总糖的测定蒽酮比色方法

总糖测定——蒽酮比色法

一、原理：

单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。

二、试剂：

1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、

2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。

2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。

3、72%硫酸溶液。

三、测定方法：

（一）样品处理：

称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。

（二）测定

吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。

四、结果计算：

总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4

式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；

10-4：将ppm换算为%的系数

五、说明与讨论

1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。

2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。

3、反应液中硫酸的浓度高达60%以上，在此高酸度条件下，在沸水浴中加热，可使双糖、淀粉等发生水解，再与蒽酮发生显色反应。因此测定结果是样液中单糖、双糖和淀粉的总量。如要求测定结果不包括淀粉，应该用80%乙醇作提取剂，以避免淀粉和糊精溶出。此外，在测定条件下，纤维素也会与蒽酮试剂发生一定程度的反应，因此应避免样液中含有纤维素。

4、蒽酮试剂不稳定,易被氧化变为褐色，一般应当天配制，添加稳定剂硫脲后，在冷暗处可保存48小时。

5、此法要求样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀，如样液色泽较深，可用活性炭脱色。

蒽酮法测还原糖

总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。三、实验器材 1.吸管 2.试管 3.分光光度计 4.水浴锅 5.电炉 6.电子分析天平四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。 2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3． 6 mol/l HCl溶液。

4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。五、实验操作 1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作 2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。

样品中糖含量的计算： w —糖的质量分数（%）； C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）； m —样品的质量（mg ）。ｗ＝ CV ｍ ×100%

(整理)可溶性糖测定.

引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法 1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。（2）浓硫酸（比重1.84）。 1.2.3实验材料植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。表1 各试管加溶液和水的量管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

蒽酮比色法测总糖

[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42. 1. 2 试剂 0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中，加入蒸馏水25 mL, ，缓慢加入98% 质量分数）浓硫酸75 mL, ，边加边搅（于冰水浴中完成），直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用（临用新配）。浓盐酸、浓硫酸、NaOH ，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。 1. 3 方法 1. 3. 1 显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ，并加入蒸馏水至1m L, ，分别加入不同量的显色剂显色测定，以0. 1 mL, 蒸馏水为空白对照。 1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ，在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。 1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL 显色剂，进行显色测定。 1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验，考查 4 个影响因素（料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问）对实验的影响，因素水平见表 1.

1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中，加入30 mL, 蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中，加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ，冷却后，滴加一滴酚酞，用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。 1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn ，冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。 2 结果与分析 2. 1 吸收曲线用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625 nm 处有最大吸收，故本实验采用625 nm 为测定波长。 2. 2 显色剂用量由图 1 可以看出，当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9 m l。

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。五、结果计算

实验8-植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。三、材料、仪器及试剂

1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml 浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。五、结果计算样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项

总糖和还原糖的测定——斐林氏法

总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。一、目的学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。二、原理还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）

蒽酮比色法测总糖

啤酒中糖含量的测定蒽酮比色法测总糖一．实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。二．仪器与药品 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液（l00 μg/ml）：精确称取100mg干燥葡萄糖，先用蒸馏水定容至100ml，再取出10ml定容至100ml； (2)浓硫酸； (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用； (4)啤酒（不用处理）。三．实验步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。 2.稀释：吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml（先吸取2ml啤酒定容至100ml，再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml）

蒽酮法测定可溶性糖

植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法) 一、材料、仪器设备及试剂 1．材料新鲜或烘干的植物叶片 2．仪器设备分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。 3．试剂蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解； 9.2mol/L HCIO 浓硫酸（相对密度1.84）； l％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度； 100μg蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。淀粉标准溶液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60-70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，却为每ml含淀粉100g 的标准液。二、实验步骤 1．标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0~10分别编号，按表加人溶液和水，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml．以糖含量为横坐标；光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。表试剂管号 01,23,45,67,89,10 100μg·L-1蔗糖液/ml00.20.40.60.8 1.0 水/ ml 2.0 1.812.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量/μg020********* 2．可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10~0.30g ,共3份，分别放入3支刻度试管中，加人5－10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。 3．显色测定：吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml，然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。可溶%）＝（C*V／a*n）／（W*106）式中C：标准方程求得糖量（g） a：吸取样品液体积(ml)； V：提取液量hal）； n：稀释倍数；

饲料中淀粉的测定(蒽酮比色法)

化验室检测标准饲料中淀粉的测定（蒽酮比色法）———————————————————————————————————————一、原理用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在640 nm 下的吸光度. 二、试剂配制 1.80％乙醇溶液； 2.52％高氯酸溶液； 3.蒽酮试剂(将 0.4 g 蒽酮溶于 100 mL浓硫酸溶液中，现用现配)； 4.淀粉标准液(将 200 mg 淀粉倒入 100mL 烧杯中，加入 5 mL 蒸馏水，加入 65 mL52％高氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入 100 mL 溶量瓶中，加水定容，浓度 2 mg／mL；取上述标准淀粉溶液10.00 mL 于 250 mL 溶量瓶中，加水定容，此淀粉溶液的浓度为 80 ug／mL. ) 三．标准曲线在洁净的试管，分别加入 0.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0 ug 淀粉标准液，每一个浓度2 个重复，加水调整各试管溶液均为 2.00 mL，在冰水中冷却 2 min，加入 6.00 mL 蒽酮－硫酸溶液，摇匀，在冰水中冷却 2 min. 将试管放入沸水中 5 min，各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温. 用2.00 mL 蒸馏按照上述操作作为空白参比，于 640nm 波长下比色，测定各试管溶液的吸光度. 以吸光度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线，进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之间的回归公式。四．操作步骤 1.称取 1-2 g 饲料样品于 80 mL 离心管中，可溶性淀粉称取0.5g其中包括 2 个重复，加入 80％乙醇溶液 2 滴使样品湿润。 2.再加入 5 mL 水摇匀，加入 25 mL 热的 80％乙醇溶液, 摇匀后放置 5 min, 以2500 /分钟速度离心 5 min，倾出上清液。 3. 再用 30 mL 80％乙醇溶液提取1次。 4.于上述残留物中加入5 mL水和 30 mL 52％高氯酸溶液，搅拌 10 min，以 2500转/分钟离心 10 min。 5.将上清液转入 100 mL 溶量瓶中，残留物再用 35 mL 52％高氯酸溶液提取，合并提取液，以水定容。 6. 过滤，弃去最初5 mL滤液，吸取4.00 mL滤液于100mL溶量瓶中，加水定容. 取上述淀粉提取液 2.00 mL，测定沸水浴显色后溶液的吸光度. 五．计算公式淀粉(％)＝G/(8M). 式中：G 为由饲料样品提取液测定的吸光度，由工作曲线回归公式计算出来的淀粉毫克数；M 为饲料样品的质量；最后换算成每克饲料干物质中淀粉的含量。对于淀粉含量高，而且粗纤维含量低的谷物籽实饲料，推荐使用高氯酸水解－蒽酮比色法，其测定结果差较小，而作步骤快捷简便；对于粗纤维含量高的粗饲料，建议用酶水解法测定，但由于操作步骤繁琐，应尽量减少操作本身造成的实验误差，而且应该选用纯度高、活性强的酶制剂。

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器（1）分光光度计（2 ）电子顶载天平（3 ）三角瓶：50m1 X 1 （4 ）大试管：9 支（5）试管架，试管夹（6 ）漏斗，漏斗架（7 ）容量瓶：50rnl X 2 （8 ）刻度吸管：1m1X3 ，2m1X1 ，5mlX1 （9 ）水浴锅 2 . 试剂（1）葡萄糖标准液：l00ug/ml （2 ）浓硫酸（3）蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin 取出，用流水冷却，室温放置10min ，在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取lg,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入 4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug ）。查表所得糖含量（ug ）乂稀释倍数五、结果处理查表所得糖含量Cug）乂稀释倍数心植物样品含糖壘（%）=：样品重（町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题？

实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法精修订

实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]

实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。三、材料、仪器及试剂 1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H 2SO 4 ，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD 2.样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入 20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定

总糖含量的测定

实验二总糖含量的测定一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数六、注意事项：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定。二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

蒽酮比色法快速测定葡萄糖

蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 (二)试剂 (1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。 (2)2mol/L氢氧化钾溶液。 (3)3mol/L盐酸溶液 (5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。 (6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此液含糖为100μg/ml。 (三)测定步骤 1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为 2.0ml。从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。在分光光度计中,以640nm

2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。离心液倒入干净试管中。再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。此液用用淀粉的测定(B液)。 3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。 4.蔗糖的结果计算从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。式中: S──待测样品液中蔗糖量(μg) W──样品称重(g) V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml) V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml) V3──样品液总体积(ml) V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml) 5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。 6.果糖、葡萄糖的结果计算由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。

实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法

实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～ 120mg/100ml）。血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。血糖浓度的调节血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。神经系统的调节作用神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另

一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。激素使血糖浓度降低的激素 :胰岛素使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。胰岛素使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。胰高血糖素主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。肾上腺素

蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量

实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器，试剂和材料 1、仪器（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。（5）试管架，试管夹各2个； 2、试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。 3、材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。四、操作步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。 2、植物样品中可溶性糖的提取

总糖的测定-蒽酮比色法教学提纲

总糖的测定-蒽酮比色法

植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮比色法）2010-5-24 一、实验目的掌握蒽酮比色法测定总糖和还原糖含量的原理和方法，学会正确使用分光光度计。二、实验原理游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。三、实验材料 1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。 2．研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。 3．植物原料，如银耳、木耳、菜叶等。四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。 2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。 4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。五、操作步骤 1．葡萄糖标准曲线的绘制取干净试管6支，按下表进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。 2．样品中还原糖的提取和测定称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。（样品液显色后若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当稀释后再加蒽酮显色测定）。

植物组织中可溶性糖含量的测定

植物组织中可溶性糖含量的测定碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。（三）仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、 0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量