苹果渣中多酚物质的纯化及其抑菌活性的研究

收稿日期：２００６－０９－１３ ＊通讯作者

基金项目：农业部９４８项目（２００６－Ｇ２８）；陕西师范大学研究生创新基金项目作者简介：郝少莉（１９８２－），女，硕士研究生，研究方向为现代果汁加工技术。

苹果渣中多酚物质的纯化及其抑菌活性的研究

郝少莉，陈小蒙，仇农学＊

（陕西师范大学食品工程系，陕西　西安 ７１００６２）

摘 要：本实验运用静态吸附与解吸实验对１０种大孔树脂进行筛选，筛选出效果最好的树脂对苹果渣中多酚物质进行动态吸附实验研究，并采用滤纸片法研究了多酚纯化物的抑菌活性及其质量浓度、ｐＨ值、温度对抑菌活性的影响。结果表明：Ｄ４０２０大孔树脂表现出良好的吸附性能与最好的解吸效果；苹果渣多酚纯化物对细菌的抑制作用较强，而对供试霉菌、酵母菌抑制作用不明显，其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度（ＭＩＣ）均为０．０１５％（Ｗ／Ｗ）；在ｐＨ５～６环境条件下其抑菌效果最佳；一定温度内处理不影响苹果多酚的抑菌活性。关键词：苹果渣；多酚；纯化；抑菌活性

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｉｎ　Ａｐｐｌｅ　Ｐｏｍａｃｅ

ＨＡＯ　Ｓｈａｏ－ｌｉ，ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｍｅｎｇ，ＱＩＵ　Ｎｏｎｇ－ｘｕｅ＊

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｘｉ＇ａｎ ７１００６２，　Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ　：Ｓｔａｔｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｓｔａｔｉｃ　ｄｅ－ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｗｅｒｅ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ｆｒｏｍ　ｔｅｎｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｙｎａｍｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｍａｃｅ．　Ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｍａｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，　ｐＨ　ｖａｌｕｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｆｉｌｔｅｒ　ｐａｐｅｒ　ｄｉｓｋｓ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ　Ｄ４０２０　ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｄ－ｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｒｅｓｉｎｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ，　ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅｅａｓｙ　ｄｅ－ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ．　Ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｂｕｔ　ｎｏ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｍｉｌｄｅｗａｎｄ　ｍｉｃｒｏｚｙｍｅ．　Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｏｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ａｎｄＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｉｓ　０．０１５％（Ｗ／Ｗ）．　Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎｐＨ５～６，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｐｐｌｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｗｏｕｌｄ　ｎｏｔ　ｂｅ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｒａｎｇｅ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｐｐｌｅ　ｐｏｍａｃｅ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ

中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００７）１１－００８６－０５

苹果渣是苹果汁加工的副产物，含有丰富的多酚类物质，如绿原酸、根皮素、原花青素、槲皮素糖苷等，湿果渣中总多酚含量约为１～３ｇ／ｋｇ，个别品种可达７ｇ／ｋｇ［１］。目前我国果汁加工中大量的苹果渣被当作垃圾抛弃，既浪费资源又污染环境。

许多研究表明苹果多酚具有多种保健功能，如预防龋齿、预防高血压、抗肿瘤、抗突变、抑菌、清除自由基、抗氧化作用和抗衰老等

［２］

。其抗氧化能力是ＶＥ

的５０倍、ＶＣ的２０倍［３］。苹果多酚还具有消臭、保鲜、保香、护色、防止维生素损失等作用，可以防止食品品质劣变［２］。

国内外对苹果多酚抑菌作用的研究报道较少，且多数是研究鲜苹果中多酚的抑菌作用。本实验对苹果渣中

多酚提取物进行了初步纯化，并研究了多酚纯化物对微

生物的抑制作用及影响因素，旨在为苹果渣的综合利用及新型安全天然食品防腐剂的研究提供依据。１材料与方法１．１材料

１．１．１

供试样品与试剂

苹果渣 市售红富士苹果榨汁得果渣，苹果渣于８０℃下烘干保存备用。

９５％乙醇、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、无水碳酸钠、浓盐酸、钨酸钠、钼酸钠、磷酸、硫酸锂、氢氧化钠、酚酞等均为国产分析纯。１．１．２

供试树脂

ＬＳＡ－８００Ｂ、ＬＳＡ－２０、ＸＤＡ－１大孔树脂 西安蓝晓交换吸附材料有限责任公司；Ｄ３５２０、Ｄ４０２０、Ｘ－５、ＡＢ－８、ＮＫＡ－ＩＩ、ＮＫＡ－９、Ｓ－８大孔树脂 南开大学化工厂。

１．１．３供试菌种

大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）和啤酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）陕西师范大学生命科学学院微生物实验室；青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ） 陕西师范大学食品工程系微生物基础实验室。

１．１．４培养基

细菌用培养基：牛肉膏蛋白胨培养基；霉菌用培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ）。

１．２仪器

ＭＡ系列分离层析仪（该仪器由层析柱、ＨＤ－３紫外检测仪、ＤＨＬ－Ａ电脑恒流泵、ＤＢＳ－１００电脑全自动部分收集器、记录仪五部分组成） 上海沪西分析仪器厂；ＫＱ－２５０ＤＢ型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；ＳＨＺ－８２型水浴恒温振荡器 江苏金坛丹阳门石英玻璃厂；ＷＦＪ２０００型可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司；ＲＥ－５２ＡＡ型旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂；８００Ｂ型台式离心机 上海安亭科学仪器厂；Ｓ－ＳＷ－ＣＪ－１Ｆ型无菌操作箱 上海跃进医疗器械厂。

１．３方法

１．３．１总酚测定方法（ＦＣ法，Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕｓ）［４］准确移取提取液２．０ｍｌ于２５ｍｌ棕色容量瓶中，依次加入ＦＣ试剂［５］１．０ｍｌ、１ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＣＯ３溶液５ｍｌ，定容，于３０℃水浴中静置１ｈ，取出测定７６０ｎｍ下测吸光度。以蒸馏水代替样品为空白对照。

１．３．２ＦＣ法测定总酚工作曲线建立

精确配制０．０２５‰。的单宁酸溶液，取１０支２５ｍｌ棕色容量瓶，分别移取０、１、２、３、４、５、６、７、８、９ｍｌ单宁酸，ＦＣ法测吸光度。以单宁酸为横坐标，７６０ｎｍ下的吸光度为纵坐标，建立标准曲线，并进行回归分析［４］。

１．３．３苹果渣中总酚的乙醇提取流程［６］

（超声波辅助提取）

↓

干果渣→乙醇提取→过滤→蒸发→定容→取样→恒温静置→测吸光度

准确称取干果渣１０ｇ，加入１００ｍｌ的６０％（Ｖ／Ｖ）乙醇溶液，在超声波清洗器中重复提取四次，提取时间２０ｍｉｎ，温度为４０℃，提取功率２５０Ｗ，合并提取液。提取液旋转蒸发除去乙醇，定容至１００ｍｌ。ＦＣ法测吸光度，计算多酚浓度。１．３．４苹果渣中多酚物质的纯化

１．３．４．１树脂预处理［７］

将试验用１０种大孔吸附树脂以９５％乙醇浸泡１２ｈ，使其充分溶胀，然后乙醇冲洗至无白色浑浊，蒸馏水洗至中性；再以５％的盐酸溶液浸泡１２ｈ，蒸馏水冲洗至中性；最后用２％的ＮａＯＨ溶液浸泡１２ｈ，蒸馏水冲洗至中性，备用。

１．３．４．２吸附量、吸附率、洗脱率的测定方法准确称取经过预处理的湿树脂（滤纸吸干）质量Ｗ（ｇ），置于１５０ｍｌ具塞磨口三角瓶中，加入总酚浓度为Ｃ０的提取液体积Ｖ（ｍｌ），在一定的温度下静态吸附２４ｈ，使之达到吸附平衡。滤出树脂，ＦＣ法测定溶液中剩余多酚浓度Ｃｅ；以适当的洗脱剂在一定温度下振荡洗脱吸附多酚后的树脂，ＦＣ法测定洗脱液中总酚浓度。按照下列公式计算吸附量、吸附率、洗脱率。

吸附量Ｑ（ｍｇ／ｇ）＝［（Ｃ０－Ｃｅ）×ＶＡ］／Ｗ （１）

吸附率Ａ（％）＝［（Ｃ０－Ｃｅ）／Ｃ０］×１００ （２）

式中，Ｑ为吸附量；Ｃ０为总多酚的起始浓度；Ｃｅ为吸附平衡时总多酚浓度；ＶＡ为吸附液体积；Ｗ为树脂质量；Ａ为吸附率。

洗脱率Ｄ（％）＝ＣＤＶＤ／［（Ｃ０－Ｃｅ）×ＶＡ］×１００ （３）

式中，Ｄ为洗脱率；ＣＤ为洗脱液中总多酚浓度；ＶＤ为洗脱液体积。Ｃ０为总多酚的起始浓度；Ｃｅ为吸附平衡时总多酚浓度；ＶＡ为吸附液体积。１．３．４．３静态饱和吸附与解吸实验［８－１０］

准确称取经过预处理的１０种树脂各３．０００ｇ，置于具塞磨口三角瓶中，准确加入总多酚浓度为４７．５μｇ／ｍｌ的提取液１００ｍｌ，室温下恒温水浴吸附２４ｈ至平衡，滤出树脂并以浓度为７０％（Ｖ／Ｖ）的乙醇溶液１００ｍｌ室温振荡洗脱２ｈ，测定吸附液中剩余总多酚浓度和洗脱液中总多酚浓度，计算吸附量、吸附率、洗脱率，并以此三个指标筛选出合适的树脂。

１．３．４．４动态吸附与解吸实验［１０－１１］

准确称取３０ｇ预处理过的Ｄ４０２０树脂，湿法装柱，平衡后以１ｍｌ／ｍｉｎ流速上样，待吸附饱和后以同样流速的８０％（Ｖ／Ｖ）乙醇溶液洗脱，直至紫外检测仪上显示数据接近零。将洗脱液旋转蒸发除去乙醇，真空冷冻干燥得棕色多酚粉末，备用。

１．３．５苹果渣中多酚纯化物的抑菌活性研究１．３．５．１供试菌株的准备

将供试菌种接入相对应的试管斜面培养基上，每种菌接两支重复，细菌置３７℃恒温箱内培养１８～２４ｈ，霉菌培养４４～４８ｈ，待用。

１．３．５．２培养基的配制并制备平板

１．０

０．８０．６０．４０．２０．０

０

１

２

３

４

５

６

７

８

９

１０

Ａ７６０

单宁酸浓度（×１０－６）

图１ FC 法标准曲线Fig.1 Standard curve of FC

ｙ＝０．０９３３ｘ＋０．０１２７

Ｒ２＝０．９９９４

树脂型号提取液中总酚含量（ｍｇ）

吸附总酚量（ｍｇ）

吸附量（ｍｇ／ｇ）

吸附率（％）洗脱液中总酚含量（ｍｇ）

洗脱率（％）

ＡＢ－８４．７４６３．７７０１．２５７７９．４２．４８２６５．８ＮＫＡ－９４．７４６３．６００１．２００７５．８２．１６８６０．２ＮＫＡ－ＩＩ４．７４６３．５９４１．１９８７５．７１．８８６５１．９Ｓ－８４．７４６３．９４０１．３１３８３．０１．１８６３０．１Ｄ４０２０４．７４６３．７８３１．２６１７９．７２．７０４７１．５Ｘ－５４．７４６３．４４２１．１４７７２．５２．０８９６１．０ＬＳＡ－８００Ｂ４．７４６３．４６９１．１５６７３．１１．５１３４３．６ＸＤＡ－１４．７４６３．６７８１．２２６７７．５１．７６２４７．９ＬＳＡ－２０４．７４６３．６００１．２００７５．８１．８８０５２．２Ｄ３５２０

４．７４６

３．０２４

１．００８

６３．７

１．７６２

５８．３

表１ 10种树脂吸附、解吸性能

Table 1 Absorbing and eluting characteristics of 10 resins

配制的各种菌株的培养基，经高压蒸汽消毒灭菌，冷却至５０～６０℃，无菌操作于经干热灭菌的培养皿内，每皿约１５～２０ｍｌ，即培养皿内培养基的厚度约２～２．５ｍｍ，制备够充足数量。

１．３．５．３样品溶液的制备

准确称取０．２００ｇ　的样品粉末，水溶解后，配成０．２００％浓度的溶液，然后稀释成不同浓度溶液。１．３．５．４

供试菌株悬浮液的制备

［１２］

在超净工作台上进行无菌操作。用接种环挑取少许菌体于装有１０ｍｌ无菌水的试管中，用力振荡，制成均匀的各种菌悬浮液，浓度为１０５～１０６ＣＦＵ／ｍｌ。１．３．５．５苹果渣中多酚纯化物抑菌作用的定性实验

采用滤纸片法［１３－１４］，用无菌吸管吸取上述各种菌悬液０．５ｍｌ于平板上，然后用无菌涂布棒涂布均匀，待用。

将苹果渣中多酚纯化物配成质量浓度为０．２００％的水溶液，将直径为６ｍｍ、已杀菌烘干的滤纸圆片浸入该多酚溶液中２ｈ，捞出沥干，贴于含菌平板中同时以水做空白实验，每平板贴３片滤纸片，呈正三角形，每个圆形滤纸与相邻的滤纸或壁相隔３０ｍｍ，重复２个平板，倒置培养，细菌于３７℃培养２０ｈ，真菌２８℃培养４８ｈ，细菌２４ｈ后观察，真菌４８ｈ后观察，用游标卡尺测试培养基中抑菌圈的直径。１．３．５．６

最低抑菌浓度实验［１５］

分别研究不同浓度的样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度（ＭＩＣ），其实验操作过程与上述相同。１．３．５．７

不同ｐＨ值对苹果渣中多酚纯化物的抑菌活性

的影响实验

［１６］

以大肠杆菌为试验菌。取适量的样液分别与不同ｐＨ值的Ｎａ２ＨＰＯ４－ＫＨ２ＰＯ４缓冲体系溶液混合，使样液的最终浓度为０．１００％，制作滤纸圆片，贴于含菌平板中，每ｐＨ值重复２个平板，并以不同ｐＨ值的缓冲溶液为对照。经恒温培养２４ｈ后测定其抑菌圈直径。

１．３．５．８苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的热稳定性试

验［１６］

以大肠杆菌为供试菌，将０．１００％的样液在不同温度条件下分别处理３０ｍｉｎ后，制作滤纸圆片，贴于含菌平板中，每一处理温度重复２个平板，同时以水做空白试验。经恒温培养２４ｈ后测其抑菌圈直径。２结果与分析

２．１

总多酚测定（ＦＣ法）标准曲线

２．２苹果渣中多酚物质的提取实验

由上述实验可知，湿果渣含水率为８５％，多酚含量为７９２．０６９ｍｇ／ｋｇ（以湿重计），４４００．３２１ｍｇ／ｋｇ（以干重计），损失率为１６．１１％。２．３

静态吸附与解吸性能比较

综合分析表１可知，１０种树脂中以Ｓ－８、Ｄ４０２０、ＡＢ－８、ＸＤＡ－１、ＮＫＡ－９对苹果渣多酚的吸附率相对较高，均高于７５％；但是Ｓ－８、ＸＤＡ－１的洗脱率均低于５０％，ＮＫＡ－９和ＡＢ－８的洗脱率均低于７０％；Ｄ４０２０树脂的吸附量大，且易被解吸，因此选择Ｄ４０２０树脂为最佳的吸附分离载体，进行进一步的实验研究。２．４

苹果渣中多酚纯化物对不同菌株的抑制作用

表２ 筛选菌株实验

Table 2 Experiment of filtrating fungus

菌种 抑菌圈直径（ｍｍ）

样品对照组

大肠杆菌１３．１２６．００金葡菌１０．１０６．００青霉菌６．００６．００

啤酒酵母６．００６．００

表３ 苹果渣中多酚纯化物最低抑制浓度测定

Table 3 Minimum antimicrobial concentrations of the purified

apple polyphenols

浓度（％） 抑菌圈直径（ｍｍ）

大肠杆菌金葡菌

０．２００１３．５１１０．５６０．１５０１４．２３９．２００．１００１０．４５９．０００．０５０８．５６８．０１０．０２５８．１０７．５５０．０１５７．５０７．０１０．０１２６．００６．００

１１

１０

９

８

７

６

５

４

４５６７８９

抑

菌

圈

直

径

（

ｍ

ｍ

）

ｐＨ值

图２ 不pH值对苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的影响

Fig.2 Effects of different pH values on antimicrobial activity of

apple polyphenols purified

图３ 不同pH值的苹果渣中多酚纯化物对大肠杆菌的抑菌圈

Fig.3 Antimicrobial circles of different pH values apple

polyphenols purified against

E.coli

ｅ．ｐＨ８．０４

ｄ．ｐＨ６．９８

ｃ．ｐＨ５．１９

ａ．ｐＨ４．４９ｂ．ｐＨ５．２９

０．２００％浓度的样品对不同菌株的抑菌效果见表２。

结果表明，所选用的样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，但对试验用青霉菌、啤酒酵母无抑制作用。被抑制的细菌中既有革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）又有革兰氏阴性菌（大肠杆菌），既有球菌（金黄色葡萄球菌）又有杆菌（大肠杆菌），可见苹果多酚有着广谱的抑菌作用。

２．５苹果渣中多酚纯化物最低抑菌浓度实验

以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌，研究苹果渣中多酚纯化物的最低抑制浓度，结果见表３。

表３结果表明，苹果渣中多酚纯化物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度均为０．０１５％。

２．６ｐＨ值对苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的影响以大肠杆菌供试菌，研究不同ｐＨ值对苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的影响，结果见图２。

由图２知，ｐＨ值对苹果多酚抑菌活性的影响较大，当ｐＨ在５～６的弱酸条件下，其抑菌活性较高，而当ｐＨ值为７～８时，苹果多酚的抑菌活性较低，即随着碱性的增强，苹果多酚的抑菌活性下降。

不同ｐＨ值的苹果渣中多酚纯化物对大肠杆菌的抑菌圈见图３。图中间的白色区域是直径为６ｍｍ的滤纸圆片，其周围的环状区域是抑菌圈。图３ａ、ｂ、ｃ抑菌

圈都呈透明状，原因为苹果渣中多酚纯化物在此范围内的抑菌活性强，抑菌圈内无菌落再生长；图３ｄ、ｅ抑菌圈呈乳白色，原因为苹果渣中多酚纯化物在此范围内的抑菌活性差，在实验后期抑菌圈内原先受到抑制的菌落重新生长。２．７苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的热稳定性研究以大肠杆菌为供试菌，研究经不同温度处理的样品抑菌效果，结果见图４。

由图４可见，在低于８０℃范围内处理３０ｍｉｎ后的样品，其抑菌活性差别不大，但当温度高于８０℃时，其

１４１２１０８６４２０２０

４０

６０

８０１００

１２０

１４０

抑菌圈直径（ｍｍ）

温度（℃）

图４ 不同温度对苹果渣中多酚纯化物抑菌活性的影响

Fig.4 Effects of different temperature on antimicrobial activity

of apple polyphenols purified

抑菌活性缓慢下降，可能是高温破坏了多酚结构的缘故。参考有关文献可知，苹果多酚的抑菌活性同其结

构密切相关［１６］。由此可知，苹果多酚具有较好的常温抑菌活性。３结 论

３．１

超声波辅助乙醇提取法对苹果渣中多酚的提取总量

为７９２．０６９ｍｇ／ｋｇ　（以湿重计）、４４００．３２１ｍｇ／ｋｇ（以干重计），损失率为１６．１１％。３．２

在１０种供试树脂中，Ｄ４０２０对苹果多酚表现出良好的吸附性能与最好的解吸效果，因此选择Ｄ４０２０树脂为最佳的吸附分离载体。３．３

苹果渣中多酚纯化物对细菌有较强的抑制作用，对霉菌、酵母菌没有很明显的抑制作用，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑制质量浓度（ＭＩＣ）均为０．０１５％，菌悬液浓度均为１０５～１０６ＣＦＵ／ｍｌ。３．４

ｐＨ值影响苹果多酚的抑菌活性。当ｐＨ为５～６时，其抑菌活性较高，而当ｐＨ值为７～８时，苹果多酚的抑菌活性较低，即随着碱性的增强，苹果多酚的抑菌活性下降。３．５

苹果多酚具有较好常温抑菌活性。在低于８０℃范围内处理３０ｍｉｎ后的多酚纯化物，其抑菌活性差别不

大，但当温度高于８０℃时，其抑菌活性缓慢下降。３．６

由以上结论可知，苹果渣中多酚纯化物具有良好的抑菌活性，而我国苹果渣资源十分丰富，这一研究对于苹果渣的综合开发及新型食品添加剂的研究有较高的应用价值。

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