北京入境人员中HIV-1感染毒株的序列特征和亚型分析

〔实验研究与疾病监测〕北京入境人员中HIV-1感染毒株的

序列特征和亚型分析

邢　辉　王　钰　张绍福　邵一鸣　北京出入境检验检疫局(北京　100013)

朱　红　郭　辉　梁　浩　周　涵　中国疾病预防控制中心性病艾滋病中心

摘要　〔目的〕　了解北京入境人员中HI V-1型感染毒株的分子流行病学特征。〔方法〕　采集12份确认为

HI V-1型感染者的全血,分离单核细胞(PNMC),提取前病毒DNA,通过套式PCR扩增得到12份样品的结果,并对

其env C2-V3区进行序列测定和分析。〔结果〕　得到的样品分别属于HI V-1型的A、B、C亚型和重组AE型流行

株。〔结论〕　北京口岸入境人员中HI V-1型毒株的感染情况比较复杂。提示应加强对入境人员的HI V-1的检

测,防止其它亚型的HI V-1型毒株传入我国。

关键词　HI V-1;序列测定;亚型;系统树;入境人员

〔中图分类号〕R512.91　〔文献标识码〕B

近几年随着经济的发展,对外交流日趋频繁,出入境人员中的HI V感染者也在不断上升。HI V基因的高度变异性是HI V的主要特征。本研究共测定了12名HI V-1感染者全血中单核细胞前病毒env 基因C2-V3区基因序列变化,并与国内外资料进行比较,以掌握HI V-1型感染毒株的流行趋势及变异情况,这对于进一步加强艾滋病的预防和控制工作,以及补充完善分子流行病学资料都具有重要的意义。

1　材料与方法

1.1　样本来源　采集12份已确认的HI V-1型感染者全血。

1.2　测定方法

1.2.1　核酸提取　采用德国QI AGE N公司的QI2 AAMP BLOOD试剂盒,从每位感染者的抗凝全血中提取细胞DNA,-80℃冻存备用。

1.2.2　HI V-1env基因的扩增　用nested-PCR对HI V-1包含V3-V4片段的env基因686bp进行扩增。第1轮反应体系:总体积50μl,10×bu ffer5μl, dNTP浓度200μm ol/L,T aq酶0.5U,引物0.4μm ol/L,核酸样本10μl及相应的ddH2O。条件为:94℃1min, 55℃1min,72℃1min,3个循环;94℃15s,55℃45s,72℃15s,35个循环;72℃10min。取5μl PCR扩增产物,用E7/E8为内侧引物,按上述条件进行第2次PCR反应,扩增env基因C2-V3区。扩增引物见图1。

1.2.3　产物的回收和纯化　PCR产物经质量分数为1%的琼脂糖凝胶电泳,与Marker对照判定无误后,切下特异扩增条带,用QI AGE N公司的QI Aex试剂按说明提纯扩增的HI V-1型DNA片段,回收的DNA溶于10mm ol/L Tris HC L(pH8.7),经琼脂糖凝胶电泳与DNA标准品比较后估算核酸浓度。

1.2.4　序列测定　已E7为引物,提纯的PCR产物为模板,采用美国ABI公司的Dye T erminater循环测定反应试剂盒,在美国PE公司的9700型PCR仪上进行测序反应,反应条件:95℃10s,50℃5s,60℃4min,25个循环;反应产物提纯后,在ABI377型全自动测序仪上进行序列测定。

1.2.5　序列分析　测得的序列用威斯康星G CG公司软件包进行编辑、校正、排列比较和同源性等分析,用Pilup程序将样品序列与国际标准序列进行比较;用G rowtree程序做系统树(Phylogenetictree)分析。

2　结果

将所研究的12份样本和国际各亚型标准毒株

国家科技部基础数据库项目

的env 基因V3-V4区序列构建系统进化树,结果显示:

12份毒株分成A 、B 、C 、E 亚型4组,其中A 亚型3份;E 亚型3份;C 亚型1份;B 亚型5份。在A 亚型中,B J0201、B J0204、B J0212与A 亚型代表株(al.de.93.q23-17)聚集在一起,而远离其他亚型。在C 亚型中,B J0210与C 亚型标准株(c.in.95.95in21068)聚集在一起。在AE

中,B J0205,B J0207,B J0214与AE 重组标准株(01ae.th.90.cm240和01ae.cf.90.90cfl1697)最接近。在B 亚型中,B J0202、B J0203、B J0206、B J0208、B J0211与B 亚型标准株(https://www.360docs.net/doc/4615783569.html,.83.r f )

最接近。

图1　HI V -1env 基因扩增引物图 (下转265页)

利用各种媒体进行宣传教育活动,但出入境人员对艾滋病的传播途径,预防方法仍然缺乏足够认识,而且普遍认为自己避免不洁性行为,HI V/AI DS会远离自己;同时在人群中存在恐惧心理,从而造成一些的误解。笔者认为除媒体宣传之外,还需要通过其它渠道进行宣传教育,提高对艾滋病知识的知晓水平。

近年来,随着经济发展,国际交流越来越频繁,出入境人员逐年增加,尤其龙岩本地居民与境外人员联姻的现象越来越多,当事人短期出入境,一般不做HI V检测。本次检出的1例HI V感染者为涉外婚检人员,因此如何做好境外人员尤其涉外婚检人群HI V的监测,保护境内婚配,对防止境外传染源的传入与传播,防止HI V的母婴传播将起到重要作用。近年,婚前同居现象越来越多,婚前性行为加大了性病、艾滋病感染的可能性;吸毒人群范围也在不断扩大,吸毒方式由口服发展为静脉注射;出入境人员及献血员以青壮年居多,而他们又处于性活跃期,因此预防性接触传播,应大力开展正确的性知识宣传教育及推广安全套的使用,是防制艾滋病的重要手段,同时也应加强对吸毒人群、娱乐场所服务员的HI V 监测工作,努力防止在高危人群中发生HI V的流行。

参　考　文　献

1　严延生.福建省艾滋病流行态势以及影响因素分析.海峡预防医学杂志,2000,6(4)

2　廖寿恒.高危人群HIV血清流行病学监测.中国性病艾滋病防治, 1999,5(2)

〔收稿日期:2004-04-29〕

(上接262页)

3　讨论

本研究对12名HI V-1型感染者P BMC中HI V -1env基因C2-V3区及其邻近区序列进行分析后发现,这12份样品中存在A、B、C亚型和重组AE型株。A亚型3人中有2人曾去过非洲,另1名为非洲裔军人;AE重组3人中有2人曾去过香港和泰国,另1名为海员;1名南非人为C亚型;这与国内有关文献报道相一致1～3。B亚型的情况较为复杂,5人中有1名美国人,有3人曾分别去过香港,安哥拉和莫桑比克,还有1人流行病学资料不明。

HI V-1A亚型毒株最早发现于非洲,是在非洲广泛流行的1种HI V-1毒株2。序列分析结果表明:3例A亚型毒株与非洲VG275A亚型毒株很接近,流行病学资料显示,其中2名感染者到过非洲西部的几内亚比绍,其感染途径为境外感染,而无其它可能的途经,还有1名感染者是科特迪瓦军人。感染C亚型的1人是南非国籍,这与C亚型主要流行于非洲南部的报道是一致的。有3个样品为在泰国性传播人群中广泛流行的HI V-1型重组AE毒株。结合流行病学资料,有2人曾分别去过香港、泰国、阿联酋等国家,有境外性接触史。国内外研究表明,B亚型主要经输血或静脉吸毒等方式通过血液传播,先流行于欧美后流行于东南亚。5名感染者有1人去过香港,有性接触史;有2人分别去过安哥拉和莫桑比克,也有性接触史,是否还有其他感染途径的可能,有待于进一步研究;另1人及1名美国人,具体流行病学资料不清楚。

随着我国进一步对外开放,对外交往更加频繁,入境人员中HI V-1型感染者日益增多,呈现为多种HI V-1型病毒基因亚型混合存在的情况,出现A、B、C、AE重组亚型,感染情况复杂。这预示着今后对这一人群的艾滋病预防将会变得更加复杂和困难。因此应加强对出入境人员的HI V抗体检测以及时发现HI V感染者;同时,卫生主管部门也应及早制定相应的预防与控制艾滋病的政策,从而有效的预防HI V-1型毒株的蔓延,并防止其他亚型的毒株传入我国,造成更大的危害。

参　考　文　献

1　冯铁建,邵一鸣,李良成,等.深圳地区HIV-1流行毒株的env基因序列测定和亚型分析.中华传染病杂志,1998,16(4):203-206 2　苏玲,邢辉,羊海涛,等.中国首例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)A 亚型毒株的鉴定.病毒学报,1997,13(3):264-267

3　曾常红,苏玲,江立敏,等.广东省HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析.中华流行病学杂志,1998,19(5B):313-315.

〔收稿日期:2004-08-12〕