSCs)。如果从脐血中培养出MSCs，与胚胎干细胞相比，应用和研究则不受伦理的制约，蕴藏着巨大的临床应用价值[2,3]。本研究将探讨人UCB-MSCs体外培养的方法、细胞的生长曲线、增殖周期和细胞表面标志等方面，分析UCB-MSCs 作为间充质干细胞来源的可行性。
脐带血干细胞检测
脐带血干细胞检测 对每份脐血干细胞进行下列检测： ①母体血样做梅毒、HIV和CMV等病原体检测，这一检测使脐血干细胞适合于其它家庭成员应用。如任何一种病原体测试阳性，需重复测定。 ②每份脐血干细胞样本同时检测确定没有微生物污染。 ③细胞活性检测、有核细胞数、CD34+细胞数、集落形成试验等。CD34是分子量115KD 的糖蛋白分子，使用特定单克隆抗体（抗-CD34）确定，脐血祖细胞的大部分，包括体外培养产生造血集落的细胞都包含在表达CD34抗原的细胞群中。 ④HLA组织配型、ABO血型。 一、采血方式及其优点 再生缘生物科技公司采用最严谨的封闭式血袋收集法，避免在收集脐带血液时可能遭受微生物污染的发生，且以最少之操作步骤，收集最大量之脐带血液方式，在产房内即可完成。 二、脐带血处理与保存 脐带血收集于血袋，经专人运送至再生缘生物科技公司之无菌细胞分离实验室后，由专业的技术人员于完全无菌的环境下，依标准操作程序将血液进行分离，收集具有细胞核的细胞，其中含有丰富的血液干细胞，经加入冷冻保护剂和适当品管检测后，并进行以最适合
血液干细胞的冷冻降温程序方式，进行细胞冷冻程序，达到避免细胞受到冷冻过程之伤害。完成后，冷冻细胞立刻保存于摄氏零下196度的液态氮槽中。所有操作程序记录和细胞保存相关数据，均由计算机条形码系统追踪确认，完全符合国际脐带血库之标准操作程序和品管要求。 母亲血液之检测 为确保所操作和保存的脐带血液细胞，符合国际血液操作规范，并提供客户最大的保障，对于产妇血液必须同时进行一些病毒传染病的检测，以确保没有下列病毒，如艾滋病毒(HIV)、C型肝炎病毒(HCV)、人类T细胞淋巴病毒(HTLV)和梅毒(syphilis)，同时对于B型肝炎病毒(HBV)和巨细胞病毒(CMV)加以侦测和纪录，作为将来可能应用脐带血细胞时之必要参考数据并符合卫生医疗之要求。 脐带血细胞之品管 对于所保存之脐带血细胞均进行多项操作流程监控和品管检测，如微生物污染检测、血液细胞浓度、细胞存活率、细胞活性测定等，每一步骤均有详细之纪录，在操作方法和使用仪器方面均定期进行验证和校验，以符合国际医疗标准。 三、实验室、贮存处所介绍 再生缘生物科技公司拥有符合美国联邦标准(FED-STD-209E)和中华民国优良药品制造标准（一区、二区、三区）的生物安全实验室和无菌操作设备，在专业的技术人员依标准操作程序下进行血液分离和保存步骤，保障客户珍贵样品和权益。 分离后之细胞将依浓度分装入4-6个冷冻管，计算机降温冷冻完成后，即由食品工业发展研究所国家细胞库专业液态氮库房人员，将冷冻细胞分别存放于二个不同的脐带血细胞专属液态氮槽中保存，在安全机制上更有保障。液态氮库房拥有五吨的液态氮供应系统，每一液氮槽均有自动充填装置和异常警报系统，和每日值勤人员监控，确保冷冻细胞处于最佳的冷冻状态。 四、安全管制措施 脐带血液经快递送达无菌细胞分离实验室后，每一步骤均有专业技术人员操作和监督，并将所有分析数值详细填于具有条形码管制之分析表格和计算机数据表中，利用条形码和读码系统确认样品之专一性，避免人为失误，且便于追溯和数据品管。 在冷冻细胞保存上
分子原子原胞晶体显示软件Visual Molecular Dynamics 使用说明
简介： 这个教程为新用户介绍了VMD的用法。老用户也可以用本教程进一步熟悉程序的应用，以更好地利用VMD。本教程是针对VMD 1.8.3设计的，需要约3个小时来完成。 本教程新增的内容可用三个独立的单元讲解。第一个单元主要内容是分子图形表现方法 基础，还会介绍制作形象逼真的图像要了解的知识。另外的两个单元是针对高级用户，介 绍了VMD的脚本。尽管非技术性用户可以略去脚本的阅读，但是我们鼓励每个人都去试一 试着读一下，因为它会提供一些有力而易用的工具，这些工具是简单的图形用户界面所无法 提供的。 本教程以一种有趣的小蛋白质泛素的研究为例来说明VMD的应用。在本文中，一些资 料是在小框中出现的。这些小框中包括教程的补充内容，例如泛素扮演的生物学角色，使用VMD的一些提示和捷径等等。 如果你有对本教程的评论和问题，请发邮件至tutorial-l@https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,。邮件列表可以在https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,/Training/Tutorials/mailing list/tutorial-l/.中找到。 泛素本教程会用VMD来显示泛素。泛素是一个由76个氨基酸组成 的小蛋白质，在所有的真核生物中普遍存在。在所有真核生物蛋白 质中，泛素是最为保守的蛋白质之一（在昆虫，鱼，牛和人中，前 74个氨基酸是完全一样的）。它已被证明存在于细胞核、细胞质和 细胞表面。它首要的功能是介导蛋白质降解，在降解过程中，作为 细胞内蛋白水解酶识别的标志。 需要的程序： 以下是本教程中需要的程序 VMD: 可以从https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,/Research/vmd/下载（在所有平台上均可使用）。 绘图程序：要观看从VMD输出的图像，需要专门的程序。VMD有一个内置的绘图程序， 也可以应用外部程序。应用什么程序是由你的操作系统决定的。例如： – Unix/Linux: xmgrace, http://plasma-gate.weizmann.ac.il/Grace/ – Windows: Excel, https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,/en-us/FX010*********.aspx (需要购买) – Mac/Multiple Platforms: Mathematica, https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,/ (需要购买); gnuplot, https://www.360docs.net/doc/4e11473898.html,/(免费下载) 现在开始学习VMD 你可以在VMD-tutorial-files目录里找到本教程的文件。如图1所示的VMD-tutorial-files的 文件和目录
胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别
胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别 干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的原始的未分化的细胞，它可以向多种类型细胞分化，并具有相应的功能，可以用来修复和替代受到损伤，病变的组织和器官。目前主要的成体干细胞来源有胎盘来源、脐带来源、脐带血来源和骨髓来源的干细胞，本文主要介绍一下胎盘来源的干细胞和脐带血来源的干细胞的区别： 1、分离部位不同：胎盘干细胞是从胎盘组织中分离提取的干细胞，脐带血干细胞是从脐带里面血液中分离提取的干细胞。 2、种类不同：胎盘中的干细胞主要指的是间充质干细胞，而脐带血干细胞主要指的是造血干细胞。 3、分化能力不同：1）胎盘干细胞分化能力强，在特定的诱导条件下可以分化成血管干细胞、神经干细胞、肝干细胞等多种类型的干细胞，从而修复受损和病变的组织和器官2）脐带血干细胞可以在体内向红细胞、血小板等各种血液细胞分化。 4、数量不同：1）胎盘体积大，从中提取的干细胞数量丰富，并可以在体外培养扩增，扩增培养的子细胞数量达十亿个，可以供成人多次使用2）脐带血干细胞的数量要根据抽取的脐带血多少而定，不可以在体外培养扩增，一份脐带血干细胞可以供40kg以下患者一次使用。 5、治疗使用：1）胎盘干细胞目前在治疗脑瘫、糖尿病、肝硬化、心血管疾病等诸多疾病都显示了良好的效果2）脐带血干细胞可以治疗白血病，再生障碍性贫血等血液系统疾病。不过对于儿童白血病多以先天性为主，所以对于这种情况，自己的脐带血干细胞是不能使用的，需要配型使用捐献的脐血干细胞。 6、配型方面：二者自体使用都不需要配型，如果异体使用，胎盘干细胞由于免疫源性低的特点，所以配型成功率非常高，有血缘关系的亲属都可以使用；脐带血干细胞与父母配型有1/2的几率，与兄弟姐妹有1/4的几率。
脐带血造血干细胞库技术规范
脐带血造血干细胞库技术规范(试行) I 脐带血造血干细胞库(简称脐带血库)的质量控制 1 规章制度和操作规程 脐带血库必须制定脐带血采集、制备、检测、库存、选择和发放的规章制度、操作规程。 1.1 脐带血供者筛选标准和咨询。 1.2 脐带血采集和运送。 1.3 脐带血制备、冷冻、库存。 1.4 标签。 1.5 传染性疾病、人类组织相容性抗原（HLA）分型、造血干细胞和其他检测。 1.6 库存脐带血和脐带血检测标本的确认。 1.7 脐带血的发放。 1.8 脐带血库与移植机构之间的运输。 1.9 数据管理、申请查询、供者与受者配型、脐带血的选择。 1.10 移植随访资料的收集和分析。 1.11 人员培训和继续教育。 1.12 材料、试剂和设备。 1.13 不合格产品、操作错误和事故的报告。 1.14 卫生清洁。 1.15 保密制度。 2 规章制度和操作规程的执行 2.1有脐带血库主任的签字及开始实施的日期。 2.2各项规章制度和操作规程修改，须由脐带血库主任或文件起草人进行审查、签字并标明日期。 2.3 规章制度和操作规程应置于方便工作人员随时取用的位置。 2.4 存档的各种规程和标准记录应长期保留。 2.5 如认为本技术规范不适应当前发展，允许各脐带血库根据情况适当调整，但应报脐带血造血干细胞库专家委员会备案，备案期为30天。专家委员会如不同意备案的规章制度和操作规程，应在备案期间内通知备案单位停止执行。 3 质量控制 3.1 应有专门的质量控制规程，以便对脐带血库工作人员在常规操作中所使用的规程、试剂、设备和材料进行质量控制。 3.2 脐带血库内部的质量控制 3.2.1应由脐带血库主任或指定专人进行质量控制。 3.2.2脐带血库内部的质量控制包括质量评估，改进和修正的措施，错误和事故的处理。 3.2.2.1 脐带血库必须有不合格产品的记录和报告。 3.2.2.2 脐带血库主任应定期召开质量评价会议，对错误和事故进行评价；对重大事故应及时处理。 3.2.2.3 脐带血库主任必须签发对规程的修正。
第六章 分子动力学模拟 Molecular Dynamics
第六章 分子动力学模拟 Molecular Dynamics –MD 6.1引言 分子动力学模拟方法是在牛顿力学的理论框架下，根据体系内分子之间的相互作用势，获得每个原子随时间运动的轨迹，通过系综平均，可以得到感兴趣的与结构和动力学性质有关的物理量，如：平均原子坐标，平均能量、平均温度及原子运动的自相关函数等。这些物理量是通过对每个原子的运动轨迹，即微观量求平均而得到的宏观量，因此可以与实验观测量进行比较。 用计算机模拟方法在向空间采样方法有两种： （1） 随机采样 MC （2） 确定性方法MD 以上讲过的MC （Monte Carlo ）采样方法就是随机方法，与随机方法不同，确定性方法是按照动力学规律使系统在相空间运动。分子动力学模型就是一种确定性方法。它的基本出发点是从一个完全确定的物理模型出发，通过解牛顿运动方程而得到原子运动的轨迹。我们感兴趣的可测量的客观物理量可以通过相空间的采样求系综平均而得到。在多态历经假设成立的情况下，系综平均与长时间平均是相同的。 ? ∞ →∞==τ τ τ0 1 ))(),((lim dt t p t q A A A 系综 其中q,p 为t 的函数。A 表示系综平均，∞A 表示无穷长时间平均。因模拟时间总是有限的。对耦分子体系，当模拟时间大于分子的弛豫时间时，有限观测时间可以变成为无穷长的。 当弛豫模拟〉τt ，模拟t 可认为∞，因物理上的∞是不可能的。 6.2基本原理 1.动力学方程 基本动力学方程包括在经典力学（CM ）框架下的牛顿方程和在量子动力学（QM ）框架下的薛定谔方程。在常温下，经典的牛顿方程对研究生物分子体系的结构和动力学性质已经足够了，因为这时体系的量子效应并不十分重要。但是，对研究包含隧道效应的反应时间问题时，量子效应十分明显，这时就必须用QM 方程来模拟体系的量子动力学性质。
脐带血干细胞的基础与应用研究
生命科学 Chinese Bulletin of Life Sciences 第18卷 第4期2006年8月 Vol. 18, No. 4Aug., 2006 脐带血干细胞的基础与应用研究 顾东生, 刘 斌, 韩忠朝* （中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室，天津 300020） 摘 要：作为造血干/祖细胞(hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells, HSCs/HPCs)的另一 来源，脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs 的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时，脐带血中还存在多种非造血的干细胞和前体细胞，如间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)、内皮前体细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)和非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells, USSCs)等，这些细胞可能会在未来的细胞治疗和再生医学中发挥重要作用。本综述还讨论了脐带血的临床应用及HSCs/HPCs 的体外扩增、增加HSCs 归巢和再植能力等提高其临床应用能力的相关研究。关键词：脐带血；造血干细胞；移植 中图分类号：R322.2; R323.3; Q813 文献标识码：A The research and application of cord blood stem cells GU Dong-Sheng, LIU Bin, HAN Zhong-Chao* (State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Tianjin 300020, China) Abstract: Umbilical cord blood (UCB), as an alternative source of hematopoietic/progenitor stem cells (HSCs/HPCs), has been used clinically for a large number of malignant and non-malignant disorders. The quality and quantity of HSC and HPC may be the most important factors on which the capacity of UCB to perform clinical function depends. Other non-HSCs/HPCs, such as mesenchymal stem cells (MSCs), endothelial progenitor cells (EPCs) and unrestricted somatic stem cells (USSCs), also present in cord blood, which may play a future role in cell therapy and regenerative medicine. This review also covers the efforts to expand HSCs and HPCs ex vivo and recent studies on attempts to enhance the homing and engrafting capability of HSCs as means to enhance the clinical utility of UCB. Key words: umbilical cord blood; hematopoietic stem cells; transplantation 收稿日期：2006-04-25 基金项目：“863”计划(2003AA205060)；“973”项目子项(2001C B5101) 作者简介：顾东生(1981—)，男，硕士研究生；刘 斌(1973—)，男，硕士，助理研究员；韩忠朝(1953—)，男，博士，教授，博士生导师，*通讯作者。 文章编号 ：1004-0374(2006)04-0323-05 1988年，Broxmeyer 首先以实验证明脐带血(umbilical cord blood, UCB)中富含造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)。法国Gluckman 等[1]在巴黎圣路易斯医院为一位患有先天性再生不良性贫血的儿童实施了世界上首例脐带血移植术，并取得成功。从此，人们对于一直被当成废弃物丢掉 的胎盘和脐带血有了全新的评价和认识，至今，各国学者对脐带血的基础研究和临床应用进行了大量工作并取得很大成绩。本文对脐带血中存在的多种干/祖细胞的生物学特性及临床应用研究进行综述。1 脐带血干细胞 在现阶段，脐带血之所以能够应用于临床治疗
高通量筛选神经毒性(Molecular Devices)
高通量筛选神经毒性 优点 完全自动化的图像获取与分析 快速得到每个细胞的多表型参数 实时监测活细胞的毒性，可持续几分钟至几天 神经系统对许多毒性化合物以及自然环境中生成的有害物质非常敏感。在疾病发生过程中，神经毒性可以对大脑或者外周神经系统造成短暂或持续性的损伤，例如脊髓损伤，中风，创伤性脑损伤等。同时这种神经毒性也是造成很多神经退行性疾病诸如阿尔兹海默和帕金森的主要诱因。 诱导人多功能干细胞的高通量成像技术可以用于筛查候选药物或者环境污染物的神经营养，保护功能或者神经毒性大小。本篇说明会阐述如何结合iPSCs，分子仪器和软件自动对诱导多功能干细胞进行终点法及活细胞的神经毒性筛选。 以iPSC为基础的毒性筛查 诱导多功能干细胞技术对我们研究神经元毒性是十分有用的，iPSCs可以大批量的展示成熟神经元的功能。如果将这种独特的生物学相关的细胞类型和高通量成像分析结合在一起，我们就可以快速的筛选出在引起神经元毒性中起主导作用的化合物并大大减少临床前研究和相关动物实验的成本。此篇中用到的是Cellular Dynamics International公司完全分化的人神经细胞。 量化完整的神经细胞网 高通量分析是一种定量化的分析方法，其可以测量神经突触长度表征被测物的阳性或阴性作用。iPSC衍生的神经元细胞可以在3-5天内于96或者384孔板中形成神经元网络，然后用毒性化合物刺激48-72小时。神经网被?-tubulin标记后，可利用ImageXpress? Micro 宽敞成像系统获取图像。和抗抗体我们可以实现神经元网络的可视化。使用MetaXpress? 图像处理软件中Neurite Outgrowth模块和AcuityXpress? 高内涵数据分析软件对相关图像和实验数据进行分析。 无论是否进行了细胞核复染色，Neurite Outgrowth模块都能找到神经细胞胞体，并根据这些荧光标记的神经细胞轴突将之标定为阳性细胞。神经细胞网络具有几个重要的特征参数包括轴突数目，轴突长度，每个细胞或者区域的分支数。我们可以针对每个孔的相关数据和细胞表型进行计算和统计。