酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响

酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响王继峰1，2，赵新元1，2，赵焱2，马成2，钟儒刚1，钱小红1，2，应万涛2*

【摘要】摘要:蛋白质的还原-烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤，常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(IAA)，但是IAA除了和半胱氨酸发生反应，也可能和其他多种氨基酸发生副反应。我们模拟常规的酶切条件，系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况。结果表明，多种氨基酸可以发生烷基化，其趋势为:半胱氨酸＞肽段N端氨基酸＞天冬氨酸＞谷氨酸＞组氨酸＞天冬酰胺＞赖氨酸＞酪氨酸，同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性。根据定性结果，采用质谱多反应监测(MRM)技术对多个肽段进行了定量分析，评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响。该研究结果表明，过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响。在蛋白质组学研究的样本处理流程中，应避免样本的过烷基化。

【期刊名称】色谱

【年(卷),期】2013(031)010

【总页数】7

【关键词】关键词:液相色谱；质谱；多反应监测；蛋白质组学；烷基化；碘乙酰胺

【文献来源】https://https://www.360docs.net/doc/5517059349.html,/academic-journal-cn_chinese-journal-chromatography_thesis/0201246863297.html

近几年蛋白质组学迅猛发展，逐步渗入到生命科学的各个领域，并且由大规模的定性分析，向高通量、目标化、准确的定量分析发展。在常见的“自下而