PMD-18T

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pMD?18-T Vector Cloning Kit

■ 制品内容

pMD18-T Vector (50 ng/μl)20 μl × 1 支

Control Insert (50 ng/μl)10 μl × 1 支

Solution I*75 μl × 2 支

* 使用时请于冰中融解。

■ 制品说明

pMD18-T Vector是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning) 的专用载体。本载体由pUC18载体改建而成，在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I 和Sal I 识别位点之间插入了Eco R V 识别位点，用Eco R V 进行酶切反应后，再在两侧的3′端添加"T" 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3′末端添加一个"A" 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。

由于本载体以pUC18载体为基础构建而成，所以它具有同pUC18载体相同的功能。此外，本制品中的高效连接液Solution I 可以在短时间内(约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。

■ 保存

-20℃。

■ 纯度

Control Insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。

■ 用途

1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。

2. 对克隆后的PCR产物使用Bca BEST Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。

■ pMD18-T Vector的结构

■ 注意事项

1. Solution I 请于冰中融解。

2. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR产物) 建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA (甚至是电泳也无法确认的

非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。

3. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连

接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以

提高DNA的回收率。

4. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高(>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。

5. 本制品来源于pUC18载体，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。

■其他说明

详细内容请参考说明书

pMD18-T Vector

Positions of various elements

Vector size (bp) 2692

Multiple cloning site 399-461

Cloning Site 425

LacZ α-peptide 146-475

Ampicillin resistance gene 1632~2492

pUC origin 873-1461

primer binding sites：

BcaBEST Sequencing Primer M13-47 binding site 352-375

BcaBEST Sequencing Primer RV-M binding site 484-507

1 TCGCGCGTTT CGGTGATGAC GGTGAAAACC TCTGACACAT GCAGCTCCCG

51 GAGACGGTCA CAGCTTGTCT GTAAGCGGAT GCCGGGAGCA GACAAGCCCG

101 TCAGGGCGCG TCAGCGGGTG TTGGCGGGTG TCGGGGCTGG CTTAACTATG

151 CGGCATCAGA GCAGATTGTA CTGAGAGTGC ACCATATGCG GTGTGAAATA

201 CCGCACAGAT GCGTAAGGAG AAAATACCGC ATCAGGCGCC ATTCGCCATT

251 CAGGCTGCGC AACTGTTGGG AAGGGCGATC GGTGCGGGCC TCTTCGCTAT

301 TACGCCAGCT GGCGAAAGGG GGATGTGCTG CAAGGCGATT AAGTTGGGTA

351 ACGCCAGGGT TTTCCCAGTC ACGACGTTGT AAAACGACGG CCAGTGCCAA

401 GCTTGCATGC CTGCAGGTCG ACGA Tt------AT CTC TAGAGGATCC CCGGGTACCG

451 AGCTCGAATT CGTAATCATG GTCATAGCTG TTTCCTGTGT GAAATTGTTA

501 TCCGCTCACA ATTCCACACA ACATACGAGC CGGAAGCATA AAGTGTAAAG

551 CCTGGGGTGC CTAATGAGTG AGCTAACTCA CATTAATTGC GTTGCGCTCA

601 CTGCCCGCTT TCCAGTCGGG AAACCTGTCG TGCCAGCTGC ATTAATGAAT

651 CGGCCAACGC GCGGGGAGAG GCGGTTTGCG TATTGGGCGC TCTTCCGCTT

701 CCTCGCTCAC TGACTCGCTG CGCTCGGTCG TTCGGCTGCG GCGAGCGGTA

751 TCAGCTCACT CAAAGGCGGT AATACGGTTA TCCACAGAAT CAGGGGATAA

801 CGCAGGAAAG AACATGTGAG CAAAAGGCCA GCAAAAGGCC AGGAACCGTA

851 AAAAGGCCGC GTTGCTGGCG TTTTTCCATA GGCTCCGCCC CCCTGACGAG

901 CATCACAAAA ATCGACGCTC AAGTCAGAGG TGGCGAAACC CGACAGGACT

951 ATAAAGATAC CAGGCGTTTC CCCCTGGAAG CTCCCTCGTG CGCTCTCCTG

1001 TTCCGACCCT GCCGCTTACC GGATACCTGT CCGCCTTTCT CCCTTCGGGA

1051 AGCGTGGCGC TTTCTCATAG CTCACGCTGT AGGTATCTCA GTTCGGTGTA

1101 GGTCGTTCGC TCCAAGCTGG GCTGTGTGCA CGAACCCCCC GTTCAGCCCG

1151 ACCGCTGCGC CTTATCCGGT AACTATCGTC TTGAGTCCAA CCCGGTAAGA

1201 CACGACTTAT CGCCACTGGC AGCAGCCACT GGTAACAGGA TTAGCAGAGC

1251 GAGGTATGTA GGCGGTGCTA CAGAGTTCTT GAAGTGGTGG CCTAACTACG

1301 GCTACACTAG AAGAACAGTA TTTGGTATCT GCGCTCTGCT GAAGCCAGTT

1351 ACCTTCGGAA AAAGAGTTGG TAGCTCTTGA TCCGGCAAAC AAACCACCGC

1401 TGGTAGCGGT GGTTTTTTTG TTTGCAAGCA GCAGATTACG CGCAGAAAAA

1451 AAGGATCTCA AGAAGATCCT TTGATCTTTT CTACGGGGTC TGACGCTCAG

1501 TGGAACGAAA ACTCACGTTA AGGGATTTTG GTCATGAGAT TATCAAAAAG 1551 GATCTTCACC TAGATCCTTT TAAATTAAAA ATGAAGTTTT AAATCAATCT

1601 AAAGTATATA TGAGTAAACT TGGTCTGACA GTTACCAATG CTTAATCAGT

1651 GAGGCACCTA TCTCAGCGAT CTGTCTATTT CGTTCATCCA TAGTTGCCTG 1701 ACTCCCCGTC GTGTAGATAA CTACGATACG GGAGGGCTTA CCATCTGGCC 1751 CCAGTGCTGC AATGATACCG CGAGACCCAC GCTCACCGGC TCCAGATTTA 1801 TCAGCAATAA ACCAGCCAGC CGGAAGGGCC GAGCGCAGAA GTGGTCCTGC 1851 AACTTTATCC GCCTCCATCC AGTCTATTAA TTGTTGCCGG GAAGCTAGAG 1901 TAAGTAGTTC GCCAGTTAAT AGTTTGCGCA ACGTTGTTGC CATTGCTACA 1951 GGCATCGTGG TGTCACGCTC GTCGTTTGGT ATGGCTTCAT TCAGCTCCGG 2001 TTCCCAACGA TCAAGGCGAG TTACATGATC CCCCATGTTG TGCAAAAAAG 2051 CGGTTAGCTC CTTCGGTCCT CCGATCGTTG TCAGAAGTAA GTTGGCCGCA 2101 GTGTTATCAC TCATGGTTAT GGCAGCACTG CATAATTCTC TTACTGTCAT 2151 GCCATCCGTA AGATGCTTTT CTGTGACTGG TGAGTACTCA ACCAAGTCAT 2201 TCTGAGAATA GTGTATGCGG CGACCGAGTT GCTCTTGCCC GGCGTCAATA 2251 CGGGATAATA CCGCGCCACA TAGCAGAACT TTAAAAGTGC TCATCATTGG 2301 AAAACGTTCT TCGGGGCGAA AACTCTCAAG GATCTTACCG CTGTTGAGAT 2351 CCAGTTCGAT GTAACCCACT CGTGCACCCA ACTGATCTTC AGCATCTTTT 2401 ACTTTCACCA GCGTTTCTGG GTGAGCAAAA ACAGGAAGGC AAAATGCCGC 2451 AAAAAAGGGA ATAAGGGCGA CACGGAAATG TTGAATACTC ATACTCTTCC 2501 TTTTTCAATA TTATTGAAGC ATTTATCAGG GTTATTGTCT CATGAGCGGA 2551 TACATATTTG AATGTATTTA GAAAAATAAA CAAATAGGGG TTCCGCGCAC 2601 ATTTCCCCGA AAAGTGCCAC CTGACGTCTA AGAAACCATT ATTATCATGA 2651 CATTAACCTA TAAAAATAGG CGTATCACGA GGCCCTTTCG TC