大鼠各组织中β-Klotho的表达情况研究论文
万方数据
万方数据
万方数据
万方数据
大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：
将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋： 将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块： 待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。
实验大鼠取材方案
实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、
大鼠取材方案
实验大鼠取材方案 ［取材内容］ 1. 取大歸脉血分离血衆血清-80 C保存。 2. 取大鼠门静脉血分离血清-80 C保存。 3. 取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃 4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。 5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽 保存备用。 6. 取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 7. 取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。 9. 取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 10. 取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装
液氮冰冻保存备用。 11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组 织分装 液氮冰冻保存备用。 12. 取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮 冰探保 存备用。 13. 取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保 存 备用。 14. 取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 ［试剂及药品］ 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 应二醛 磷酸 盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或 4 戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液 ［器材］ 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、 眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、
大鼠系统解剖简述
大鼠系统解剖简述
第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮 和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺，大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对，胸部3对，腹部1对，鼠蹊部2对。个别的大 鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中，由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第 二章骨 一．脊柱大鼠的脊柱由57－61块脊椎骨组成，包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、 尾锥27－31块。锥式C7T13L6S4Cy27 －31。骨性标志为第二胸椎，其棘突最 高，超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样，恒为7块，全无 肋骨相连，横突上具有横突孔，供锥动 脉通过。 2、胸椎13块，椎骨的长度由前向后逐渐增加（由 2毫米增加到4毫米），锥管的直径平 均为3.3毫米，较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块，每块锥体的长度比较一致，约6
－7毫米。锥管直径由前面的4毫米向 后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节，最前一节为胸骨柄，第二到第五 节称为胸骨体，最后一节为剑突，棒状 的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨 柄长约10毫米。 第三章肌 肉系统（省略） 第四章消 化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可 分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。 附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和 胰。 第一节消化管 一、口腔 1、舌全长约30毫米，不具有正中系带， 但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈－胸段长度约75毫米，腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米，食管外径约2毫米。 位置：食管主要是沿气管背侧走行，仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置：横位于腹腔的左前部，其壁 面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小：胃重为体重的0.5％，属单室 胃。
大鼠肝组织RNA提取策略与注意事项
第一部分RNA 提取策略 1、RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。针对它们我们应该戴帽子，口罩，橡胶无菌手套，在清洁灰尘少的地方提取RNA。我上面说了内源性RNAase污染才是关键，所以有些同志没有注意这些对外源性RNAase的防护RNA也提取的很出色。但是如果你运气不太好的话外源性RNAase污染影响很大的。 2、样品的取材我们抽提RNA往往都是需要其mRNA，而mRNA的表达量和细胞或者组织的生长状态息息相关，我们取组织块应该避免取到坏死组织，而细胞我们应该在其处于生长旺盛的时期收集（贴壁细胞消化要迅速，离心要稍为快些，甚至可以不消化下来直接进入裂解步骤；此外还可以采取先震荡敲击培养瓶的方法使细胞和培养瓶的结合下降，然后用吸管吹打培养基地方法把细胞吹打下来，这样细胞的代谢不会明显的受到抑制。注意在平时传代的时候就要注意观察细胞除了用胰酶消化下来以外是否还有其他比较简单的方法）（此外还可以把培养液倒掉后迅速的加入裂解试剂开始抽提ＲＮＡ）。 3、待提取样品保存方法这些保存方法温度从4度到零下196度不等，选择哪一种保存方法关键是要对这些保存方法的优缺点有清醒的认识。根据你需要的RNA种类可以做简单的分类。包括RNA病毒RNA ，mRNA（各种），rRNA 等其中最容易降解或者破坏的就是mRNA，最不容易损失的就是RNA病毒RNA （因为有蛋白壳保护）。超低温保存：特指液氮保存不管组织还是细胞如果需要其中的mRNA必须在液氮中保存，-70度等方法都是错误的方法，在很短的时间内或许可以，但是长期是不可能的。-20~~~-70摄氏度保存：RNA病毒的RNA 可以在这个温度段安全的保存。但是其产生的mRNA还是必须超低温保存。 4度保存：有特殊的保护试剂存在地情况下组织的保存：应该是离体后在1min 内就放入液氮或者保护试剂中。由于提取RNA对组织块有一定量的要求，大约100mg居多（脂肪细胞需要的量多的多，因为细胞是大大膨胀的），所以在取材前就需要明确到底你需要的组织大概多大是100mg，令少勿多。如果是取临床的标本，就应该带上液氮罐子，DEPC处理的器械，锡箔纸，线等在手术室外等候，标本一切下就尽快进行切割（大概100mg一块），包装（锡箔纸内），捆扎（方便在液氮罐子中寻找），迅速丢入液氮罐子中，最好是1min内完成（所以大家取材前一定要好好联系一下，不要到时候手忙脚乱的^_^）细胞的保存：比较麻烦些，所以大多都是直接提取RNA再保存。建议离心收集后用特殊保护试剂重悬后保存。 4、RNA提取提取RNA可以分为总RNA，mRNA，Virus RNA（RNA病毒）几类Trizol即异硫氰酸胍-苯酚法，这种方法的原理是：首先用强变性剂异硫氰酸胍裂解细胞，同时使核蛋白复合体中的蛋白变性，释放出核酸。释放出来的DNA 和RNA由于在特定pH时溶解度不同，分别位于整个体系中的中间相和水相，
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项 [取材内容] 大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液 [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、 2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐 [取材动物] 大鼠 [取材步骤] 1. 取材前夜禁食，自由饮水。 2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。 3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。 4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。 5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。 6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。 7.肝脏取材：结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1. 75%乙醇50分钟 2. 85%乙醇50分钟 3. 95%乙醇(I) 30分钟 4. 95%乙醇(II) 30分钟 5. 100%乙醇(I) 30分钟 6. 100%乙醇(II) 30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 &二甲苯（I）20分钟 9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。（三）浸蜡、包埋与修蜡块 1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。 2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板 上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度 以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上， 进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1.脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟 2 .染色
大鼠肝脏组织总RNA提取
大鼠肝脏组织总RNA提取 实验前准备: 1.试剂 RNAprep pure Tissue Kit (TIANGEN)，无水乙醇，巯基乙醇，DEPC 2．试验用具的处理 去RNase处理： 1〉配制0.1% DEPC 水（1000ml 水加1ml DEPC，用转子于通风橱内搅拌至完全溶解）。 2〉将需要用的枪头，枪头盒和EP管等浸泡入DEPC水中，过夜。将枪头装入枪头盒中，120C灭菌30min。60C烘干过夜。 3〉D EPC水于120C灭菌30min。 配制DNase I 工作液： 取9ul DNase I 存储液放入新的RNase-Free的离心管中，加入71ul RDD溶液，轻柔混匀。 试验步骤 1.准备碎冰以及液氮，将肝脏组织从-80C转移到液氮中。 2.称取10-20mg肝脏组织（注意称取组织的部位尽量相同、不含其它结缔组织成分） 与RNase-Free的2ml EP管中。 3.加入300ul 裂解液，匀浆器匀浆（中号探头，最高速度），其间间歇性地将EP管 置于冰上以防止组织裂解液过热。 4.匀浆后，将探头插入水中洗涤30s（开动状态下），转移到新的水中再次洗涤30s， 然后与DEPC水中洗涤30s。进行下一个样品的匀浆。 5.加入590ul RNase-Free ddH2O和10ul 蛋白酶K，混匀后56C处理15min。 6.13000rpm 离心3min，取800ul上清加入400ul无水乙醇（0.5倍体积），混匀。将 混匀液转入吸附柱中（吸附柱放在收集管中），13000rpm 离心30s，弃废液，将 吸附柱放回收集管中。 7.向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回 收集管中。 8.向吸附柱中央加入80ul的DNase I 工作液，室温放置15min。 9.向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回 收集管中。 10.向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。13000rpm 离心30s，弃废液， 将吸附柱放回收集管中。 11.向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。13000rpm 离心30s，弃废液， 将吸附柱放回收集管中。 12.13000rpm 离心2min，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底凉干吸 附材料中残余的漂洗液。 13.将吸附柱转入一个新的RNase-Free的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 70ulRNase-Free ddH2O，室温放置2min，13000rpm 离心2min，得到RNA溶液。 浓度：终浓度（ng/ul）=（OD260）X （稀释倍数n）X 40
大鼠系统解剖简述
大鼠系统解剖简述 第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺,大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对,胸部3对,腹部1对,鼠蹊部2对。个别的大鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中,由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第二章骨 一.脊柱大鼠的脊柱由57-61块脊椎骨组成,包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、尾锥27-31块。锥式C7T13L6S4Cy27-31。骨性标志为第二胸椎,其棘突最高,超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样,恒为7块,全无肋骨相连,横突上具有横突孔,供锥动脉通过。
2、胸椎13块,椎骨的长度由前向后逐渐增加(由2毫米增加到4毫米),锥管的直径平均为3.3毫米,较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块,每块锥体的长度比较一致,约6-7毫米。锥管直径由前面的4毫米向后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节,最前一节为胸骨柄,第二到第五节称为胸骨体,最后一节为剑突,棒状的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨柄长约10毫米。 第三章肌肉系统(省略) 第四章消化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和胰。 第一节消化管 1 一、口腔 1、舌全长约30毫米,不具有正中系带,但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈-胸段长度约75毫米,腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米,食管外径约2毫米。 位置:食管主要是沿气管背侧走行,仅在颈部稍偏左侧。
大鼠系统解剖简述
第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺，大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对，胸部3对，腹部1对，鼠蹊部2对。个别的大鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中，由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第二章骨 一．脊柱大鼠的脊柱由57－61块脊椎骨组成，包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、尾锥27－31块。锥式C7T13L6S4Cy27－31。骨性标志为第二胸椎，其棘突最高，超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样，恒为7块，全无肋骨相连，横突上具有横突孔，供锥动脉通过。 2、胸椎13块，椎骨的长度由前向后逐渐增加（由2毫米增加到4毫米），锥管的直径平均为3.3毫米，较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块，每块锥体的长度比较一致，约6－7毫米。锥管直径由前面的4毫米向后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节，最前一节为胸骨柄，第二到第五节称为胸骨体，最后一节为剑突，棒状的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨柄长约10毫米。 第三章肌肉系统（省略） 第四章消化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和胰。 第一节消化管
一、口腔 1、舌全长约30毫米，不具有正中系带，但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈－胸段长度约75毫米，腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米，食管外径约2毫米。 位置：食管主要是沿气管背侧走行，仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置：横位于腹腔的左前部，其壁面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小：胃重为体重的0.5％，属单室胃。 形态：胃小弯朝向背前方，食管在其中部入胃。胃大弯朝向腹后方，其边缘有双层的口袋状大网膜。贲门部外观呈半透明状，内壁有粘液腺。 三、小肠 1、十二指肠 长度：长约100毫米。 位置：从幽门发出向右后行，再折向前终于右侧。可分为降支（向右后行）、横支（水平部）、升支(向前行)，它们构成一个不完全的环，包围着部分胰腺。 颜色：淡红色。 2、空肠 长度：为小肠的最长部分，大约有700－1000毫米。 位置形态：盘旋在腹腔的右方腹侧部。 3、回肠 长度：较短，约有40毫米。 位置形态：以三角形的系膜回盲褶与盲肠的末端相连，向盲肠的开口与结肠的起始部紧密相接。 二、大肠 1、盲肠 长度：是介于小肠与盲肠之间的一个大的盲囊。长约60毫米，直径约10毫米。位置：通常位于腹腔的左后部。盲肠呈锥体形，分为基部、体部和尖端。 2、结肠
SD大鼠组织器官自发性病变
目的为了解毒性试验中SD大鼠组织器官自发性病变的发生情况,为药物安全性评价试验提供SD大鼠自发性病变基本资料。方法特选取现工作单位安评中心2010年至2012年12个SD大鼠1～6个月长期毒性试验(GLP试验)270只空白对照组SD大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大脑、小脑、脑桥、延髓、脑垂体、食管、气管、主动脉、唾液腺、颌下淋巴结、甲状腺、甲状旁腺、胃、小肠、大肠、胰腺、肠系膜淋巴结、膀胱、睾丸及附睾、子宫及卵巢、前列腺、乳腺、坐骨神经、视神经、皮肤等病理检查数据进行总结。结果心最常见自发性病变主要见于以淋巴细胞、浆细胞为主的炎细胞浸润,多为局灶性,实质心肌细胞未见明显病理改变,统计结果显示雄性大鼠相对雌性大鼠更易发生此病变。肝中发生率最高的自发性病变为局灶炎细胞浸润,病变程度多为轻度,中央静脉周围炎细胞浸润较为常见,主要为淋巴细胞。其次为肝脏的小肉芽肿,病变程度多为轻微或轻度,其病理发生机制尚不清楚,雌性比雄性易发。肝细胞的脂肪变性在肝自发性病变中也较常见,这是由于中性脂蛋白的形成及发生分泌障碍,致使肝细胞内脂滴潴留。此外,肝中还可见髓外造血,一些药物也可诱发此病变,如有的药物能够刺激动物机体造血功能亢进,肝中也可观察到此改变,这时还要注意观察脾、骨髓等其他器官的变化,与自发性病变区别诊断。脾的自发性病变较少,本次统计仅发现个别SD大鼠色素沉着增多,主要为含铁血黄素,由于生理或病理原因,红细胞被组织细胞吞噬而破坏,红细胞中血红蛋白被分解,铁沉着于组织细胞,所以脾中含铁血黄素沉着增多成为红细胞破坏亢进的指标之一。肺经统计发生率较高的自发性病变为肺内泡沫细胞聚集及局灶炎细胞浸润。肾最常见的自发性病变为局灶炎细胞浸润,主要发生在肾的间质,以淋巴细胞及浆细胞为主,而肾小管、肾小球等未见明显病理改变。其次为嗜碱性肾小管,肾小管上皮细胞胞浆呈嗜碱性,细胞核较大,此为再生肾小管。在试验观察中发现一些药物也可诱发此病变,可参考药物作用机理及其它试验结果具体分析。一些SD大鼠肾中单个肾小管钙化,皮、髓质交界处及髓质较常见。个别可见间质性肾炎,表现为间质小血管扩张充血,炎细胞浸润,肾小管萎缩/消失被增生的结缔组织取代等,肾小球的变化多不明显,发生率很低。脑及神经组织的自发性病变在本次统计中尚未发现。此外,其他组织器官的自发性病变有睾丸萎缩,前列腺间质炎细胞浸润,卵巢囊肿,十二指肠绒毛轻度变性、坏死、脱落等。发生在甲状腺的腮后体残留、甲状旁腺Küersteiner's囊肿、垂体的Rathke's囊肿以及甲状腺中的胸腺异位均属于先天性改变。结论常见的自发性病变可以归为以下几类:炎细胞浸润发生率最高,常见于心、肝、肾、肺。退行性变化常见于肝细胞脂肪变性,肾小管钙化,脾色素沉着等。还有与药物诱发的病变相类似的一些自发性病变,如肝脏髓外造血、嗜碱性肾小管等。器官实质细胞损伤偶有发生,如间质性肾炎。此外,甲状腺、甲状旁腺、垂体的囊肿,甲状腺中胸腺
介绍大鼠各组织器官石蜡切片制作法_高宝红
介绍大鼠各组织器官石蜡切片制作法山西省中医院（030012）高宝红 在科研工作中，实验标本多为动物模型，如大鼠、小鼠及兔等。大小鼠及兔的组织脏器较人体组织脏器稚嫩柔软，水分含量多。因此在制作组织切片的过程中，必须根据其组织结构特点，采用不同于人体组织的处理方法，注意各种动物组织在固定、脱水、透明浸蜡、包埋、切片的每个程序中选择最佳的时间方案，才能避免组织块变脆，切片易碎、有裂隙，染色时易脱片等常见不良后果的发生，保证高质量石蜡切片一次成功。本研究就如何制作优质的大鼠各组织器官石蜡切片作了总结，现从固定、取材、脱水、透明、浸蜡、包埋到切片、烤片、脱蜡、染色的经验介绍如下。 1如何制作优质大鼠各器官石蜡切片 1.1标本：大鼠各个脏器—— —心、肝、脾、肺、肾、大脑、脊髓、胃肠、垂体、胸腺、淋巴结、肾上腺、卵巢、睾丸、子宫、膀胱、附睾。 1.2固定液：中性甲醛溶液，固定时间为24h。 1.3取材：心脏：最大纵断面取1块，厚度为2mm；肝脏：右叶纵断面取1块，厚度为2mm；脾脏：纵断面取1块，厚度为2mm；肺脏：纵断面取1块，厚度为2mm；肾脏：最大面剖开取一半，包括皮质、髓质和肾盂；大脑：最大面剖开取一半；脊髓：横断面剖开取1块，厚度2~3mm；胃：沿大弯侧剪开，纵切一长条，长1cm，宽2mm；肠：横断面切取一段，约2mm；垂体：全包；胸腺：全包；淋巴结：全包；肾上腺：全包；卵巢：全包；子宫：横断面剖开取一段，厚度2mm；睾丸：最大面剖开，取半；附睾：纵断面剖开取半；膀胱：剖开取半。 1.4各个脏器的脱水透明浸蜡时间：见第1024页表1。 1.5包埋：胃肠、子宫、膀胱立埋，其余脏器平埋，蜡温为65~ 70℃。 1.6切片：厚度4μm，摊片水温56℃左右，选取无皱折的4片。 2动物组织石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色切片置70℃的烤箱中30min 入二甲苯脱蜡20min；入梯度乙醇100%→95%→85%→75%，自来水冲洗2min；入苏木精30min，取出自来水冲洗2min；入盐酸乙醇分化5s，自来水冲洗2min；入伊红5 s，自来水冲洗2min；入梯度乙醇75%→85%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%→100%；入二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ；中性树胶封片。 3石蜡切片中注意事项 广泛接触宫颈表面，特别是宫颈管上皮细胞更不易取得。TCT 使用软质塑料宫颈刷，可更广泛接触宫颈表层及宫颈管，易于取得广泛而更有代表性的标本。②巴氏涂片在制片时易丢失较多量细胞。③巴氏涂片质量不易控制，易造成涂片过厚或过薄，细胞重叠、退变，对取材医生经验有更高要求。TCT由自动细胞制片机系统制片，制成的涂片较薄、较均匀。④巴氏涂片为原始标本，易带有白细胞、红细胞、黏液及滴虫、真菌、细菌等病原体，造成涂片背景不清晰，可能对阅片造成一定的影响。TCT涂片经细胞保存液和滤膜的过滤处理，洗脱大部分白细胞、红细胞、黏液及滴虫、真菌、细菌等病原体成分，制成的涂片背景清晰、成分单一，易于阅片。这是TCT比巴氏涂片较为优越的因素。 子宫颈液基薄层细胞学新技术及TBS分类法对宫颈病变的诊断率提高了31.3%，对低度鳞状上皮以上病变的检出率提高了65%[7]。 本研究，所检查的5322例患者的结果中细胞学诊断为鳞癌有3例，病理活检均为鳞癌，符合率为100%；11例HSIL 中：CINⅢ9例，原位癌2例，符合率为100%；19例LSIL活检均为CINⅠ符合率为100%。可见，TCT对宫颈癌和CIN的阳性检出率高，尤其对CINⅡ以上的危害性较大的宫颈癌显示极高的阳性符合率，假阳性率低。本组资料还表明TCT除对癌前病变和癌有较高的诊断率外，对各种微生物，如滴虫、霉菌、细菌和HPV感染等也可提供直接诊断或提示诊断，对上述疾病的及时治疗有很大帮助。 积极推广液基细胞技术及采用TBS诊断分级标准作为妇女每年一次的常规普查，能及早发现宫颈早期病变，是防止宫颈癌发生的关键。 参考文献 1刘树范.宫颈及阴道细胞病理学诊断报告建议.中华妇产科杂志，1998，33（5）：316-318. 2郎景和.迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇.中华妇女杂志，2002，37（3）:1-2. 3赵方辉，戎寿德，乔友林.宫颈癌及其癌前病变筛查方法现状. 中国医学科学院报，2001，23（6）：638-641. 4刘植华，李悦.子宫颈癌的早期诊断.中国实用妇科和产科杂志，2004，2007（7）：435-436. 5Frable WJ,Austin RM,Greening SE,et al.Medicolegal affairs. International Academy of Cytology Task Force summary.Diagnos－tic cytology towards the21st century:an jnternational expert con－ference and tutorial.Acta Cytol,1998,42（1）:76-119. 6Joseph MG,Cragg F,Wright VC,et al.Cyto-histological corre－lates in a colposcopic clinic:a1-year prospective study.Diagn Cytopathol,1991,7（5）:477-481. 7zur Hausen H.Papillomavirus infections--a major cause of hu－man cancers.Biochim Biophys Acta,1996,1288（2）:F55-78. （收稿日期：2009-10-16）