豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用
多肽检测方法的建立
多肽检测方法的建立 在开始做多肽分析之前要首先了解多肽的构成——氨基酸的性质，两个酸性（Asp、Glu），三个碱性（Arg、His、Lys），以及他们的亲疏水，特别是Val、Ile、Leu三者基团多的肽链要格外注意，以下列出二十种氨基酸疏水比例：Arg（R）-4.5 、Lys（K）-3.9、Asn（N）-3.5 、Asp（D）-3.5 、Gln（Q）-3.5、Glu（E）-3.5、His（H）-3.2、Pro（P）-1.6、Tyr（Y）-1.3、Trp（W） -0.9 、Ser（S）-0.8 、Thr（T）-0.7 、Gly（G）-0.4、 Ala（A）1.8 、Met（M）1.9 、Cys（C）2.5、 Phe（F） 2.8 、Leu（L） 3.8 、Val（V）4.2、 Ile（I）4.5。 肽链构成的不同直接决定检测方法的建立，根据肽链我们再决定该肽的溶解方法以及检测时 所走的梯度。 首先谈液相检测样品的溶解，现在取样量用2mL透明进样瓶作参照，一次取样量碾成粉末后基本上薄薄的铺满瓶底1/3。对于一条肽链来说能否顺利纯化就看关键能不能将它很好的溶解。溶解的原则就是尽量用最少的有机试剂达到最优的溶解效果，这个不是为了节省有机试剂，而是确保样品不会因为有机试剂加多而提前出峰，进而影响判断。 对于一条普通的肽加水和乙腈就可以溶解了，样品溶解先碾成粉末，一般疏水基团数目不超过40%比例的但多于10%的，考虑在样品碾成粉末后先加两滴乙腈，稍微摇晃使样品在乙腈中分散均匀，再一滴一滴加高纯水，先加一滴如果发现水滴下去的位置样品能溶掉可再滴加直至0.5-0.7mL（适当体积）左右，滴加水过程中观察样品有没有析出，如果有就立即停止加水，补滴乙腈，再通过不断调整水与乙腈的比例再将样品体积控制在0.5-0.7mL左右，注意尽量用最少的有机试剂达到最优的溶解效果。体积控制好后观察样品中有没有没能溶解的颗粒或者絮状物，如果有就用超声，仍不能溶解则考虑过滤掉非溶物，样品即可用了。如果当时加完乙腈再滴加水时发现这样并不能让该肽溶解，则再多加乙腈试试，如果可溶就此放大体积至0.5-0.7mL，后面处理同上。若多加乙腈不溶这时就要比对肽链序列的酸碱性，一般碱性很好溶，难溶的多属酸性，如果酸性不强考虑用醋酸铵，如果不行就用稀释至10%的氨水，用碱性助溶试剂时一定要注意该肽链里有没有Cys基团，如果有尽量少用，可以考虑先用纯甲酸溶再用乙腈和水稀释至适当体积，如果纯甲酸不能溶那只好加碱性试剂，不过接下来检测要快，不能让样品不必要的时间滞留，避免样品变质。如果乙腈与水不能溶解，而且该肽不显酸碱性，则考虑加甲酸溶，如果这样不行则用纯甲酸先不加乙腈和水，能溶掉考虑再稀释，溶剂成份加的顺序是有讲究的，不能溶可以考虑用稀氨水，以上都不行的话就考虑放弃，如果非要检测结果的可用DMSO试试助溶。如果一开始疏水基团就大于40%就多加乙腈，谨慎加水，必要时甲酸、氨水；疏水基团少于10%的直接考虑水溶不加有机相。 样品溶解好就要做液相及质谱检测。检测时要分析清楚序列特点，含Trp的样品测前加少许酸（TFA、乙酸，0.1%-1%），再用吹风机对吹2-5min，瓶身发烫为止，Trp会结合不稳定的羧基，含不含该羧基的会各自形成一个峰，所以务必要处理；含至少两个连续的Pro，多个连续Ser的要把柱温箱加热到50度再测，这样的基团在常温下检测会形成假的肩峰，加热可避免；对于整条肽链都是两三个基团重复构成的有可能在C18柱上出峰很小，这时可以考虑用CN柱；对于那些用碱性溶剂溶解的样品尽量用CN柱在4g/L的醋酸铵流动相里测。至于检测时梯度的设定很大程度受经验的影响，不过做久了会发现其中的规律，拿250mm、5um 的C18柱举例，A：0.1%(V/V)TFA in H2O，B：0.1%TFA in 80%(V/V)ACN，以下涉及流动相比例未强调的均是体积比。十个氨基酸左右长度的肽，亲疏 水总和接近0时就用10-70%B in
风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查.docx
风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查 目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。 风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项 检查内容：包括风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项。 检查目的：60％～70％的女性都会感染上风疹病毒，一旦感染，特别是妊娠头三个月，会引起流产和胎儿畸形。 检查方法：静脉抽血 检查时间：孕前三个月 检查价格：全套240元左右，医院一般每星期做一次检测。（因各地物价差异，此价格仅供参考） 检查对象：所有育龄女性 检查内容分析： 不同病原体导致的宫内感染对胎儿造成的不良后果也不尽相同。 巨细胞病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害 单纯疱疹病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害。 风疹病毒感染对胎儿的危害：可导致先天性风疹综合症，主要表现为耳聋、白内障和先先性心脏病。 弓形虫感染对胎儿的危害：多侵害神经系统。 诊断方法 目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。 抗体IgM阴性的临床意义：没有活动性感染，但不排除潜在感染。
抗体IgG阳性的临床意义：表明孕妇既往有过这种病毒感染。或接种过疫苗。 抗体IgM阳性的临床意义：表明孕妇近期有这种病毒的活动性感染。 一般认为孕妇的活动性感染与胎儿宫内感染有关，约40%的活动性感染容易引起胎儿的宫内感染，所以，孕期检查主要检查孕妇血中的IgM抗体。我国妇女中巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒、人乳头瘤的感染率很高，既往感染率高达90%。据调查，孕妇中各种病原体的活动性感染约在3%~8%，但也有一些IgM 抗体不高的孕妇可能有潜在感染，也可能造成胎儿的宫内感染。 经过以上的分析，您可能清楚了，在化验单上，不是一看到有加号（+），就认为会造成胎儿的宫内感染。IgG抗体阳性，仅仅说明既往感染过这种病毒，或许对这种病毒有了免疫力了。IgG抗体阴性，说明孕妇也许没有感染过这种病原体，对其缺乏免疫力，应该接种疫苗，待产生免疫抗体后再怀孕。接种过一些病毒疫苗的妇女，会出现IgG抗体阳性。如接种过风疹疫苗的妇女会出现风疹病毒IgG抗体阳性。接种过乙肝疫苗的妇女会出现乙肝抗体阳性。所以，要分清哪个是保护性抗体，哪个是非保护性抗体。 相关链接：孕前检查，你清楚了吗？一般体检代孕前检查？莫儿戏！孕前检查，男人查什么？
ELISA检测方法有哪些
ELISA检测方法有哪些？ 酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图： 直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。 间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。 夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法： 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，
弓形虫 ELISA检测 说明书 人用文档
正文】 弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书 一、制品名称 通用名：弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 英文名：Diagnostic Kit for IgG Antibody to Toxoplasma(ELISA) 汉语拼音：Gongxingchong IgG Kangti Jiance Shijihe（Meilian Mianyifa） 二、原理与用途 体外诊断用试剂，本品系由纯化弓形虫抗原包被的微孔板和酶标记抗人IgG抗体及其他试剂配套组成，应用间接法原理检测人血清或血浆样品中的弓形虫IgG抗体。本品对样本原液的最低检出量为100IU/ml。 三、试剂盒的组成 1、包被弓形虫抗原的微孔板96孔 2、酶标记抗人IgG抗体6.5ml 3、阳性对照血清0.8ml 4、临界阳性对照血清0.8ml 5、阴性对照血清0.8ml 6、显色液A 6.5ml 7、显色液B 6.5ml 8、终止液6.5ml 9、浓缩洗涤液(10倍) 50ml 10、样品稀释液52ml×2 四、样本要求 本试验用血清或血浆进行检测，用量为10μl。勿使用染菌、脂血、溶血或黄疸样品。按照标准方法收集血清，室温保存样品不要超过8小时，若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2～10℃，如保存超过1周则保存在－20℃。 五、操作程序 1、试剂盒在室温平衡20～30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水10倍稀释。 2、样品1:100稀释：将样品稀释液1ml加入一洁净小管内，加10ml待检样品，充分混匀。 3、将板条固定于板架上，剩余的板条用不干胶密封并放入密封袋中保存。每孔加入稀释后样品100ml，每个样品至少做2孔。阳性对照、阴性对照各加2孔，临界对照血清加3孔，100ml/孔。另留一孔不加任何液体为空白对照。置37℃30分钟。 4、甩净孔中液体，洗板3次，每次停留1分钟后甩净拍干，除空白对照外每孔加酶标记物50ml（1滴），置37℃30分钟。 5、甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔滴加显色液A、B各50ml（1滴），置37℃避光10分钟，每孔立即加入终止液50ml（1滴），混匀后用酶标仪450nm读数判定结果。 六、质量控制 以空白孔调零，450nm波长测定A值。阳性对照A值平均值≥0.50，阴性对照A值平均值≤0.10，临界对照A值平均值介于0.12～0.35，证明实验成立。 七、结果判定 样品A值≥临界对照A值平均值判为阳性，样品A值＜临界对照A值平均值则判为阴性。 八、注意事项 1、不同试剂组分不得混用； 2、试剂盒应按含有传染性材料对待； 3、凡是染菌、严重溶血、黄疸或高血脂的待检样品可能引起错误结果，应重新采样复试或
快灵生物弓形虫抗体检测卡说明书
快灵生物弓形虫抗体快速检测试纸卡(TOXO Ab) 产品用途： 快灵生物犬猫弓形虫抗体快速检测试纸卡可以帮助兽医及宠物主人在10分钟内准确地鉴别诊断犬、猫是否产生弓形虫抗体。 检测样品：血清 包装规格：10条/盒，独立包装 适用情况：宠物医院，宠物饲养场，动物卫生监督部门，养宠家庭 精密性：同批次产品在相同样品浓度下测定，反应结果一致，显色均一 保存条件：阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒，2-30℃可保存18个月。常见问题： 1）根据临床经验判断为阳性，但是检测卡检测为阴性？ A、现在的动物疫病感染方式越来越复杂，而且呈现多种疫病混合感染，疫病的感染症状也不典型，所以单靠临床经验判断没有太大的说服力。 B 、感染初期或潜伏期，病毒含量较少，所以测不出来，建议过几天再测 2）快灵试纸和其他家试纸检测出的结果不符合？ A、病毒上面有不同的抗原决定簇，在试纸研发过程中，选用的特异性抗体都是对应不同的抗原决定簇，所以不能保证所有试纸厂家都是选用同一特异性抗体，也就有可能出现多个厂家的试纸结果不符合，好的试纸一定是选择了最具有代表性的特异性抗体。 B、病毒在流行过程中，其抗原决定簇可能也会发生变异，不同地区流行的毒株可能存在病毒抗原漂移。因此同一品牌试纸未必能将某类病毒的各个变异型全部检出。、 C、各种试纸的灵敏度不一样，也会导致在病毒浓度较低时检测结果出现偏差。 D、患病宠物处于患病初期时，体液内病毒浓度偏低，取样方式或时间的差异，均会导致试纸卡反应结果的差异。 3）抗原检测阳性的实际意义是什么？ 抗原检测阳性能直接确诊动物病原的存在。临床治疗中也可对抗原进行间歇检测来观察使用药物对病原的影响。当然，刚注射疫苗不久的动物用试纸进行检测，结果也可能是阳性，但做为疫苗的抗原与具有攻击力的野毒在动物体内的浓度一般有较大差距，因此在T线反应颜色强度上也存在差异。如果是灭活疫苗，则在动物体内很快就被中和了，试纸也就检测不出了。 4）T线出现慢
ELISA检测
ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体 在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。 因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下： 1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。 2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5．加入酶底物，温育显色测定 本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其
猪痘病毒PCR检测方法的建立及应用
江西农业大学学报2012，34（4）：781－785http：//xuebao．jxau．edu．cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E－mail：ndxb7775@sina．com 猪痘病毒PCR检测方法的建立及应用 张文波，蒋新华，冷闯，邓舜洲* （江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌330045） 摘要：建立猪痘病毒（swinepox virus，SWPV）的PCR检测方法，为SWPV的流行病学调查和临床诊断提供可靠技术支撑。参考GenBank登录的SWPV（AF410153．1）基因组序列，设计合成1对引物，扩增目的片段为975bp。以SWPV江西分离株SWPV－JX01为模板，对反应条件进行优化，建立了SWPV的PCR诊断方法。特异性、敏感性和重复性试验表明，该方法对临床上常见的其它猪病毒检测结果均为阴性；对模板的最低检测量为2．7pg；具有良好的重复性。用此方法检测50份疑似猪痘的临床样品，其中阳性率为80．2%。该方法敏感度高，重复性和特异性良好，可用于猪痘病毒的分子流行病学调查和临床病例的诊断。 关键词：猪痘病毒；PCR；猪痘 中图分类号：S852．65+9．1文献标志码：A文章编号：1000－2286（2012）04－0781－05 Development and Application of a PCR Assay for Detection of Swinepox Virus ZHANG Wen-bo，JIANG Xin-hua，LENG Chuang，DENG Shun-zhou （College of Animal Science and Technology，JAU，Nanchang330045，China） Abstract：A detection method for Swinepox Virus（SWPV）with PCR technique was established as a relia-ble technological means for epidemiological investigation and clinical diagnosis of SWPV．A pair of primers were designed according to the genome of SWPV to develop a PCR assay for detection of SWPV，the length of the product was975bp．The SWPV strain isolated from Jiangxi Province（SWPV－JX01）was taken as tem-plates．The PCR detection method for SWPV was finally established under optimal reaction conditions．The tests for the specificity，sensitivity and repeatability of the PCR assay were conducted，the results indicated that all were negative to the optimal examination method on other pig viruses and the necessary dose of tem-plates of the assay was2．7pg．50clinical samples，which were suspected SWPV syndrome from Jiangxi Prov-ince，were analysed by the method，the result showed that80．2﹪samples（41/50）were SWPV positive．The PCR detection method established in this study has the characteristics of sensitivity，high specificity and good repeatability，may be used in molecular epidemiological investigation and rapid clinical diagnosis of SWPV．Key words：swinepox virus；PCR；swinepox 猪痘病毒（swinepox virus，SWPV）在分类上属于脊椎动物痘病毒亚科猪痘病毒属唯一成员。是引起猪痘（swinepox，SWP）的主要病原，以引起猪的发热、外表皮肤起水泡、形成痘疹和结痂为特征，对3月 收稿日期：2012－05－01修回日期：2012－06－04 基金项目：国家自然科学基金项目（31160498/C1803） 作者简介：张文波（1972—），男，讲师，博士，主要从事动物传染病与免疫学研究，E－mail：hnzwb22@163．com；*通讯作者：邓舜洲，副教授，博士，E－mail：shzhdeng@163．com。
有关物质测定HPLC方法的建立
有关物质测定hplc方法的建立 一、开始之前必须明白： 1、有关物质来源的两种途径： 1）合成过程中的中间体和副产物； 2）储存过程中产生的降解产物； 2、分析你的样品结构，熟悉样品的基本性质； 3、样品中可能含有的中间体； 4、样品的基本稳定性和可能产生的降解产物； 二、准备工作 1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话就简单了，直接奔主题了。 2、没有文献（苦！），那就很是麻烦了。 1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等； 2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）； 3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。 4）分析结构。。。。。。 5）与同类产品进行比较； 三、开工（以紫外检测为例） 1、流动相的选择（采用粗品进行选择） 1）、有文献，按文献进行优化。不过我得提醒一下，文献的方法参考是可以的，要想完全按照他的条件做出来是很难的。 2）、没有文献。。。。。。 a、紫外扫描一下，看看哪里有最大吸收。将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。要是有pda检测器就不需要这一步了。 b、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书吧，看看它是怎么教你选择流动相的。 2、最低检测限 3、系统适应性试验 重复进样5次，记录色谱图，给出系统评价报告 4、考察中间体及副产物和样品的分离度。同时定出中间体在色谱图中的出峰位置，为定质量标准提供依据。 5、考察降解产物和样品的分离情况。 这个一般是通过破坏性试验来考察。常用的一般是高温、强光、氧化、强酸、强碱五个因素
弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则
附件2 弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂 技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）抗体亲合力检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及IgG抗体亲合力检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 弓形虫( Toxoplasma, TOXO ) 、风疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨细胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四种病原体，以缩写形式ToRCH命名。上述四种病原体已引起围
产医学家和优生优育学家的关注，如何应用应基于大量的研究及相关学科的诊疗指南。 依免疫球蛋白重链抗原特异性不同，免疫球蛋白可分为G型免疫球蛋白（IgG）、M型免疫球蛋白（IgM）、A型免疫球蛋白（IgA）、E型免疫球蛋白（IgE）和D型免疫球蛋白（IgD）五种类型。ToRCH抗体检测试剂，主要检测的免疫球蛋白为ToRCH特异性IgG和IgM。在病原体感染的初次体液免疫应答中(原发性感染)，特异性IgM抗体首先出现，但存在时间较短，通常为数周到数月。病原体特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的辅助判断。特异性IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且较长时间存在。 在感染过程中特异性抗体对抗原亲合力随感染时间的延长而不断升高，检测IgG抗体亲合力，能够较准确地判断感染时间，可作为ToRCH 抗体检测的一种补充，高IgG抗体亲合力可辅助排除近期原发性感染。 不同类型的ToRCH特异性抗体检测结果，在ToRCH病原体感染的辅助诊断及免疫状态的评估中，起着重要的指导作用，因此ToRCH特异性抗体检测的准确性至关重要。相关的生产企业必须充分意识到该类产品的潜在风险，根据本指导原则的要求对该类试剂的安全性和有效性进行科学合理的验证。 ToRCH抗体检测试剂是指一类利用免疫学方法，如酶免疫技术和化学发光免疫分析技术等，对人体血清或血浆样本中的ToRCH特异性抗体进行体外定性和/或半定量和/或定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可用于ToRCH感染辅助诊断及免疫状态的评估。IgG抗体亲合力检测试剂是一类对ToRCH特异性IgG抗体阳性的人血清和/或血浆样本中ToRCH特异性IgG亲合力进行体外定性检测的试剂，用于辅助判断感染时间，排除近期原发性感染。本类试剂尚不用作产前筛查。本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。
ELISA检测方法
ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。 注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
关于原料药有关物质检查方法建立的思考解读
关于原料药有关物质检查方法建立的思考 审评四部七室赵慧玲 【摘要】本文针对审评原料药有关物质检查方法中存在的问题，介绍欧洲和英国药典关于原料药已知杂质的研究现状和有关物质方法建立及质量控制，以供申请人参考。 【关键词】有关物质、方法学、分离度。 笔者审评原料药有关物质检查方法中发现，大多申请人越来越多地认识到控制原料药有关物质的重要性，自行建立方法考察原料药中存在的有关物质。但在研究中往往片面认为样品通过了破坏性试验和1％自身对照法后的系统适用 性试验就符合了要求。因此，忽视对主成分中杂质产生原因的分析，忽视仪器的检测灵敏度的分析、忽略色谱柱（柱效）的选择、流动相及比例的选择、检测波长的选择。忽视主成分和可能产生的杂质分离度的问题。 1、原料药有关物质方法建立应关注的问题： 原料药中的杂质来源于合成的中间体、副产物、以及降解产物，建立方法初期，仅采用破坏性试验的方法考察降解产物的做法是片面的。由于降解产物的量较小，如果选择的方法不好，比如，柱效低，波长选择不合理、流动相及流动相比例不合适，即使有降解产物，也达不到有效的灵敏度和有效的分离。因此，一个好的分析方法的建立首要问题应是围绕主成分和杂质的分离度和检测波长进行。对于生产原料药的企业来讲，由于可以通过工艺得到中间体、副产物，在方法建立初始，首先应该将可能的中间体和副产物作为杂质对待，进行柱效、流动相及流动相比例、波长和分离度等方法学的研究。方法建立成熟后，可根据中间体和副产物的安全性和工艺得到的难易程度决定是否固定为已知杂质。如果工艺中难以得到，且比较安全，可考虑采用杂质校正因子加上相对保留时间的方法。或采用杂质相对保留时间加上自身对照方法。上述三种方法均有好的分离度和响应值（灵敏度）作保证。也是研发和审评中应当提倡的。 如果原料合成中确实得不到副产物，对于有紫外吸收的样品可以用二极管阵列检测器，考察未精制的粗品，并对比已精制过的样品，确定粗品中各成分的分离度和样品中可能杂质的检测波长。方法确立后，可采用自身对照方法或面积归一化法控制杂质。对于后一方法，在研发和审评中应当慎重选用。 如果证明上述四个方法是比较成熟的方法后，如果再加上破坏性试验考察降解产物，其方法就更加完整和适用。 2、介绍欧洲和英国药典控制有关物质关注的问题 欧洲和英国药典的原料药标准后面，大部分都附有可能产生的中间体和副产物的结构，在有关物质质量控制中有些采用已知杂质的方法；有些采用杂质校正因子加上相对保留时间的方法；杂质相对保留时间加上自身对照方法和自身对照方法或面积归一化法。 例如：核黄素磷酸钠的有关物质检查就是采用HPLC的已知杂质－核黄素、其他杂质相对保留时间加上自身对照的方法。 取本品0.1g，用水50ml溶解，并用流动相稀释至100ml，取该溶液8ml，用流动相稀释至50ml，作为供试品溶液。另取核黄素对照品60mg，加盐酸试液1ml
弓形虫抗体igm阳性怎么办
弓形虫抗体igm阳性怎么办 这个情况之前已经有过感染那体内已经有了抗体，怀孕之前还是要去做一个检查确保健康才能有孩子，期间不要再接触宠物了现在这种情况是很常见的因为很多人养宠物，就算自己家里没有养难免接触到别人家的，所以一定要确保自己的身体是健康的菜能要宝宝，弓形虫的危害很大会对宝宝的大脑造成损伤。 1.种病对于成人来说,无需治疗,随着人体产生抗体,弓形虫自然会被杀死.当然医治最好了.但对于三个月以下的胎儿有着 致命的影响对而言,已经感染了,则产生抗体了,今后再发生暴露,因为已经感染过有抗体,也完全可以抵抗了.即使在怀孕期再次 感染,对胎儿也不会有任何影响了.可以完全不去管弓形虫这件 事了. 2.前如果感染过弓形虫,但现在已经形成抗体,那么IGG是 阳性,如果是新近感染的,IGM是阳性.这种情况是不能怀孕的,得需要经过治疗之后等IGM转阴,IGG阳性之后才能怀孕. 3.弓形虫病目前是没有特效药的,所以很难一次治愈.弓形 虫感染有多种简便有效的药物治疗,如磺胺类加乙胺嘧啶,和螺 旋霉素等,治疗须按医嘱进行,孕妇感染及时治疗大约可使胎儿
感染机会减少这种情况可能需要先进行治疗的，否则对生育有一定的影响，首先家里面不要养宠物了。临床上治疗通常是乙胺嘧啶与磺胺制剂联合应用。 首先不要养宠物了，暂时放到朋友家，宠物的存在很难免保证不会在发生感染，所以一定要注意啦，这种情况很可能会发生二次感染所以一定要先经过检查医生说没问题了就要孩子，要是检查不过关还需要多治疗，家里宠物要养肯定是要每年都去做次检查，每个月都要去杀一次虫，其实养宠物的人需要勇气，要慢慢锻炼宠物的习性。
人体弓形虫病
第14卷 第1期医学研究生学报V o l.14 N o.1 2001年2月Jou rnal of M edical Po stgraduate Feb.2001 人体弓形虫病 林 军综述, 武建国审校 (南京军区南京总医院解放军医学检验中心,江苏南京210002) 摘要: 弓形虫病是全球广泛分布、对人类造成严重危害的人兽共患病。近年来,由于与宠物接触增多,我国弓形虫病发病率有增高趋势。鉴于本病临床表现缺乏特异性,一旦确诊,治疗效果显著。本文从发病机制、病理改变、临床表现、实验室诊断、治疗等几个方面对本病进行了简要的评述,以期引起广大临床医务人员的重视。 关键词: 弓形虫,病原; 临床,实验诊断 中图分类号: R382.5 文献标识码: A 文章编号: 100828199(2001)0120057203α Toxoplas mosis i n human bei n g L I N G Jun rev ie w ing, W U J ian2guo check ing (Cen ter of M ed ica l L abora tory S cience,J in ling H osp ita l,N anj ing210002,J iang su,Ch ina) Abstracts: Toxop las m o sis is an infecti ou s disease w h ich affects bo th hum an and an i m als.It dis2 tribu tes all over the w o rld and m akes great harm to hum an beings.In recen t years,the m o rb idity of toxop las m o sis in ou r coun try increased becau se of con tacting w ith p ets.Toxop las m o sis has no sp ecific clin ical m an ifestati on s and responds w ell to co rrect treatm en t.In o rder to raise clin ician s’no tice to toxop las m o sis,th is article w ill review the disease from the asp ects of eti o logy,ep idem i o l2 ogy,clin ical m an ifestati on and exp eri m en tal diagno sis. Key words: Toxop las m o sis; Toxop las m a gondii; C lin ic; Exp eri m en t; D iagno sis 0 引 言 弓形虫病(toxop las m o sis)是由刚地弓形虫(tox op las m a g ond ii)引起的一种人兽共患传染病。早在1908年,法国学者N ico lle和M anceaux从北非刚地梳趾鼠的单核细胞中发现的形态与利什曼原虫非常类似的一种寄生虫,后发现该寄生虫不同于利什曼原虫,遂命名为刚地弓形虫。人类弓形虫病公认是Janku于1923年首先报告的。我国是1955年由于恩庶等首次从家兔和猫体中分离出弓形虫虫体,1964年谢天华报告首例弓形虫病(眼型)患者1。本病广泛分布于世界各地,各个国家和地区的感染率不同,有的国家高达80%,我国血清抗体的阳性率为5%～20%。人群及动物普遍易感。弓形虫对组织无选择性,除红细胞外任何有核细胞均可被侵犯。由于感染的部位不同,临床表现复杂,于是造成诊断困难。 1 发病机制及病理 1.1 发病机制 弓形虫病一般分为先天性和获得性两大类。先天性弓形虫病是指母亲在妊娠期间感染弓形虫而发生虫血症,弓形虫经胎盘引起胎儿宫内感染。获得性弓形虫病一般是指弓形虫经口腔进入消化道而传染,但也可以通过皮肤和粘膜感染。 弓形虫进入人体后经回肠或通过淋巴液至淋巴结,经血行播散至全身,并迅速进入单核2巨噬细胞使其胀破,散出的弓形虫再次侵入新的细胞。如此反复,发展为局部组织的坏死病灶,同时伴有以单核细 ? 7 5 ? α收稿日期: 1999210222 作者简介: 林 军(1962-),女,吉林长春人,主管技师,医学本科,从事临床检验专业。
弓形虫抗体快速检测试剂盒
弓形虫抗体快速检测试剂盒 弓形虫概述： 刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）,简称弓形虫，是一种人畜共患的传染病，猫科动物是弓形虫的最终宿主。特别是孕妇感染了弓形虫会对胎儿发育有影响，引起流产和先天性弓形虫病。弓形虫IgM/IgG抗体检测，是优生优育孕前的必检测项目之一。 产品简介： 弓形虫抗体快速检测试剂盒采用了胶体金法定性检测人血清/全血中弓形虫IgM/IgG抗体， 试剂盒主要组成： 1、弓形虫抗体快速板 2、样本稀释液 3、说明书 样本要求： 建议用新鲜血清或全血直接检测，避免使用高脂血的样本、溶血样本可能影响结果的判读，应避免使用。 检测方法： 1、使用前，保证试剂盒处于常温（15℃--30℃）。 2、撕开铝膜袋取出测试板平放，在检测板加样孔中加10 μl血清样本或全血样本，然后加入100 μl样品稀释液。3-5分钟内观察检测卡中部检视窗的结果，20分钟内结果有效。 检测结果判读： 阳性结果：在检测区和对照区均出现一条紫红色线。 阴性结果：仅在对照区出现一条紫红色线。 无效结果：对照区无紫红色线出现，表示测试无效。需重新测试。 检测结果解释： 1、若IgM抗体检测为阳性，说明近期感染弓形虫病。 2、若IgG抗体检测为阳性，说明既往感染过弓形虫病。 3、若IgM抗体检测为阴性、IgG抗体阴性，身体还未受到过感染弓形虫病。 检测的局限性： 1、本试剂盒为初筛产品，确诊应根据患者临床评价和检测结果进行严谨分析。 2、如样本中所检抗体含量极低，可能产生不正确的阴性结果。当怀疑感染时，即使检测为阴性，可以隔一段时间进行重新检测，或用其它确诊试验证明。
3、本产品批间和批内产品的阴性符合率和阳性符合率都≥95%以上。 4、本产品要求待测血清必须新鲜，新鲜血清4℃保存不超过48小时，脂血、溶血、陈旧浓缩的血清均影响检测结果。
猪弓形虫病详解
猪弓形虫病详解 核心提示：弓形体病是由弓形虫寄生引起的人畜共患的一种寄生虫病。通过口、眼、鼻、呼吸道、肠道及皮肤等途径侵入猪体。以高热、呼吸及神经症状及繁殖障碍为特征。临床可见急性、亚急性和慢性3种病型，农村散养和规模化养猪场时有发生，死亡率高达60％以上。 1简介 弓形体病又称为弓浆虫病或弓形虫病，是由弓形体感染动物和人而引起人畜共患的原虫病。本病以高热、呼吸及神经系统症状、动物死亡和怀孕动物流产、死胎、胎儿畸形为主要特征。 2 病原 该病病原是弓形虫，在整个发育过程中分5种类型，即滋养体（速殖子）、包囊、裂殖体、配子体和卵囊。弓形虫发育过程需要2个宿主，其中滋养体和包囊是在中间宿主（人、猪、犬、猫等）体内形成的，裂殖体、配子体和卵囊是在终末宿主（猫）体内形成的。 猫既是终末宿主也是中间宿主。虫体在猫的肠上皮细胞内，进行裂殖生殖，重复几次裂殖生殖后，形成大量的裂殖子，末代裂殖子重新进入上皮细胞，经过配子生殖，最后形成卵囊。卵囊随粪便排出体外，在外界适宜的温度、湿度和氧气条件下，经过孢子化发育为感染性卵囊。 从终末宿主排出的卵囊在外界可存活100天至1年半，一般消毒药无作用。速殖子的抵抗力弱，在生理盐水中几小时就丧失感染力，各种消毒药均能将其迅速杀死。 3 治病机理 弓形虫几乎可以感染所有类型的细胞。弓形虫从入侵部位进入血液后散布全身并迅速进入单核-巨噬细胞以及宿主的各脏器或组织细胞内繁殖，直至细胞胀破，逸出的速殖子又可侵入邻近的细胞，如此反复不已，造成局部组织的灶性坏死和周围组织的炎性反应，此为急性期的基本病变。如患者免疫功能正常，可迅速产生特异性免疫而清除弓形虫、形成隐性感染；原虫亦可在体内形成包囊、长期潜伏；一旦机体免疫功能降低，包囊内缓殖子即破囊逸出，引起复发。如患者免疫功能缺损，则的虫大量繁殖，引起全身播散性损害。弓形虫并可作为抗原，引起过敏反应、形成肉牙中要炎症。此外，弓形虫所致的局灶性损害，尚可引起严重继发性病变、如小血栓形成、局部组织梗死，周围有出血和炎症细胞包绕，久而形成空腔或发生钙化。 弓形虫可侵袭各种脏器或组织，病变的好发部位为中枢神经系统、眼、淋巴结、心、肺、肝和肌肉等。 4 流行病学 4.1 传染源
临床医学检验方法性能评价与质量控制体系的建立及推广应用研究
临床医学检验方法性能评价与质量控制体系的建立及推广应用研究 临床医学检验是运用现代化学、物理方法,通过实验室技术、医疗仪器为临床诊断、治疗提供依据的一门学科,是临床医学不可或缺的一部分。近年来,随着医疗科技发展进程的不断推进,临床医学检验工作也取得了长足的进步,医学检验技术和检验仪器不断更新,临床实验室工作效率得到稳步提升。与此同时,我国医疗卫生体制改革的不断深化,以及社会大众健康意识、法律意识、维权意识的不断增强,对临床医学检验工作提出了更高的要求,如何提高临床医学检验质量,真实客观地反映患者的病情,减少误诊是临床医学检验工作者探讨的重要课题。临床医学检验方法的性能评价是临床医学检验质量控制的基础环节,同时也是临床医学检验设计质量控制方法的依据。本文主要探讨了临床医学检验方法性能评价与质量控制体系的建立及推广应用。 1临床医学检验方法的性能评价 基于保证临床医学检验质量的考虑,临床医学在使用检验方法对患者标本进行检测前,必须采用相应的实验去评价检验方法的基本性能,只有符合临床使用要求的检验方法才能用于临床检验。而在性能评价内容、评价类型与评价方案上,具体分析如下 临床医学检验方法性能评价的内容在性能评价内容上,主要包括:①检验方法的特性。即检验结果可报告范围和检验方法的灵敏度。②检验方法需证实的基本性能。即检验方法的精密度、准确度和总误差。③检验方法整个分析性能的其他内容。即特异性分析、建立参考范围及其他必要的性能。 临床医学检验方法性能评价的类型临床和实验室标准化协(clinical and laboratory standards institute,CLSI)建议指南EP192中对临床医学检验方法性能评价的类型做出了如下描述:①建立(establishment)。主要是检验仪器制造商在产品研发阶段对其操作性能的规定。②证实(validation)。即制造商为确保其产品性能能够满足使用要求而进行的一系列产品性能证明工作。③验证。即临床医学检验部门为保证检验方法能够满足临床需要而进行检验方法性能的验证工作。目前,临床医学检验部门多采用6西格玛质量管理方法来评价临床医学检验方法的性能。该评价方法用数据说话,以科学的分析为依据,简便、直观,是行之有效的现代临床医学检验方法性能评价的手段。 临床医学检验方法性能评价的方案在性能评价方案上,主要方案流程如下:精密度→准确度→总误差→检验结果可报告范围→参考范围→交叉污染→分