肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

作者：陶黎阳，黎渐英， TAO Li-yang， LI Jian-ying

作者单位：陶黎阳,TAO Li-yang(广东省广州医学院病理教研室,广东广州,510182)，黎渐英,LI Jian-ying(广东省中山大学附属第一医院肾内科,广东广州,510080)

刊名：

中国医药指南

英文刊名：GUIDE OF CHINA MEDICINE

年，卷(期)：2011,09(7)

被引用次数：1次

参考文献(8条)

1.Choi CH ABC transporters as multidrug resistance mechanisms and the development of chemosensitizers for their reversal[外文期刊] 2005

2.DeVita VT Jr;Chu E A history of cancer chemotherapy 2008(21)

3.Jemal A;Siegel R;Xu J Cancer statistics,2010[外文期刊] 2010(05)

4.叶翩;张淑玲;揭盛华人肝癌裸鼠移植模型的研究进展[期刊论文]-世界华人消化杂志 2006(36)

5.陈杰;白春学;钱桂生A549/CDDP多药耐药细胞系的建立[期刊论文]-中国癌症杂志 2003(02)

https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html,ge H An overview of cancer multidrug resistance:a still unsolved problem[外文期刊] 2008(20)

7.Parkin DM;Bray EFerlay J Global cancer statistics,2002[外文期刊] 2005(01)

8.Tao LY;Liang YJ;Wang F Cediranib(recentin,AZD2171)reverses ABCB 1-and ABCC1-mediated multidrug resistance by inhibition of their transport function[外文期刊] 2009(05)

本文读者也读过(2条)

1.张玲.王红仙.胡月霞.胡静.华贵杰.ZHANG Ling.WANG Hong-xian.HU Yue-xia.HU Jing.HUA Gui-jie急性高容量血液稀释在髋关节置换术患者中的临床应用研究[期刊论文]-中国医药指南2011,09(7)

2.杨志宏.翟宝进.邵泽勇.伍烽.王智彪HepG2/Adm裸鼠移植瘤的建立及多药耐药特性评价[期刊论文]-重庆医科大学学报2004,29(4)

引证文献(1条)

1.沙慧芳.孙强玲.杨晓华耐紫杉醇肺癌细胞BNX动物模型的建立[期刊论文]-第二军医大学学报 2011(12)

本文链接：https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html,/Periodical_zgyyzn201107001.aspx

脑肿瘤动物模型的研究

脑肿瘤动物模型的研究动物模型是研究肿瘤发病机制和检验各种治疗方法的有力武器，本文就脑肿瘤动物模型的历史发展和应用前景作一综述。脑肿瘤目前仍是严重威胁人类健康和生命的疾病，而肿瘤实验动物模型的建立为研究其发病机制、生物学特性和检测各种治疗方法提供了一种高模拟性工具。自上世纪以来，先后建立了化学物质诱发脑肿瘤模型、病毒诱发模型、同种以及异种移植模型，随着现代分子生物学技术的发展，转基因动物模型又将成为人们研究的热点。 1.早期脑肿瘤动物模型及其局限性 1．1 自发性脑肿瘤动物模型脑肿瘤在哺乳动物中的发病率不一，有报道狗为0.1-0.5%，SD大鼠（7803只）为0.44%，但另一组41000只SD大鼠中仅发现38例中枢神经系统肿瘤，在灵长类动物中更为罕见，曾解剖14000只恒河猴和1247只猕猴尸体，未发现一例脑肿瘤[1]。由于发病率低，加之自发瘤的隐匿性及荷瘤动物生存期短的特点，自发瘤模型难以用于临床。 1．2 化学物质诱发模型早期使用甲基胆蒽注入鼠脑实质内可成功诱发出脑肿瘤，其中大部分为胶质瘤和脑膜肉瘤。在20世纪70年代，开始使用一种合成的致癌物质N-亚硝基脲及其衍生物乙基亚硝基脲（ENU）等进行肿瘤诱发实验。Kostener[2]等将50㎎/㎏的ENU给受孕20天的大鼠一次性静脉注射后，子代中均出现了中枢神经系统肿瘤，但ENU对成年鼠诱发脑肿瘤率较低。亚硝基脲类物质诱发的脑肿瘤在部位、类型、诱导时间以及恶性程度等方面均有很大差异。 1．3病毒诱发模型由于发现病毒与脑肿瘤的发病存在一定的关系，一些学者试图使用病毒进行脑肿瘤诱发实验，核糖核酸病毒（Rous肉瘤病毒）和脱氧核糖核酸病毒（腺病毒）均可诱发脑肿瘤。Bigner[3]等把浓缩的Rous肉瘤病毒（0.01ml）注射到一种新生犬脑内，经一段潜伏期后全部发生胶质瘤或肉瘤，而且在动物体内并未发现子代病毒，这说明病毒的致瘤机理可能与其复制无关。中国生物治疗网https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html,杨教授特别指出，肺癌的早期症状也有人将AD12病毒直接注入到出生后24小时的鼠脑实质内，经过数月的潜伏期后就能发生脑肿瘤，其中大部分为髓母细胞瘤。Tabuchi[4] 则把感染Rous病毒的纤维母细胞接种到猴的右额叶内，73%发生了肿瘤，主要是肉瘤。病毒诱发的脑肿瘤可在同种动物中连续传代，经过克隆后可制成生物特性稳定的模型，但其致瘤周期不一，诱发瘤性质差别较大，而且病毒不宜保存，对人也有一定的伤害作用，从而限制了其应用。 2．脑肿瘤移植模型同种移植模型较多用于胶质瘤的研究。将诱发的鼠脑胶质瘤进行体外细胞培养，形成稳定的细胞系，如C6，9L，BT4A等，再将这些细胞植入同种大鼠脑内，可得到同种移植胶质瘤模型。脑肿瘤同种移植模型虽能提高肿瘤的模拟性和统一性，但动物脑瘤与人脑瘤相比，在遗传学、细胞动力学和生物学方面均存在显著的差异，因而人们将目光更多地投向脑肿瘤异种移植模型。由于免疫排斥反应的存在，早期多将肿瘤移植于动物免疫缺陷区，如豚鼠眼前房、仓鼠颊囊、兔角膜和鸡胚绒毛膜等，还有学者采用药物、X线照射等方法抑制动物免疫反应[5]。直到1968年由于免疫缺陷动物的发现，才真正开创了脑肿瘤异种移植动物模型的时代，这些动物包括T淋巴细胞功能缺陷的裸小鼠、裸大鼠，B淋巴细胞功能缺陷的CBA/N小鼠以及T、B淋巴细胞联合缺陷的Lasat小鼠、SCID小鼠等。目前对于脑肿瘤移植的方法还存在不同意见，主要包括：脑内移植、肾包膜下移植和皮下移植。脑内移植最接近肿瘤的人体生长环境，但其操作复杂，动物感染及死亡率高。近来有学者[6]采用立体定向技术将浓缩的肿瘤

2015年中国肺癌诊疗指南

2015 中国原发性肺癌诊疗规范内容：一、概述二、病理诊断评估三、分期四、治疗五、姑息治疗（一）前言原发性肺癌（以下简称肺癌）是我国最常见的恶性肿瘤之一。全国肿瘤登记中心2014年发布的数据显示，2010年，我国新发肺癌病例60.59万（男性41.63万，女性18.96万），居恶性肿瘤首位（男性首位，女性第2位），占恶性肿瘤新发病例的19.59%（男性23.03%，女性14.75%）。肺癌发病率为35.23/10万（男性49.27/10万，女性21.66/10万）。同期，我国肺癌死亡人数为48.66万（男性33.68万，女性16.62万），占恶性肿瘤死因的24.87%（男性26.85%，女性21.32%）。肺癌死亡率为27.93/10万（男性39.79/10万，女性16.62/10万）。在高危人群中开展肺癌筛查有益于早期发现早期肺癌，提高治愈率。低剂量 CT(low-dose computed tomography，LDCT)发现早期肺癌的敏感度是常规胸片的4-10 倍，可以早期检出早期周围型肺癌。国际早期肺癌行动计划数据显示，LDCT 年度筛查能发现85% 的I期周围型肺癌，术后10 年预期生存率达92%。美国全国肺癌筛查试验证明，LDCT 筛查可降低20%的肺癌死亡率，是目前最有效的肺癌筛查工具。我国目前在少数地区开展的癌症筛查与早诊早治试点技术指南中推荐采用LDCT 对高危人群进行肺癌筛查。

美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)指南中提出的肺癌筛查风险评估因素包括吸烟史（现在和既往）、氡暴露史、职业史、患癌史、肺癌家族史、疾病史（慢阻肺或肺结核）、烟雾接触史（被动吸烟暴露）。风险状态分3组：(1)高危组：年龄55-74 岁，吸烟史≥30包年，戒烟史<15 年（1 类）；或年龄≥50 岁，吸烟史≥20包年，另外具有被动吸烟除外的项危险因素（2B 类）。(2) 中危组：年龄≥50 岁，吸烟史或被动吸烟接触史≥20包年，无其他危险因素。(3)低危组：年龄<50 岁，吸烟史<20包年。NCCN 指南建议高危组进行肺癌筛查，不建议低危组和中危组进行筛查。为进一步规范我国肺癌的诊疗行为，提高医疗机构肺癌的诊疗水平，改善肺癌患者的预后，保障医疗质量和医疗安全，国家卫生和计划生育委员会医政医管局委托中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会，在原卫生部《原发性肺癌诊疗规范（2010 版）》的基础上进行了更新，制订了本规范。（二）临床表现 1．肺癌早期可无明显症状，当病情发展到一定程度时，常出现以下症状：(1) 刺激性干咳。(2) 痰中带血或血痰。(3) 胸痛。(4) 发热。(5) 气促。当呼吸道症状超过2 周，经对症治疗不能缓解，尤其是痰中带血、刺激性干咳，或原有的呼吸道症状加重，要高度警惕肺癌存在的可能性。 2．当肺癌侵及周围组织或转移时，可出现如下症状： (1) 肿瘤侵犯喉返神经出现声音嘶哑。 (2) 肿瘤侵犯上腔静脉，出现面、颈部水肿等上腔静脉梗阻综合征表现。 (3) 肿瘤侵犯胸膜引起胸膜腔积液，往往为血性；大量积液可以引起气促。 (4) 肿瘤侵犯胸膜及胸壁，可以引起持续剧烈的胸痛。

裸鼠胶质瘤模型

（1）丁香园总结：瘤子长不出无非两方面原因，老鼠或者细胞。关于裸鼠，楼上已有描述，接种部位和接种年龄。一般来说，左侧前肢靠近心脏，血供会比较丰富，容易生长新血管。虽然文献都报道在腋窝注射，但如果局部皮下组织致密，会相对容易形成浓聚的小包块，容易达到有效的细胞浓度。裸鼠周龄不要小于四周，否则动物可能不能耐受，过早死亡，也不可大于六周，否则免疫力会增强，不容易形成肿瘤。如果以上都不能成瘤，实验室之前又没有固定protocol，动物可以尝试NOD/SCID。细胞数量每个细胞株不同而有不同剂量，恶性程度高，有些胶质瘤，4次方就已经足够了，有些难长的，恐怕7次方都嫌不够。但一般达到2×10的7次方就不能再往上加，因为细胞悬液已经达到饱和状态，再往上增加细胞可能在注射时针管会对细胞有物理损伤。细胞悬液大概是一个注射点150微升左右。另外，还可以添加matrigel，理论上可以促进成瘤。裸鼠种植瘤需注意： 1、肿瘤细胞的状态 2、细胞的数量:每只注射 2X106-107 3、裸鼠的选择：5-8周龄 4、种植部位：血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。（2）具体操作解析： 1、能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过 1*107 2、接种时间，最好在1小时之内完成。但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1 小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。效果还是不错的 3、成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出来。

人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立

人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：／c(／)裸小鼠，鼠龄6～1 0周，体重l5～25 g，雄性。饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。方法：收集培养的823细胞(癌细胞在含10% 小牛血清的1640 培养液中，于2恒温孵育箱中培养，常规传代。)在细胞培养至对数期时，用1640制成约2×l07个／细胞悬液，取0．2(4x106个823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为l 3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约l ×l ×2的小块，加入适量的备用。以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的23大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。作鼠间传代(2只／代)。移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。 A具体操作： 1一般要求需在无菌条件下进行。可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。常用腋下部位皮下作为实体瘤接种部位；肌肉接种则用大腿肌肉；腹水型接种于腹腔。2瘤块的制备接种用的瘤块应选择接种后7－10d、肿瘤生长旺盛且无溃破而动物健康较好的瘤源动物，颈椎脱臼，固定于蜡板上，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤(消毒面应尽可能大一些)。切开皮肤、选择生长良好无坏死或液化的瘤组织。在无菌平皿内，剪成2－33的小块。平皿内放置少许消毒的生理盐水缓冲液或其它营养液，以保存瘤块。平皿应放置在冰块上。用无菌套管针抽吸或向套管针内塞进一小瘤块，接种于同种受体动物右前肢腋窝皮下(接种部位皮肤应先用碘酊、酒精消毒)。接种操作时间应尽可能的缩短，从一个瘤块所取的材料一般应在30内接种完。 3瘤细胞悬液的制备如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞悬液接种。具体方法为，在无菌操作下取瘤块，除去坏死组织，将数个瘤块混合，剪成小块，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水适量稀释成1∶3－1∶4的瘤细胞悬液。容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前应将细胞混匀。每个动物接种0.2。整个操作应在30内完成。停止给予受试物之次日(或停止给予受试物后1－5d)处死动物，先称体重，后解剖皮下瘤块，称重。如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。应当减少剂量重新试验。

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用王全凯1，杨全会2，郭静2，谢广云1，崔涛1，许荣焜2，许建宁1* 1. 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 100050 2. 中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005 摘要：目的建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物制剂疗效的观察。方法将人原发肝癌手术新鲜组织移植于BALB/c裸鼠皮下，建立人肝癌组织裸鼠移植瘤动物模型；于同体移植后第15 天连续ig给予长科制剂（CKBM），通过观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，测定瘤体体积和质量、抑瘤率以及进行组织病理学观察，初步评价CKBM的抗肿瘤疗效。结果人肝癌组织裸鼠移植瘤保持了人肝癌组织特性，并能通过同体移植传代；观察发现CKBM对人肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤率达45.71%，对癌细胞生长有一定的抑制作用。结论在成功建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型基础上，观察发现CKBM具有一定的抗肿瘤疗效。关键词：肝癌；裸鼠；移植瘤；动物模型；抑瘤率中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)03 - 0398 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.03.018 Establishment and application of implantation model of human hepatocellular carcinoma in nude mice WANG Quan-kai1, YANG Quan-hui2, GUO Jing2, XIE Guang-yun1, CUI Tao1, XU Rong-kun2, XU Jian-ning1 1. National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China 2. Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China Abstract:Objective The human hepatocellular carcinoma model was established by implantation in BALB/c nude mice. Its characteristics were certified in the model which was used for the observation of antitumor efficacy. Methods Human hepatocellular carcinoma were sc implanted to BALB/c nude mice for the establishment of the implantation model of the human hepatocellular carcinoma in BALB/c nude mice. The nude mice were exposed to the pharmaceuticals from CK Life Sciences Limited by ig on day 15 after the implantation to find out its healing efficacy through the animal reflecting, the occurring time, volume, weight of tumors, the rate of tumor inhibited, and pathological histology. Results The characteristics of human hepatocellular carcinoma could be kept with passaging by autograft. The tumor inhibiting rate of the pharmaceuticals was 45.71%, showing the certain inhibitory effect on growth of tumor cells. Conclusion A certain antitumor efficacy of the pharmaceuticals made by CK Life Sciences Limited is found out on the basis on the human hepatocellular carcinoma model in nude mice established successfully. Key words: hepatocellular carcinoma; nude mice; implanted tumor; animal model; tumor inhibitory rate 人类肝癌的基础和临床实验研究多数都借助于实验动物模型。目前，以人肝癌组织移植裸鼠建立的动物移植瘤模型是最接近人类肝癌的整体实验模型，是肝癌基础和临床实验研究理想的动物模型。人肝癌组织裸鼠移植瘤模型是指把人肝癌组织块接种于裸鼠皮下建立的实验动物模型，常用于筛选抗肿瘤药物和制剂、实验性治疗和抗肿瘤机制研究[1]。基于为肝癌实验和临床研究以及药物筛选提供体内实验系统的目的，本研究建立了人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物长科制剂（CKBM）疗效的观察。 1材料与方法 1.1实验动物 BALB/c（nu/nu）裸小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供）。饲养于中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学部收稿日期：2013-06-03 作者简介：王全凯（1977—），男，北京人，主管技师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132199 E-mail: kylewang@https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html, *通信作者许建宁，硕士生导师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132592 E-mail: jnx999@https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html,

人CHG_5胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立及其生物学特性分析

文章编号:100025404(2003)0420287204论著人CHG25胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立及其生物学特性分析徐承平,卞修武　(第三军医大学附属西南医院病理学研究所,重庆400038) 提　要:目的　建立人脑胶质瘤裸鼠脑内原位移植动物模型并探讨其生物学特性。方法　采用瘤细胞悬液接种法,将人脑CHG25胶质瘤细胞接种于裸鼠大脑实质内。分别于接种后8、14、19、24和30d处死动物并行病理检查、胶质纤维酸性蛋白免疫组化、染色体核型分析及透射电镜检查。结果　肿瘤移植成瘤率为100%,肿瘤生长稳定,肿瘤病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征和免疫表型。结论　本移植瘤模型能作为研究胶质瘤发生、生物学特性以及治疗研究的可靠动物模型。接种后14d左右是利用该模型进行实验的最佳时机。关键词:胶质瘤;动物模型;原位移植;裸鼠中图法分类号:R2332;R732352;R730.264 文献标识码:A Establishment of orthotopic implantation model of human CHG25glioma cell line in nude mice and analysis of its biological features X U Cheng2ping,BI AN X iu2wu(Institute of Pathology,S outhwest H ospital,Third Military Medical University,Chongqing400038,China) Abstract:Objective　T o establish an orthotopic im plantation m odel of human glioma in nude mice and investi2 gate its biological features.Methods　The human CHG25glioma cells were inoculated into brains of nude mice.The animals were sacrificed at day8,14,19,24and30after inoculation.The tum ors were examined with light micro2 scope,electron microscope,kary otype analysis and immunohistochemical stain for glial fibrillary acidic protein.Re2 sults　G liomas were formed in100%in nude mice,and the growth of tum ors was stable.The tum ors showed the m orphological of human glioma with the immunophenotype.Conclusion　The glioma m odel in nude mice is a reliable animal m odel for the study of the tum origenesis and biological characteristics and therapy.The14th day af2 ter inoculation might be suitable for experimental study. K ey w ords:glioma;animal m odel;orthotopic im plantation;nude mice 恶性胶质瘤是最常见的中枢神经系统肿瘤之一,其侵袭性强、发病率高、位置特殊、预后差,严重威胁着人类健康。建立一个可靠的胶质瘤异种移植瘤模型,是研究胶质瘤生物学特性和各种体内实验研究的基础。近年研究表明,肿瘤的原位移植(Orthotopic im2 plantation)动物模型是目前最为理想而可靠的肿瘤模型[1],但在脑部进行胶质瘤的原位移植瘤实验难度较大。为此,我们采用本室已建立的人脑恶性胶质瘤细胞系CHG25细胞接种于免疫缺陷动物裸鼠脑内,建立了一种人脑胶质瘤原位移植动物模型。 1　材料与方法 111　胶质瘤细胞来源及培养人脑间变性星形细胞瘤细胞系CHG25由本室建立[2],按本基金项目:国家自然科学基金资助项目(39970268) 作者简介:徐承平(1972-),男,重庆市涪陵人,硕士研究生,医师,主要从事肿瘤诱导分化治疗和血管生成方面的研究。电话:(023)68752246 通信作者:卞修武,E2mail:bianxiu wu@https://www.360docs.net/doc/5c4008272.html, 收稿日期:2002203212;修回日期:2002208209室常规方法培养,即用含10%小牛血清(河南郑州产品)的RP2 MI1640(Hyclone公司)完全培养基,另添加适量HEPES、双抗(100UΠml青霉素及100μgΠml链霉素)、3%谷氨酰胺,置37℃、5%C O2混合气体孵箱中培养,细胞换液时间为1～2d,每3～5d传代1次,传代前用0125%胰酶消化。 112　瘤细胞悬液的制备取对数生长期的单层培养CHG25细胞以0125%胰酶消化,收集细胞,离心去上清,用无菌生理盐水离心洗涤2次,将细胞悬浮于生理盐水中,台盼蓝染色细胞活力测定大于90%,并进行细胞记数,调整细胞浓度为2×106Πml,置于冰上备用。接种细胞量1×104Π只。 113　实验动物和接种方法使用本校实验动物中心引进的近交系雌性BA LBΠc nuΠnu 无胸腺裸小鼠14只,体重15～20g。鼠龄5～7周,饲养于SPF 级无菌净化室内。接种部位为裸鼠右侧大脑尾状核。整个接种过程在层流超净台中进行。裸鼠经1%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,俯卧位固定头颅,75%酒精消毒头顶部皮肤后,接种部位的确定参照文献[3]并作适当修改,即在裸鼠额部距颅中线右侧215mm,冠状缝前1mm处先用直径为1mm的牙科钻小心钻穿颅骨,然后用吸有5μl瘤细胞悬液的微量进样器经孔垂直进入脑实质中,进针深度为针尖距颅骨表面315mm,注射前 782 第25卷第4期2003年2月第　三　军　医　大　学　学　报 ACT A　AC ADE MI AE　ME DICI NAE　MI LIT ARIS　TERTI AE V ol.25,N o.4 Feb.2003

移植性肿瘤动物模型

移植性肿瘤动物模型目前临床所使用的抗肿瘤药物，大多数是通过动物移植性肿瘤实验法筛选而被发现的，移植性肿瘤动物模型是现代肿瘤研究中应用的最广最有价值的模型。其优点包括：（1）可使一群动物被同时接种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%；（2）对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效；（3）可在同种或同品系动物中连续移植，长期保留供试验用；（4）试验周期一般较短，试验条件易于控制等。但是这类肿瘤生长速度快、增殖比高、体积倍增时间短、肿瘤生命性质简单，与人类肿瘤具有明显不同；特别是与人类的致死性实体恶性肿瘤生命性质、与生长发生机制差异更大。存在着能够为现代肿瘤基础生命科学研究模拟人类恶性肿瘤综合生命性质的局限性、片面性。现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，白血病P388，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，白血病L5170Y，P1534淋巴白血病，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，Gardner淋巴肉瘤，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway 骨肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Ｗagner癌肉瘤，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分为敏感，中度敏感，低敏感和不敏感瘤株四类，同样敏感株对抗癌药的疗效水

裸鼠移植瘤方法建立

1.细胞准备： 1.1用PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得200μL 悬浮液里面含有1×107个细胞。总共需要细胞: 18（只）*200ul*1.2=4.32ml×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。 2.裸鼠准备： 2.1 3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞1×107/200μ L。每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2 )/2(D表示肿瘤的长径, d 表示肿瘤的短径)。（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G） 2.2 当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。对照组，TO901317组，DADS组。每天（每天给药？会不会太频繁？可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为25mg/kg/d，将粉末状的TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有TO901317 的蓖麻油200μL；对照组注射等体积的蓖麻油。连续注射两周。（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。 2.3每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。照相结束后，用剪刀将每个肿瘤分成 3 份，一份用来提取总RNA，一份用来提取组织内总蛋白质，这两份组织放到冻存管里，冻于液氮罐中，第三份用来做免疫组化，因此，该样本须置于4%的多聚甲醛（有毒，小心配置）固定剂中进行固定。备注： 1. 裸鼠饲养情况裸鼠有专门的SPF饲养动物房，买裸鼠前动物住的盒子、垫料、水和饲料要消毒。提前准备好，一般送裸鼠的单位会配备专门的SPF箱子，接到裸鼠后在专门裸鼠动物房进行交接。这个有个通风台也要提前消毒预备好。裸鼠到达目的饲养地后一般是饲养1-2周才开始试验，这也是国际上的通行规定。盒子要每2-3天消毒一次，根据裸鼠的排泄情况而定，所以要有替换的盒子。一般来说各个医院的动物房这些盒子比较紧缺，需要提前计算好。别到时候需要更换的时候找不到盒子。 2.动物接种数量根据你离心后细胞计数的数量。然后是用多少的液体稀释，一般是PBS。如果你培养后经过离心收集到的细胞总数是1*108次方。也就是10*107次方/5×106个= 20个。那你可以稀释到4ml，每次给予0.2ml，正好可以接种20只裸鼠。根据肿瘤细胞的类型和你所给予的干预情况，一般接种3周瘤子可以达到0.5-1.2cm左右。用左手揪起来一块皮，然后在揪起来的皮和身体之间那里注射，就是皮下而不是皮内了先把针头插进去，然后挑起来，看清楚不是体内而是皮下，也没有戳穿皮肤，然后再开始注射裸鼠的皮皱皱的，很容易揪起来一块，如果不麻醉就是用手拎着注射针头很容易戳到别的地方放在4度30~40分钟对细胞活力影响不大。用哪种液体悬浮细胞也都行，用无血清培养基效果可能会好一点点。应该是用PBS或HANKS液处理的,建议不要用无血清培养基或者其他培养液.里头成分复杂: 1,虽然裸鼠免疫缺陷,但是培养基成分复杂,有时还会有致敏原什么的,引起不必要的麻烦. 2,只要能够维持一定的渗透压,持续一个小时肯定是没有问题的,这点PBS或HANKS液就够了,而且影响因素少. 裸鼠对于实验环境又很敏感，特别是在给予药物处理之后。不知道大家给药的灌胃器或注射器是否消毒？药液是否无菌过滤？ 3、操作是否严格

小鼠移植瘤模型动态观察

小鼠移植瘤模型动态观察摘要：利用小鼠移植瘤模型动态观察血管生成拟态的时空变化。方法：采用B16黑色素瘤细胞和C57小鼠制作小鼠恶性黑色素移植瘤动物模型，成瘤后根据随机数字表每天随机抽取一只小鼠处死，共12d，获得肿瘤样本114例。常规HE染色和CD31、PAS染色。显微镜下分别计数肿瘤组织中央区和外周区的高倍视野（400）下血管生成拟态以及内皮依赖性血管。结果：在移植瘤形成的第1～8天，肿瘤组织内存在血管生成拟态。第9～12天该结构被内皮依赖性血管替代。肿瘤中央区、外周区血管生成拟态密度均呈现先递增后递减趋势；两个区域内的血管生成拟态密度比较：在第1～6天内肿瘤中央区高于外周区，在第7～8天肿瘤外周区高于中央区。内皮依赖性血管在肿瘤组织的中央区和外周区呈现递减趋势。两个区域内的内皮依赖性血管密度比较：在第1～7天肿瘤中央区内皮依赖性血管密度高于外周区，在第8～12d两个区域内的内皮依赖性血管密度无明显差别。血管生成拟态密度与肿瘤组织的坏死率之间呈密切负相关（r=-0.978,P<0.05）；内皮依赖性血管密度与肿瘤组织坏死率之间亦存在负相关（r=-0.230,P<0.05）。结论：黑色素瘤移植瘤中血管生成拟态是肿瘤细胞为适应环境而产生的一种暂时性的血液供应方式，与内皮依赖性血管并存于肿瘤组织内。随肿瘤生长变化而与内皮依赖性血管之间存在一定的时空变化规律。【关键词】血管生成拟态；肿瘤血管生成；恶性黑色素瘤血管生成拟态是一种与传统的肿瘤血管生成途径完全不同的、不

依赖内皮细胞的全新的肿瘤细胞的血液供应方式。1999年由美国lowas大学的Maniotis和Folberg等提出，他们对眼葡萄膜恶性黑色素瘤微循环研究时发现恶性黑色素瘤细胞通过自身变形和与细胞外基质相互作用，模拟血管壁结构形成可输送血液的管道，从而重塑肿瘤的微循环，并且与宿主血管相连通，使肿瘤获得血液供应，命名为血管生成拟态[1～6]。 2005年10月河北北方学院学报（医学版）第5期2005年10月张凡等：小鼠黑色素瘤移植瘤中血管生成拟态的时空变化第5期血管生成拟态概念的提出丰富了肿瘤血液供应理论，但目前对它与内皮依赖性血管之间的演变规律缺乏认识，本研究在前期研究的基础上首次提出了血管生成拟态的时空变化概念：即血管生成拟态是肿瘤血液供应的一种暂时性替代模式，在肿瘤发生发展的一定时期内存在，在肿瘤的不同区域存在不同的变化趋势，并利用小鼠移植瘤模型连续观察对我们的假说进行验证。 1 材料和方法 1.1 实验动物 C57小鼠购自北京军事医学科学院动物室，6～8周龄，共20只，雌雄各半，体重25～30g，编号后天津医科大学实验动物中心洁净实验室饲养。 1.2 实验方法先将黑色素瘤细胞株B16复苏，1640细胞培养基上培养6d，使细胞排满瓶底，0.2%胰酶消化成单细胞悬液，调整细胞密度达到1107/ml。75%酒精消毒小鼠鼠蹊部，每只小鼠鼠蹊部皮下注射0.2ml细胞悬液。每天观察动物生命体征及肿瘤细胞生长状况，10d

人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植双荧光模型的建立

人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植双荧光模型的建立于宁;李张昱;高鑫;郭剑锋;陈四方;朱宏伟;叶永造;谭国伟【期刊名称】《中华神经医学杂志》【年(卷),期】2016(015)006 【摘要】目的建立裸鼠的人脑胶质瘤细胞原位移植双色荧光模型. 方法体外培养转染有增强型红色荧光蛋白(ERFP)的人U87细胞(ERFP-U87),制成细胞悬液后接种于表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的裸小鼠脑部右侧尾状核区域,活体成像系统上动态观察肿瘤的生长,4周后HE染色移植瘤组织切片,荧光显微镜下观察肿瘤细胞与宿主基质细胞的关系. 结果表达EGFP的裸鼠在活体成像系统下可见全身组织器官均带有绿色荧光.接种ERFP-U87细胞后1周于移植部位可见红色荧光,且随时间的增加而增强.HE染色移植瘤组织显示肿瘤细胞较正常细胞深染,核大,可见分裂相及多核;荧光显微镜下观察可见肿瘤组织与宿主基质分别呈现红、绿色荧光,肿瘤组织与鼠脑组织界限不清,可见肿瘤发生血管,正常内皮细胞形成血管,部分管壁有肿瘤细胞包绕,肿瘤组织中呈现绿色荧光. 结论双色荧光胶质瘤动物模型可作为胶质瘤基础研究的理想模型.%Objective To establish the double fluorescent animal models of orthotopic transplantation of human glioma cells into nude mice and provide dynamic observation of occurrence and development of gliomas.Methods Human U87 cells were transfected with enhanced red fluorescent protein (ERFP) and then inoculated into the right caudate nucleus of nude mice with enhanced green fluorescent protein (EGFP).Dynamic observation of tumor growth was carried out by in vivo imaging.HE staining was performed on the

如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定教程文件

如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定实验肿瘤学的需要导致肿瘤动物模型的产生,借以研究人类肿瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。肿瘤动物模型可来自于动物的自发肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤。一前两者由于对动物品系要求严格、实验周期较长或缺少实验一致性而较少使用。移植性肿瘤动物模型具有特性明确、生长一致性好、实验周期短、瘤株分布广泛、可反复复制等优点,在肿瘤研究中占有重要地位。可移植性肿瘤,是把动物或人的肿瘤移植到同系、同种或异种动物,经传代后,组织类型和生长特性已趋稳定,并能在受体动物中继续传代,又称为可移植性肿瘤细胞。二可移植性肿瘤移植于同系或同种动物,称为同种移植,是国内外最常用的肿瘤动物模型复制方法之一。同种移植的优点是,可供选择使用的细胞系或细胞株多,许多细胞系在世界范围分布广泛,并且这些细胞的生物学特性已经比较明确,一般都有明确的背景资料,使一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速度一致、个体差异较小,成活率高,易于对照观察,这些都是便于科研成果相互比较和交流的有利因素三在接种过程中，应把握注射深度，否则易造成内脏损伤。接种后三天即开始观察有无肿瘤形成。本实验具有周期短、制作方便、成功率比较高、较好重复性和稳定性的明显优势，是一种较为理想的肿瘤实验动物模型，值得推广。肝癌肿瘤模型建立：抗肿瘤药物及制剂的药效学评价，可通过建立小鼠荷瘤数据模型，探索肿瘤生长的本质及其发生发展的规律，探究其抗肿瘤效果。方法：小鼠右腋下注射H22肿瘤细胞，注射部位发生癌变，小鼠肿瘤生长明显，切片结果证明实验成功，模型构建完成，使小鼠荷瘤，观察肿瘤生长，记录体重数据并建立动物模型。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1动物及分组：取20只昆明鼠随机分成A组（10只），B组（5只），C组对照组（5只），编号饲养。 1.1.2试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蜡等。 1.1.3仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，切片机等。 1.2实验方法 1.2.1模型建立：取H22肿瘤细胞，3000转离心分钟，再用无菌生理盐水洗涤肿瘤细胞3次，并做适当稀释，取40微升细胞悬液加入10微升0.4%台酚蓝染色并镜检计数，制成浓度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。 1.2.2：细胞计数：细胞计数液2%冰醋酸溶液。取50微升细胞悬液加入450微升的细胞计数液中计数。 1.3记录：接种完成后,逐日观察接种部位有无感染,肿瘤生长后有无自然消退,用游标卡尺，每周测量肿瘤长径a和短径b ,并计算平均直径,即r = (a + b) /2，每天称量小鼠体重和肿瘤并记录，绘制曲线。 1.4制备组织切片： a处死小鼠，将肿瘤组织切成1*1*0.4cm的小块。 b将切块的组织置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，过夜。

细胞系来源的异体移植肿瘤模型

Doses of inoculated ?uorescent cells R a d a n c e ×105 (p /s e c /c m 2/s r ) A C B D B12-Luc 皮下接种实体瘤模型B16-Luc 肿瘤转移模型 Bright B r i g h t L u c i f e r a s e V e n t r a l D o r s a l 12d 15d 18d 12d 15d 18d The days after tumor inoculation 12 1234567246810121415 18 V e n t r a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108) D o r s a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108) R e l a t i v e l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108) Days after operation NS 0.04U Bleomycin 52图1.?A–B.基于人结肠癌细胞系的颅内转移瘤模型。向裸鼠颈动脉注射不同接种量的，带有Luciferase 荧光标记的人结肠癌细胞，并选取多个时间点通过活体成像术检测Luciferase 在颅内的表达水平。C.基于 A549Luc 细胞的原位CDX 肿瘤模型。Balb/C 裸鼠提前经气管插管注射生理盐水（NS）或博来霉素（诱导肺纤维状损伤以促使外源细胞成瘤）处理，饲养两周后再经气管插管注射1×106个A549Luc 细胞，继续饲养一周后进行活体成像，检查肺部成瘤情况。D.基于荧光标记B16Luc 黑色素瘤细胞的皮下/转移瘤模型。细胞系来源的异体移植肿瘤模型细胞系来源的异体移植肿瘤模型(Cell●line-derived●xenograft,●CDX)是将体外培养的人源或鼠源的肿瘤细胞系移植到免疫缺陷小鼠体内而构建的肿瘤模型，其具有建模时间短，重复性好，成本低等特点。基于细胞系的肿瘤模型作为经典的体内实验方法，在肿瘤学研究和抗肿瘤药物研发过程中有着极大的需求。依托超过120种经过验证的具有完善遗传背景的细胞系（部分常用细胞系见表1），南模生物可根据客户的研发需要提供各类基于细胞系的肿瘤模型服务。我们可以构建各类皮下，原位或者转移瘤模型，并针对相应的模型提供高度定制化的体内药效学服务。可提供的服务类型： ●●肿瘤细胞系的基因修饰，包括过表达，基因敲除 ●●肿瘤细胞表型分析，包括增殖，凋亡，迁移，分化等 ● ●成瘤后的表型分析，包括肿瘤生长，转移，血管形成等 Case study 1：活体成像CDX 肿瘤模型带有Luciferase 荧光标记的肿瘤细胞系可用于构建各类皮下，原位或转移型的CDX 肿瘤模型。Luciferase 报告基因系统以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（firefly●luciferase）的活性，其优点是可以在小鼠存活的情况下反复测量，分析不同时间点的荧光变化，以此来示踪肿瘤细胞的增殖与转移。

小鼠肿瘤模型

肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22 等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。 1.关于构建瘤种可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3X 106/mouse,接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml 一次性注射的针头。 2.关于腹水传代观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9 天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个就可以了，不用离心，直接用P BS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7 天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。 3.关于接种进行试验这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的