FLOW_Chapter CellQuest软件应用指南(繁体中文版)
第5章 CELLQUEST軟體使用手冊
學習本章後應能夠：
z真實血樣之3色螢光染色技術
z用CellQuest 從流式細胞儀收取3色樣本
z用CellQuest 從流式細胞儀分析3色樣本
z應用Quadrant（象限）產生統計
z將統計結果輸出爲試算表
z應用Region（區）和Gate（門）產生統計
5.1. CELLQuest軟體
1.1 概述
CELLQuest軟體從流式細胞儀上進行收取和分析資料的通用軟體。使用者可藉由CELLQuest 軟體來從事儀器之調整與設定，可用以進行細胞檢品之檢驗測量，CELLQuest 軟體同時是細胞儀的資料處理系統內的必要軟體。
在資料分析方面，CELLQuest 軟體提供使用者雙色或多色分析功能，可以定量各類細胞族群的百分比，細胞受染的螢光強度，也可以製作一維直方圖、二維散點圖、二維密度圖、二維等高線圖、及三度空間圖譜，並且可作文字處理之中間插圖，無需再剪貼拼湊，適用于論文發表，及會議報告使用。CELLQuest軟體功能強大且靈活，並與Macintosh 的多工環境完全相容。分析原始資料所得的統計資料，也可以輸出到 IBM-PC 相容的軟體，例如，EXCEL, PowerPoint, Lotus 123, SigmaPlot, 進行再統計分析或繪圖。
1.1.1 收取 (Acquisition)
即收取並儲存流式細胞儀上資料的過程。在收取前，需用您的樣本來最佳化儀器的條件。
1.1.2 分析 (Analysis)
將收取的資料進行進一步分析。在分析時，將讀取資料檔案，然後可畫Region (區)、設置Marker (界限)、和進行統計。在CellQuest中，可畫單參數直方圖、雙參數散點圖、密度圖和等高圖。
1.1.3 從收取到分析 (Acquisition?Analysis)
在CellQuest中，從收取到分析的功能允許在資料收取結束後可從收取圖轉換到分析圖。剛剛收取的資料及在收取時限定的格式出現在圖中，如Region, Marker 等。
1.2工具板
工具板可用來畫圖、Region, Marker和文字等。點擊選擇。工具板按
鈕
1. 等高圖：點擊，可畫等高圖，可自定義圖的大小。
2. 選擇：點擊，可選擇一個或多個目標，進行改大小或移動。
3. 3 維圖：點擊，可畫3維圖，可自定義圖的大小。
4. 直方圖：點擊，可畫直方圖，可自定義圖的大小。
5. 密度圖：點擊，可畫密度圖，可自定義圖的大小。
6. 散點圖：點擊，可畫散點圖，可自定義圖的大小。
7. 直方圖 marker：點擊，可在直方圖上定位 Marker 的左邊界和右邊界。
8. 象限 marker：點擊，可在散點圖、密度圖和等高圖上定位 marker 。
9. 縮小：點擊，然後點擊圖，將放大圖縮小到原大小。
10. 放大：點擊，然後點擊圖，將縮小圖放大到原大小。
11. 矩形 region：點擊，然後在散點圖、密度圖和等高圖中點擊，然後拖動對角線至所需
大小。
12. 多邊形 region：點擊，然後在散點圖、密度圖和等高圖中點擊形成起始點，然後拖動
滑鼠畫出多邊形頂點並在起始點處點擊完成多邊形 region。
13. 直方圖 region：點擊，可在直方圖上定位region 的左邊界和右邊界。
14. 橢圓形region: 點擊，然後在散點圖、密度圖和等高圖中點擊，然後拖動對角線至所需
大小。
15. 箭頭：點擊，然後在實驗文件中點擊，拖出直線。
16. 文本：點擊，然後點擊定位插入點並編輯文字。
17. 計算器：如果自動重複計算關閉，點擊進行資料複計算。
1.3 CellQuest 的文件
1.3.1 FCS list mode資料檔案：
是流式細胞儀的標準格式資料檔案（FCS2.0）。當Acquisition Control 視窗的Setup前未打;時，進行收取後自動保存的文件格式。該文件含有從流式細胞儀收取的平均2000-10000個細胞數的資料。一個含有4參數10,000細胞數的資料檔案若256道解析度則文件大小爲45kb，若1024道解析度則文件大小爲85kb。
1.3.2 CellQuest實驗文件：
您設置的圖、region、gate、統計(statistics)、markers、文字、顔色等
都將保存。資料檔案不在實驗文件中保存。CellQuest實驗文件的功能表由File功能表下New、Open、Close、Save及Save as等(類似Microsoft Word)。
z實驗文件可以後打開以恢復收取和分析。
z實驗文件可以通用範本儲存以用於常規收取和分析。除資料檔案外所有條件（包括region、gate、statistics）都可以通用範本儲存。
z在實驗文件中，有3種圖：收取、分析和收取到分析。一個實驗文件可含上述3種圖的組合，但收取圖不能用來分析，分析圖不能用來收取。
1.3.3 InstrSetting文件：
儀器調試實驗文件，可含Detector, Threshold, Compensation儀器條件的組合。
1.3.4 Statistic文件：
統計輸出文件，可Quadrant Stats（or Region Stats or Gate Stats）方
框中之所有資料。
1.4 CellQuest 的儀器控制
在CellQuest軟體中，儀器的控制選單位於Cytometer功能表中。用CellQuest進行3色分析中，應用陰性對照和調補償用對照進行儀器條件設置。陰性對照可用不加抗體組或同型對照組。它將用於調節FSC、SSC探測器、FSC閾值、設淋巴細胞區region、確認
FL1/FL2/FL3的設置及象限設置。調補償用對照包括單陽性螢光試劑，如包括下列試劑：CD8 FITC組、CD19 PE組、CD3 PerCP組。
調節探測器和放大器可使所需信號出現在資料圖的適當位置。細胞通過雷射束時産生光信號，然後轉換成電信號，並在散點圖上相對應於一個道值。依據所選的解析度的不同，道值有從 0-255、0-1023不同範圍。
1.4.1探測器 (Detector)：
在流式細胞儀中有二種探測器：光電二極體和光
電倍增管(PMTs)。光電二極管對光的敏感度低
於光電倍增管。光電二極體用於探測FSC，因
爲FSC是強信號。可通過電壓而選擇對FSC
信號的不同放大。
E00：將信號放大 1 (100)倍。
E01：將信號放大 10 (101)倍。
E02：將信號放大 100 (102)倍。
E03：將信號放大1000 (103)倍。
E-1：將信號放大 0.1 (10-1)倍。
光電倍增管(PMTs)用於探測SSC、FL1、FL2、FL3, 因爲它們是弱信號。 PMTs的電壓調節從150-999。當電壓上升時，信號增加，資料出現在道值較高處。可通過點擊↑↓來選擇或直接拖動滑標上下移動。
放大器（Amp Gain）：
可對信號進行微調。對FSC、SSC、FL1、FL2、FL3 可設置放大模式和放大增益。若放大模式選擇Lin (線性)，放大器的增益可在1－9.99之間調節。可通過點擊↑↓來選擇或直接拖動滑標上下移動。若放大模式選擇Log (對數)，放大器的增益則不可調節。對數常用於分開陰性信號和弱陽性信號。
1.4.2閾值（Threshold）：
可用來設置低於該道值的資料信號不被處理，只有高於閾
值道數的信號才傳送到電腦進行處理。每次只能有一個參
數設置閾值 (FSC、SSC、FL1、FL2、FL3)。在免疫表
型中，在FSC上設閾值。在DNA分析中，在FL2上設
閾值。可通過點擊↑↓來選擇或直接拖動滑標上下移動。
1.4.3螢光補償（Compensation）：
當樣本用2色或3色螢光染色時需調節補償以消除光譜重疊。因爲螢光素發射一定波段的螢光，因此在探測某種特定螢光素的探測器上有來源於另一種螢光素的螢光信號。FITC主要出現在FL1探測器上，但也有部分重疊到FL2探測器上。PE
主要出現在FL2探測器上，但也有部分重疊到FL1和 FL3探
測器上。補償調節如下：
FL1－％FL2：從FL1探測器上減去重疊的FL2
FL2－％FL1：從FL2探測器上減去重疊的FL1
FL2－％FL3：從FL2探測器上減去重疊的FL3
FL3－％FL2：從FL3探測器上減去重疊的FL2
補償調節量依賴於探測器的電壓。當補償過後的群體與陰性群體一致時，補償調節正確。補償調節可通過點擊↑↓來選擇或直接拖動滑標上下移動。
1.4.4儀器狀態（Status）：
在功能表位於Cytometer功能表中。用來在收取的任何時候
查看流式細胞儀的運行狀態，以利解決儀器運行中出現的問
題。
測試脈衝：在FACSCalibur中可從Status功能表中選擇FSC：僅FSC探測器上産生的信號、或ALL：所有探測器上産生的信號、或OFF。（注意：只在工程人員指示下可啟動此測試信號。）
狀態：顯示儀器運行模式
Not Ready：雷射器正在預熱、鞘液桶空、廢液桶滿。
Ready：樣本管插在SIP上且支撐臂位於中位(即管下)，樣本管加壓，儀器在RUN狀態。
Standby：儀器在Standby 狀態或儀器在Run 狀態而無樣本管在SIP上或支撐臂位於側位(即不在管下)或樣本管未完全加壓。Standby時儀器的雷射
器電源降低。
雷射器電源：以mW表示，在RUN時，爲15mW；在Standby 時，爲4－6 mW 。
雷射器電流：顯示雷射器電流值，當高於某值時，在顯示幕上會出現提示資訊。
樣本電壓：顯示樣本壓力和鞘液壓力之間的差異。當插上樣本管于上樣區時，樣本壓力和鞘液壓力之間的差異增加，該樣本電壓降低。
鞘液：顯示鞘液桶是空或OK。
廢液：顯示廢液桶是滿或OK。
1.5 CellQuest 的視圖
在實驗文件中，可畫圖和作統計圖。它們在顯示上有三種形式：
1.5.1啟動（Activated）：
外方框呈灰色。點擊除方框以外的任何地方即可啟動。每次只能啟動一個圖。任何命令只針對此啟動的圖。
1.5.2被選擇（Selected）：
在每個角出現黑色方框。點擊圖方框即可選擇該圖。一次可選擇多個圖。任何命令可影響被選擇的圖。可通過下列2種方式選擇多個圖：撳Shift鍵同時點擊多個圖方框或在實驗文件中點擊任何對角線拖方框包繞欲選的圖。若需全選，可從Edit 功能表中選擇select all。只要被選圖才可以更改大小、刪除和移動。
1.5.3去選擇（Deselected）：
圖方框的每個角無黑色方框。點擊圖外的任何地方即可去選擇。去選擇的圖不受任何命令影響。
5.2. 調試FACS Calibur 細胞儀
在此練習中，您將：
?建立CellQuest 實驗文件。
?調節FSC、SSC探測器和FSC閾值。
?畫淋巴細胞區、設門。
?調節FL1、FL2、FL3探測器。
?調節螢光補償。
2.1 調試最佳化儀器設置
爲按上述步驟進行最佳化，需準備下列樣本：
（1）Autofluorescence Control（不加任何抗體）
（2）IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PerCP。
（3）CD8-FITC。
（4）CD19-PE。
（5）CD3-PerCP。
1. 先開儀器後開電腦，以確保儀器
和電腦之間的正常通訊。
2. 在蘋果功能表下點擊CellQuest
啓動軟體。
3. 點擊實驗文件的右上角的放大
鈕，將實驗文件視窗放大。
4. 從工具板中點擊散點圖圖示。
5. 在實驗文件的空白區點擊，然後拖動對角線至所需大小。出現散點圖對話方框。
6. 點擊Plot source (散點圖來源)，選擇Acquisition (收
取)。
7. 確認X和Y軸參數預設為FSC-H 1024、SSC-H 1024。
8. 在顔色方框中點擊Multicolor Gating.。（收取樣品時，
門內細胞將出現顔色）。
9. 點擊OK。出現FSC/SSC散點圖。
10. 從Acquire功能表中選擇Connect to Cytometer。出現
Acquisition Control 對話方框。將其拖至空白區。
11. 從Cytometer功能表中選擇Detectors/Amps。出現 Detectors/Amps視窗。將其拖至空
白區。
12. 從Cytometer功能表中選擇Threshold。出現 Threshold 視窗。將其拖至空白區。
13. 確認Threshold參數為FSC。
14. Detectors/Amps視窗中之放大模式Mode之選擇，一般之設定如下：
FSC及SSC為LIN；螢光參數FL1 – FL3點選LOG。
2.2調節FSC/SSC探測器（電壓）及FSC閾值
在FSC/SSC散點圖上調節FSC放大器增益和SSC電壓是爲了將所感興趣的細胞顯示在圖中。調節FSC閾值是爲了去除碎片和噪音。所有樣本管都可用來調節，一般用陰性對照管來調。
1. 使儀器處於RUN，插上陰
性對照管。
2. 點擊Acquisition Control
視窗中的Acquire（注意Setup前需打叉或打勾，即不儲存資料）
3. 選擇FSC/SSC爲Lin（線性放大），將FSC電壓置於E00，調節FSC放大器增益(Amp
Gain)；調節SSC電壓(Voltage)；調節FSC閾值(Threshold)，觀察圖的改變。
4. 如下圖1，FSC放大增益不足；圖2，FSC增益太高；圖3，SSC電壓太低；圖4則
理想。
2.3 設置淋巴細胞Region
1. 在工具板中選擇多邊形的Region。
2. 在FSC/SSC散點圖上設淋巴細胞
Region，在Region外點擊，將R1
拖至空白區。該Region將在調節螢光探測器時
使用。
3. 移去陰性對照管，點擊Acquisition Control 視窗
中的Pause。
2.4 調節FL1、FL2、FL3的探測器（電壓）
用陰性對照管，在所有螢光散點圖上調節FL1/2/3的電壓來調節背景螢光。
1. 選擇散點圖。
2. 在出現的對話方框內選擇X軸：FL1-H 1024，Y軸：FL2-H 1024。
3. 選擇G1=R1。
4. 點擊OK，FL1/FL2的散點圖出現。
5. 點擊FL1/FL2散點圖的邊方框並將之拖至FSC/SSC圖的右側。
6. 同樣建立一個FL3/FL2的散點圖，並選擇G1=R1。
7. 在工具板中選擇象限界限，在FL1/FL2散點圖上以陰
性對照管的門內細胞畫象限，這些象限將指定陰性/陽
性區域。
8. 點擊FL1/FL2散點圖，拖動Marker的柄將它設定在
101處。
9. 從Stats視窗選擇Quadrant Stats（象限統計）。
10. 在FL3/FL2散點圖上，重復7-9步。
11. 插上陰性對照管。
12. 點擊Acquisition Control視窗中的Restart。
13. 若必要，調節FL1、FL2的電壓（在Detector/Amps 視
窗中），使這群細胞調在所有圖的左下角（如右圖）。
14. 若必要，調節FL3的電壓（在Detector/Amps 視窗
中），使這群細胞調在所有圖的左下角。
15. 點擊Acquisition Control視窗中的Pause。
16. 移去陰性對照管。
17. 關閉Detector/Amps 和Threshold視窗。
2.5 調節螢光補償
最佳化的最後一步是調節光譜重疊。若3色樣本，必要時需調節FL2-%FL1，
FL1-%FL2，FL3-%FL2，FL2-%FL3的補償。補償的調節依賴於由陰性對照管設定的探測器電壓。一旦電壓設定，補償用單陽性管調節。
1．從Cytometer 功能表中選擇Compensation。
2．插上CD8-FITC管。
3．點擊Acquisition Control視窗中的Restart。
4．若必要，調節FL2-%FL1使FITC+細胞在FL1/FL2散點圖的右
下象限。
5．移去此管，插上小鼠CD19-PE管。
6．點擊Acquisition Control視窗中的Pause、Restart。
7．若必要，調節FL1-%FL2使PE+細胞在FL1/FL2散點圖的左上象限。
8．若必要，調節FL3-%FL2使PE+細胞在FL3/FL2散點圖的左上象限
9．移去此管，插上CD3-PerCP管。
10．查看FL2-%FL3的補償，應爲0.0%，若必要，調節該補償。11．關閉Compensation視窗。
12．點擊Acquisition Control視窗中的Pause、Abort。
13．移去樣本管，插上雙蒸水管。將儀器處於Standby狀態。
14．您已完成3色螢光之最佳化。
2.6 調出由FACSComp 產生儲存的儀器條件
若已有儀器條件儲存檔，則可調出儀器條件設定檔並作微調即可。
1. 從Cytometer 功能表中選擇
Instrument Settings，出現對話方
框
2. 點擊Open，選擇目錄及文件
（如：Mac HD：/ BD Files：/
Instrument Setting Files：/ Calib
File），點擊Open。
3. 點擊Set、點擊Done。
5.3 收取細胞資料
在此練習中，您將：
?設定Acquisition（收取）和 Storage（儲存）的條件。
?設定文件儲存參數
?儲存實驗模板文件。
?儲存儲存、恢復儀器設置
?收取細胞資料
小鼠IgG1-FITC/小鼠IgG1-PE/CD45-PerCP
CD3-FITC/CD4-PE/CD45-PerCP
CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP
3.1 設置Acquisition & Storage 視窗
在此視窗可設定收取和儲存的細胞數及類型。也可設定儲存的參數及其解析度。
1. 從Acquire 功能表中選擇
Acquisition & Storage，出現
Acquisition & Storage視窗
2. 在Acquisition Gate 中選擇
預設設置：Accept、All。亦
即是螢幕上接受所有細胞的
資料。
3. 在Collection Criteria中選擇
定時設置：預設值為 10000
of All，即每一樣品收取
10000個細胞後存檔，10000
個細胞含其它非細胞雜訊。如
改為 10000 of G1=R1，即收取10000個位於 R1 區域中細胞，不計算氣泡與其它非細胞雜訊。
4. 在Storage Gate中選擇預設設置：預設值為All，即收取儲存所有細胞的資料。
5. 在Resolution（解析度）中選擇預設設置：1024
6. 點擊Parameter Saved，出現對話方框。
7. 只有被選參數才儲存在Data file中。若3色分析，FSC-H、SSC-H、FL1-H、FL2-H、
FL3-H需儲存。
8. 點擊此對話方框的OK。
9. 點擊Acquisition & Storage視窗的OK。
3.2 設置Parameter Description
1．從Acquire 功能表中選擇Parameter Description，出現Parameter Description對話方框。
2．點擊Folder，出現對話方框，選擇或新建文件夾「Your Folder」。
3．點擊此對話方框的Select「Your Folder」。
4．點擊Parameter Description對話方框的File，出現檔案名編輯視窗。
5．在Custom Prefix中：輸入檔案名MyData。
6．在File Name Suffix中選擇File Count。
7．在File Count中：確認輸入的爲1（如此CellQuest會依序以 .001, .002為附加檔名）8．點擊此對話方框的OK。
9．在Parameter Description對話方框中可輸入您想保存的Patient ID，Sample ID，Comments等資訊。
10．選擇或輸入所有參數名
選擇：如需要，可點擊右側的箭頭，選擇已設定的參數名。
輸入：或在P1-P5後的空格中輸入參數名。
3.3儲存實驗範本文件
準備工作：在麥金塔硬碟中建立一檔案匣，以暫存各纇檔案。在 Macintosh HD 上輕按兩下，可見硬碟中主目錄，如下圖，欲新增檔案匣時，可自File指令欄中選取New Folder，並將隨後出現之Untitled Folder更改為Your Folder。儘可能根據實驗相關資料命名檔案，如計畫主持人姓名，技術員姓名，檢測項目，或當天日期等，並儘量要求系統化。
在CellQuest中，您設置的含有圖、門、界限（Marker）和
統計的實驗文件可以範本文件形式儲存，以後可打開進行資料收
取和分析。範本文件也包含使用者在Acquisition & Storage與
Parameter Description方框中的設置。從File功能表中選擇
Save，出現文件保存對話方框，選擇或新建文件目錄及檔案名
（例：Your Folder：/3C Acquire），點擊Save。
3.4 儲存、恢復儀器設置
收取完樣品後，別忘了儲存和列印最佳化後的儀器設置條件，以備日後重新設置。
3.4.1 儲存儀器設置
1．從Cytometer功能表中選擇Instrument Setting。出現Instrument Setting視窗。2．點擊Save，出現文件保存對話方框，選擇文件目錄及檔案名（例：Your Folder：/3C Setting1），點擊Save。
3．點擊Print，列印儀器設置條件3C Setting1。
4．在Instrument Setting視窗中點擊Done。
3.4.2 恢復儀器設置
1．從Cytometer功能表中選擇Instrument Setting。出現Instrument Setting視窗。
2．點擊Open，出現文件打開對
話方框，選擇文件目錄及檔案
名（例：Your Folder：/3C
Setting1），點擊Open。
3．在Instrument Setting視窗
中點擊Set，待地球轉完消失
後，點擊Done。
3.5 用預設之實驗文件來分析檢品、收取資料
在此將用實驗範本文件收取資料。此前已用樣本細胞最佳化條件，收取和儲存的門及細胞數已設定、文件的儲存已設定。
1. 從蘋果選單中啟動CellQuest。從螢幕上方 File 指令欄中，選取 Open，開啟硬碟中已
建立之Your Folder：/3C Acquire收取用實驗文件。點擊 Open 即可。
2. 從螢幕上方 Acquire 指令欄中，選取Connect to Cytometer，進行電腦與儀器間之連
線。有一 Acquisition Control 方框顯示出來，將此視窗移至右下方。
3. 從 Cytometer 指令欄中，開啟 Detectors/Amps 與 Threshold 兩個對話方框，並將它
們移至螢幕的右方，以便利收取資料時可即時調整儀器設定。
4. 從 Cytometer 指令欄中，選取 Instrument Settings，在對話方框中，選擇 OPEN 以
調出儲存之儀器設定，Your Folder：/3C Setting1，點擊 Open 則方框中會出現先前儲存之儀器設定，確認無誤後，點擊 SET，螢幕上 Detectors/Amps 與 Threshold 兩個對話方框中之條件應會隨之改變成 3C Setting1，確認無誤後，點擊 DONE。
5. 在 Acquisition Control 視窗中確認: Setup。用陰性對照組樣品上機分析，HIGH
RUN。點擊 Acquire 以進行微調。調整完畢後，點擊 Pause，取下樣品換 PBS，儀器設定在Standby。
6. 從 Acquire 指令欄中，選擇Acquisition & Storage，會出現一對話方框，可確認
Acquisition & Storage儲存細胞資料之設置，點擊 OK 以確認。
7. 從 Acquire 指令欄中，選擇Parameter Description以確認檔案儲存處與檔案名稱。
8. 最後Acquisition Control視窗中，將: Setup 改成 Setup。此時CellQuest會自動
顯示 Your Folder:MyData.001為資料檔名。
9. 將第一管樣品放到檢測區，快速將支撐臂重定。HIGH RUN，點擊“Acquire” 便可啟
動樣品之分析測定與資料儲存。當第一管收取完成後，會自動儲存資料檔MyData.001，並會出現“嘟＂聲，CellQuest會自動升冪附加檔名成MyData.002。
10. 插上下一管，可繼續分析下一個樣品，直到所有檢品都分析完畢。
11. 您可在 Acquire 指令欄中，選擇「Counters」，
移放在右下方，便可觀察分析樣品之進度。
12. 分析完畢後用，用滑鼠從螢幕上方 Acquire 指令欄中，選取Disconnect to Cytometer
以斷絕電腦與儀器間之連線。之後您可進行關機程序或接著分析已儲存的資料，列印圖
表與報告。
13. 檢品分析完畢後，必須再執行下列步驟:
(1) 以2 ml 5％漂白水取代樣品，將樣品架置於左位以外管吸除約1 ml，再將樣品架
置於中位 HI RUN 五分鐘。
(2) 同上，改用2 ml DI water。
(3) 按STANDBY，樣品架上留約1 ml DI water。
(4) 退出軟體“File＂?“Quit＂(永遠選擇“Don‘t save＂)
(5) 關電腦“Special＂?“Shutdown＂。
(6) 務必等五分鐘後再關 FACSCalibur 電源，以延長雷射光源壽命。
3.6 典型的儀器設定
Single Color Two Color Three Color
FITC PE FITC/ PE FITC/ PE/ PerCP
FSC FSC FSC Threshold FSC
52 52 Value 52
52
FSC Voltage E00 (Lin) E00 (Lin) E00 (Lin) E00 (Lin)
SSC Voltage 350 (Lin) 350 (Lin) 350 (Lin) 350 (Lin)
FL1 Voltage 600 (Log) - 600 (Log) 600 (Log)
FL2 Voltage - 540 (Log)540 (Log) 540 (Log)
FL3 Voltage - 650 (Log)
FL1 – ﹪FL2 0.0 % 0.0 % 0.7 % 0.7 %
FL2 – ﹪FL1 0.0 % 0.0 % 25.0 % 25.0 %
FL2 – ﹪FL3 0.0 % 0.0 % 0.0 % 0.0 %
FL3 – ﹪FL2 0.0 % 0.0 % 0.0 % 17.0 %
5.4 CELLQUEST資料分析範例
4.1 概述
以下之範例練習可讓您熟悉 CELLQuest 軟體的基本功能，我們將以12個已儲存之資料檔案來示範一維直方圖及二維散點圖之資料分析。這12個資料檔案都是白血球表面抗原分析之實例，利用本公司 SimulTest 系列單株抗體，以免疫螢光染色技術來同時標記兩個白血球表面 CD 抗原，使其一個 CD 抗原發綠色螢光，另一個 CD 抗原發紅色螢光，再以流式細胞儀定量有表現各類 CD 抗原之淋巴球細胞之百分比。這12個資料檔案之檔名及樣品資料如下:
CD 抗原染色病人甲病人乙病人丙
同型對照組 NORM001 NORM005 NORM009
CD3/CD19 NORM002 NORM006 NORM010
CD3/CD4 NORM003 NORM007 NORM011
CD3/CD8 NORM004 NORM008 NORM012
4.2 二維散點圖之資料分析
在此練習中，您將：
z用FSC/SSC 二維散點圖設淋巴細胞門。
z在同型對照組FL1/FL2散點圖上設象限界限Quadrant Marker。
z用FL1/FL2散點圖分析2色資料。
z列印結果報告。
z以Next Data File指令依序分析其他資料。
z將分析文件以範本形式保存。
4.2.1 顯示一個二維散點圖
1. 從蘋果選單中選擇 CellQuest，放手後儀器
會啟動該軟體，可見一「Untitled」未命名文
件，以及工具板。您將利用工具板在
「Untitled」文件上編輯一分析用範本文件
(Analysis Template)。
2. 在「Untitled」文件右上角點擊一下以顯示整
頁大小。
3. 從螢幕左列工具板中，選取二維散點圖，在“Untitled”文件中，自左上到右下繪出一個適
當大小的方格，螢幕上會出現一對話方框。
4. 點擊 Select File 鈕，螢幕上會出現
一 Data File 對話方框，應用此方框
來下載軟體中已存之 Sample
Files，它們的路徑位於Mac HD:/BD
Applications:/CellQuest
Folder:/Sample Files。
5. 點擊 Open 來開啟 Sample Files 檔案匣。
6. 再點擊 Open 一次來顯示 NORM001 檔案。
7. 圖中的 X 與 Y 參數項會出現預設值—FSC-H 256 與 SSC-H 256，確認無誤之後，
點擊 OK 便完成了一個 NORM001 的 FSC /SSC 二維散點圖。
各平台软件的情况
一、ArcGis平台的有关情况： 1、软件的功能：是功能非常强大的GIS平台软件。 2、软件的易用性：ArcGis软件为大型的GIS平台软件，长期以来一直致力于大型数据库管理平台及GIS二次开发应用，更多的适用于国家级、省级数据中心建设和大型企业及科研机构的应用，软件自身为英文版，对系统主菜单有中文汉化包，更多的命令、工具集均为英文。软件对使用人员起点要求比较高、难学难精，更适合于专业人员使用。 3、平台的购置费用：适用于县级的软件包，C/S版国土优惠价 4.2万元，为5用户版，C/S、B/S混合版国土系统优惠价8.2万元，为5用户版。 4、售后服务： ⑴提供电话、传真、Email、网络、远程协助等免费的支持服务。 ⑵提供现场服务：每次上门服务费2万元。 ⑶提供菜单式的订购培训服务，依据培训的深浅程度不同收费。就县级使用而言，最基本的操作培训，每个人大约需要1万元。 ⑷软件升级维护，购买软件的12个月内（维护期），免费升级；12个月后，需要缴纳有关产品的年度升级维护费，才可以升级。 C/S版县级的软件包，年度升级维护费2.875万元；C/S、B/S 混合版县级的软件包，年度升级维护费4.175万元。 如果用户若干年后才继续产品升级，升级费用为相应产品维护费年价的1.5倍，而不是将过去历年服务费累加，即C/S版县级的软件
包，升级费2.875*1.5=4.175万元；C/S、B/S混合版县级的软件包，升级费4.175*1.5=6.2625万元。 （资料来源：ESRI中国（北京）有限公司政府事业一部） 二、搭建一个基于ArcGis平台的城镇地籍管理系统（以瑞得为例）： ⑴ArcGis平台（瑞得需要C/S、B/S混合版平台支持）：软件费 8.2万，现场安装服务费2万，培训费（每县培训2名使用人员）2万，合计12.2万元。（以后的年度升级维护费、上门服务费不计） ⑵瑞得城镇土地调查数据库管理系统：软件价格：3.8万（单一用户）。 ⑶一个县的ArcGis平台的瑞得城镇土地调查数据库管理系统完整价格，需要12.2万+3.8万=16万元整。 三、具有自主知识产权的国产GIS平台的城镇地籍管理系统（以超图为例）： 1、软件的功能： ⑴超图公司开发的SuperMap平台:通过科学技术部高新技术发展及产业化司委托，国家遥感中心联合中国地理信息系统协会、中国环境遥感学会、中国海外地理信息系统协会共同组织的2007年度国产空间信息系统软件测评，获得了基础软件、桌面软件、专业软件三
外汇操作第一讲
外汇业务会计操作指南 主讲人：王淑杰 第一章外汇日常业务及其会计处理 中国正逐步融入世界经济体系，特别是加入WT0后，我国对外经济贸易活动更加频繁，日新月异的电子商务，更是催生了国际贸易的繁荣。如果企业经常有外币业务应到银行开立外汇账户，然后进行外汇款项的支付和结算，并且在出口收汇、进口付汇时，进行相应的核销；外汇账户信息发生变化时，也应及时变更或撤销账户等。 第一节外汇与外汇管理 一、外汇的含义和种类 （一）外汇的含义 一般而言，外汇有动态和静态两种含义：动态意义上的外汇，是指人们将一种货币兑换成另一种货币，清偿国际间债权债务关系的行为，这个意义上的外汇概念等同于国际结算。静态意义上的外汇又有广义和狭义之分：广义的静态外汇是指一切用外币表示的资产；狭义的外汇是指以外币表示的可用于国际之间结算的支付手段。 我国的外汇管理法令中一般沿用广义的静态外汇概念。根据2008年8月1日修改通过的《中华人民共和国外汇管理条例》(以下简称《外汇管理条例》)的规定，外汇是指下列以外币表示的可以用作国际清偿的支付手段和资产：（1）外币现钞，包括纸币、铸币；（2）外币支付凭证或者支付工具，包括票据、银行存款凭证、银行卡等；（3）外币有价证券，包括债券、股票等；（4）特别提款权；（5）其他外汇资产。 （二）外汇的分类 外汇基本分为三大类，自由外汇、有限自由兑换外汇和记账外汇。 1．自由外汇 自由外汇又称“自由兑换外汇”、“现汇”，是指不需要外汇管理当局批准可以自由兑换成其他国家货币，或者是可以向第三者办理支付的外国货币及支付手段。世界上有50多种货币是可自由兑换货币，其中主要有美元、英镑、日元、港币、新加坡元、加拿大元、澳大利亚元、新西兰元等货币，以及用这些货币表示的汇票、支票等支付凭证和信用凭证。 特别提示 实务中可能会接触到现汇(外币，下同)和现钞的不同提法。现汇是指以外币表示的可以用作国际清偿的支付手段。现钞是指外国货币，包括纸币和铸币。也就是说现钞就是通常说的钱，而现汇除了钱外还包括外币银行存款、票据、股票等。 现汇账户的收入是各种汇入或转入的现汇款项，现钞的收入一般是由境外携入或个人退还的外币现钞，比如赴国外出差人员返还的外币备用金；如果单位收到的外币现钞要存入现汇账户，需经过现钞折现汇的计算；同样，如果单位从现汇账户上提取现钞，也要经过现汇折现钞的计算。 2．有限自由兑换外汇 有限自由兑换外汇是指未经货币发行国批准不能自由兑换成其他货币或对第三者进行
商务谈判实训总结
商务谈判实训总结 商务谈判是在经济活动中，谈判双方通过协商来确定与交换有关的各种条件的一项必不可少的活动，它可以促进双方达成协议，是双方洽谈的一项重要环节。商务谈判是人们相互调整利益，减少分歧，并最终确立共同利益的行为过程。我们就是以这种形式来进行模拟商务谈判，在谈判过程中充分利用课程所学的方案策略，同时也结合营销手段，达到谈判的最佳效果。 在本周实训的第一天，侯老师教我们学习谈判中的礼仪，比如我们的站姿、坐姿、怎样打领带等等。让我们从中受益匪浅，每一个细节都可以延伸应用到我们以后的工作生活中。 在实训的第二天，我们的任务是按小组完成方案撰写和开局与签约的模拟。其中，方案撰写，分为买方和卖方的角色完成，具体小组内部分工。我们小组有6人，林丹娜、吕珺婧和我3人完成买方方案，杨明明、李怡敏和郑煌佳3人完成卖方方案。在上午时段我们完成了纸质稿的内容并交到学习委员那里，下午的时候6人一同前往图书馆完成了谈判情景模拟拍摄。 在实训的第三天，班级的团支书下达了双数同学的任务。首先我被分配到组建公司的任务，我们的小组成员有王茂、刘挺、楼姗姗、颜青云、杨明明、娄华锋。作为小组长的我，在第一时间联系了各个小组成员，并在讨论组里分配好任务，杨明明负责我们公司的产品介绍，要求图文并茂，（我们公司主营景宁惠明茶，龙泉贡茶，遂昌太虚妙露茶，松阳银猴，等等），她上网负责搜索这些茶叶的资料，并配上对应的图片。刘挺负责我们公司最重要的经营产品：景宁惠明茶（这个产品是我们要与美国某公司关于购销茶叶谈判的茶叶），是我们公司的招牌。也要求图文并茂，一定要详细一些，图片要好看一些。颜青云负责我们公司产品主要经营的方向。楼姗姗负责我们公司的介绍。娄华锋负责做我们公司产品的资信程度。分配好小组成员的各项任务后，我负责整理和修改他们所发给我的内容，然后组建好公司发给林丹娜。当天我们高效的完成了林丹娜分配给我们的任务。 在实训的第四天，我收到任务到团支书寝室与英语1118班的美方代表磋商，当时达成了协议。之后我又负责书写了谈判人员的姓名。晚上的时候准备收集各项有利于我们周五谈判的资料。
软件系统简介
发电厂运行仿真分析系统软件系统简介 软件网站：https://www.360docs.net/doc/6217074851.html, 主要邮箱：szy@https://www.360docs.net/doc/6217074851.html, 附属邮箱：emrun@https://www.360docs.net/doc/6217074851.html,
目录 1. 软件版本简介 (1) 1.1 原理版功能 (1) 1.2 定制版功能 (1) 1.3 单机版功能 (1) 1.4 网络版功能 (1) 2. 软件功能简介 (2) 2.1 节能分析功能 (2) 2.2 运行仿真操作 (2) 2.3 故障事故分析 (2) 2.4 试验优化分析 (3) 2.5 设计优化分析 (3) 2.6 运行优化分析 (3) 3. 软件支撑系统 (1) 4. 软件操作简介 (3) 4.1 工况选择／保存功能 (3) 4.2 冻结／解冻/加速 (3) 4.3 外部参数设置功能 (4) 4.4 回退功能 (4) 4.5 事件及报警记录 (4) 4.6 重演功能 (5)
4.7 快存功能 (5) 4.8 故障设置功能 (5) 4.9 各类操作画面示例 (6) 4.10 测试版说明 (10)
1. 软件版本简介 1.1 原理版功能： 原理版软件只对通用类型的电厂生产原理过程进行仿真，在仿真范围及控制室表盘配置及DCS画面上进行简化，适合于现场运行管理人员和节能分析人员对运行过程进行理论分析，主要包括：故障运行分析、经济指标分析和典型技术分析，适用于对电厂机组的初步理论指导和经济核算指导。原理版软件也适合于大专院校热动、热自及电气专业的学生的课程学习。 1.2 定制版功能： 定制版软件只对某一具体电厂的生产过程进行仿真，满足电厂控制室DCS系统的完整操作画面及相关表盘的虚拟配置，建立的各系统数学模型能够真实再现这个电厂生产过程的各种运行工况，在功能、模拟范围和模型逼真上较高，对电厂设计论证、技术改造、经济评定、节能分析及对实际运行数据的跟踪比较程度水平较高。定制版软件主要适用于运行人员岗前培训、运行人员实时数据优化指导。 3. 单机版功能： 单机版软件的所有运行操作及节能分析功能都集成在单台计算机软件内，在独立的该计算机上能够完成仿真及运行的所有操作功能，包括运行操作分析、故障处理分析、经济指标分析等操作功能。 4. 网络版功能： 网络版软件按照不同的运行操作功能对仿真分析系统进行平台设置，可以在同一局域网内将不同的网络节点计算机设置成不同功能的操作员站：如汽机操作员台、锅炉操作员台、电气操作员台、故障设置及经济指标统计平台等。
农村集体三资管理(定稿)
农村集体“三资”管理制度 为了进一步加强农村财务管理，规范村级财务收支行为，管理用好农村集体资产、资源、资金，保证农村经济健康快速发展，规范我县农村“三资”管理工作，特制定本管理制度。 一、财务收入管理制度 1、村集体经济组织应当依法、合理组织收入，加强货币资金管理。 2、村集体经济组织收入主要包括：上级和部门对村级的专项补助和拨款、村内兴办集体公益事业“一事一议”筹资筹劳收入、集体统一经营收入、发包及村办企业上缴收入、投资收益、上级转移支付以及奖励、救济扶贫补助、补偿资金、社会捐赠资金、集体建设征地地补偿费，以及各种代收、借贷等其他收入。 3、村集体经济组织取得的各项收入应当使用“省农村集体财务与资产监督管理总站”统一监制的票据，确保收入有据可查，并在一定的时限内及时、足额上缴乡镇农村集体财务委托代理中心入帐核算，严禁私设小金库、坐支、截留、挪用或擅自抵顶债务。上级转移支付以及奖励、补助、补偿资金等须直接拨入乡镇农村集体财务委托代理中心帐户，统一支付管理。
4、乡镇农村集体财务委托代理中心要经常核查村级有关经济往来帐目，定期与开户银行核对，定期盘点库存现金，发现问题及时纠正。 二、财务开支审批制度 1、村集体经济组织各项支出应做到集体理财、民主管理、公开透明。 2、村集体经济组织支出主要包括：；村（组）干部报酬、办公费、会议费、差旅费、广播通讯等管理费、计生支出、五保户供养、集体统一经营支出、公益事业支出、生产建设支出、经营性支出、其他经审核许可支出。村级不得开支招待费。 3、村集体经济组织支出实行备付金制度，每月由村出纳员到乡镇农村集体财务委托代理中心领取一定数量的备付金用于日常开支，发生超出备付金限额的支出事项时，村应提前向中心提出申请，经中心主任审批后预支。 4、财务开支事项发生时，经手人必须取得合法有效的原始凭证，注明用途并签字（盖章），经村书记和村主任共同审批同意并签字，定期交村民主理财小组审核。大额开支，村民主理财小组审核后须提交村民会议或村民代表会讨论决定。财务开支严禁“白条”做帐。 5、审核同意后的财务开支票据由村出纳员负责到乡镇农村集体财务委托代理中心报账。中心要加强对原始单据的
国家外汇管理平台操作指南审批稿
国家外汇管理平台操作 指南 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
国家外汇管理局应用服务平台操作指南 前言： 1.本指南适用于尚未开通国家外汇管理局应用服务平台账号和首次登陆平台尚以及尚未进行初始化角色分配的用户。 2.国家外汇管理局应用服务平台地址：建议使用版本以上IE浏览器访问国家外汇管理局用服务平台。 4.国家外汇管理局应用服务平台对外服务时间：工作日 8:00-20:00 5.国家外汇管理局网站有时会出现无法登陆，网页打开缓慢等情况，遇到这样的情况可以多试几次或者晚些时候重试1.国家外汇管理局应用服务平台账号开通 企业应到所属外汇局申请业务开通（国际收支网上申报系统是到银行申请业务开通），外汇局业务人员通过本应用中的“企业网上业务开通/关闭”功能为申请开通的企业办理业务开通并出具开通通知书（见下图1），应用服务平台将自动为开通后的企业生成业务管理员（ba），为其指派/撤销该应用的企业类角色。开通通知书包含访问地址、初始密码等信息。 若使用中企业的业务管理员（ba）密码有遗忘，应通过所在地外汇局，由业务操作员进行密码重置。 企业的业务操作员由企业业务管理员负责增加，并为其分配角色。如果业务操作员已经在平台存在（即办理过其他业务），则应直接分配权限即可。在使用过程中若密码有遗忘，应通过本机构的业务管理员（ba）进行密码重置。
图1：货物贸易外汇管理网上业务开通 ? 2.首次登录&重置初始密码 ASOne的客户端是IE浏览器，在浏览器地址栏中输入相应的URL地址，显示图2的登录页面：
商务谈判实训心得体会范文3篇
商务谈判实训心得体会范文3篇 导读：本文是关于商务谈判实训心得体会范文3篇，希望能帮助到您！ 一、认识： 1、从谈判前的人员分工、收集整理相应的资料到现场模拟谈判展现出小组成员的协调能力、动手能力和团队合作能力及各方面沟通、组织能力。同时增进了小组成员的友谊，也拉进了老师和同学之间的距离。 2、谈判前，资料的收集、整理对谈判很重要，影响着谈判的进度和达成一致的成功率。 3、谈判时，明确自身立场时刻保持清醒的头脑不要陷入无谓的争论中乱了方位，同时要有敏捷的思维，不断转换思路，扭转谈判形势。 4、学会控制谈判氛围，一张一弛，拉近谈判双方距离，增进双方感情促进谈判圆满达成。 5、在谈判开始之前分配好谈判选手各自的任务、职责以达到相互配合、相互协调的目的，从而提高谈判成功率。 二、不足： 1、在语言表达方面，犀利的言语反击也是必要的但要注意场合不要过激，这样既不失涵养又留有继续谈判的空间，并且作为一个谈判人员要时刻提醒自己，此次的你不仅代表你自己还代表这你所代表的公司单位，不能胡来、不讲道理。 2、谈判开局时双方代表有一方态度一直很强势，根本没有站稳立场，没有值得参考借鉴的观点、想法，让谈判一度陷入争执，甚至僵局冷场。商务谈判心得体会 3、各组代表成员对各己的分工不明确，在双方互递资料
的时候出现混乱。 三、收获： 在这周的实训中，虽然只是一次模拟谈判，但也让我感受到了谈判的氛围，反思到以下几点： 1、商务谈判的原则。在商务谈判中不要在立场上讨价还价，争执不休，这样会降低谈判的效率，要协调谈判双方的利益，只有站在对方的利益上考虑问题，多为对方考虑，在保持自己利益的上尽量为对方的利益考虑，然后再互赢得基础上提出自己的看法，不要因为自己的原因去责怪对方，要有良好的谈判情绪，有良好的沟通，是对方了解自己的谈判是诚心的而不是虚情假意，当然，谈判的人要言而有信，说话要留有余地，少听多讲! 2、商务谈判的技巧。在谈判的过程中，要注意几点：1.讲话技巧，不要言语粗劣，语气要委婉但是又不失阳刚之气，接下来是要密切注意对方的反应，看对方的反应随时改变自己的应对策略;2.提问技术，再提问题的过程中要抓住重点，不要问一些无关紧要的问题;3.回答技巧，回答的时候要注意言简意赅，不要废话连篇。4.说服技巧，在说服对方的时候，要做好利益分析，简化接收手续，当对方不满时，要避免争论。 3、商务谈判的策略。要明白对方的需求，在知道对方的需求时，才能更好的在谈判的过程中获得谈判的优势。 4、在商务谈判中，我们要时刻保持冷静清醒的头脑，这样才有利于自己的谈判，才能在谈判的过程中获得有利的地位。 5、要了解对手，因为知己知彼，百战不殆。 另外，经过老师的指点，我们充分认识了此次模拟谈判的不足之处，让我们学到更多谈判技巧，经过了这次谈判，我们每个人都会或多或少从中领悟到一些东西，或是几点体会，或是一点经验，或是认识到自己的不
软件应用系统
第1章软件应用系统 1.1供求信息管理平台 供求管理系统包括以下功能： 会员管理：提供多级会员管理制度，如普通会员、实名会员，同时，提供会员信誉积分管理制度，不同等级的会员有一定的信誉积分限制。会员信誉积分达到一定量后，便有机会提升会员等级。对于级别高的会员可以给予一定奖励。采用信誉积分制管理会员可以提高信息的真实、有效性，同时可以提高平台的使用率。 普通会员发布供求信息后，经过管理员在后台审核通过后，可正式在网站上进行发布显示。每发布一条信息，根据信息的真实性和有效性，奖励一定的信誉积分，进行信誉积分累加。信誉积分达到一定的分数后，管理员根据会员的表现会主动和会员联系，提升会员为实名会员。 实名会员发布的供求信息，可以不通过后台管理员的审核，直接发布到网上。为了确保信息的真实性和可靠性，加入实名会员，必须携带有效证件及复印件（如身份证、工作单位证明、县乡村证明、营业执照）等信息，在专门的部门登记后，由管理员分配为实名会员。实名会员发布的信息如有违反会员管理条款,一经发现,管理员有权降低该会员的会员等级或减少该会员的信誉积分。 站内搜索功能:
●简单搜索 输入需要检索的信息关键字，即可在全站内检索到含有此关键字的信息。同时如果检索出来的结果繁多，可以再次输入关键字，选择“在结果中搜索”，进行二次搜索。 ●高级搜索 提供组合查询条件，可根据时间、标题、内容、栏目名称等多条件组合查询信息，使信息查询结果更精确。 产品市场价格信息实时发布系统: 信息员可以把当地渔产品的市场价格信息实时的发布到平台上，为供求双方提供一个买卖产品的价格参考。 供求信息发布系统： 提供多渠道供求信息发布方式。用户可以通过网络直接发布信息,把自己能够提供的产品发布在网上，详细描述产品的品种、质量、特征、数量、价格等信息，并且留下自己的联系方式，如果浏览网站的其他人恰好对该商品有需求，则可以通过网站上的联系方式和对方联系，促进当地贸易的发展；需要求购物品的用户也可以把自己需要的物品的品种、质量要求、数量要求、可接受的价格信息等发布到供求信息平台，让有商品的商家或个人主动和他联系。 提供对不良信息的屏蔽功能，发布的信息内容中包含不良信息，将不能发布在网上；管理员则可以通过后台的管理程序，将过时的或者明显虚假的信息删除。 信息发布收费系统（平台的盈利模式）：
农村三资管理办法
农村三资管理办法 农村三资管理办法 农村三资管理办法:2011-6-28 21:56:28 县农村集体“三资”管理办法第一章总则第一条为深入推进农村基层党风廉政建设，切实加强农村集体资金、资产、资源（以下简称“三资” ）管理，保护农村集体“三资”所有者和经营者的合法权益，确保农村集体“三资”保值增值，促进农村经济发展，根据相关政策法规，结合我县实际，制定本办法。第二条本办法适用于全县各村集体“三资”的管理。第三条村全体成员是村集体“三资”的所有者，依法享有对村集体“三资”的占有、使用、收益和处分的权利。第四条县农业局（经管总站）是各代理服务中心的主管部门，在加强农村集体“三资”管理工作中履行以下职责：（一）负责督促各代理服务中心认真履行职责，优化服 务质量。（二）负责对“三资”代理服务中心工作人员进行培训、考核、奖惩工作。（三）与乡镇党委、政府紧密配合，有效化解涉及“三资”管理方面的信访矛盾，严肃查处违纪违法问题。（四）指导和督促各代理服务中心及时公开涉及“三资” 管理方面的重大事项。（五）建立健全农村集体“三资”管理各项规章制度，并认真抓好落实，保证农村集体“三资”正常运转，保值增值。（六）加强对各代理服务中心日常工作的指导和检查，保证各村集体“三资”底数清晰，台帐完备，帐、村主任不准兼任村财务人员。第十一条严格执行国家《现金管理暂行条例》，村集体现金收入由村民理财小组审核后及时记入本村账簿，并在三日内由村报账会计交代理服务中心代管入账。严禁坐收坐支、瞒收不报和私设“小金库”。第十二条村集体存款实行银行统一开户。代理服务中心对代管的各村资金要统一在当地银行、信用社开户，不准另行开户，严禁公款私存。第十三条村集体对外联营投资入股，必须经村民会议或村民代表会议讨论决定，并与对方签订合同，由代理服务中心备案。购买的有价证券、股票等由代理服务中心代管，并纳入账内核算，登记名称、类别、金额、购买日期、兑换日期、利息标准和盈亏等情况。第十四条村集体应收款项要及时收回，对确实无法收回的呆账、死账，必须经村民会议或村民代表会议讨论决定，报代理服务中心审核后进行账务处理，严禁擅自进行账务处理。第十五条村集体资金收支票据必须具备日期、收支项目、数量、单价、大小写金额等
国家外汇管理平台操作指南
国家外汇管理局应用服务平台操作指南前言： 1.???????本指南适用于尚未开通国家外汇管理局应用服务平台账号和首次登陆平台尚以及尚未进行初始化角色分配的用户。 2.???????国家外汇管理局应用服务平台地址： 3.???????建议使用IE6.0版本以上IE浏览器访问国家外汇管理局用服务平台。 4.???????国家外汇管理局应用服务平台对外服务时间：工作日8:00-20:00 5.???????国家外汇管理局网站有时会出现无法登陆，网页打开缓慢等情况，遇到这样的情况可以多试几次或者晚些时候重试 1.国家外汇管理局应用服务平台账号开通 企业应到所属外汇局申请业务开通（国际收支网上申报系统是到银行申请业务开通），外汇局业务人员通过本应用中的“企业网上业务开通/关闭”功能为申请开通的企业办理业务开通并出具开通通知书（见下图1），应用服务平台将自动为开通后的企业生成业务管理员（ba），为其指派/撤销该应用的企业类角色。开通通知书包含访问地址、初始密码等信息。 若使用中企业的业务管理员（ba）密码有遗忘，应通过所在地外汇局，由业务操作员进行密码重置。 企业的业务操作员由企业业务管理员负责增加，并为其分配角色。如果业务操作员已经在平台存在（即办理过其他业务），则应直接分配权限即可。在使用过程中若密码有遗忘，应通过本机构的业务管理员（ba）进行密码重置。 ?图1：货物贸易外汇管理网上业务开通 2.首次登录&重置初始密码 ASOne的客户端是IE浏览器，在浏览器地址栏中输入相应的URL地址，显示图2的登录页面： 图2：国家外汇管理局应用服务平台登录页
用户登录：在该区域，输入用户的机构代码（同组织结构代码）、用户代码、用户密码，系统对用户的身份进行认证，认证通过后，如果用户是第一次登录系统，系统会要求修改密码，如图3所示，如果不是第一次登录系统，登录后，显示该用户可访问的应用系统（如图5），用户点击应用系统后，进入组装界面，进行相关的操作。 图3 系统强制修改密码 在图3所示界面，输入用户的原有密码、新的密码、重复密码，其中新的密码与重复密码必须相同，且不等于初始密码，点击确定按钮，进入如图5所示的平台主界面，进行相关的操作。 图4 修改密码 图5：平台主界面 3.创建业务操作员并进行权限分配（以个人结售汇为例） ? ?(1)首先用个人结售汇业务管理员（简称ba）登录到应用服务平台 ? ?(2)进入功能页面，单击“用户角色管理”-》“业务操作员维护”，如下图： ? ?(3)点击“增加(A)”按钮 在上图业务操作员的增加界面，输入用户代码、用户名称、联系电话、邮箱地址、初始密码，其中用户代码、用户名称、初始密码为必填项，用户代码不能重复。 注意：如果业务操作员在平台中已有用户代码，则直接分配角色即可。 ? ?(4)在角色分配区域，为该业务操作员分配角色，如下图： 注意，为了保证自营出口数据采集工具生效，角色中务必包含：“货物贸易外汇网上业务” 注意：用户代码对应首页登录框中的用户代码，并且一定要为该用户分配角色，否则新建用户登录系统后没有可以访问的功能资源。 ? ?(5)在上图中，单击“保存”按钮，如果保存成功，会有提示信息，如下图： ? ?(6)设置成功后，请用业务操作员账号重新登陆本系统，并修改初始密码。密码修改完成后，再按照《自营出口数据采集工具说明书》的流程设置
商务谈判实训心得体会(体会心得)
商务谈判实训心得体会 在本期的第十三周我们迎来了我们的商务谈判实训学习。这次实训由我们的王鹏老师带领，并且这次实训主要围绕着“若尔盖草原生态环境问题”和“四川两河镇新农村建设”主题展开，为期一周的商务模拟谈判。王老师让我们进行模拟谈判是为了锻炼我们对所学知识的灵活掌握程度和实际运用能力，作为年轻大学生的我们要学会把知识学以致用，理论与实际充分结合。这次实训老师把全班同学分成五个小组，并且这五个小组分别扮演不同的角色，在“若尔盖草原生态环境问题”中有两小组同学分别扮演牧民和政府并展开辩论；在“四川两河镇新农村建设”中有三小组同学分别扮演农民、政府和电力公司也展开了精彩的辩论。在围绕着这两个主题的模拟谈判中虽然有一些不尽人意的地方但还是有一些收获，以下是我对本次模拟商务谈判的总结，希望通过此次总结吸取其中的可取之处并在以后的学习生活中不断改进、不断提高、不断超越。 一、认识： 1、从谈判前的人员分工、收集整理相应的资料到现场模拟谈判展现出小组成员的协调能力、动手能力和团队合作能力及各方面沟通、组织能力。同时增进了小组成员的友谊，也拉进了老师和同学之间的距离。 2、谈判前，资料的收集、整理对谈判很重要，影响着谈判的进度和达成一致的成功率。 3、谈判时，明确自身立场时刻保持清醒的头脑不要陷入无谓的争论中乱了方位，同时要有敏捷的思维，不断转换思路，扭转谈判形势。
4、学会控制谈判氛围，一张一弛，拉近谈判双方距离，增进双方感情促进谈判圆满达成。 5、在谈判开始之前分配好谈判选手各自的任务、职责以达到相互配合、相互协调的目的，从而提高谈判成功率。 ●二、不足： 1、在语言表达方面，犀利的言语反击也是必要的但要注意场合不要过激，这样既不失涵养又留有继续谈判的空间，并且作为一个谈判人员要时刻提醒自己，此次的你不仅代表你自己还代表这你所代表的公司单位，不能胡来、不讲道理。 2、谈判开局时双方代表有一方态度一直很强势，根本没有站稳立场，没有值得参考借鉴的观点、想法，让谈判一度陷入争执，甚至僵局冷场。 3、各组代表成员对各己的分工不明确，在双方互递资料的时候出现混乱。 ●三、收获： 在这周的实训中，虽然只是一次模拟谈判，但也让我感受到了谈判的氛围，反思到以下几点： 1、商务谈判的原则。在商务谈判中不要在立场上讨价还价，争执不休，这样会降低谈判的效率，要协调谈判双方的利益，只有站在对方的利益上考虑问题，多为对方考虑，在保持自己利益的上尽量为对方的利益考虑，然后再互赢得基础上提出自己的看法，不要因为自己的原因去责怪对方，要有良好的谈判情绪，有良好的沟通，是对方了解自己的谈判是诚心的而不是虚情假意，当然，谈判的人要言而有信，说话要留有余地，少听多讲！
软件开发平台在企业中的应用
软件开发平台在企业中的应用 对于刚毕业的大学生来讲，从事软件开发行业等于是踏上了IT业的头等舱，很多计算机系相关专业的学生都在纷纷面试软件开发及维护的相关岗位。IT企业在招聘的时候会给面试者设置沟通考核，上机测试等重重关卡，不但要求应聘者具有扎实的理论背景、优秀的动手能力，还要有恰当的表现力。这些条件对于缺乏实践训练的大学生来说很难达到。还有一年的时间我们07级的学生就要毕业走向社会了，面临日益激烈的竞争，我们如何在竞争中脱颖而出? 面对推陈出新的技术，我们如何跟上时代的步伐？为此，我们根据软件工程师的必备素质，给有志成为软件精英的学生们提出一些建议。 首先，要了解软件开发的具体流程。实际的软件项目开发过程，它是遵循一定的软件开发流程的。这个流程基本上应该是标准化的。一个软件项目的形成，它分为前期的项目搜寻阶段，这个阶段的主要任务是收集一些市场信息，跟踪用户的需求等。再就是项目立项，提出立项的建议，提供合适的资金和资源，使项目建议成为正式项目。然后就是项目的售前工作，合同的生成以及合同的执行。具体到工作岗位，比如说需求分析员，根据客户的说明，发现软件需求并最终写成《软件需求说明书》；软件设计员，根据《软件需求说明书》的要求，设计软件方案，写成《软件设计说明书》；程序员根据《软件设计说明书》的要求编写程序代码；测试员根据《软件需求说明书》的要求，检查软件产品是否符合设计的要求。这只是大致的流程，实际情况要比这还复杂。 其次，要了解当今的主流开发平台都有哪些，主流开发技术都有哪些。J2EE 和.net都是当前web应用系统开发的主流平台。Web应用系统就是利用各种动态Web技术开发的基于B/S(浏览器/服务器)模式的事务处理系统。用户直接面对的是客户端浏览器，使用系统时，请求之后的事务逻辑处理和数据的逻辑运算由服务器与数据库系统共同完成，对用户而言是完全透明的。运算后得到的结果再通过浏览器的方式返回给用户。比如：ERP系统、CRM系统以及常见的网站系统(如电子政务网站、企业网站等)都是Web应用系统。不同的软件开发平台，所应用的技术也不一样。以J2EE为例，J2EE是Java2平台企业版（Java 2 Platform,Enterprise Edition）的缩写。它是一套全然不同于传统应用开发的技术架构，包含许多组件，主要可简化且规范应用系统的开发与部署，
农村集体资金资产资源管理规定
农村集体资金资产资源管理使用决定 第一章总则 第一条为切实加强本村集体资金、资产、资源(以下简称“三资”)管理，保护农村集体“三资”所有者和经营者的合法权益，确保本村集体“三资”保值、增值，促进本村集体经济发展，根据有关法律、法规规定，结合我村实际，制定本办法。 第二条村党支部书记是本规定具体实施的第一责任人;村委会主任是本规定具体实施的直接责任人，应当带头遵守、严格执行本规定，依法加强村集体资金、资产、资源和财会人员的管理。 第三条村集体全体成员是村集体“三资”的所有者，依法享有对村集体“三资”的占有、使用、收益和处分的权利。村集体经济组织代表村集体全体成员依法对村集体“三资”进行管理，其主要职责是： (一)执行本集体经济组织成员会议或者其代表会议通过的章程、决议和决定； (二)制定村集体“三资”管理的规章制度； (三)向本集体经济组织成员会议或者其代表会议报告村集体“三资”管理工作； (四)指导、监督所属经营单位对集体“三资”的管理和使用； (五)负责村集体“三资”的日常管理工作；
(六)接受乡党委政府的指导和监督。 第四条按照《村民委员会组织法》规定履行必要的程序后，乡农村财务管理服务中心负责村集体资金、帐目的代管工作。第五条乡农业经营管理站是本村农村集体“三资’管理工作的主管部门。 第六条农村集体“三资”受法律保护，禁止任何组织和个人哄抢、侵占、损坏，挪用、私分、平调或以其它方式非法占用。
第二章村集体资金的管理 第七条村集体资金主要包括：村集体所有的现金、存款、短期投资、内部往来、应收款等。 第八条严格执行国家《现金管理暂行条例》，建立健全现金内部控制制度。村集体向单位和农户收取各项收入时，必须使用市农经办统一监制的票据，并在收到现金后3日内上交乡财务委托代理服务中心代管，严禁坐收坐支和私设小金库。 第九条严格执行帐、款分管，由村财会人员负责办理现金的收支和保管，非财会人员不得保管现金、存款和票据。 第十条村集体存款实行银行统一开户，乡会计委托代理服务中心对代管的本村资金统一在当地银行、信用社开户，村集体资金的存入、支取要到乡会计委托代理服务中心办理手续。村集体存款不准另行开户，严禁公款私存。 第十一条村集体对外联营投资入股，必须经村民会议讨论决定，并与对方签订合同。购买的有价证券、股票等由乡会计委托代理服务中心代管，并纳入帐内核算，登记名称、类别、金额、购买日期、兑换日期、利息标准和盈亏情况。 第十二条村集体内部往来、应收款项要及时收回，对确实无法收回的呆帐、死帐，必须经村民会议讨论决定，报乡经管站审核后进行帐务处理，严禁擅自进行帐务处理。 第十三条村集体资金收支实行定期报帐，按照乡统一规定日期报账。村每月发生的资金收支必须当月报帐，严禁跨月份报
资本项目操作指南
资本项目外汇 业务操作指南 （银行版） 国家外汇管理局宁波市分局 （资本项目管理处） 二〇一〇年十二月 目录 第一部分：基本管理要求 直接投资外汇管理信息系统操作管理 《资本项目外汇业务核准件》管理 第二部分：外商直接投资 外商投资企业资本金账户 外国投资者专用外汇账户 资产变现专用外汇账户 外国投资者竞标土地使用权的保证类专用外汇账户 外国投资者产权交易外汇资金（包括价款及交易保证金）托管及结算专用外汇账户资产变现专用外汇账户资金入账 外商投资企业资本金结汇 境内机构或个人的资产变现专用外汇账户资金结汇 外国投资者专用外汇账户资金结汇 境外机构在境内设立的分支、代表机构购买境内商品房结汇 境外个人购买境内商品房结汇 港澳台居民和华侨购买境内商品房结汇 境外机构在境内设立的分支、代表机构和境外个人退回的人民币购房款售付汇 境内机构及个人收购外商投资企业外国投资者股权股权售付汇 外商投资企业外国投资者减资售付汇 中外合作企业外方先行回收投资售付汇 外商投资企业清算外国投资者所得资金售付汇 投资项下境内外汇划转 第三部分：境外直接投资 境内机构境外直接投资前期费用售付汇 境内机构境外直接投资资金售付汇
境内机构境外直接投资企业减资、转股、清算资金入账 境外放款专用账户开立 境外放款专用账户资金入账 境外放款资金汇出 境外放款还本付息资金汇回 第四部分：信贷管理业务 外债及外债转贷款专用账户 外债项下结汇 外债项下还本付息售付汇 外债项下境内外汇划转 国内外汇贷款业务 偿还国内外汇贷款售付汇 国内外汇贷款项下境内外汇划转 银行融资性对外担保业务 银行非融资性对外担保业务 外汇质押人民币贷款 境外机构担保项下贷款 外汇委托贷款业务 第五部分：贸易信贷业务 预收货款 延期收款 预付货款 预付货款退汇 延期付款 第六部分：证券投资业务 A股上市公司外资股东减持所得人民币售付汇 A股上市公司外资东分红所得人民币售付汇 证券公司B股保证金账户 第七部分：个人项下业务 境内个人参与境外上市公司员工持股计划或认股期权计划境内专用外汇账户境内个人参与境外上市公司员工持股计划或认股期权计划资金售付汇 境内个人参与境外上市公司员工持股计划或认股期权计划资金调回及结汇第八部分：资本项目报表 资本项下外汇业务月报表管理
商务谈判实训个人心得
《商务谈判》实训个人心得 实训时间：2012年6月4日---2012年6月7日 实训目的：为了让我们掌握交流与谈判的基本原则和基本方法，以及在交流谈判中所应注意到的特殊之处。结合具体的案例运用所学的谈判知识与营销策略通过实训掌握商务谈判的基本原理、策略、技巧以及商务礼仪的基本内容，了解商务谈判中影响谈判策略、谈判技巧、谈判价格的因素，价格的关系，合理的报价范围、报价策略、报价原则、报价方式，培养学生的市场调查以及收集资料的能力、语言能力、思辨能力、应变能力及团队合作精神。 实训要求：让我们做到理论与实践相结合，理论指导实践，实践检验理论根据各自的特点与实际情况，按礼仪、开局、报价、讨价还价、威胁与僵局、让步6个方面，有方法有步骤的进行富有成效的交流的商务谈判活动。 汉字是由象形文字演变过来的，按照传统的说文解字，我们知道“谈”字是两个火气的人在互相说话，“判”字是用一把剑划清是非。 由此可见，谈判就是人们为了维护各自的利益或改变相互关系而交换观点，为取得一致而同对方洽谈协商的活动。准确地说，谈判是一种妥协并不是一种对抗，牢记这一点非常重要，因为对抗只会加剧双方的矛盾，造成冲突，而谈判则是彼此让步。商务谈判和其他性质的谈判相比，其目的性、原则性、对抗性、灵活性的特征更为明显。商务谈判始终围绕的是利益分配，谈判的是找到双方都能够接受的利益平衡点，问题在于，任何一方都希望这个平衡点对自己更为有利。 在市场经济日益发展，国际经济日趋激烈的今天，商务谈判显示出无法代替的地位和举足轻重的作用。商务谈判的成功与否，并不取决于经理人员的专业技术，二取决于管理者的谈判技巧。 商务谈判时理论与实践并重的科学，它集政策性、知识性、艺术性于一体。在本次商务谈判中，我们同学了解了商务谈判的完整流程，学习了谈判策略和交流方式，锻炼了语言表达能力和沟通能力，掌握了一定的谈判技巧和经验。本次谈判实习还锻炼了我们的团队协调能力，这事非常难的可贵的。 认识：在谈判前老师给了我们一天的时间收集资料，全面的收集信息对一个正式的谈判时很重要的，直接觉定着谈判的进度及达成一致的成功率。谈判之前，要先想一下自己的优势，并且应该贯穿谈判的始终，这样才会处于主动地位；谈
软件应用系统设计及实施方案
软件应用系统设计及实施方案
目录 1软件系统架构设计 (6) 1.1概要说明 (6) 1.2系统特点 (6) 1.2.1根据优化流程开发 (6) 1.2.2充分利用现有资源 (6) 1.2.3先进的设计理念 (6) 1.2.4开放式的可扩展性 (6) 1.2.5与现有系统轻松衔接 (6) 1.2.6可信赖的高可靠性 (7) 1.3总体体系架构 (7) 1.3.1基于组件的SOA系统应用架构 (7) 1.3.2系统技术框架 (8) 1.3.3其他重要问题 (10) 1.4主平台解决方案 (11) 1.4.1基于工作流的业务流程管理 (11) 1.4.1.1监控管理 (13) 1.4.1.2工作项服务 (13) 1.4.1.3日志服务 (13) 1.4.2业务规则管理 (14) 1.4.3主平台和各子系统的接口 (14) 1.4.4多级基于角色的权限管理 (14) 1.5数据模型 (15) 1.5.1数据建模原则 (15) 1.5.2数据建模方法 (16) 1.5.3数据质量管理 (17) 1.5.4数据存储方式 (17) 1.5.5其他重要问题 (18) 1.6用户界面 (18) 1.6.1用户界面设计原则 (18) 1.6.2用户界面层设计技术 (18) 2概要设计说明 (20) 2.1概述 (20) 2.2设计原则 (20) 2.2.1统一设计原则 (20) 2.2.2先进性原则 (20) 2.2.3高可靠/高安全性原则 (21) 2.2.4标准化原则 (21) 2.2.5成熟性原则 (21) 2.2.6适用性原则 (21) 2.2.7可扩展性原则 (21) 2.3系统功能综述 (21) 2.3.1主控平台 (21) 2.3.2房屋图元信息 (21) 2.3.3房屋基础信息 (22) 2.3.4楼盘表 (22) 2.3.5房屋权属信息 (22) 2.3.6房屋地址库信息 (22) 2.3.7统计分析 (22) 2.4重点子系统解决方案 (23) 2.4.1xxx子系统解决方案 (23)
农村三资管理制度
农村三资管理制度财务收入管理制度 1、村级一切收入必须全额及时缴入会计服务中心为各村开设的账户，统一管理。具体包括：上级 补助收入、扶贫资金收入、各项捐赠收入、一事一议资金、村级集体资产出租或承包收入以及村级其他零星收入。 2、收入行为一经发生，必须在5日内缴入账户，坚持先收后支,严禁以收抵支。所有收入在规定时间内未入帐的，由经手人承担相应的纪律和法律责任.。 3、收入票据必须使用各县农经局统一要求的票据。其中“一事一议”要附有村民代表会议记录复印件，任何村和个人不得自制、自购其他收款收据。 4、坚持“量入为出”的原则，严禁村级负债发生，确因特殊情况需要负债的，须经村民代表会议表决通过并报镇政府批准。 财务开支审批制度 村级经济活动中，村民委员会负责按年度支出计划，提前 作出用款预算，经村两委审核，报会计服务中心审批后支出。 2、村财务支出实行联签制，必须使用“山西省农村集体经济组织财务支出审批单”。财务事项发生时，经手人必须取得有效的原始凭证，注明用途并签字盖章，交民主理财小组审核同意并签字盖章，经村两委审批同意并签字盖章，报会计服务中心审核后方可入账（或报账）。 3、涉及财务收支的事项应当每月按时结算。未按时记结的，由直接责任人向民主理财小组报告，审议通过的，填写未结算事项报告单，按程序记结。对审议未通过的支出事项，不予登记并由责任人自行处理。 4、村“两委”主要干部在离任或年度财务结账（决算）前，要认真清理任期内发生的经济收支事项，按程序及时入账。 财务公开管理制度 1、财务公开的形式：各村要坚持实际、实用、实效的原则，在便于群众观看的地方设立固定的财务公开栏，同时还可以通过广播、“明白卡”、民主听证会等其他有效形式公开。 2、财务公开的内容： 财务计划：包括财务收支计划；固定资产购建计划；农田基本建设计划；兴办企业及资源开发投资计划；收益分配计划等。 各项收入：包括财政转移支付收入；发包及上交收入；集体统一经营收入；一事一议筹资筹劳；土地补偿费；救济、扶贫款；罚没款物等其他收入情况。 各项支出：包括生产性建设支出（包括购建生产性固定资产支出）；公益福利事业支出（包括购建公益性固定资产支出）；村干部补助及奖励；集体统一经营支出；救济、扶贫专项支出；村办公经费等明细项目支出；五保户供养支出；罚没款物等其他支出情况。 各项财产：包括现金及银行存款收支情况；库存物资；固定资产；对外投资；资源及项目发包、租赁情况；其他财产。 债权债务：包括内部往来；外部单位和个人往来；银行（信用社）贷款；其他债权债务。 收益分配及其他事项：包括公积公益金的提取和使用收支情况；年终收益分配。 3、财务公开的程序:村集体经济组织公布的财务账目必须真实可靠，公开前必须经过民主理财小组的审核，公开榜必须由村委主任、乡会计服务中心总会计、民主理财小组组长签字、加盖民主理财审核印章后，以村集体经济组织的名义公布，公布的材料必须存档。村纪检监督小组负责对公开的内容、公开的时限进行监督。
徐州市企业进出口外汇管理业务操作指南
企业货物贸易外汇管理业务操作指南 国家外汇管理局徐州市中心支局 货物贸易外汇管理制度改革的基本原理是企业出口报关和退税环节不再使用出口收汇核销单，外汇局全面采集企业进出口收付汇及货物流的信息，以单个企业为主体，依托货物贸易外汇监测系统进行总量核查，筛选异常主体，识别异常行为，锁定现场核查对象，核实异常情况，对企业实施分类管理。 企业业务流程图
企业在外汇局办理业务流程如下： 第一步：企业持以下材料至外汇局办理“贸易外汇收支企业名录”登记手续与电子口岸IC卡认证手续： （一）《货物贸易外汇收支企业名录登记申请书》； （二）法定代表人签字并加盖企业公章的《货物贸易外汇收支业务办理确认书》； （三）《企业法人营业执照》或《企业营业执照》副本原件及加盖企业公章的复印件； （四）《中华人民共和国组织机构代码证》原件及加盖企业公章的复印件； （五）《对外贸易经营者备案登记表》原件及加盖企业公章的复印件，依法不需要办理备案登记的可提交《中华人民共和国外商投资企业批准证书》或《中华人民共和国台、港、澳投资企业批准证书》等原件及加盖企业公章的复印件； （六）外汇局要求提供的其他资料。 ★备注：第（一）和（二）项材料企业可在“徐州市外商投资信息服务平台”网站（http://121.14.200.217/WebProXZ/app/entp/home）（以下简称“服务平台”）下载填写完整后打印出来。 第二步：企业至海关办理货物进出口报关业务；至银行提交相应材料办理货物贸易外汇收支业务。
★备注：部分业务，企业须经外汇局审核，凭外汇局出具的《登记表》至银行办理贸易外汇收支（见下图）。