超声波细胞破碎仪的工作原理
超声波细胞破碎仪杀菌原理【超声波振动棒】
技术特点：
(1)空化作用在振动棒的周围产生，超声波能量非常均匀的分布槽体或圆筒周围，从而达到最佳的清洗效果。
(2)超声波振动棒的功率输出不受液位、槽体容量及温差等负载变化的影响，功率输出稳定均匀。
（3）超声波细胞破碎仪较传统的超声振板有着1.5 倍以上的使用寿命。
（4）圆管型设计可使细胞破碎仪方便的安装在槽内任何位置。（5）保证完全密封防水。
工作原理：
超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。
超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它是一种波动形式，因此它可以用于探测人体的生理及病理信息，既诊断超声。同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用,能引起生物体的功能和结构发生变化，即超声生物效应。
超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。
热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热(42-43℃)，因为正常组织的临界致死温度为45.7℃，而肿瘤组织比正常组织敏感性高，故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍，DNA、RNA、蛋白质合成受到影响，从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。
空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡，使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000℃)、高压(可达500×104Pa)，可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH 自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。
机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。
细胞破碎技术—超声波破碎
细胞破碎技术——超声波破碎法 摘要： 细胞破碎技术的基本概念及其基本方法，重点介绍了从超声波破碎仪及超声波破碎常见的问题与解决方法上介绍了超声波破碎法。 关键词：细胞破碎方法超声波破碎仪常见问题 正文： 一、细胞破碎阻力 细菌——几乎所有细菌的细胞壁都是由肽聚糖（peptidoglycan）组成，它是难溶性的聚糖链（glycan chain），借助短肽交联而成的网状结构，包围在细胞周围，使细胞具有一定的形状和强度。短肽一般由四或五个胺基酸组成，如L-丙氨醯-D-谷氨醯-L-赖氨醯-D-丙氨酸。而且短肽中常有D-胺基酸与二氨基庚二酸存在。破碎细菌的主要阻力是来自于肽聚糖的网状结构，其网结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度，如果交联程度大，则网结构就致密。 酵母菌——酵母细胞壁的最里层是由葡聚糖的细纤维组成，它构成了细胞壁的刚性骨架，使细胞具有一定的形状，覆盖在细纤维上面的是一层糖蛋白，最外层是甘露聚糖，由1,6一磷酸二酯键共价连接，形成网状结构。在该层的内部，有甘露聚糖-酶的复合物，它可以共价连接到网状结构上，也可以不连接。与细菌细胞壁一样，破碎酵母细胞壁的阻力主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度。 真菌——霉菌的细胞壁主要存在三种聚合物，葡聚糖（主要以β-1,3糖苷键连接，某些以β-1,6糖苷键连接），几丁质（以微纤维状态存在）以及糖蛋白。最外层是α-和β-葡聚糖的混合物，第2层是糖蛋白的网状结构，葡聚糖与糖蛋白结合起来，第3层主要是蛋白质，最内层主要是几丁质，几丁质的微纤维嵌入蛋白质结构中。与酵母和细菌的细胞壁一样，真菌细胞壁的强度和聚合物的网状结构有关，不仅如此，它还含有几丁质或纤维素的纤维状结构，所以强度有所提高。 植物细胞——对于已生长结束的植物细胞壁可分为初生壁和次生壁两部分。初生壁是细胞生长期形成的。次生壁是细胞停止生长后，在初生壁内部形成的结构。目前，较流行的初生细胞壁结构是由Lampert等人提出的“经纬”模型，依据这一模型，纤维素的微纤丝以平行于细胞壁平面的方向一层一层敷着在上面，同一层次上的微纤丝平行排列，而不同层次上则排列方向不同，互成一定角度，形成独立的网路，构成了细胞壁的“经”，模型中的“纬”是结构蛋白（富含羟脯氨酸的蛋白），它由细胞质分泌，垂直于细胞壁平面排列，并由异二酪氨酸交联成结构蛋白网，径向的微纤丝网和纬向的结构蛋白网之间又相互交联，构成更复杂的网路系统。半纤维素和果胶等胶体则填充在网路之中，从而使整个细胞壁既具有刚性又具有弹性。在次生壁中，纤维素和半纤维素含量比初生壁增加很多，纤维素的微纤丝排列得更紧密和有规则，而且存在木质素（酚类组分的聚合物）的沉积。因此次生壁的形成提高了细胞壁的坚硬性，使植物细胞具有很高的机械强度。 二、细胞破碎各类方法 目前已发展了多种细胞破碎方法，以便适应不同用途和不同类型的细胞壁破碎。破
超声破碎
大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。 1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。 2*破3S停10S，破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。 链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。 使用超声破碎时采用的具体条件是： (1)取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体． (2)用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL 大塑料试管内． (3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S)． (4)破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜． 超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。 在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，超5停5的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢，因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。 再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗？破碎时间长也会影响到酶的活性。所以想问问anaisai战友，你提供的“功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S”的条件好像是用于破碎链霉菌孢子的，也可以用于发酵离心后的菌泥吗？如果可以，你破碎的全程时间大概是多少呢？ 如果你需要的是胞内酶，细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断，最直接的办法是先绘制相关曲线（酶
超声波细胞破碎仪使用注意事项
超声波细胞破碎仪使用注意事项： 1 、切记空载（一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机,） 2、变幅杆（超声探头）入水深度：1.5Cm 左右，液面高度最好有30mm以上，探头要居中，不要贴壁。超声波是垂直纵波，插入太深不容易形成对流，影响破碎效率。 3、超声参数设置：设置键好仪器工作参数（具体设置见说明书或来电咨询），对于对温度要求比较敏感的样品（比如细菌）一般外面采用冰浴，实际温度肯定是低于25度，蛋白核酸肯定不会变性。 1）时间：超声时间每次最好不要超过5秒，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。 2）超声功率：不宜太大，以免样品飞溅或起泡沫，如小于10ml样品容量，功率应在200w以内,选用2mm超声探头，另将面板后面的变幅杆选择开关打到相应挡；10-200ml样品容量的功率在200－400w，选用6mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；200ml以上的样品容量功率在300-600w之间，选用10mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；（2MM的小探头功率严禁超过350W） 3）容器选择：有多少的样品就选多大的烧杯，这样也是有利样品在超声中对流，提高破碎效率。例如；20ML的处理量最好用20ML的烧杯。 如100ml大肠杆菌样品设置参数：超声5秒／间隙5秒次数70次（总时间为10分钟）。功率300W（仅供参考） 500ML左右的量，功率开到500W-800W左右 4、若样品放在1.5ml的EP管里请一定要将EP管固定好，以防冰浴融化后液面下降导致空载 5、日常保养：用完后用酒精擦洗探头或用清水进行超声！
sonics超声破碎仪使用说明
Autotune 系列高强度超声波细胞破碎仪使用说明及注意事项 800瓦特机型 一、安全注意事项: -确保超声波细胞破碎仪经过三芯插头座妥善接地。 -电源部分存在高电压，非合格技术人员不得打开机壳。 -打开机壳进行维修前拔下电源线以防止触电。 -电源部分未连接变换器时不得接通电源开关。 -探头上不得安装异物。 -除样品外不得让任何物品接触振动的探头 -不得让微端头或者说延长头在空气中振动超过10秒钟以上。 -使用微端头时，一定保持幅度在40以下（目前所装为微端头），超过40会使微端头和延长杆断裂。 -不要在螺纹端没有安装端头、延长头或者微端头的情况下开动探头。 -超过100°C的温度工作时用风冷冷却变换器。 -操作超声波细胞破碎仪时建议使用隔音罩（已配备）。 -不得随意拆卸探头、端头等机械部件，以免影响其连接造成电源控制部分失效，此外，机械部件连接不牢有可能造成共振频率的变化，影响破碎效果。-固体易于被超声波排开，应当放在大得足以容下探头，却小得足以限制样品移动的容器中。 -在每次使用前，把探头端头放在水或者酒精中并且通电源数秒以去除残余物。
按键、控制件、指示件和连接件的功能
使用步骤： 1.确认ON/OFF 电源开关置于OFF 。 2.把电源线插进电源插座。 3.检查变换器和探头或者直微端头配合表面的清洁度，以及螺杆螺孔的清洁度。检查螺杆是否拧紧。 4.用通/断开关接通电源。开关会发光并且液晶显示屏显示超声波细胞破碎仪的功率，注意事项及以下控制参数。 5. 把探头浸入到样品中约2英寸（5厘米）。如果使用微端头，则把探头浸入到样品中约1/2英寸（1厘米）。（注意：应当把探头浸入得足够深以防止空气注入样品中，并且防止气溶现象和泡沫现象。） 6. AMPL.幅度是操作该超声波细胞破碎仪时必须设定的唯一参照。对于连续工作，其它两个控制参数 TIME 和PULSE 不需要设定。 AMPL.显示由AMPLITUDE 控制钮设定的，意为最大幅度的百分比，例如 75%，按需要设定幅度。但是在使用微端头时须注意，不得超过40%。 这时液晶显示屏显示 7. 施加超声波能量请按停止施加超声波能量时请按 8. 需要设定破碎时间TIME 和PULSE 的请参阅详细说明书。 9. 用毕，把探头端头放在水或者酒精中并且通电源数秒以去除残余物。
超声波破碎细胞的常见问题
超声波破碎细胞的常见问题 大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。 在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。 1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部 0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。 2*破3S停10S，破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。 问：链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？ 答：前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。 使用超声破碎时采用的具体条件是： (1)取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体． (2)用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL大塑料试管内． (3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S)． (4)破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜． 超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，
His-GFP蛋白的纯化步骤
以His-GFP为例简述His-tag蛋白的纯化 His-tag是重组蛋白中最常用的融合标签之一。使用镍柱纯化His-tag融合蛋白的原理为：组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子，在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合，在低pH下用咪唑竞争洗脱。实验中一般选用6个组氨酸（His6-tag）的标签。His6标签有许多优点： （1）由于只有6个氨基酸，分子量很小，对蛋白结构和活性的影响较小，一般不需要酶切去除； （2）可以在变性条件下纯化蛋白，在高浓度的尿素和胍中仍能保持结合力； （3）His6标签无免疫原性，重组蛋白可直接用来注射动物，也不影响免疫学分析。 His6标签也有一些不足，如目的蛋白易形成包涵体、难以溶解、稳定性差及错误折叠等。镍柱纯化时金属镍离子容易脱落，混入蛋白溶液，不但会通过氧化破坏目的蛋白的氨基酸侧链，而且柱子也会非特异吸附蛋白质，影响纯化效果。 本实验将以His-GFP（绿色荧光蛋白）为例，阐述His-tag蛋白的纯化过程。 1. E. coli重组菌体破碎 表达完成的E. coli重组菌体，经超声或细胞破碎仪进行破碎。当需要破碎的细胞沉淀较少（＜ 1 g）时，通常在Eppendorf管中，用超声法完成细胞裂解。而当细胞沉淀较多时，可选用细胞破碎仪进行破碎。本实验采用细胞破碎仪法。 细胞破碎仪法： 称量细胞沉淀的湿重，加入细胞湿重10倍体积的裂解缓冲液。如，1 g细胞沉淀加入约10 ml的裂解缓冲液，使得细胞在溶液中的终浓度为10-15%，在此范围内细胞破碎的效果较好。过浓或过稀的细胞浓度均不利于破碎效率。裂解缓冲液的组成如下： Lysis buffer：20 mM Tris-HCl, pH 7.4 100 mM NaCl 10 mM imidazole 0.1% Triton X-100 1 × protease inhibitor 将细胞沉淀在裂解buffer中充分搅拌至没有结块后，进行高压破碎。 细胞破碎仪的使用方法：首先加水至规定线后，开压缩机，将冷却水制冷至4o C，方可
XO-650说明[数显]1(1)
本企业通过ISO9001：2008国际质量管理体系认证超声波细胞破碎仪 说 明 书 南京先欧仪器制造有限公司 地址：南京市栖霞区麦翔科技园C区 电话：025-85590003025-85590004传真：025-******** 网址：https://www.360docs.net/doc/5815758102.html, E-mail:xo@https://www.360docs.net/doc/5815758102.html,
本企业通过ISO9001：2008国际质量管理体系认证 一、概况： 我公司生产的XO系列超声波细胞粉碎机是引进国外先进技术研制而成，产品质量及性能达到国际先进水平，已通过质量技术监督局鉴定认可，部分产品已远销国外。 超声波细胞粉碎机是一种利用强超声在液体中产生空化效应，对物质进行超声处理的多功能、多用途的仪器，能用于多种动植物细胞、病毒细胞的破碎，同时可用来乳化、分离、提取、消泡、脱气、清洗及加速化学反应等等。被广泛应用于生物化学、微生物学、药物化学、表面化学、物理学、动物学、农学、制药等领域的教学、科研及生产。 二、技术参数： XO-650D型： 工作频率：20-25KHz，频率自动跟踪 超声时间设定：0.1秒—99秒（建议1-4秒） 间歇时间设定：0.1秒—99秒（建议2-8秒） 全程时间设定：0.1分—99分 超声功率：650W可调 随机变幅杆：Φ6 破碎容量：0.1—500ml 占空比:0.1-99.9% 电源:220V±5% 工作环境：室内（无潮湿，无阳光，无腐蚀性气体） 三、各种规格变幅杆的适用范围如下：★ 变幅杆型号频率功率范围破碎容量 Φ220-25KHz20-250W0.5-5ml Φ320-25KHz30-400W3-10ml Φ620-25KHz60-650W10-100ml Φ1020-25KHz100-950W100-200ml Φ1520-25KHz200-950W200-500ml Φ2020-25KHz400-1200W500-1000ml
非接触式超声波全自动破碎仪
XO非接触式超声波细胞裂解系统 主要技术参数： 型号Xianou-1500W Xianou-2500W Xianou-3500W Xianou-5000W 频率19.5-20.5KHz 19.5-20.5KHz 19.5-20.5KHz 19.5-20.5KHz 功率1500W 2500W 3500W 5000W 破碎容量（0.1-2ml）X4孔（0.1-2ml）X8孔（0.1-2ml）X16孔（0.1-2ml）X32孔占空比1-99% 1-99% 1-99% 1-99% 电源 220/110V 50Hz/60Hz 220/110V 50Hz/60Hz 220/110V 50Hz/60Hz 220/110V 50Hz/60Hz
非接触式超声波细胞裂解系统简介 非接触式超声波细胞裂解系统相比传统超声方法而言，该系统适用于具有特殊需要的反应体系，同传统接触式超声法相比在安全性、精密度、反应效率、反应边界条件和反应均匀度层面均表现突出的优势，作为样品前处理的新方法在分子生物学领域掀起了仪器行业新的革命。 该仪器用途广泛，主要针对细胞的破碎、裂解和细胞内容物颗粒的释放，以科研院所研究为例，本仪器尤其适用于腺病毒的微粒释放，制备高效价的重组腺病毒，还可以制备病毒DNA，DNA终端蛋白化合物，同时是土壤样品制备的理想仪器。已经成为CHIP（染色质免疫共沉淀）研究平台不可缺少的标准化工具。 特点： 1．无气雾浮质产生-增强生物安全性，用于无菌操作（如：分支杆菌，乙肝病毒，甲肝病毒，流感（包括H1N1），非典病毒ＳＡＲＳ)； 2．避免了样品交叉污染；非接触式打断染色体、破碎细胞； 3．消除了传统探头的手持或固定带来的操作负担，同时带有消音压紧装置； 4．可有效阻止样品泡沫的产生； 5．中文液晶显示，功率可以微调，击进方式可每次5W微调； 6．采用周期性的脉冲方式破碎细胞，脉冲的启动和终止时间可调，精确度为±0.1秒；7．可处理多种样品，样品处理范围广泛； 8．可使用标准地可抛弃式容器(PCR tubes Eppendorf, 1.5~50ml Corning/Falcon tubes)；9．可用于处理微量样品；最少至5uL； 10．根据不同仪器型号，可一次性处理4~32个样品； 11．采用自动、连续旋转离心管，使超声波的能量分布更为均匀，数据实时显示与记录,且可以重复； 12. 带冷却水循环槽，可选配低温冷却液循环机，避免了破碎过程中温度过高，影响反应的活力（如病毒的感染力）。 13.采用无损、低噪音、高性能、高品质材料的超声发生系统。 非接触式超声波细胞裂解系统优越性： 传统超声波破碎仪（Probe Sonicator），探头与样品直接接触，有金属离子污染，一次只能处理一个样品，实验周期长；对于多个样品，需要重复使用同一探头，容易造成样品交叉污染。由于每次探头插入样品的深度不用，每次超声的能量分布也不尽相同，影响实验结果的重复性和准确性。此外，由于不能采用封闭系统，在超声过程中产生的气雾或者泡沫会扩散到环境中，造成潜在的生物危险。XO非接触式超声波细胞裂解系统，一次可同时检测4-32个样品，实验效率高；无需更换操作探头，各样品均在单独的全封闭试管中，避免交叉污染；采用控温水浴，超声波能量分布均匀，超声作用完全；超声参数设置灵活，实验步骤标准化，实验重复性好，结果可靠性高。 总之，该设备主要的优点有以下： （1）多样品同时处理； （2）克服了传统法易造成污染的缺陷； （3）密闭式样品处理, 不产生感染性飞雾； （4）短时间内可获得最大的样品量；
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化 一可溶性蛋白的纯化 （一）菌体的破碎 1. 仪器与材料：-80℃冰箱；超声波细胞破碎仪；50mM PBS或50mM Tris-HCl pH 7.5；50ml 离心管；冷冻高速离心机 2. 方法 2.1反复冻融 2.1.1收集菌液500ml，等分10份，4000 r/min 4℃离心15min，弃上清。 2.1.2 菌体沉淀中加入相同菌液体积的50mM PBS 或50mM Tris-HCl（选择使蛋白稳定的缓冲液和pH）重悬洗涤一次。 2.1.3 然后按原菌液体积的1/4加入缓冲液重悬菌体，并加入蛋白酶抑制剂PMSF 和EDTA(带His标签不加)，PMSF终浓度为100μg/ml, EDTA的终浓度为。取20μl重悬菌液进行电泳，检测蛋白表达的情况（是否表达，是可溶性表达还是包涵体表达）。 2.1.4 将菌液（经检测有表达）在-80度冰冻，室温融解，反复几次（反复冻融三次），由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 2.2 超声波处理(对超声波及热敏感的蛋白慎用) 2.2.1 将反复冻融的菌液（必要时可加入1mg/ml 溶菌酶，缓冲液pH＞8.0，加入后需静置20min），进行超声破碎，超声条件：400W，工作5秒，间隔5秒，重复一定次数，（根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件）。直至菌体溶液变清澈为止，大约花费时间。 2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液，10000rpm离心10分钟，分别对上清和沉淀进行检测，并用全菌作为阳性对照，检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。 注意事项： （1）超声破碎具体条件可根据实验情况而定，要掌握好功率和每次超声时间，降低蛋白被降解的可能。 （2）功率大时，每次超声时间可缩短，不能让温度升高，应保持在4度左右，超声时保持冰浴。 （3）菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford 法或者紫外吸收法。 （4）可通过SDS-PAGE 电泳观察菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。 二包涵体蛋白的纯化 1 菌体的破碎（加溶菌酶处理包涵体效果可能不好，包涵体中总是有残留的溶菌酶，你看看有没有不加溶菌酶的，这个先保留好了） 1.1仪器与材料：超声波细胞破碎仪；20mM PBS或20mM Tris-HCl pH 7.5；裂解液buffer A；溶菌酶10mg/ml；50ml ，15ml离心管；冷冻离心机 1.2 方法 (1) 收集菌液500ml，等分10份，4000 r/min 4℃离心15min，弃上清。
超声波细胞破碎仪使用注意事项
欧诺仪器 超声波细胞破碎仪使用注意事项： 1 、切记空载（一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机,） 2、变幅杆（超声探头）入水深度：1.5Cm 左右，液面高度最好有30mm以上，探头要居中，不要贴壁。超声波是垂直纵波，插入太深不容易形成对流，影响破碎效率。 3、超声参数设置：设置键好仪器工作参数（具体设置见说明书或来电咨询），对于对温度要求比较敏感的样品（比如细菌）一般外面采用冰浴，实际温度肯定是低于25度，蛋白核酸肯定不会变性。 1）时间：超声时间每次最好不要超过5秒，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。 2）超声功率：不宜太大，以免样品飞溅或起泡沫，如小于10ml样品容量，功率应在200w以内,选用2mm超声探头，另将面板后面的变幅杆选择开关打到相应挡；10-200ml样品容量的功率在200－400w，选用6mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；200ml以上的样品容量功率在300-600w之间，选用10mm超声探头，另将面板后面的变幅杆打到相应挡；（2MM的小探头功率严禁超过350W） 3）容器选择：有多少的样品就选多大的烧杯，这样也是有利样品在超声中对流，提高破碎效率。例如；20ML 的处理量最好用20ML的烧杯。如100ml大肠杆菌样品设置参数：超声5秒／间隙5秒次数70次（总时间为10分钟）。功率300W（仅供参考）500ML左右的量，功率开到500W-800W左右 4、若样品放在1.5ml的EP管里请一定要将EP管固定好，以防冰浴融化后液面下降导致空载 5、日常保养：用完后用酒精擦洗探头或用清水进行超声. 创新优质超值诚信
细菌裂解-蛋白质表达的关键性步骤说明
细菌裂解-蛋白质表达的关键性步骤说明 关于包涵体蛋白质的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括包括：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化。此次介绍菌体的破碎相关知识。 菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 2.玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。 3.超声波处理法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，在1KG至10KG频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施，时间以及超声间歇时间、超声时间可以自己调整，超声完全了菌液应该变清亮，如果不放心可以在显微镜下观察。对超声波及热敏感的蛋白和核酸应慎用。 4.反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 5.化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好，我用的浓度一般为1mg/ml。 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且应该在破碎的同时多加几次；另外，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。 这是标准配方: 裂解液：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 但我个人的经验是:如果你裂解细菌是为了提取蛋白的话,而且蛋白的分子量又小于20kd的话,尽量减少溶菌酶的用量,会引入溶菌酶这种杂蛋白.一般配60ml裂解液用药匙匙柄盛一点就够.判断裂解好坏的标 准是,溶液很粘. protocol是10ml-50ml缓冲液(菌体洗涤液,裂解液等)/1g湿菌体. 如果只做一个鉴定,我觉得100-200ml菌就够了. 但凡超声,我都用60ml裂解液,因为我们的超声仪(现代分子生物学实验技术录象里的那种)很适合用100ml小烧杯,装60ml裂解液,这样能让超声头离液面不高不低,不会冒泡泡,也不会洒出来.菌多我就延长超声时间. 沉淀,也就是包涵体沉淀了,如果要上柱纯化,一定要先用4M尿素洗涤一下再用8M尿素溶解.如果不上柱,只是跑跑电泳,可以直接用8M尿素溶解以后,离心取上清,加入适量体积的loading buffer.loading buffer 对于包涵体的溶解能力是较弱的.
实验8 超声波细胞破碎机在生物工程中的应用
实验八超声波细胞破碎机在生物工程中的应用 一、实验目的 学习超声波细胞破碎仪在不同细胞破碎中的应用。 二、原理 超声波细胞破碎仪就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。 三、主要结构 包括超声波发生器、换能器和隔音箱等。 四、工作参数 包括超声时间、间隙时间、超声功率、保护温度等。 五、细胞超声破碎具体应用 1、大肠杆菌的超声破碎（革兰氏阴性菌） 大肠杆菌发酵后，经过离心收集菌体，菌体用磷酸盐缓冲液PBS按1：10的比例进行重悬菌体，冰浴。设定超声破碎仪的参数，超声功率700W，超声时间5s，间隙时间5s，全程时间25min，保护温度20℃，超声结束后，离心，取上清或沉淀进行后续实验。 2、芽孢杆菌的超声破碎（革兰氏阳性菌） 一般在缓冲液中加入溶菌酶以促进细胞的裂解。 3、酵母菌的超声破碎（大肠杆菌的超声破碎方法对酵母处理效果不好） 超声功率900W，超声时间5s，间隔时间5s，全程时间20-30分钟。操作时先取1克左右（湿重）离心收集的菌体，加10毫升裂解液（强裂解液或蜗牛酶），混匀后即可开始。超声结束后，离心，取上清进行后续实验。 六、超声波破碎仪的使用注意事项 1 、切记空载（一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机）。 2、变幅杆（超声探头）入水深度：1.5cm左右，液面高度最好有30mm以上，探头要居中，不要贴壁。超声波是垂直纵波，插入太深不容易形成对流，影响破碎效率。 3、超声参数设置：设置键好仪器工作参数，对于对温度要求比较敏感的样品（比如细菌）一般外面采用冰浴，实际温度肯定是低于25度，蛋白核酸肯定不会变性。 4、时间：超声时间每次最好不要超过5秒，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多为原则，可延长超声机子以及探头的寿命。 七、课后思考； 1、为什么革兰氏阴性菌的超声破碎效果比阳性菌要明显，而酵母菌破碎效果不明显呢？ 答：因为阴性菌的细胞壁比阳性菌的薄，所以容易进行细胞破碎，其效果就好；但是，酵母菌是真菌，因为其细胞壁和原生质膜令酵母菌在超声波破碎中的效果很不明显。 2、细菌超声破碎加入溶菌酶的目的是什么？超声破碎时为什么要冰浴？
细胞破碎仪说明书
使用及操作方法 本仪器的工作状态完全由按键设定，仪器的功能状态方式（菜单）及设定参数均在液晶 显示屏上显示。 1 按键功能说明 本仪器共有6个按键，分别是选项、确定、↑、↓、启/停和开/关，如上图所示。其中，选项键为返回键，按此键可返回上一级菜单。确定键为选择确认键，在您选择好某菜单后，只要你认为内容准确无误，便可启用该键确认下来。↑和↓键具有两项功能，一是用于光标的上、下移动，二是用于仪器参数的调整；按动上述某一键，即可移动光标或修改参数。启/停是启动键和停止键，用于控制仪器的启动和停止；在完成仪器的参数设定后，按下此键，仪器开始工作；在运行过程中按下此键，仪器将会停止工作。开/关是电源开关键，用于控制电源的通断，特别提示：为防止机器误开关，开机或关机时需要按下开/关键30秒。 2 仪器操作方法 1、接通电源，按下开/关键，仪器显示如下图，进入初始化自检状态。 2、仪器自检结束后，进入主菜单，用户可以根据需要选择工作方式，屏幕显示如下。
3、按下↓键向下移动光标至专家模式，然后按下确定键进入专家模式，屏幕显示如下。 4、根据待裂解样本的类型，通过↑、↓和确定键来选择对应的程序，仪器所有参数均已由程序设定完毕，按程序要求放入研磨球，然后按下启/停键即可运行仪器。 5、按选项键可以逐级返回，最后通过↑、↓和确定键进入自选模式，自选模式下又分成固定模式和程控模式，屏幕显示如下图。 6、在固定模式下，允许用户对转速和时间进行设定；通过↑和↓键可以调整速率，范围是2000~4500次；然后按下确定键，再通过↑和↓键调整时间，具体范围为1~30min。 7、在程控模式下，允许用户对速率、破碎时间、间隔时间和循环次数进行设定，屏幕显示如下图所示。
超声破碎仪使用说明
使用说明： 1.旋转功率调节旋钮以调节输出功率大小；间隙时间和超声时间由超声时间设定旋钮 来调节，总工作时间由总时间设定置数码开关来设置。设置好后，按工作复位键进入超声工作； 2.按样品量的多少选择适当的容器（试管或各种烧杯及离心管），固定或安放好后，调 节振动系统位置，使变幅杆末端插入样品液面10-15mm并使其在容器的中心位置，不得让变幅杆与容器相接触。变幅杆末端离容器一般应大于30mm。量少时，功率开得较小的情况下可小于30mm； 3.将功率调节旋钮向逆时针方向转至最小位置，工作时间、超声时间和间隙时间调至 所需的合适时间（一般工作时间不宜开的过长，且间隙时间应大于工作时间）。上述准备就绪即可按电源开关开机，再按一次保护复位按钮及工作复位按钮，待设定的间隙时间过后即可进入振荡状态，显示屏开始显示工作时间，将功率调节旋钮慢慢向顺时针方向转动，调至所需的功率位置上，以达到理想的工作效果，待设定的工作时间过后，时间显示窗所设定的总时间。仪器处于停振状态，如需重复上述实验，可按工作复位键，如不需要重复，应关机并切断电源。 4.如在工作是保护指示灯亮（在保护复位键上），说明仪器的功率开得过大而进入保护 状态。减少功率，按一次保护复位键及工作复位键，即开始工作； 5.调换探头时，按探头的规格，相应调节变幅杆选择开关（机箱背面）；
注意事项 1.严禁在变幅杆未插入液体内（空载）时开机，否则会损坏换能器或超声波发生器； 2.换能器在支架上要固定牢靠，防止从立柱上突然下滑，变幅杆末端切勿碰撞，防止变形 或损伤； 3.对各种细胞量的多少、时间长短和功率大小，有待用户根据各种不同介质摸索确定，选 取最佳值； 4.用一定时间后变幅杆末端会被空化腐蚀而发毛，可用油石或细什景锉刀锉平，否则会影 响工作效果； 5.功率表显示的数值与电压、变幅杆插入页面深度及负载（被破碎样品的浓度、稠度）有 关，电源电压低于220V，变幅杆插入液面深，负载浓度太浓，显示数值可能要稍小； 反之稍高。此数据为模拟参数，它的大小不影响超声波发射的实际功率； 6.本机不需预热，使用应有良好的接地； 7.在超声破碎时，由于超声波在液体中起空化效应，使液体温度会很快升高，用户对各种 细胞的温度要多加注意，建议采用短时间（每次不超过5秒）的多次破碎，同时可外加冰浴冷却； 8.本机采用无工频变压器的开关电源，在打开发生器机壳切勿乱摸，以防触电； 9.本机安放在干燥处，不可放置于潮湿、高温、灰尘较多及有腐蚀性气体等地方； 10.实验表明：短时间的多次工作比连续长时间的效果要好，为防止液体发热，可设定较长 的间隙时间。另外，不间断长时间工作容易造成空载，缩短仪器的使用寿命。
超声破碎细胞问题汇总
超声破碎细胞问题汇总 2008年12月11日星期四 15:31 大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以. 在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。？ 1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。 2*破3S停10S，破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。 链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？ 前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。 使用超声破碎时采用的具体条件是： (1)取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体．(2)用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40 mL大塑料试管内．(3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S)．(4)破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜． 超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。 放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。 在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，超5停5的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢，因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。
超声波破碎仪操作规程
1.目的 规范超声波细胞粉碎仪的使用、维护与保养。 2.范围 3.职责 使用人员对本规程的实施负责，部门负责人监督实施。 4.规程 4.1安装 4.1.1搬运时应从底部抬起，倾斜面不可大于45度，轻搬轻放。 4.1.2将超声波发生器和隔音箱放在平稳，无振动的实验台面上，将变幅杆从隔音箱上部的 孔内插入，轻轻放下，接通电源。 4.2使用 4.2.1按样品量的多少选择适当的容器（试管或各种烧杯及离心管），固定或按放好后，调 节振动系统位置，使变幅杆末端插入样品液面10-15mm并使其在容器的中心位置，不得让变幅杆与容器相接触。变幅杆末端离容器底部一般应大于30mm。 4.2.2打开超声波发生器背后右下方的电源键，超声波发生器的液晶显示屏上会出现不停闪 烁的变幅杆参数，按下∧或∨键，设定所需变幅大小，按下确定键。 4.2.3进入设置界面，变幅杆参数不停闪烁，按下确定键即可。按下“设置键”，“时间” 参数会不停闪烁，按下∧或∨键，设置所需时间。 4.2.4时间设置好后，再按“设置键”，可以设置“超声开”的时间，按下∧或∨键，设置 所需时间。 4.2.5再按“设置键”，可以设置“超声关”的时间，按下∧或∨键，设置所需时间。4.2.6再按“设置键”，可以设置“功率”大小，按下∧或∨键，设置所需功率。 4.2.7按下键，超声开始。 4.3清洁、维护与保养 4.3.1清洁： 4.3.1.1清洁前断开电源。 4.3.1.2用湿温软布擦超声波细胞破碎仪的内外表面；污脏严重时，可用洗涤食具用的中性洗 涤剂擦拭，然后用洗净的软布擦净水渍。 4.3.1.3每次超声破碎完样品后，用20%的乙醇清洗变幅杆探头，擦干净。 4.4注意事项 4.4.1严禁在变幅杆未插入液体内（空载）时开机，否则会损坏换能器或超声波发生器。4.4.2对各种细胞量的多少，时间长短，功率大小，有待用户根据各种不同介质摸索确定， 选取最佳值。 4.4.3用一定时间后变幅杆末端会被空化腐蚀而发毛，可用油石或细什景锉刀锉平，否则会 影响工作效果。
细胞破碎
细胞破碎-------综述 摘要：细胞破碎，细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不相同，如动物脏器的细胞膜较脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁 细胞破碎方法有：高压匀浆破碎法振荡珠击破碎法高速搅拌珠研磨破碎法超声波破碎法渗透压冲击破碎法酶溶破碎法等等，这篇综述主要讲的是超声波破碎法。 关键词：细胞破碎超声波破碎法原理应用超声波细胞破碎仪又叫超声波细胞粉碎仪是一种利用强超声在液体中产生空化效应，对物质进行超声处理的多功能、多用途的仪器。能用于多种动植物细胞、病毒细胞的破碎，同时超声波细胞破碎仪可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡、清洗及加速化学反应等。 仪器原理： 超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它是一种波动形式，因此它可以用于探测人体的生理及病理信息，既诊断超声。同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用,能引起生物体的功能和结构发生变化，即超声生物效应。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42-43℃），因为正常组织的临界致死温度为45.7℃，而肿瘤组织比正常组织敏感性高，故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍，DNA、RNA、蛋白质合成受到影响，从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡，使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。 结构特点： ●超声探头采用进口钛合金材质 ●高能效换能器结构图片[1] ●振幅自动调节，在不同的负载状况时振幅保持一致 ●设置超声间歇时间
超声波细胞破碎仪操作规程
1、目的 规范实验室超声波细胞破碎仪的操作维护方法，保证实验检测的有效性。 2、适用范围： 适用于实验室超声波细胞破碎仪的使用和维护。 3、职责 分子生物学实验室PCR检测岗位人员必须熟练掌握超声波细胞破碎仪的使用方法，并定期做好维护保养和状态检查工作。 4、作业程序 4.1操作规程 4.1.1确认ON/OFF电源开关置于ON。 4.1.2把电源线插进电源插座。 4.1.3如果使用选配的脚踏开关，把插头插入后面板上的插座中。确认插头插牢和插到位。 4.1.4检查变换器和探头或者直微端头配合表面的清洁度，以及螺杆螺孔的清洁度。检查螺杆是否拧紧。 4.1.5用手把探头或者直微端头组件（由连接器和直端头组成）组装到变换器上，用随机附送的搬手拧牢靠 4.1.6向探头上固定可更换端头、延长器或者锥形的微端头使用活搬子或者花搬子. 4.1.7把变换器电缆连接到电源单元上。 4.1.8把变换器、探头组件安装在实验室支架上。只把夹具固定到1/2英寸（63毫米）直径的变换器壳上。不要把夹具固定到变换器/探头组件的其它部分上 4.2 维护保养规程 4.2.1如果探头必须与固体样品接触，请使用切成70毫米长的20毫米直径不锈钢管。不要用玻璃管. 4.2.2微端头只能与液接触，不得与其它物体接触 4.2.3在每次使用前，把探头端头放在水或者酒精中并且通电源数秒以去除
残余物 4.2.4探头可以用高压蒸锅消毒，也可以浸入开水中消毒，也可以用消毒灭菌剂消毒. 4.2.5不得把锥形微端头用在连接器上。没有连接器不要用直端头。在处理低表面张力液体时不得使用带螺纹端和可更换的端头的探头.