猪、鸡白细胞干扰素

【兽药名称】

通用名：猪白细胞干扰素

商品名：复合型猪白细胞干扰素冻干粉

英文名：lyophilized powder of compound leukocyte interferon

汉语拼音名：Fuhexing Zhubaixibao Ganraosu Dongganfen

【主要成分】猪白细胞干扰素

【性状】本品为类白色粉末。

【药理作用】

1、抗病毒作用。干扰素作用于易感细胞，形成抗病毒蛋白，从而发挥抗病毒作用。已知抗病毒蛋白至少有3种：蛋白激酶、磷酸二脂酶和2-5A合成酶，前2种能破坏细胞核糖体转译病毒蛋白质，后一种酶能降解mRNA，有的抗病毒蛋白还能抑制转录酶，阻止mRNA的形成，还有的能抑制病毒DNA和RNA的合成。干扰素是机体抗病毒感染的细胞中产生的，虽然不能直接抑制感染细胞中的病毒复制，但可释放至周围细胞中，刺激这些细胞产生抗病毒蛋白质，阻止病毒增殖。在发生病毒血症数小时后，血清中即出现干扰素，并很快循环至靶细胞，抑制病毒增殖，防止病毒扩散。在恢复过程中，局部聚集大量淋巴细胞，产生α-型和γ-型干扰素参与细胞免疫，同体液免疫共同发挥作用。

2、免疫调节作用。大量实验证明，干扰素对整个机体的免疫功能包括免疫监视、免疫防卫、免疫稳定等均有不同程度的调节作用。随着所用干扰素剂量的不同，对免疫呈现不同的作用。较大剂量的干扰素如107单位，在细胞免疫方面能抑制T细胞增殖，主要是DNA合成受阻；影响迟发性变态反应及异体组织排斥反应的发生；在体液免疫方面，可抑制初次抗体反应和再次抗体反应，即可抑制IgM也可抑制IgG的合成，还可抑制IgE的合成与释放。较小剂量的干扰素对T、B细胞的功能明显增加，如用200-800u/ml干扰素处理T细胞时，可使T细胞的功能明显增加，用1000-2000u/ml干扰素处理“低反应”的B细胞时，可使形成抗体的细胞增加。【适应症】主治猪无名高热、蓝耳病、流行性腹泻、传染性胃肠炎、流行性感冒、肺炎、伪狂犬病和细小病毒等病毒病。

【用法与用量】每瓶用适量生理盐水稀释，溶解摇匀后肌肉注射。乳猪40头/瓶仔猪20头/瓶育肥猪10头/瓶，连用3-5天。

【不良反应】无。

1. 本品宜低温保存，4-8℃，有效期18个月；-20℃，2年；

2. 请勿与活疫苗同时使用；

3. 第1次吸取药液后，剩余部分贮存于4℃，24h内用完。【休药期】无

【规格】100万单位/瓶

【包装】 10瓶/盒×12盒/箱

【贮藏】低温保存。

【兽药名称】

通用名：鸡白细胞干扰素

商品名：复合型鸡白细胞干扰素冻干粉

英文名：lyophilized powder of compound leukocyte interferon

汉语拼音名：Fuhexing Jibaixibao Ganraosu Dongganfen

主要成分：鸡白细胞干扰素

【性状】本品为类白色粉末。

【药理作用】

2、免疫调节作用。大量实验证明，干扰素对整个机体的免疫功能包括免疫监视、免疫防卫、免疫稳定等均有不同程度的调节作用。随着所用干扰素剂量的不同，对免疫呈现不同的作用。较大剂量的干扰素如107单位，在细胞免疫方面能抑制T细胞增殖，主要是DNA合成受阻；影响迟发性变态反应及异体组织排斥反应的发生；在体液免疫方面，可抑制初次抗体反应和再次抗体反应，即可抑制IgM也可抑制IgG的合成，还可抑制IgE的合成与释放。较小剂量的干扰素对T、B细胞的功能明显增加，如用200-800u/ml干扰素处理T细胞时，可使T细胞的功能明显增加，用1000-2000u/ml干扰素处理“低反应”的B细胞时，可使形成抗体的细胞增加。【适应症】主治禽温和型流感、新城疫、传染性法氏囊、传染性支气管炎、传染性喉气管炎等病毒病。

【用法与用量】肌肉注射用适量生理盐水稀释雏鸡1200羽/瓶成鸡600羽/瓶，连用3-5天。

【不良反应】无。

1. 本品宜低温保存，4-8℃，有效期18个月；-20℃，2年；

2. 请勿与活疫苗同时使用；

3. 第1次吸取药液后，剩余部分贮存于4℃，24h内用完。【休药期】无

【规格】100万单位/瓶

【包装】 10瓶/盒×12盒/箱

【贮藏】低温保存。

猪干扰素研制及应用

猪干扰素基因在腺病毒的表达及应用崔尚金（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室, 黑龙江哈尔滨 150001）多年来，疫苗免疫接种一直是一种预防大范围传染病爆发的最为有效的措施之一。目前被广泛用来进行免疫控制传染病以及自身免疫病和癌症等疾病的治疗。免疫接种的优点是促使先天性免疫细胞产生免疫记忆细胞，从而使机体针对特定的病原体产生持久的免疫保护。疫苗接种不仅可以通过注射灭活苗或弱毒苗实现，还可以通过注射亚单位疫苗(如纯化的类毒素)实现，也可以由其它方式将抗原呈递给免疫系统。尽管疫苗接种非常成功，但免疫失败也时常出现（例如猪瘟疫苗），而且屡见不鲜，具体原因尚未明确。有些疫苗能够提供短期保护，不能使机体产生免疫记忆；有些疫苗能够使机体产生免疫记忆，但却不能使机体针对抗原产生有效的免疫保护。强烈的免疫反应并不不一定保证形成保护性免疫。例如，呼吸道的感染可以导致保护性免疫失效，而且现在形成了很多综合症，如猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖综合症病毒等都是以综合征来危害动物机体。从疫苗开发的角度来看，在没有保护性免疫的干扰下，产生稳固的免疫应答的感染是一个非常有前景的研究领域。在免疫学领域，一些新的、功能强大的研究工具已经开始广泛使用，这主要归功于在宿主与病原体相互作用方面得到了新的见解，并进一步理解了以细胞和分子为基础的保护性免疫。保护性免疫应答不仅仅是抗原特异性的结果，更是体内环境各种因素、各种因子相互作用、相互影响的综合结果。因此，疫苗开发的重点应当从目前只考虑抗原特异性向抗原特异性和体内环境综合考虑转变，这必定是今后发展的新方向，也是目前大家对自然免疫、天然免疫研究非常火热的最重要的原因之一。新知识和新技术的获得必将使研究人员按照新的方式改造疫苗和体内环境综合考虑来对抗传染病，从而研制更为有效、更容易形成具有选择性保护和持久性的免疫记忆的新的免疫疫苗及相关产品。其中，干扰素作为研究的非常彻底的一种细胞因子，起到了很好的疗效，本文主要介绍猪I型干扰素。 1957 年 Isaac 和 Lindenman 进行鸡胚细胞流感病毒感染试验中首次发现一类能干扰和抑制病毒复制的可溶性细胞分泌物，故取名为干扰素（ interferon Wheelock 与 Green 分别于 1965 年和 1969 年相继发现免疫活性细胞经丝裂原或抗原刺激后，发生一类对酸敏感的干扰素，称为免疫干扰素。目前依据干扰素对酸的敏感性通常分为 I 型干扰素（酸敏感型）和 II 型干扰素（耐酸型）两类。几乎所有脊椎动物均可产生这两类干扰素，根据发生干扰素细胞种类不同，I 型干扰素至今已发现 INF- α、β、ω、κ、τ、δ等 6 种类型，而 II 型干扰素迄今为止仅发现 INF- γ一种（ Domeika, 2003 由于干扰素具广谱、高效抗病毒功能，及其对免疫系统起关键调节作用，因此成为当今免疫学、遗传学和分子生物学研究最为活跃的领域之一。 1、细胞因子及干扰素概念细胞因子是由机体各种细胞合成分泌的具有多种生理活性和参与病理反应的小分子可溶性蛋白质。

基因工程重组人干扰素概述(

根据来源、基因序列和氨基酸组成分类 I 型干扰素： IFNα、IFNβ、IFN τ、IFN ω 来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等功能：抗病毒感染、抗肿瘤生长免疫调节(较弱）其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。 II 型干扰素：干扰素γ（IFN ) 来源：活化的T细胞和NK细胞产生功能：免疫调节提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答趋化作用抗病毒和抗肿瘤作用（次要）

2. 根据动物来源确定分类，例如人干扰素（HuIFN），小鼠干扰素（MuIFN）。免疫调节作用表现在对宿主免疫细胞活性的影响，如对巨噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞等均有一定作用。 ●对巨噬细胞的作用：IFNγ可使巨噬细胞表面MHCⅡ类分子的表达增加，增强其抗原递呈能力；此外还能增强巨噬细胞表面表达Fc 受体，促进巨噬细胞吞噬免疫复合物、抗体包被的病原体和肿瘤细胞。 ●对淋巴细胞的作用：干扰素对淋巴细胞的作用较为复杂，可受剂量和时间等因素的影响而产生不同的效应。在抗原致敏之前使用大剂量干扰素或将干扰素与抗原同时投入会产生明显的免疫抑制作用；而低剂量干扰素或在抗原致敏之后加入干扰素则能产生免疫增强的效果。在适宜的条件下，IFNγ对B细胞和CD8+T细胞的分化有促进作用，但不能促进其增殖。IFNγ能增强TH1细胞的活性，增强细胞免疫功能；但对TH2细胞的增殖有抑制作用，因此抑制体液免疫功能。IFNγ不仅抑制TH2细胞产生IL-4，而且抑制IL-4对B细胞的作用，特别是抑制B细胞生成IgE。 ●对其它细胞的作用：IFNγ对其他细胞也有广泛影响：①刺激中性粒细胞，增强其吞噬能力；②活化NK细胞，增强其细胞毒作用；

干扰素

干扰素抗病毒研究进展摘要: 干扰素（IFN）是一种广谱感病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性 IFN具有毒副作用小，高剂量仅有一般生物制剂的常见反应，抗原性弱，可反复应用等优点。随着IFN基因工程产品在临床上的推广应用，将大大提高病毒性疾病的治疗效果，具有广阔的应用。关键词：干扰素；抗病毒活性；抗肿瘤免疫;生物学特性； 1 干扰素的分类和生物学活性 IFN蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性[2]分为3型，即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素，Ⅰ型包括IFN-α、β、ω、ε、κ [3]、δ、τ、δ[4]等，但IFN-δ、τ、δ只在猪、牛、反刍动物和鼠体内检测到，在哺乳动物中IFN-α/β是多基因家族，IFN-α包括25个以上的亚型[5]。Ⅱ型干扰素由单基因家族IFN-γ构成，又称为免疫干扰素。Ⅲ型干扰素是一种新发现的细胞因子，与Ⅰ型干扰素关系密切，称为IFN-λ[6-7]，研究认为Ⅲ型干扰素有特殊的生理学功能[8]。干扰素本身并非直接抗病毒物质，其抗病毒作用体现在多方面。IFN对于病毒复制的任何阶段都具有靶向作用，包括穿入、转录、RNA稳定性、翻译起始、成熟、装配和释放过程。 2 干扰素的研究意义

近年来，国际反病毒和抗癌研究领域，在自然免疫调节和抗病毒物质，作为一种天然抗病毒蛋白质干扰素人类开发更多的关注。干扰素将成为一个21世纪的反病毒，防癌，其中最广泛使用的药物之一。α-干扰素治疗慢性乙型肝炎是目前抗病毒药物的第一选择是，对肝炎的药物治疗总有效率约为20％-30％。慢性肝炎的药物干扰素代表发展方向。它是唯一的C型肝炎病毒的药物有效的治疗，它是最广泛的肿瘤细胞因子的临床治疗。病毒性皮肤病，慢性宫颈炎，呼吸道病毒感染和妇科疾病，丘疹皮疹，造血系统恶性肿瘤，淋巴瘤，其主要标志。β-干扰素治疗多发性硬化症复发静脉使用。主要γ-干扰素治疗类风湿关节炎。γ-干扰素的免疫功能比α，β-干扰素强1000倍，不仅能增强机体免疫功能，自身免疫性疾病，还可以调整过渡到接近正常水平的免疫力。干扰素还用于生殖器衣原体感染，膀胱癌，生殖器疣，皮肤疾病，血液病，艾滋病相关综合征的治疗。世界上许多国家已批准生产和使用基因重组干扰素制剂为许多疾病的治疗。治疗后的临床应用表明，通常不严重的副作用，干扰素治疗，临床适应症正在不断发展扩大了干扰素的新用途 3.干扰素的生物学特性研究表明，IFN生物学活性的发挥有赖于诱导的多种效应蛋白质的合成，其并不直接作为反应作用因子对其效应分子的基因组进行调控，而是通过受体介导的信号转导系统引发一系列特定的生化反应，最终达到效应分子表达的目的，而且IFN具有很强的活性，其活性呈多样性。 3.1抗病毒作用 IFN 、IFN—B、IFN 均有抗病毒作用一。动物试验证明，抗病毒活性远较I型低，和IFN—p能相互加强抗病毒作用。干扰素抗病毒具有广谱性，但它对细胞抗病毒作用是间接的，而且是非特异性的。当干扰素与细胞表面的干扰素受体结合后，可诱导细胞内产生有酶活性的抗病毒蛋白(AndviralProtein，AVP)。已知的AVP至少有三种：蛋白激酶，磷酸二脂酶和2～5腺酸合成酶，前两种能破坏

干扰素基础知识

干扰素干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。目录：一、干扰素二、干扰素简介三、干扰素多少钱四、发现五、什么叫干扰素（IFN）六、品种及价位七、作用机制 ①间接性 ②广谱性 ③种属特异性 ④发挥作用迅速八、分类九、干扰素制剂如何分类十、临床上常用的干扰素有哪些制剂

1自然干扰素 2人体白细胞重组干扰素 3复合干扰素十一、干扰素适应症十二、干扰素有哪些不良反应十三、如何应对干扰素的不良反应十四、干扰素研究、应用历程十五、病毒的克星——干扰素十六、哪些人不宜使用干扰素治疗十七、什么是长效干扰素十八、普通干扰素和长效干扰素的区别十九、干扰素治疗的禁忌证二十、用途及用法二十一、干扰素治疗乙肝效果一、干扰素药物类别：抗肿瘤药，抗病毒药；所属类别：生物反应调节剂药物名称：干扰素英文名称：Interferon 药物别名：序号中文别名英文别名一．α干扰素制剂/规格：序号制剂规格 1．注射剂5×10。单位（1 ml）；1×106。单位（1 ml）； 2．冻干剂l×10。单位

成份/化学结构：序号成份化学结构药理作用：1.抗病毒作用：其抗病毒活性不是杀灭而是抑制病毒，它一般为广谱病毒抑制剂，对RNA和DNA病毒都有抑制作用。当病毒感染的恢复期可见干扰素的存在，另一方面用外源性干扰素亦可缓解感染。 2．抑制细胞增殖干扰素抑制细胞分裂的活性有明显的选择性，对肿瘤细胞的活性比正常细胞大500～1000倍。干扰素抗肿瘤效果可以是直接抑制肿瘤细胞增殖，或通过宿主机体的免疫防御机制限制肿瘤的生长。 3．诱导细胞凋亡：干扰素可以诱导肿瘤细胞凋亡，从而杀灭肿瘤细胞。 4.干扰素对体液免疫、细胞免疫均有免疫调节作用，对巨噬细胞及NK细胞也有一定的免疫增强作用。药动学：干扰素在肌内注射或皮下注射后入血的速度较慢，需较长时间才能在血中测到。肌内注射后Tmax为5～8小时。一次肌注：106单位，血清浓度为100单位/ml，这比在病毒感染时自然产生的干扰素量为高。循环中的干扰素半衰期为2～4小时。只有少量干扰素能进入血脑屏障，脑脊液内的浓度约为血内浓度的l/30，只有在兔身上研究过排泄，排出量只有0.2%～2.0%。适应症：1.用于多种恶性肿瘤，包括毛细胞白血病、慢性白血病、非何淋巴瘤、骨髓瘤、膀胱癌、卵巢癌、晚期转移性肾癌及胰腺恶性内分泌肿瘤、黑色素瘤和Kaposi 肉瘤等。 2．与其他抗肿瘤药物并用。 3．作为放疗、化疗及手术的辅助治疗剂。 4．病毒性疾病的防治。用法用量：

原核蛋白表达常见问题解析

原核蛋白表达常见问题解析 1、为什么目的蛋白总是以包涵体的形式出现？在原核蛋白表达纯化中目的蛋白经常发生错误的折叠，并聚集成为包涵体。经过诱导，目的蛋白通常可达细胞总蛋白的50%以上。虽然有一定比例的蛋白以可溶的单体形式存在，而多达95%（甚至更多）的蛋白则在包涵体中。实验过程中，可以采取降低诱导温度，例如25–30°C，或降低IPTG浓度(0.01–0.1mM)并延长诱导时间，还有采用特别的培养基等方法获得更多的可溶蛋白。 2、跨膜蛋白为什么很难表达？跨膜蛋白的表达成功率相对较低是一个实验结果，究其原理，目前众说纷纭很多种理论。以我们浅薄的理解层面来看，主要有以下几个原因：跨膜蛋白一般都是强疏水性的氨基酸分子和亲水性的分子跳跃式的连接，形成的亲水疏水的一个最简单的跨膜化学结构，这种结构与信号肽结构相似，对于原核细胞来说，简单的细胞器很难像真核细胞一样完成信号肽识别及切除、引导内质网、高尔基体重新包装及分泌这一复杂过程，有些蛋白是多次跨膜，对于原核细胞来说几乎是不可能完成的任务。另外，对于疏水性的片段，在原核细胞中极易形成包涵体，疏水性多肽会抑制翻译过程，甚至与原核膜结构融合形成毒性，出于生物自我保护的本能，所有的细胞器都会停止合成蛋白的过程。 3、如何选择蛋白表达宿主菌？

4、我们有哪些原核蛋白纯化方式？如何选择不同的纯化方式？答：我们公司的蛋白纯化方法大致分为亲和纯化、离子交换、切胶回收三类。 1、常规情况下，一般携带融合标签（His标签，GST标签，sumo标签，Fc标签），我们可以通过Ni柱、GST柱、Protein A等进行亲和纯化获得融合蛋白，用亲和纯化的方法一般可以获得85%以上纯度的蛋白，亲和纯化的方便快捷。 2、如果需要目的蛋白不含有任何标签，怎么选择纯化方式？。（1）可表达融合蛋白，用蛋白工具酶切割融合蛋白，再进行纯化除去工具酶。此方法能快速得到蛋白。（2）可表达不含标签的蛋白，进行离子、分子筛、疏水等纯化，通过AKATA纯化设备获得蛋白。 3、如果需要获得蛋白作为抗原，可以直接通过切胶回收的方式，此方法获得蛋白纯度较高，进行免疫动物后得到的抗体进行WB反应，灵敏度较高。 5、表达得到的蛋白是有活性的么？答：需要让蛋白有活性的条件很复杂，合适的缓冲液体系、盐浓度、蛋白的折叠状态甚至检测活性的方法的细微差别都可能导致活性的强弱有无，一般情况下，上清表达的蛋白要比包涵体经过变复性纯化后得到的蛋白活性要好，我们尽量从上清中获得蛋白，期许蛋白形成的折叠最接近活性状态，这也是我们擅长的。但是在实际实验条件下，我们无法承诺表达纯化的蛋白一定具有客户期望的生理活性。

重组猪_干扰素的纯化及生化性质鉴定

重组猪α-干扰素的纯化及生化性质鉴定邵　菁 1,2 ,于瑞嵩 2,3 ,董世娟 2,3 ,朱于敏 2,3 ,沈世缘 2,3 ,曹祥荣1,李　震 2,3 (1.南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046)(2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106)(3.上海市农业遗传育种重点实验室,上海201106) [摘要]　对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α2干扰素(Po I F N 2α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α2干扰素(Po I F N 2α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经N 端氨基酸测序,W estern 2bl ot,对酸、热、巯基乙醇的稳定性和糖基化程度等检测后发现,所表达的猪α2干扰素N 端氨基酸序列(前5个)正确,对酸和热基本稳定,二硫键对目的蛋白的活性至关重要,没有发现目的蛋白的糖基化. [关键词]　重组猪α2干扰素(Po I F N 2 α),亲和层析,离子交换层析,糖基化,生化性质[中图分类号]S852.4　[文献标识码]A [文章编号]100124616(2008)022******* Pur i f i ca ti on of Recom b i n an t Porc i n e 2 αI n terferon and the Iden ti f i ca ti on of its B i ochem i ca l Character isti cs Shao J ing 1,2 ,Yu Ruis ong 2,3 ,Dong Shijuan 2,3 ,Zhu Yum in 2,3 ,Shen Shiyuan 2,3 , Cao Xiangr ong 1 ,L i Zhen 2,3 (1.School of L ife Science,Nanjing Nor mal University,Nanjing 210046,China ) (2.Ani m al Husbandry and Veterinary Research I nstitute,Shanghai Acade my of Agricultural Sciences,Shanghai 201106,China ) (3.ShanghaiMunici pal Key Laborat ory of Agri 2Genetics and B reeding,Shanghai 201106,China ) Abstract:I n this study,we devel oped the technique f or purifying recombinant porcine 2 αinterfer on (Po I F N 2α)that was efficiently exp ressed by Pichia Past oris and studied the bi oche m ical characteristics of Po I F N 2α.Recombinant porcine I F N 2 αwas purified t o homogeneity by affinity chr omat ography and i on 2exchange chr omat ography stepwisely after centrifu 2gati on 、dialysis and filtrati on .The results of its bi oche m ical characteristics showed that the first five a m ino acids of N -ter m inal of the purified p r otein was correct .The p r otein was heat and acid 2stable and the dithi olate 2bond was crucial t o the p r otein activity .No glycosylati on were f ound on the target p r otein . Key words:recombinant porcine α2interfer on (Po I F N 2 α),affinity chr omat ography,i on 2exchange chr omat ography,glyco 2sylati on,bi oche m ical characteristics 　收稿日期:2007207202. 基金项目:上海市农业科学院青年科技发展基金(农青年科技2005-02)资助项目.通讯联系人:李　震,研究员,研究方向:动物生物技术,E 2mail:zhenli@https://www.360docs.net/doc/5815815562.html, 干扰素(I nterfer on,I F N )是一类重要的细胞因子,具有种属特异性,在同种细胞上具有广谱的抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种生物活性.根据干扰素的来源和性质可分为Ⅰ型干扰素和Ⅱ型干扰素[1,2] . 猪干扰素(Po I F N )也可分为I 型和Ⅱ型,I 型包括α、β、ω和τ4种,Ⅱ型仅有γ1种.I 型猪干扰素基因无内含子,基因组中一般含有多个I 型猪干扰素基因[3] .猪I F N 2α(Po I F N 2α)基因家族分为二类同源的、但明显不同的基因类型:Po I F N 2 α1和Po I F N 2α2.目前,Po I F N 2α1基因已经在真核和原核细胞中得到表达,但相关的分离纯化报道很少.通过研究表明,Po I F N 2 α可被用作动物疫苗的免疫增强剂和猪病毒病的治疗剂 [4,5] ,因此,在获得较高水平表达产物的基础上,探索重组Po I F N 2 α的分离纯化工艺,具有重要的理论意— 79—第31卷第2期2008年6月南京师大学报(自然科学版) JOURNAL OF NANJ I N G NOR MAL UN I V ERSI TY (Natural Science Editi on ) Vol .31No .2Jun,2008

重组干扰素的生产 (2)

题目浅析重组干扰素的生产姓名杨胜德学号11113173 专业生物工程学院微生物指导教师鞠守勇二零一二年十一月

目录摘要﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 关键词﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 Abstract﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 Key words﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍3 前言﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1.基因工程菌的构建﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1目的基因的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.1干扰素mRNA的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.2 cDNA的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍4 1．1.3 cDNA第二链的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．2 大肠杆菌质粒的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3重组质粒的获取﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.1重组质粒的合成﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.2 重组DNA的转化﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 1．3.3重组体的筛选与鉴定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 2.目的基因的表达﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 3.产物的提取与纯化﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍5 4.质量控制和要求﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 4.1半成品检定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 4.2成品检定﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6 5.参考文献﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍7 6.致谢﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍8

白细胞干扰素生产扩建项目建议书

年产3亿瓶畜禽白细胞干扰素生产线扩建项目项目建议书一、总论 1、项目名称：年产3亿瓶畜禽白细胞干扰素生产线扩建项目 2、项目单位概况：企业名称：黑吉辽绿宝生物技术有限公司企业性质：民营企业法定代表人：孙元科企业类型：有限责任公司公司地址：黑吉辽省佳木斯临河县城西工业园区注册资本：1000万元经营范围：生物技术开发；畜用药品、生物制品制造；兽药器械、饲料添加剂及原料、五金交电化工产品、百货销售；农副土特产品（不含棉花、蚕茧）购销。 3、合作方式：合资、合作 4、项目拟建地点：黑吉辽临河经济开发区生物高科园区 5、项目建设内容项目规划占地20000 m2，总建筑面积17616m2，占地面积8898 m2。包括： 1）、制药车间：建设3座建筑面积4000 m2符合GMP标准的生化制药车间，合计12000m2，年产畜禽动物白细胞干扰素3亿瓶（9

亿毫升）。 2）、动物室：按照生产、质检要求，在原厂址扩建1座面积600m2动物室，自繁自养小动物，为质检提供合格、足量的实验动物。 3）、仓库：包括原辅材料库、成品库和包装物库，包括产品冷藏库和包装库，计2340 m2。 4）、检测中心：建筑面积540 m2。 5）、公用工程：包括供维修、水泵房、空压机房、锅炉房、配电房、职工餐厅。新建维修房216 m2、水泵房144 m2、空压机房180 m2、锅炉房216 m2、配电房120 m2、餐厅1260 m2。 6）、室外工程：土建工程土石方量约6000 m3，厂区道路场坝约3000 m2，场地绿化8000 m2，污水处理、给排水工程、围墙650m等。 5、项目建设年限：24个月二、项目建设的必要性和条件 1、项目建设的必要性畜禽白细胞干扰素研制成功填补了该技术领域国内外空白。防治兼备的双重功能，解决了兽药界多年来不能解决的难题，克服了现有生物制品对病毒性疾病只能防不能治的缺陷。同时，建设单位正加紧研发治疗动物细菌性和病毒性疾病的复合生物制品，力争在兽药界再创辉煌；提升了兽用生物制品的档次。由于本产品是对畜禽病毒性疾病的预防和治疗有特效的兽用新生物制品，生产技术在国内领先，达到国际先进水平。本企业制定的“制造及检验规程”和“质量

载体与表达系统

载体与表达系统 0001--pIRES --BD Co--真核表达--yshu3507 0002--pECFP-C1--BD Co--真核表达--yshu3507 0003--pShuttle--/--/--victoh 0004--pSBR322--/--/--chujun_hust 0005--pcDNA3.1(+)/CAT--invitrogen--真核表达--wangjun2002274 0006--pQEx--Qiagen--原核表达--wangjun2002274 0007--pIVEX2.3--Roche--体外转录翻译--wangjun2002274 0008--pIRES-EGFP--/--/--luoqingli2003 0009--pET-28a（+）--Novagen--原核表达--wangjun2002274 0010--pSUPER Vector--oligoengine--siRNA--zyh961171 0011--pET-32a(+)--novagen--原核表达--Crazyvirus 0012--pBK-CMV--/--原核表达、真核表达--zrzhong6519 0013--pcDNA3.1/Zeo (+)--invitrogen--原核表达--Crazyvirus 0014--pcDNA3--invitrogen--真核表达--kras 0015--pfastbac1--invitrogene--昆虫表达--cox2wj 0016--pEGFP-C3--clontech--真核表达--smilely 0017--pSecTag2--invitrogen--真核表达--kenmed 0018--PYX212--/--真核表达--Gmail 0019--pET20b--Novagen--原核表达--Gmail 0020--pEGFP-1--BD BIO--转录调控--wyh 0021--pEGFP/U6 --/--siRNA--songbinn

重组猪_干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达

18卷3期2002年5月生　物　工　程　学　报 Chinese Journal o f Biotechnology V ol.18　N o.3 May 2002 　收稿日期:2001212217,修回日期:2002202228。基金项目:上海市农科院重点学科青年科技骨干培养基金。 3通讯作者。　T el :86221262200389;Fax :86221262207858;E 2mail :zhenli60@https://www.360docs.net/doc/5815815562.html, 重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达陈　涛1　于瑞嵩 2,3 　刘惠莉 2,3 　李　震 2,33 　曹祥荣 1 1(南京师范大学生命科学学院,南京　210097) 2(上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海　201106)3 (上海市农业遗传育种重点实验室,上海　201106) 摘　要　用巨引物PCR 法介导的定点突变把猪α干扰素(P oIFN 2α)第86位Cys (TG C )突变为T yr (T AC ),同时将其成熟蛋白N 端第一个密码子TG T 同义突变大肠杆菌偏爱的密码子TG C ,构建了大肠杆菌融合基因表达载体pGEX 2 IFN ,表达产物占菌体总蛋白的20%。将以包涵体形式表达的目的蛋白经变、复性处理,并以FP LC 进一步纯化,得到了具有较高生物活性的产物(5200I U Πmg )。关键词　猪α干扰素,巨引物PCR ,定点突变,包涵体中图分类号　Q78 文献标识码　A 文章编号100023061(2002)0320339204 干扰素是动物中目前所知出现最早、作用最快的第一抵御病毒体系。人和鼠的干扰素已得到深入研究,但对于猪的干扰素研究相对较少。我国是养猪大国,而猪的病毒性疾病种类多、危害大,发展具广谱抗病毒效应的猪干扰素无疑有重要意义。猪α型干扰素(P oIFN 2α)基因无内含子,蛋白糖基化修饰也不重要 [1] ,因而方便利用原核表达载体表达。我们在研究中克隆到编码猪α型干扰素成熟肽部分的基因片段[2] 并在大肠杆菌中进行了表达,发现其活性较低,估计其编码肽段的第86位Cys 可能影响了干扰素的抗病毒活性[3] 。本实验参照 P oIFN 2α1序列[1] 将此位点突变为T yr ,然后用大肠杆菌融合表达系统表达出G ST 2IFN 融合蛋白,目的产物纯化后具有较高的抗病毒活性。 1　材料与方法 111　材料菌种和质粒:受体菌E .coli DH5α、E .coli BL21为本室保藏菌种;p GEX 24T 23载体购自Pharmacia 公司;pUCm 2IFN 质粒为本室构建、保存。工具酶和试剂:P fu DNA 聚合酶购自上海生工生物工程公司,限制酶、T 4DNA 连接酶、S1核酸酶购自T aK aRa 公司,HuIFN 2 α标准品购自卫生部上海生物制品研究所,Sephecyic 200购自Phamacia 公司,其它试剂均为国产分析纯。人羊膜上皮细胞(WISH )及水疱性口炎病毒(VS V )购自卫生部上海生物制品研究所。112　方法 11211　定点突变:采用巨引物PCR 法[4] 。根据所得 P oIFN 2 α序列[2]设计3条引物:P1:5′G AT CCTG C G ACCTG CCT C A 3′;P2:5′G CTG AT CC AG T CC AG TG T AG AAC3′;P3:5′C AG AATT CAG AATGGG CTTG 3′。其中P1处于IFN 基因的5′端,斜体C 为引入的突变碱基,并在前面加了G AT CC (下划线部分),以便与经Bam HI 酶切后用S1核酸酶削平的载体进行平端连接构成新的Bam HI 酶切位点。P2处于IFN 基因内部,斜体T 为引入的突变碱基。P3处于IFN 基因的3′末端,下划线部分为引入的Eco RI 酶切位点(引物示意参见图1) 。图1　引物示意图 Fig.1　P osition of primers The asterisk (3)indicates the sites to be mutated

干扰素常识

一、什么是干扰素 1、是通过基因工程技术生产的高科技、绿色抗病毒生物兽药。 2、是一类蛋白多肽，具有多功能的细胞因子、具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白。 3、能诱导动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白。 4、抑制病毒增殖，增强机体免疫应答。 5、在动物抵抗病毒感染过程中起着重要作用。 6、是目前所知发挥作用最快的病毒防御体系，几分钟内使机体处于病毒状态。 7、使机体在1－3周时间内对病毒的重复感染有抵抗作用。二、干扰素的分类根据产生干扰素细胞种类不同分为︱型和‖型︱型干扰素包括α、β 、δ、τ、ω 等亚型，最具有典型代表的是a亚型，具有强烈的抗病毒功能，因此又称抗病毒干扰素（IFN-α） ‖型干扰素目前只发现y亚型，具有强烈的免疫调节功能，因此又称免疫干扰素（IFN-y）︱型和‖型均具有抗病毒、调节免疫、抗肿瘤的作用区别：抗病毒方面IFN－a﹥IFN－y 免疫调节方面IFN－y﹥IFN－a 三、干扰素的药理 GTPase 阻断病毒穿入 2?，5?-Aase 阻断病毒脱壳抗病毒蛋白表达———Pkas ——细胞呈现抗病毒状态——阻断病毒复制 2?-PDEas 阻断病毒合成活化NK细胞 MO吞噬功能亢进激活免疫细胞——加强KT细胞功能——杀伤病毒感染细胞 ADCC活性增强四、干扰素作用 1、抗病毒、抗肿瘤作用干扰素进入机体后产生多种广谱抗病毒蛋白分解病毒RNA阻断病毒蛋白合成导致tRNA与氨基酸不能结合消除病毒感染。 2、免疫调理、免疫增强作用：激活T淋巴细胞，活化巨噬细胞，吸引淋巴细胞向炎性组织移动。五、吉莱德系列干扰素具有的显著特点和优势： 1、高浓缩型 ①每毫升的活性单位高达100多万，无须加量使用。

原核&真核表达载体构建

原核、真核表达载体构建真核表达载体和原核表达载体的区别：主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同。比如说启动子，终止子在两种表达系统中是不一样的。带有真核表达元件的是真核载体，能在真核生物内表达；带有原核表达元件的是原核载体，能在原核生物内表达。两者都具有的为穿梭载体。㈠原核表达载体指：能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行复制的载体。原核表达载体调控原件 1.启动子启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。在转录起始点上游5～10 bp处，有一段由6～8个碱基组成，富含A和T的区域，称为Pribnow 盒，又名TATA 盒或－10区。来源不同的启动子，Pribnow 盒的碱基顺序稍有变化。在距转录起始位点上游35 bp 处，有一段由10 bp组成的区域，称为-35区。转录时大肠杆菌RNA聚合酶识别并结合启动子。-35区与RNA聚合酶s亚基结合，-10区与RNA聚合酶的核心酶结合，在转录起始位点附近DNA被解旋形成单链，RNA聚合酶使第一和第二核苷酸形成磷酸二酯键，以后在RNA聚合酶作用下向前推进，形成新生的RNA 链。原核表达系统中通常使用的可调控的启动子有Lac(乳糖启动子)、Trp(色氨酸启动子)、Tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子) 、lPL (l噬菌体的左向启动子)、T7噬菌体启动子等。 2. SD序列 1974年Shine和Dalgarno首先发现，在mRNA上有核糖体的结合位点，它们是起始密码子AUG和一段位于AUG上游3～10 bp处的由3～9 bp组成的序列。这段序列富含嘌呤核苷酸，刚好与16S rRNA 3￠末端的富含嘧啶的序列互补，是核糖体RNA的识别与结合位点。以后将此序列命名为Shine-Dalgarno序列，简称SD序列。它与起始密码子AUG之间的距离是影响mRNA转录、翻译成蛋白的重要因素之一，某些蛋白质与SD序列结合也会影响mRNA与核糖体的结合，从而影响蛋白质的翻译。另外，真核基因的第二个密码子必须紧接在ATG 之后，才能产生一个完整的蛋白质。 3．终止子在一个基因的3￠末端或是一个操纵子的3'末端往往有特定的核苷酸序列，且具有终止转录功能，这一序列称之为转录终止子，简称终止子(terminator)。转录终止过程包括：RNA聚合酶停在DNA模板上不再前进，RNA的延伸也停止在终止信号上，完成转录的RNA从RNA聚合酶上释放出来。对RNA聚合酶起

乙肝干扰素的副作用及处理.docx

乙肝干扰素的副作用及处理最常见的是发热及流感样综合征，患者体重减轻、脱发、情绪激动，骨髓抑制致血细胞、血小板减少，轻度贫血，偶可发生神经系统损伤，影响内分泌系统功能，亦有产生干扰素抗体者。其副作用及处理方法列述于下： 1)流感样综合征：患者发热、寒战、全身不适，肌痛、头痛等，有时还可出现鼻塞、流涕、头晕、尿急等，而以发热最为常见。不论应用途径及剂量大小，患者均可有发热，一般在第一次注射后2-6小时发生，体温可升至38-40℃，6-12小时达到高峰，但24小时内均能自然消退。若发热不高，可不必特殊处理，36度者多喝开水，卧床休息，但若发热较高甚或高烧者，则应给予物理降温;亦可给布洛芬0.2克口服，消炎痛栓0.5-1枚直肠给药，体温便会很快下降。乙肝患者健康治疗教科书 2)造血系统改变：抑制骨髓，降低外周血白细胞及血小板，白细胞减少通常发生于用药后数小时至数日。用药第一周，白细胞减少至40%-60%，而后趋于稳定。停药或间歇5天以上用药，白细胞可迅速恢复。主要是干扰素能可逆性地阻断白细胞从骨髓释放的缘故。长期应用可导致血色素性贫血，引起免疫介导的溶血性贫血和血小板减少，但极少见。通常可口服养血饮、复方阿胶浆等来纠正，亦可服利血生、鲨肝醇及氨肽家等药以升高白细胞及血小板。 3)消化系统反应：如食欲不振、味觉异常、恶心、呕吐、泄泻、腹胀等。药量越大，症状越频繁，但一般不需治疗，较重者可对症处理。严重者应考虑减量或停药。 4)皮肤反应：用药超过4个月者的最常见副作用是轻、中度脱发，偶有停药后更严重者。斑丘疹多发生于躯干和四肢，但多为暂时性的;还有发生潜在特异性反应，表现为弥漫性红斑及荨麻疹等。轻度皮疹多呈自限性，不必处理;严重者应考虑停药或减量，并给抗过敏治疗。 5)肾脏损害：最常见者为轻度蛋白尿，少有>0.1克/日，亦不伴有血浆蛋白的减少。其他肾脏损害虽有报道但极少见。通常无需特殊处理，嘱患者多喝开水即可。 6)对内分泌系统的影响：11-羟皮质类固醇增加，雌激素水平下降，高密度脂蛋白降低，出现糖尿，偶见高血钾、低血钙等症，还能提高血浆甘油三酯含量，但对胆固醇无影响。 7)抗干扰素抗体的产生：部分患者治疗初期甚至未应用干扰素时即出现抗干扰素抗体，影响治疗效果。估计与个体差异有关，而与应用剂量、给药途径、时间长短及患者年龄无明显关系。此外，尚可出现嗜睡、精神错乱、周围神经感觉异常等神经、精神症状，以及对心血管、骨髓系统的影响和对生长的抑制等等，但极少发生。注意：干扰素的副作用的处理应该在医生指导下，必要时用药物纠正，严重时，应该停用或减量，待恢复后再使用，如果无法副作用严重，并无法纠正，应考虑改用其它抗病毒药物，如拉米夫定。

猪_干扰素的研究进展

猪β-干扰素的研究进展徐蕙,刘德辉,郭霄峰 (华南农业大学兽医学院,广州　510642) 摘要:干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。在其基因结构、作用机理及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了猪β-干扰素的基本特性、作用机理及其临床应用。关键词:猪β-干扰素;基本特征;作用机理中图分类号:S852.4 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2009)12-0120-03 干扰素(IFN )是一种广谱抗病毒糖蛋白,是1957年由英国病毒生物学家A lick Isaacs 和瑞士研究人员Jean Lindenmann 在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现的,并将其命名为干扰素。干扰素的分子质量一般在20～100ku ,不能透过普通透析膜,但可通过滤菌器,比病毒颗粒小,沉淀病毒的离心力不能沉降干扰素。干扰素的天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸含量较高,不含核酸,所以不被DNA 酶或RNA 酶破坏,但易被胰蛋白酶、乙醚、氯仿、酮基等破坏,-20℃条件下可长期保存。I 型干扰素具有耐酸性,在pH 2时稳定。Ⅱ型干扰素不耐酸,也不耐热,即在pH 2时不稳定,在56℃条件下30min 会被破坏。干扰素具有广谱性,可抗多种病毒和微生物。 1　IFN -β的类别与组织细胞来源由于研究角度的不同,干扰素的分类方法有也不同。根据干扰素蛋白质的氨基酸结构与免疫原性的不同,可将干扰素划分为IFN -α、IFN -β、IFN -γ。其中又根据其对酸的不同敏感性,分为Ⅰ型干扰素和Ⅱ型干扰素。Ⅰ型干扰素对酸的耐受性较大,分别有IFN -α、IFN -β、IFN -ω、IFN -δ、IFN -κ、IFN -τ6种类型(银晓等,2008),Ⅱ型干扰素对酸敏感,迄今为止只有IFN -γ一个成员。近年来Ko tenko 等(2003)将Sheppard 鉴定的干扰素新家族命名为IFN -λs (IFN -λ1、IFN -λ2和IFN -λ3)。人类基因组组织(human genome org anizatio n ,H UGO )暂时将它们命名为IL -29、I L -28A 和IL -28B 。IFN -λs 与Ⅰ 收稿日期:2009-05-05 作者简介:徐蕙(1983-),女,广东人,硕士,研究方向:预防兽医微生物。通信作者:郭霄峰,男,博导。E -mail :xfgu o @scau .edu .cn 型IFN 有着几乎相同的功能,是否具有独特功能,正在进一步的研究之中(李珊等,2005)。正常的细胞不产生干扰素,只有合成干扰素的潜力(高建忠等,2004),当细胞受到病毒感染或是诱生剂作用时产生。IFN -β主要由纤维母细胞受诱生剂作用而产生,IFN -α来源于白细胞,而IFN -γ来源于淋巴细胞。2　IFN -β的结构IFN -β因种属不同氨基酸序列也不同。猪与人、牛、马的IFN -β氨基酸同源性分别为65.1%、65.1%和66.1%(曾芸等,2007)。而同一种属的不同品种中,氨基酸序列略有不同,但都在98.5%以上。Antho ny (2002)对干扰素基因研究,得出IFN -α和IFN -β基因位于人9号染色体和小鼠的4号染色体,并连锁在一起。IFN -α和IFN -β氨基酸的同源性为26%～30%(武迎红等,2007)。2.1　猪IFN -β的结构　猪IFN -β基因含有一个561bp 的ORF ,编码186个氨基酸,分子质量约为22ku 。ORF 前21个氨基酸为信号肽,成熟蛋白为分泌型蛋白,有3个潜在的N 端糖基化位点Asn 94、Asn 101、Asn 173,氨基酸序列分别为Asn Asp Se r 、Asn G lu Th r 及A sn A sp Ser ,受体为Asn 上的N 原子。曾芸等(2007)对广西巴马猪的IFN -β进行蛋白质结构预测,得出在成熟的IFN -β蛋白中含有5个α-螺旋结构,分别位于第23-43,72-92,101-128,139-157和160-183位氨基酸残基。第27-177位氨基酸残基区域为IFN -β蛋白与其在细胞表面的Ⅰ型干扰素共有受体的结合区域。M ark 等(1984)报道可用任何氨基酸替代第17位的Cy s ,从而获得一系列IFN -β的同系物。替换第17位的Cys 可采用核苷酸点突变技术,将第17位的Cy s 变成中性氨基酸,如丝氨酸或酪氨酸。第17位的Cy s 对保持IFN -β的空间结构无明显的作用,该Cy s 被Ser 替 · 120·疾病防治中国畜牧兽医　2009年第36卷第12期