5微生物培训课件20171228

2017.12.28岗位培训课件

微生物知识培训

一、概述

1、概念：微生物是一种肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总成。

特点：具有形体微小、结构简单；繁殖迅速、容易变异；种类繁多、分布广泛等特点。

2、作用：绝大多数微生物对人和动物是有益的，广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工等行业，例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。

3、危害：微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、痢疾、结核、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。

从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。

4、分类：

（1）细菌：细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。

（2）真菌：真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。

霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。

酵母菌是单细胞真核微生物，酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。

真菌生长的最适的生长温度为22～28℃，最适的pH值为4～6。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1‐4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热60~70℃1小时即被杀死，对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5％碘酒、10％甲醛则较敏感。

（3）病毒：病毒体积微小，大多数病毒只有采用电子显微镜将其放大数千、数万倍才能看见。

二、消毒与灭菌

1、消毒：杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含细菌的芽胞。消毒所用的试剂称

为消毒剂。

消毒剂：5%甲酚皂溶液、0.1%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液

2、灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。

（1）辐射灭菌法

紫外线作用于DNA，使细菌DNA的复制和转录受到干扰，导致细菌变异或死亡。常用于室内的空气消毒。

电离辐射对各种细菌均有致死作用。常用于大量一次性医用塑料制品的消毒和食品的消毒。

微波是一种波长为1mm～1m的电磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。多用于检验室用品、无菌室的用具的消毒。

滤过除菌法：用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到除菌目的。滤菌器含有微细小孔≤0.22微米,只允许液体或气体通过, 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。

适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。

（2）化学消毒灭菌法

许多从而发挥防腐、消毒及灭菌的化学药物能影响微生物的化学组成、物理结构和生理活性，作用。洁净室(区)应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。

三、GMP与微生物

1、2015年版《中国药典》四部微生物限度检查法规定的检查项目包括需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、控制菌检查。除另有规定外，需氧菌培养温度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养温度为20-25℃，控制菌培养温度为30-35℃。

2、微生物污染导致药物变质的因素有以下几个方面：

（1）微生物污染数量：在药品生产中应将微生物污染数量控制在最低限度，这就需要采取综合措施。

（2）微生物生长的营养因素：许多药物成分，都有微生物生长所需的碳源、氮源或无机盐类。生产用水（纯化水、注射用水）亦能支持微生物生长。

（3）pH值：pH值为中性时最适合微生物生长。某些微生物在pH3.5或pH8.0～9.5仍能生长。（4）温度：对于微生物污染引起药物变质的温度，不同的微生物有不同的最适温度。根据微

生物生长的最适温度不同，可以将微生物分为嗜冷、兼性嗜冷、嗜温、嗜热和超嗜热等五种不同的类型。对嗜温微生物来说，可将药物储藏在阴冷、干燥处。

3、微生物污染途径

（1）空气中的微生物

空气本身并不产生污染，因为空气不含必要的水分和营养，不是适合微生物生长繁殖的天然环境，但是一般的大气环境仍含有不少的细菌、霉菌和酵母菌。

空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。因此保持空气洁净是极为重要的。

在药品生产中，减少空气中微生物数量的方法有多种，常用的有以下3种方法：空气洁净技术采用的过滤方法：过滤是最常用的方法。过滤介质种类很多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。

化学消毒方法采用消毒剂作用于室内空气和物体表面。紫外线照射方法采用紫外线对室内空气进行照射。

（2）制药用水中的微生物

工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要。因为它不仅直接用于产品的生产，而且也用于清洗设备和用于冷却。药品微生物污染的关键环节在于工艺用水，因为水是微生物生长代谢的一个必要成分。中国药典收载了纯化水和注射用水的质量标准。

※2015年版《中国药典》二部纯化水

经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培基,30?35℃培养不少于5 天，依法检査，1ml供试品中需氧菌总数不得过lOOcfu。

常用的对水消毒的方法，以下3种：

化学消毒剂方法对水的消毒以化学消毒剂方法较常用，效果也最好。常使用次氯酸钠或通氯气。

膜过滤法适用于水系统的连续循环处理。

紫外线照射法在水系统中应用紫外线照射消毒，适用于需要特殊处理的水（如光学透明度要求高），一般在末端之前。

（3）厂房建筑与设备表面的微生物

厂房建筑物的内表面，以及设备表面、容器内外表面等，都可以是微生物寄生存的地方。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。

一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。

（4）人体的微生物

微生物广泛分布于自然界，人体与自然环境接触，当然也不能例外。凡是人体体表皮肤与外界相通的腔道如口腔、鼻腔、肠道、眼结膜、泌尿生殖道等均存在不同种类的微生物，其中有些微生物可以长期寄居在人的体表、皮肤和黏膜上。

人员污染的途径和方式：人的头发和皮肤；水滴；衣着、化妆品和珠宝手饰

生产过程中人们所引起的混杂和误差

（6）微生物污染导致药物变质的因素

药品的生产、储存、使用的全过程，都有因微生物污染而导致药物变质的因素。而药物变质，一般需要很高的微生物污染程度。也就是说，微生物面广、量大的繁殖才出现显著的易被觉察的损坏现象。

①微生物污染数量：控制在最低限度

②微生物生长的营养因素：碳源、氮源或无机盐

③pH值：pH值为中性时最适合微生物生长

④温度：可以将微生物分为嗜冷、兼性嗜冷、嗜温、嗜热和超嗜热等五种不同的类型（7）防止微生物污染的原则

了解污染源对药品生产全过程可能造成污染的来源，进行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。

在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物微生物监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。

（8）药品生产人员卫生注意事项

建立生产人员健康档案

培养药品生产人员良好的个人卫生习惯

洁净区生产人员要求

洁净区工作人员要尽可能少而精

操作人员在洁净区动作要避免剧烈运动

避免不必要的移动

四、洁净区环境监测

（1）洁净室划分为ABCD四个级别

（2）洁净室测量的级别和项目

测试项目都与洁净度相关，洁净室必测项目：风速、风量、高效过滤器检漏、洁净度、压力等；

与洁净度和气流相关，非必测试项目：自净时间测试、压差等；

与气流无关的测试，属于环境因素：照度、均匀度、噪声、温湿度等。

（3）洁净室微生物测试方法

静态测试适应范围：洁净室投入生产前。

动态监测适应范围：非无菌制剂生产监测。

连续监测适应范围：无菌制剂生产监测。

※GGBT16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法

属于被动式取样法，对空气环境破坏小；

取样工具：90mm平皿培养基：TSA或SDA

衡量方法：放置时间4小时CFU/4小时

※GBT16293_2010医药工业洁净室浮游菌检测方法

属于主动式取样法取样工具：浮游菌采样器培养基：TSA或SDA

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五、结论：

环境监控是一种重要的方式，以保证洁净室或无菌生产区域受到适当水平的控制。监测是定性的活动，即使应用于无菌生产这种最关键的活动中，批产品接受与否的结论也不应该仅仅依赖与环境取样的结果。

本质上没有人员操作的环境通常在起始阶段仅有非常低的污染率，并且在使用中维持非常低的微生物污染率。

洁净室操作人员必须努力维持适当的环境质量，并不断改进人员操作和环境控制。