新型喹唑啉类酪氨酸激酶化学抑制剂的设计与合成
2009年第17卷合成化学
V o.l 17,2008
第2期,199~202Chinese Journal of Synt hetic Che m i stry N o .2,199~202
快递论文
新型喹唑啉类酪氨酸激酶化学抑制剂的设计与合成
*
张向阳
1,2
,刘章琴1,2,陈元伟
1
(1.中国科学院成都有机化学研究所不对称合成与手性技术四川省重点实验室,四川成都 610041;
2.中国科学院研究生院,北京 100049)
摘要:以6 氨基藜芦酸和醋酸甲脒为起始原料,合成了一系列4 位具有不同芳胺基团,6,7 位引入不同取代基的新型喹唑啉类酪氨酸激酶化学抑制剂,其结构经1H NM R 表征。关 键 词:喹唑啉;氨基藜芦酸;酪氨酸激酶;药物合成中图分类号:O 626.4
文献标识码:A
文章编号:1005 1511(2009)02 0199 04
Desi gn and Synt hesis ofNovelQui nazoline Deri vatives
as Tyrosi ne K i nase Che m ical Inhi bitors
Z HANG X iang yang 1,2
, LIU Zhang qin 1,2
, CHEN Yuan w e i
1
(1.K ey Labo ra t o ry o f A symm etr ic Syn t hesis and Ch i rotechno l ogy of S i chuan P rov i nce and U n i on L aboratory of A symm etric Synt hesis ,Chengdu Instit ute o f O rgan i c Che m istry ,Ch i nese A cade m y o f Sc i ences ,Chengdu 610041China ;2.G raduate U niversity of Ch i nese A cademy o f Sciences ,Be iji ng 100049,Ch i na)
A bstract :Nove l qu i n azo li n e deri v ati v es w ith aro m atic a m i n o substitution at the position 4,different substit u ents introduced at the position 6and 7,as ty r osi n e k i n ase che m ica l i n h i b itors ,w ere synthe sized fro m 6 a m i n overatric acid and for m a m i d i n e acetate .The struct u res were confir m ed by 1
H NMR.K eywords :qu i n azo li n e ;a m inoveratric acid ;tyrosi n e k i n ase ;drug synthesis 喹唑啉类化合物在自然界广泛存在,具有重要的药物活性和生理活性
[1]
。研究发现喹唑啉
结构对表皮生长因子受体有很好的抑制效果,对治疗非小型性肺癌和乳腺癌等恶性肿瘤效果明显,其中最具有代表性的物质是易瑞沙和特罗凯(Iressa and Tarceva ,Chart 1)[2,3]
。因此新型喹唑啉类化合物的合成及生物活性研究已成为各个大型医药公司研究的热点。
研究人员对具有高活性的喹唑啉类化合物的抑制剂的构效研究表明,在喹唑啉的2 位和8 位不能有空间位阻大的取代基团,虽然在5 位引入
基团对提高化合物的活性稍显不利,但是喹唑啉的6,7 位可以引入各种基团,尤其是供电子基团,如氨基或者醚,能得到更好的结果[4,5]
。
本文以6 氨基藜芦酸(1)为原料,设计并合成了一类在4 位具有不同芳胺基团,6,7 位引入不同取代基的新型喹唑啉类化合物(6a ,6c ,7a ,7c ,8a~8d 及10a ,10c ,Sche m e 1)作为潜在的酪氨酸激酶化学抑制剂。该方法操作简单,快速,不失为合成该类新型抑制剂的新方法。所设计的路线,可以成功、快速、大量地合成一系列4,6,7 位三取代的新型喹唑啉类化合物。
*收稿日期:2008 07 26
基金项目:中国科学院百人计划资助项目(2004)
作者简介:张向阳(1983-),男,汉族,湖南常德人,在读硕士,主要从事抗癌药物的设计与合成研究。E m ai:l z xy198329@ya hoo .co https://www.360docs.net/doc/733267631.html,
通讯联系人:陈元伟,研究员,博士生导师,E m ai:l cheny w@cioc .ac .cn
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
B r ucker 300型核磁共振仪(DM SO d6为溶剂, T M S为内标)。
1和醋酸甲脒,爱斯特(成都)医药技术有限公司;苯胺,广东汕头市西陇化工厂;3 炔基苯胺, A lfa A esar公司;40%氢溴酸和三氯氧磷,成都市科龙化工试剂厂;其余所用试剂均为分析纯。1.2 合成
(1)6,7 二甲氧基喹唑酮(2)的合成
在干燥的圆底烧瓶中加入18g(40.6 mm ol),搅拌下加入醋酸甲脒36g(345.8mm ol),氮气保护下,于140反应10h。冷却至室温,加水50mL,用饱和碳酸氢钠溶液调p H7~8。过滤,滤饼用少量水淋洗,干燥得紫灰色粉末27.5 g,产率89%;1H NMR :3.86(s,3H,OC H3), 3.89(s,3H,OC H3),7.14(s,1H,Ar H),7.46
!
200
! 合成化学 V o.l17,2009
(s,1H,A r H),7.98(s,1H,N=C H),12.08(s, 1H,NH)。
(2)6,7 二羟基喹唑酮(3)的合成
在圆底烧瓶中加入28g(38.8mmo l),搅拌下加入40%氢溴酸100g,缓慢加热至110反应1h后回流(120)反应24h。冷却至室温,过滤,滤饼溶于水(30mL)中,用氨水调p H约为中性,析出固体,过滤,滤饼用少量水淋洗,干燥得白色固体36.5g,产率94%;1H NMR :6.93 (s,1H,A r H),7.35(s,1H,Ar H),7.83(s, 1H,N=C H),9.80(s,1H,A r O H),10.17(s, 1H,A r O H),11.8(s,1H,NH)。
(3)6,7 二乙酰氧基喹唑酮(4)的合成
在圆底烧瓶中加入36.32g(35.5mm o l),无水醋酸酐38g(372.2mm o l)及吡啶2mL,搅拌下回流(120)反应2h。冷却至室温,倒入盛有100mL水的烧杯中,搅拌1h后过滤,滤饼用少量水淋洗,干燥得白色固体48.0g,产率86%; 1H NMR :2.31~2.32(s,6H,C H
3),7.59(s, 1H,A r H),7.95(s,1H,A r H),8.12(s,1H,N=
C H),12.38(br,1H,NH)。
(4)6,7 二乙酰氧基 4 氯喹唑啉(5)的合成
在三颈瓶中加入41g(3.82mm o l)和C H C l3 25mL,搅拌均匀后缓慢滴加三氯氧磷1.76g (11.5mm o l),滴毕(约20m i n),于70反应1h。缓慢注入三乙胺1.16g(11.5mm ol),再反应10h。冷却至室温,减压蒸除绝大多数氯仿后在
冰浴下加入饱和N a H CO
3
溶液调pH约为6。用乙酸乙酯(3?30mL)萃取,合并有机相,用饱和食盐水(2?10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥。旋干溶剂得黄色固体50.92g,收率86%(不需提纯可直接供下步使用);1H NMR :2.31~2.33(s, 6H,C H3),7.64(s,1H,A r H),7.98(s,1H,
A r H),8.37(s,1H,N=C H)。
(5)6,7 二乙酰氧基 4 苯胺基喹唑啉(6a)的合成
在圆底烧瓶中加入5560m g(2.0mm o l)和异丙醇(20mL)溶液,搅拌下加入苯胺186m g(2.0 mmo l),于70反应12h。冷却至室温后置于冰箱过夜。析出固体,过滤,滤饼用少量异丙醇淋洗,干燥得6a。
用类似方法合成6,7 二乙酰氧基 4 (3# 炔基)苯胺基喹唑啉(6c)。
6a:黄色固体,收率74%;1H NMR :2.37 (s,3H,C H3),2.40(s,3H,C H3),7.29~7.32 (m,1H,A r H),7.44~7.50(m,2H,A r H), 7.69~7.71(d,J=6.0H z,2H,A r H),7.81(s, 1H,A r H),8.67(s,1H,Ar H),8.80(s,1H,N= C H),11.25(br,1H,NH)。
6c:白色固体,收率79%;1H NMR :2.38 (s,3H,C H3),2.42(s,3H,CH3),4.28(s, 1H,H C?C),7.38~7.41(d,J=9.0H z,1H, A r H),7.47~7.52(m,1H,Ar H),7.78~7.80 (d,J=6.0H z,1H,A r H),7.89(s,1H,A r H), 7.93(s,1H,A r H),8.81(s,1H,A r H),8.92 (s,1H,N=C H),11.22(br,1H,NH)。
(6)6,7 二羟基 4 苯胺基喹唑啉(7a)的合成
在圆底烧瓶中加入6a500m g(1.48mmo l)和甲醇5mL,搅拌下滴加25%氨水600m g,滴毕,继续反应5h。旋干溶剂,残余物用少量水淋洗涤,干燥得7a。
用类似方法合成6,7 二羟基 4 (3# 炔基)苯胺基喹唑啉(7c)。
7a:棕黄色固体,产率80%;1H NMR :
7.11~7.14(m,3H,A r H),7.34~7.42(m,3H,
A r H),7.77(s,1H,Ar H),7.80(s,1H,N=C H),
7.82(s,1H,A r O H),8.43(s,1H,Ar OH),9.68 (br,1H,NH)。
7c:棕黄色固体,收率78%;1H NMR :3.76 (s,1H,HC?C),4.10(s,2H,A r O H),6.8(s, 1H,A r H),7.08~7.11(d,J=9.0H z,1H,A r H), 7.29~7.31(m,1H,A r H),7.76(s,1H,Ar H), 7.89~7.91(d,J=6.0H z,1H,Ar H),8.08(s, 1H,A r H),8.29(s,1H,N=C H),8.80~8.90 (br,1H,NH)。
(7)6 羟基 7 (2# 氯乙烷基) 4 苯胺基喹唑啉(8a)的合成
在圆底烧瓶中加入7a100m g(0.39mmo l),碳酸钾215m g(1.56mm o l)及DMF5mL,搅拌下加入1 氯 2 溴乙烷224m g(1.56mm o l)。氮气保护下于室温反应10h。过滤,滤液加水20mL,用乙酸乙酯(3?20m L)萃取,合并有机相,用饱和食盐水(2?10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩滤液,残余物经柱层析[洗脱剂:A=V(石油醚)%V(乙酸乙酯)=3%1]纯化得8a。
用7c代替7a,用类似方法合成6 羟基 7 (2# 氯乙烷基) 4 (3# 炔基)苯胺基喹唑啉(8c)。
!
201
!
第2期 张向阳等:新型喹唑啉类酪氨酸激酶化学抑制剂的设计与合成
用溴乙酸乙酯代替1 氯 2 溴乙烷,用类似的方法合成6,7 二氧乙酸乙酯 4 苯胺基喹唑啉(8b)和6,7 二氧乙酸乙酯 4 (3# 炔基)苯胺基喹唑啉(8d)(A=2%1)。
8a:白色固体,产率65%;1H NMR(CDC l3) :4.37~4.42(m,4H,C H2C H2),7.13~7.18 (m,2H,Ar H),7.28(s,1H,A r H),7.36~7.43 (m,3H,Ar H),7.70(s,1H,Ar H),7.73(s, 1H,N=C H),8.63(s,1H,Ar OH)。
8b:白色固体,产率60%;1H NMR :1.20~
1.24(m,6H,C H3),4.16~4.24(m,4H,
C H2C H3),4.95~5.00(d,J=15.0H z,4H, COC H2O),7.10~7.21(m,2H,A r H),7.34~
7.41(m,2H,A r H),7.79~7.92(m,3H,A r H),
8.41(s,1H,N=C H),9.47(s,1H,NH)。
8c:白色固体,产率64%;1H NMR(CDC l3) :2.95(s,1H,HC?C),4.18(br,4H,C l C H2 C H2O),6.98~7.13(m,3H,A r H),7.69~7.81 (m,3H,A r H),8.33(s,1H,N=C H),8.88(s, 1H,A r O H)。
8d:白色固体,产率68%;1H NMR :1.21~ 1.26(m,6H,C H3),4.17(s,1H,HC?C),4.18~ 4.25(m,4H,C H2C H3), 4.98~5.04(d,J= 18.0H z,4H,C OC H2O),7.15(s,1H,A r H),
7.21~7.23(d,1H,A r H),7.38~7.44(,t1H,
A r H),7.84~7.95(m,3H,A r H),8.50(s,1H, N=C H),9.51(s,1H,NH)。
(8)6,7 二甲氧基 4 苯胺基喹唑啉(10a)的合成
在圆底烧瓶中依次加入2510m g(2.47 mmo l)和二氯亚砜15mL,搅拌下滴加3滴D M F,回流反应8h。冷却至室温,减压蒸除绝大部分二氯亚砜,残余物用乙酸乙酯稀释,在冰浴下加入水20mL,用饱和碳酸氢钠溶液调p H约为6。用乙酸乙酯(3?30m L)萃取,合并有机相,用饱和食盐水(2?10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,蒸除溶剂得黄色固体6,7 二甲氧基 4 氯喹唑啉(9) 415.7m g(不需提纯可直接供下步使用)。
在圆底烧瓶中依次加入9269.6m g(1.2 mmo l)和异丙醇15mL,搅拌下加入苯胺111.8 m g(1.2mm o l),于70反应12h。冷却至室温后放至冰箱过夜。析出固体,过滤,滤饼用少量异丙醇淋洗,干燥得10a。
用类似方法合成6,7 二甲氧基 4 (3# 炔基)苯胺基喹唑啉(10c)。
10a:黄色固体,收率87%;1H NMR :3.97 (s,3H,OC H
3
),4.00(s,3H,OC H
3
),7.28~ 7.36(m,2H,A r H),7.44~7.50(m,2H,A r H), 7.67~7.70(d,J=9.0H z,2H,A r H),8.35(s, 1H,A r H),8.78(s,1H,N=C H),11.48(s, 1H,NH)。
10c:黄色固体,产率80%;1HNMR :3.98 (s,3H,OCH3),4.02(s,3H,OC H3),4.30(s, 1H,H C?C),7.36~7.52(m,3H,A r H),7.77~
7.80(d,J=9.0H z,1H,A r H),7.87(s,1H,
A r H),8.39(s,1H,Ar H),8.86(s,1H,N=C H),
11.53(s,1H,NH)。
2 结果与讨论
合成4 位具有不同芳胺基团,6,7 位引入不同取代基的新型喹唑啉类酪氨酸激酶化学抑制剂的一般方法是先脱去一个甲基,然后进行保护,引入芳胺后再脱去另一个甲基,步骤繁琐[6]。本文对文献[6]方法进行了改进,先用40%氢溴酸同时脱去两个甲基,然后进行保护,引入芳胺后再同时脱去保护基团,这样可以最后一步才在6,7 位引入大量的不同的取代基团。
参考文献
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(转至第204页)
(3?30mL)萃取,合并有机相,分别用饱和氯化钠水溶液,饱和碳酸氢钠水溶液及饱和氯化钠水溶液洗涤,无水硫酸镁干燥。过滤,旋蒸脱溶,残余物经柱层析[洗脱剂:V(正己烷)%V(乙酸乙酯)=20%1]纯化得14.122g,收率77.2%; 1H NMR :1.41(,t J=7.15H z,3H,C H
3),
4.45(q,J=7.15H z,2H,CH2),7.47~7.53 (m,2H,A r H),7.63~7.65(m,1H,A r H), 8.00~8.02(m,2H,A r H)。
(2)2的合成
在单口烧瓶中加入无水三氯化铝4.363g(35 mmo l),苯15mL,搅拌下于70滴加草酰氯单乙酯1.365g(10mmo l),滴毕,于85反应6h。后处理方法同上(柱层析洗脱剂为正己烷)制得黄色片状固体2441m g,产率42.7%;1H NMR : 3.11(s,3H,Ar H),7.54~7.51(m,2H,A r H), 8.36~8.33(m,2H,A r H);13C NMR :14.1, 124.7,125.3,128.3,129.9;DEPT135 : 14.0,124.6,125.3。
2在二氯甲烷中培养出单晶,经X 衍射分析,
图1 2的分子结构图
F i gure1 M o l ecular structure o f2
其分子结构见图1。
2 结果与讨论
文献[2]曾经报道过草酰氯单酯在加热条件下会发生分解产生氯代物。据此我们推测,草酰氯单乙酯加热后首先生成氯乙烷,氯乙烷与苯再发生傅克反应生成乙基苯。文献[1]曾经报道过两分子的乙基苯在三氯化铝作用下可以发生缩合反应生成2。如此,在高温条件下,苯和草酰氯单乙酯在三氯化铝作用下反应生成2的现象就可以得到合理的解释。
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(上接第202页)
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L ett,2005,46(45):7715-7719.
酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物研究方法进展
现代生物医学进展https://www.360docs.net/doc/733267631.html, Progress in Modern Biomedicine Vol.10NO.16AUG.2010 酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物研究方法进展* 刘振凯1艾 菁2耿美玉1,2△ （1中国海洋大学医药学院山东青岛266003；2中国科学院上海药物研究所上海201203） 摘要：酪氨酸激酶（protein tyrosine kinases,PTKs ）在肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、侵袭等相关信号通路中起到了关键的调控作用，已经成为肿瘤靶向性治疗的重要靶点。本文对靶向酪氨酸激酶的小分子抑制剂的筛选和评价方法进行综述，以期促进酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物的研究。 关键词：酪氨酸激酶；抗肿瘤药物；小分子抑制剂；抑制剂筛选 中图分类号： R730.5，R915文献标识码：B 文章编号：1673-6273（2010）16-3134-04Advances in Research of Protein-tyrosine Kinases Inhibitors as Anticancer Drug* LIU Zhen-kai 1,AI Jing 2,GENG Mei-yu 1,2△ （1Marine drug and food Institute,Ocean university of China,Qingdao,266003,China;2Shanghai Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Sciences,Shanghai,201203,China ） ABSTRACT:Protein tyrosine kinases (PTKs)have long been recognized as promosing therapeutic targets involved in a variety of human diseases and in particular several types of cancer.They play important roles in regulating intracellular signal transduction path-ways closely associated with the invasion,metastasis and angiogenesis of many tumors.An effort towards the development of new and more effective PTK inhibitors represents an attractive therapeutic strategy for cancer therapy.In this paper,we review the screening and evaluation methods of small-molecule inhibitors of PTKs with a view to promote the study of PTKs. Key words:Protein-tyrosine kinases;Antitumordrugs;Small-molecule inhibitors;Inhibitors screening Chinese Library Classification （CLC ）:R730.5R915Document code:B Article ID:1673-6273(2010)16-3134-04 *基金项目：国家杰出青年科学基金资助（No 30725046） 作者简介：刘振凯（1983-），男，硕士。研究方向：分子药理学。E-mail ：lzkai111@https://www.360docs.net/doc/733267631.html, △通讯作者：耿美玉（1963-），研究员、博士生导师。E-mail ：mygeng@https://www.360docs.net/doc/733267631.html, (收稿日期:2010-05-07接受日期：2010-06-01) 恶性肿瘤是严重威胁人类生命和健康的疾病。目前，临床上常用的抗肿瘤药物主要是细胞毒类药物，这类药物大多存在难以避免的选择性差、毒副作用强、易产生耐药等缺点[1]。近年来，随着生命科学研究的飞速发展，恶性肿瘤细胞内的信号转导、 细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明，给抗肿瘤药物的研发理念带来了巨大转变。以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶/蛋白作为药物靶点，筛选发现选择性强、高效、低毒的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向[2]。 蛋白酪氨酸激酶是一类具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，它们能催化ATP 分子上的γ-磷酸基转移到底物蛋白的酪氨酸残基上，使其发生磷酸化。酪氨酸激酶分为受体型和非受体型两种。受体酪氨酸激酶是一种单次跨膜蛋白，目前至少已有近六十种分属20个家族的受体酪氨酸激酶被识别。不同的受体酪氨酸激酶和配体结合后，受体自身发生二聚化或结构重排，并进一步使受体胞内区特异的酪氨酸残基发生自身磷酸化或交叉磷酸化，从而激活下游的信号转导通路[3]。它们在信号由胞外转导至胞内的过程中发挥重要的作用。而非受体酪氨酸激酶是一种胞浆蛋白，现已经确认的有约30种，分为10大家族。蛋白酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中占据了十分重要的地位， 调节细胞生长、分化、死亡等一系列生理生化过程。蛋白酪氨酸激酶功能失调则引发生物体内一系列疾病。大量资料表明，超过50%的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常激活或过度表达将导致细胞无限增殖，周期紊乱，最终导致肿瘤的发生发展[4]。 同时，酪氨酸激酶调控异常还与肿瘤的侵袭、 转移，肿瘤新生血管生成，肿瘤化疗抗性等密切相关。事实上，以酪氨酸激酶为靶点进行抗肿瘤药物的开发已成为国际研究的前沿。 1酪氨酸激酶抑制剂的开发策略 目前酪氨酸激酶抑制剂的开发策略主要分为胞外、胞浆和核内三个层面：细胞外策略主要是针对于受体型，配体与受体的生物拮抗剂以及特异性抗体，通过拮抗配体和受体的相互作用，抑制酪氨酸激酶的激活[5]；胞浆内策略主要分为抑制激酶区的激酶活性和拮抗酪氨酸激酶与其下游信号分子的相互作用两个方面[6]；核内策略主要是利用miRNA 降解或者干扰酪氨酸激酶的mRNA ，抑制激酶的蛋白表达而达到抑制激酶活性的目的[7,8]。其中研究最多的是抑制激酶区激酶活性的小分子抑制剂，而本文也主要是针对这部分抑制剂的研究方法进行探讨。酪氨酸激酶的自磷酸化过程和催化下游信号分子磷酸化的过程都涉及到ATP 上磷酸基团的转移，这一反应过程是酪氨酸 3134··
蛋白酪氨酸磷酸酶
蛋白酪氨酸磷酸酶 本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ 1988年Tonks等首次在人的胎盘细胞中分离和纯化了第一个37kDa的蛋白酪氨酸磷酸酶1B(ProteinTyrosinePhosphatase-1B，PTP-1B)。 PTP1B是一种胞内PTP，位于内质网，在人体的各种组织中都有表达;其与蛋白酪氨酸激酶(ProteinTyrosineKinases，PTK)共同维持着酪氨酸蛋白磷酸化的平衡，参与细胞的信号转导，调节细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等。 PTP1B属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族，专一水解芳香族磷酸，如磷酸化酪氨酸(phosphotyrosyl，pTyr)残基上磷酸根的酶，通过对胰岛素受体或其底物上的酪氨酸残基去磷酸化作用，对胰岛素信号转导进行负调节，组织细胞中PTP-1B过表达都会降低PTK的活性，使胰岛素受体无法与胰岛素结合，进而引起胰岛素抵抗，最终导致2型糖尿病。 PTP-1BDNA的启动子上有一个转录因子Y盒结合蛋白-1的结合位点，它的过度表达可使PTP-1B的表达水平增加。使用反义寡核苷酸技术减少其表达后，
PTP-1B的表达随之降低，呈正相关趋势。 PTP-1B在体内没有自身的特异性受体，而是在细胞信号传导过程中，与PTP家族中的其他成员以及蛋白酪氨酸激酶协同作用，调控蛋白底物中酪氨酸的磷酸化水平，进而对细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等功能进行调节。 1PTP-1B的生理功能 目前研究发现PTP-1B主要表现出以下几个方面的生理功能： (1)与胰岛素受体(insulinreceptor，IR)、胰岛素受体底物(insulinreceptorsubstrate，IRS)等信号蛋白作用，使这些蛋白调节区的酪氨酸残基去磷酸化，进而阻断胰岛素信号级联反应的下传，在胰岛素信号中起着负调控作用。与II型糖尿病的发生具有密切的联系。 (2)在瘦素信号传导过程中，通过降低转录激活子-3(STAT-3)和Janus激酶-2(JAK-2)的磷酸化水平，在瘦素信号中起负调控作用。与肥胖的发生具有密切的联系。 (3)PTP-1B通过与生长因子等底物相互作用，参与细胞生长周期的调节，与肿瘤的发生具有一定的联系。 除此之外，研究还发现PTP-1B在催乳素信号传
蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP_1的中药抑制剂筛选
第46卷 第6期吉林大学学报(理学版) Vol .46 No .6 2008年11月JOURNAL OF J I L I N UN I V ERSI TY (SC I E NCE E D I TI O N ) Nov 2008 蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP 21的中药抑制剂筛选 李婉南1 ,李 莹1 ,庄 妍1 ,李 贺1 ,陈颖丽2 ,赵志壮 1,3 ,付学奇 1 (1.吉林大学生命科学学院,长春130012;2.吉林省中医药科学院,长春130021; 3.美国俄克拉荷马大学健康科学中心,俄克拉荷马城73104,美国) 摘要:用含有蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP 21催化结构域(ΔSHP 21)的质粒转化大肠杆菌,得到 ΔSHP 21的高效表达,经分离纯化后,以ΔSHP 21为靶标,通过体外酶反应动力学实验,对157种中药水提液的抑制效果进行研究,筛选出两种对ΔSHP 21具有显著抑制作用的中药:山茱萸和蒲公英,并对其I C 50及抑制类型做了进一步研究.为建立蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂的筛选方法和中药在治疗免疫疾病和糖尿病上的开发和应用提供了理论依据.关键词:包含SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶1(SHP 21);中药;抑制剂;筛选中图分类号:Q55 文献标识码:A 文章编号:167125489(2008)0621211206 Screen i n g Traditi onal Chi n ese M edi ci n es for I nhi bitors of Prote i n Tyrosi n e Phosphat ase SHP 21 L IW an 2nan 1 ,L I Ying 1 ,ZHUANG Yan 1 ,L I He 1 ,CHEN Ying 2li 2 ,ZHAO Zhi 2zhuang 1,3 ,F U Xue 2qi 1 (1.College of L ife Sciences,J ilin U niversity,Changchun 130012,China; 2.A cade m y of Traditional Chinese M edicine and Herbs of J ilin P rovince,Changchun 130021,China; 3.Health Sciences Center ,O klaho m a U niversity,O klaho m a C ity 73104,USA ) Ab s trac t:W ith pT7as a vect or,ΔSHP 21,a recombinant p r otein containing the catalytic domain of p r otein tyr osine phos phatase SHP 21,was highly exp ressed in E .coli cells .The enzy me was further purified t o near homogeneity .W ith the purified recombinant enzy me as a target,aqueous extracts of 157traditi onal Chinese herb medicines were analyzed f or their abilities t o inhibit SHP 21.T wo most potent inhibit ors,na mely,cornel and dandeli on,were identified,and their I C 50values and inhibit ory types were further analyzed .This study thus established a good syste m t o screen inhibit ors of SHP 21and de monstrated the potential of traditi onal Chinese medicines in treat m ent of i m munol ogical diseases and diabetes . Key wo rd s:SH22containing tyr osine phos phatase 1(SHP 21);traditi onal Chinese herb;inhibit or;screening 收稿日期:2008201215. 作者简介:李婉南(1975～),女,汉族,博士,讲师,从事蛋白质酪氨酸结构与功能的研究,E 2mail:wyshshk@https://www.360docs.net/doc/733267631.html,.联系人:付学奇(1960～),男,汉族,博士,教授,博士生导师,从事细胞信号传导与药物筛选的研究,E 2mail:fxq@jlu .edu .cn . 基金项目:吉林省科技发展计划项目基金(批准号:20060563;200705394;20080434). 蛋白质酪氨酸磷酸酶(Pr otein Tyr osine Phos phatase,PTPs )与蛋白质酪氨酸激酶(Pr otein Tyr osine Kinases,PTKs )协同作用,控制着蛋白质酪氨酸的磷酸化过程,调节细胞生长发育,并在细胞信号传导过程中发挥重要作用 [1] ,许多生理和病理现象都与此相关 [2] .研究表明,一些疾病如某些癌症、糖尿 病、白血病、免疫缺陷病、努南氏综合症等正是由于PTPs 的基因突变或异常表达导致的[3,4] ,因此 PTPs 已经成为继PTKs 之后又一个热门的研究领域.SHP 21(SH22Containing Tyr osine Phos phatase 1),又称为HCP,SHPTP1或PTP1C,是含有SH2结构域的具有高度保守序列的蛋白质酪氨酸磷酸酶的亚家
非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂的耐药
非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂的耐药 肺癌的靶向治疗耐药主要有两大类，上皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）耐药和间变性淋巴瘤激酶（ALK）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）耐药。 1. EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 埃罗替尼（Erlotinib）、吉非替尼（Gefitinib）、阿法替尼（Afatinib）是首批进入非小细胞肺癌临床治疗的EGFR 酪氨酸激酶抑制剂，EGFR 突变表型患者对这类药物的响应很好。但是，获得性耐药是EGFR 酪氨酸激酶抑制剂所面临的一大难题，什么措施可以延迟或克服这种耐药。 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂的耐药的一个原因是EGFR 靶点修饰，EGFR 酪氨酸激酶结构域出现二点突变（T790M）。接近60% 的埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼耐药肺癌患者样本均有这种突变，该突变是第一代和第二代EGFR 酪氨酸激酶抑制剂耐药的主要原因。 突变特异性EGFR 酪氨酸激酶抑制剂是一类新型的针对EGFR 突变的不可逆抑制剂。埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼主要靶向野生型EGFR，突变特异性EGFR 酪氨酸激酶抑制剂主要靶向激活性突变，例如T790M 突变。目前已经有两种突变特异性抑制剂已经接近进入临床，分别是CO-1686（Rociletinib）和AZD9291。 近期NEJM 刊登了一项研究，该临床试验纳入了46 位埃罗替尼、吉非替尼、阿法替尼耐药的肺癌患者。研究结果显示，T790M 阳性患者对Rociletinib的响应率为59%。有趣的是，对接受过一线治疗的肺癌患者来说，用靶向T790M 的药物进行二线治疗，其响应率接近60%、疾病控制率高达90%。相反，如果肺癌患者在一线治疗中没有出现T790M 突变，其响应率非常低。 AZD9291 是另一种第三代不可逆突变特异性EGFR 抑制剂。有研究报道，T790M 阳性癌症患者对AZD9291 的响应率接近60%，而T790M 阴性癌症患者对AZD9291 的响应率非常低，这与上述Rociletinib的效果相同。 2014 年有团队评估了不可逆二代抑制剂联合阿法替尼（野生型EGFR 靶向抑制剂）和西妥昔单抗（EGFR 单克隆抗体）对肺癌患者的治疗效果。该研究患者均为EGFR 突变肺癌患者，在对第一代EGFR 抑制剂产生获得性耐药后，开始接受阿法替尼和西妥昔单抗治疗。 结果显示，肺癌患者的总体响应率为29%，包括T790M 阳性和阴性患者。该研究表明突变特异性EGFR 抑制剂有希望成为EGFR 突变肺癌患者的一线治疗药物，但是它们对进展期的T790M 阴性患者并无效果。然而，将突变特异性EGFR 抑制剂与阿法替尼与西妥昔单抗联合可能是该难题的解决方案之一。 如果第三代EGFR 酪氨酸激酶抑制剂失败了，该怎么办？通常认为靶向治疗是有效的，但是即使是第三代EGFR 酪氨酸激酶抑制剂，也要考虑耐药问题。
新型酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的合成、生物活性及分子动态模拟研究
新型酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的合成、生物活性及分子动态模 拟研究 目的:蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2是新的抗肿瘤药物研究靶点。为寻找新的具有较强抗肿瘤活性的SHP2抑制剂,本课题以文献报道的SHP2抑制剂GS493,SHP836等为先导化合物,设计、合成了苯磺酸和吡嗪胺两类新的衍生物;测试了苯磺酸类衍生物对SHP2蛋白活性中 心的抑制作用;在细胞水平测试了所有化合物对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231和非小细胞肺癌NCI-H1975的增殖抑制活性;选择活性较好的化合物If、IIe进行计算机辅助的分子动力学研究,以探讨它们与SHP2作用的具体模式及对SHP2的选择性。方法:1.目标化合物的设计与合成:（1）保留GS493的苯基腙吡唑啉酮以及磺酸基团,用内脂环或酰胺代替1位苯环的硝基,3位苯环的硝基替换为氟、甲氧基等基团,设计了12个目标化合物 Ia-Il。其合成方法为:对硝基苯甲酸经酰氯化,再与胺反应形成酰胺,然后再将其硝基还原,重氮化,还原,得到N-取代-4-肼基苯甲酰胺中间体;对氨基苯磺酸经过重氮化,与取代苯甲酰乙酸乙酯耦合得到4-{2-[1-乙氧基-3-（4-取代）-1,3-二氧代丙-2-基]肼基}苯磺酸中间体,其再与N-取代-4-肼基苯甲酰胺中间体反应得到目标产物Ia-Il。（2）保留 SHP836,SHP099的吡嗪胺结构,3位引入新的芳环或芳杂环替代二氯 苯环,6位引入大位阻的取代哌嗪基团,设计了12个目标化合物 IIa-IIl。其合成方法为:以2-氨基-3-溴-6-
蛋白酪氨酸磷酸酶
蛋白酪氨酸磷酸酶 蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）是细胞增殖和信号传导的调节过程中，调节蛋白酪氨酸残基磷酸化水平的酶家族。PTP 和蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）及其各自相应的底物协同作用，形成一个复杂的信号传导网络，通过调控蛋白氨基酸残基的磷酸化水平，调节生物体内细胞的生长、分化、代谢过程，参与细胞周期调控、细胞迁移、基因转录和免疫应答等过程。目前的研究发现人类共有112 种PTPs，依据它们的结构分为酪氨酸特异性、双特异性和低分子量磷酸酶，其中蛋白酪氨酸磷酸酶-1B （Protein Tyrosine Phos－phatase-1B，PTP-1B）于1988 年由Tonks 等首次在人的胎盘细胞中分离和纯化得到，属于酪氨酸特异性磷酸酶，依据受体结构可分为受体样PTP-1B 和胞内PTP-1B。PTP-1B 专一水解芳香族磷酸，由435 个氨基酸残基组成，分子量约50ku。其结构中有一个氨基末端催化区和两个富含脯氨酸的模序。PTP-1B 在肌肉、心、肝、睾丸、肾、脾、脑和脂肪等组织中广泛表达，主要集中在细胞浆的内质网的表面。PTP-1B 的N 端为包含半胱氨酸和精氨酸残基的催化中心，朝向胞浆方向；C 端通过35 个特异性氨基酸与内质网相结合，羧基末端水解断裂后从内质网释放出有活性的PTP1B；N 端和C 端之间为两段富含脯氨酸的区域，在PTP1B 与其他蛋白之间的相互作用上发挥重要作用。 PTP-1B DNA 的启动子上有一个转录因子Y 盒结合蛋白-1 的结合位点，它的过度表达可使PTP-1B 的表达水平增加。使用反义寡核苷酸技术减少其表达后，PTP-1B 的表达随之降低，呈正相关趋势。 PTP-1B 在体内没有自身的特异性受体，而是在细胞信号传导过程中，与PTP 家族中的其他成员以及蛋白酪氨酸激酶协同作用，调控蛋白底物中酪氨酸的磷酸化水平，进而对细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等功能进行调节。 1 PTP-1B 的生理功能 目前研究发现PTP-1B主要表现出以下几个方面的生理功能： （1）与胰岛素受体（insulin receptor ，IR）、胰岛素受体底物（insulin receptor substrate，IRS）等信号蛋白作用，使这些蛋白调节区的酪氨酸残基去磷酸化，进而阻断胰岛素信号级联反应的下传，在胰岛素信号中起着负调控作用。与II 型糖尿病的发生具有密切的联系。 （2）在瘦素信号传导过程中，通过降低转录激活子-3（STAT-3）和Janus 激酶-2（JAK-2）的磷酸化水平，在瘦素信号中起负调控作用。与肥胖的发生具有密切的联系。 （3）PTP-1B 通过与生长因子等底物相互作用，参与细胞生长周期的调节，与肿瘤的发生具有一定的联系。 除此之外，研究还发现PTP-1B 在催乳素信号传导、血小板凝集等方面具有一定的影响。 2 PTP-1B 与糖尿病之间的关系 糖尿病是一类慢性代谢性疾病，随着生活水平的提高，糖尿病的发病率呈逐年上升趋势，成为继心脑血管疾病及癌症之后，威胁人类健康的第三大类疾病。目前已有约 3 亿糖尿病患者，到2030 年，预计患者人数将突破5 亿。根据糖尿病的发病机制，糖尿病可分为I 型糖尿病和II 型糖尿病，其中II 型糖尿病患者超过糖尿病患者总数的80%，主要表现为胰岛素抵抗或胰岛素受体不敏感，分泌胰岛素的胰腺B 细胞数量减少，功能障碍，从而导致糖代谢障碍，血糖水平升高。对PTP-1B 生理功能的研究已经证实，其与胰岛素及瘦素信号传导呈负调节关系，因此PTP-1B 与II 型糖尿病的发病原因关系密切，是开发II 型糖尿病治疗药物的重要靶点之一。 2.1 PTP-1B 胰岛素抵抗：代谢过程中，胰岛素可与脂肪、骨骼肌、肝细胞等细胞的细胞膜上的胰岛素受体胞外亚基结合，进而使受体胞内亚基酪氨酸激酶活化，导致自身及其底物
酪氨酸激酶小分子抑制剂及其抗瘤作用研究进展
酪氨酸激酶小分子抑制剂抗瘤作用研究进展 小分子抑制剂作为生命科学领域和干细胞研究、药物研究等诸多领域的有效研究工具，其作用越来越被人们认可。现在介绍对抗肿瘤的络氨酸激酶小分子抑制剂的相关研究进展。 与肿瘤相关的酪氨酸激酶主要有位于细胞膜的受体酪氨酸激酶和位于胞浆的非受体酪氨酸激酶，酪氨酸激酶的过度激活与肿瘤发生、发展、预后与转归密切相关。其过度激活，导致其下游信号途径的激活，最终导致细胞的转化、增殖和抵抗细胞凋亡、促进细胞生存。因此，现在科研人员努力致力于酪氨酸激酶抑制剂尤其是从特异性酪氨酸激酶抑制剂角度来研究新的抗肿瘤药物，并且已取得了巨大的突破，如针对Bcr-Abl的Gleevec、针对EGFR 受体酪氨酸激酶Iressa，已被美国FDA批准分别用于慢性粒细胞性白血病和晚期非小细胞肺癌的治疗，效果显著。另外还有许多小分子抑制剂正在临床试验中，有些在HER2/neu和VEGFR受体酪氨酸激酶小分子抑制剂方面进行的一些研究，也取得一些有意义的结果。（在附件中我们已经为您整理出来相关的信息） 不断的反复的实验才能得到需要的结果，陶素生化现可提供诸多不同信号通路的抑制剂、调节剂以及小分子化合物，并附客户评价、产品相关参考文献、技术支持等助力您的实验研究，且保证产品的高纯度和高活性，交货及时并附带完整的谱图信息。 陶素生化能够提供的118种酪氨酸激酶抑制剂的独特集合，可用于高通量筛选和高内涵筛选 ? 通过前期临床研究和临床实验，生物活性和安全性得到验证 ? 其中一些抑制剂已经得到FDA批准 ? 作用于酪氨酸激酶，如EGFR，VEGFR，SRC，c-Met和JAK ? 结构多样，药效显著，可渗透细胞 ? 具有充分详细的结构说明，IC50值，及客户反馈资料 ? NMR和HPLC技术保证产品高纯度 酪氨酸激酶过度激活，从而导致其下游信号的激活，这在肿瘤的发生、发展、转移、治疗和转归等中起着重要的作用。因此，针对其信号转导途径寻找新的抗肿瘤药物具有重要意义。目前，针对Bcr-Abl的STI571、EGFR的ZD1839已被美国FDA批准在临床应用，分别用于治疗慢性粒细胞性白血病和非小细胞肺癌。从而使得科学工作者对研究针对肿瘤特异性癌基因的药物研究更具信心，并已有许多药物在临床试验阶段，如针对VEGFR的SU666，PTK787等。从目前的各方面收集的科研结果来看，这些抑制剂可能还不能将肿瘤完成治愈，但这些抑制剂与常规化疗相结合，会明显地提高肿瘤的治疗效果。以受体酪氨酸激酶信号通路为靶点的抗肿瘤药物，通常只有在该信号通路发生异常的肿瘤细胞上才能取得较好的疗效。但在肿瘤的治疗过程中，仅仅抑制了某些发生异常的信号转导，则其他一些信号通路仍可能会产生代偿而上调，从而影响治疗效果。因此，抑制信号转导的抗肿瘤治疗还应联合其他作用途径的药物以取得更好的疗效。无论如何，这些针对肿瘤特异性基因改变的药物是消除肿瘤而又无系统毒性的希望。 关键词：酪氨酸激酶；抗肿瘤药物；信号通路；小分子抑制剂库 下面整理了络氨酸酶小分子抑制剂的药物研发最热门靶点相关信息供您参考 2000年后肿瘤信号网络被逐渐阐释、完善，大量的分子靶向药物进入临床研究、走上市场，近年针对受体酪氨酸激酶靶点如Bcr-Abl(见1.1)、VEGF/VEGFRs(见1.2)、PDGF/PDGFRs(见1.3)、EGFR/HER2(见1.4)、ALk(见1.5)已有多个药物上市，me-too品种的研发逐渐放缓，但扩展适应症、克服耐药性、优化治疗方案的研究还没有结束。 1.1.Bcr-Abl抑制剂
蛋白酪氨酸磷酸酶-1B与糖尿病之间的关系研究
蛋白酪氨酸磷酸酶-1B与糖尿病之间的关 系研究 本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ 1988年Tonks等首次在人的胎盘细胞中分离和纯化了第一个37kDa的蛋白酪氨酸磷酸酶1B(ProteinTyrosinePhosphatase-1B，PTP-1B)。 PTP1B是一种胞内PTP，位于内质网，在人体的各种组织中都有表达;其与蛋白酪氨酸激酶(ProteinTyrosineKinases，PTK)共同维持着酪氨酸蛋白磷酸化的平衡，参与细胞的信号转导，调节细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等。 PTP1B属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族，专一水解芳香族磷酸，如磷酸化酪氨酸(phosphotyrosyl，pTyr)残基上磷酸根的酶，通过对胰岛素受体或其底物上的酪氨酸残基去磷酸化作用，对胰岛素信号转导进行负调节，组织细胞中PTP-1B过表达都会降低PTK的活性，使胰岛素受体无法与胰岛素结合，进而引起胰岛素抵抗，最终导致2型糖尿病。
PTP-1BDNA的启动子上有一个转录因子Y盒结合蛋白-1的结合位点，它的过度表达可使PTP-1B的表达水平增加。使用反义寡核苷酸技术减少其表达后，PTP-1B的表达随之降低，呈正相关趋势。 PTP-1B在体内没有自身的特异性受体，而是在细胞信号传导过程中，与PTP家族中的其他成员以及蛋白酪氨酸激酶协同作用，调控蛋白底物中酪氨酸的磷酸化水平，进而对细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等功能进行调节。 1PTP-1B的生理功能 目前研究发现PTP-1B主要表现出以下几个方面的生理功能： (1)与胰岛素受体(insulinreceptor，IR)、胰岛素受体底物(insulinreceptorsubstrate，IRS)等信号蛋白作用，使这些蛋白调节区的酪氨酸残基去磷酸化，进而阻断胰岛素信号级联反应的下传，在胰岛素信号中起着负调控作用。与II型糖尿病的发生具有密切的联系。
酪氨酸激酶抑制剂在抗肿瘤治疗中的应用
第24卷第2期菏泽医学专科学校学报VOL.24NO.2 2012年JOURNAL OF HEZE MEDICAL COLLEGE2012 oi:10.3969/j.issn.1008-4118.2012.02.41 酪氨酸激酶抑制剂在抗肿瘤治疗中的应用 刘聪,纪晓 (莒南县人民医院,山东莒南276600) 关键词:酪氨酸激酶抑制；分子靶向；药物疗法 中图分类号：R730.54文献标识码：A文章编号：1008-4118（2012）02-0072-02 酪氨酸激酶抑制剂以肿瘤细胞生长因子为靶点，有针对性的阻断这些因子的信号转导通路，从而达到抑制肿瘤生长、转移的目的，已在胃肠间质瘤、慢性粒细胞性白血病（CML）、乳腺癌、非小细胞肺癌（NSCLC）等治疗中显示出高效、低毒等特点[1]。本文旨在对近年来应用较频繁且疗效确切的酪氨酸激酶抑制剂从理论到临床应用综述如下。 蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基上的激酶，能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化，在细胞生长、增殖、分化中具有重要作用。酪氨酸激酶抑制剂，抑制细胞内与靶点相关联的酪氨酸激酶的磷酸化作用，从而阻止靶点功能。常见的有生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂。 1生长因子受体 表皮生长因子受体（EGFR），是一种糖蛋白的跨膜受体，也称HER,共四个，分别叫HER-1、HER-2、HER-3、HER-4、一旦特异性配体（EGF）结合上去，就能通过相应的酪氨酸激酶的自身磷酸化作用而激活受体，从而激发了细胞内的信号转导连锁反应使DNA合成、细胞生长和存活。EGFR在相当一部分肿瘤中都有不同程度表达，其中HER-2为人类表皮生长因子受体，其过度表达见于20%~30%乳腺癌[2]，还可见于卵巢癌、肺腺癌[3]、胰腺癌、胃癌[4]、大肠癌。其他如血管内皮生长因子（VEGF）、血小板源性生长因子（PDGF）等。 2Bcr-Abl染色体 慢性粒细胞白血病患者95%左右均有第9号染色体ab1和22号染色体bcr长臂的异位，被称之为Ph1染色体。两种染色体的基因重组在一起，产生融合蛋白p-210,定位于细胞膜，为具有较高酪氨酸激酶活性的致癌蛋白，从而刺激白细胞增值，导致白血病的形成，而这一改变早于血液和骨髓的改变。所以Ph1染色体已经是慢性粒细胞白血病诊断和治疗的重要指标[5]。 3主要几种酪氨酸激酶抑制剂 1)伊马替尼是酪氨酸激酶抑制剂，靶向治疗最成功的范例，还可抑制血小板衍化生长因子（PDGF）和干细胞因子（SCF）受体的酪氨酸激酶，用于CML的慢性期、进展期、急变期。慢性期疗效优于进展期及急变期[6]。另外用于表达c-kit阳性的晚期、转移性胃肠间质瘤（GIST）[7]。2)吉非替尼Gefinib-易瑞沙-IR-ESSA-为强有力EGFR酪氨酸激酶抑制剂，用于晚期NSCLC一线或铂类失败后二、三线治疗，疗效确切[8]。本品在女性、亚洲、非吸烟、腺癌及肺泡癌患者中由于EGFR基因突变较多，因此疗效也较好[9]。本品联合化疗，优势明显[10]。3)埃罗(厄洛）替尼erlotinib-特罗凯-TARCEVA-（HER1/EGFR）受体酪氨酸激酶抑制剂，在EGFR阳性和不吸烟的患者中疗效明显。用于局部晚期或转移的非小细胞肺癌的二、三线治疗[11]，同时治疗吉非替尼失败后晚期非小细胞肺癌[12]，和吉西他滨健择联合作为晚期胰腺癌一线治疗标准方案[13]。4)索拉非尼-多吉美-Nexevar具有双重抗肿瘤作用：一方面通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路直接抑制肿瘤生长，另一方面通过抑制VEGF和PDGF受体而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞生长。用于治疗晚期肾细胞癌、晚期肝癌可获益[14]。5)舒尼替尼Sunitinib-sutent-多靶点酪氨酸激酶抑制剂，抑制VEGF-R1,-R2,-R3及血小板衍生生长因子(PDGFR-β)、KIT、FLT-3和RET的酪氨酸激酶活性，通过特异性阻断这些信号PDGFR、VEGF 传导途径达到抗肿瘤效应。用于肾细胞癌，与干扰素相比能显著提高PFS（11>6月）及OS[15]。用于格列卫治疗失败的GIST，能显著延长PFS(27.3>6.4周) [16]。6)拉帕替尼（Lapatinib）-Tykerb是一种能同时抑制EGFR（ErbB-1）和HER-2（ErbB-2）酪氨酸激酶活性的小分子酶抑制剂。Lapatinib可同时作用于 72
蛋白磷酸酶抑制剂复合物I (100×)使用说明书
使 用 说 明 书 ◆蛋白磷酸酶抑制剂复合物I (100×) ◆目录号1913 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外
蛋白磷酸酶抑制剂复合物I (100×) 目录号：1913 目录编号包装单位 191301 1 ml 191302 1 ml× 5 适用范围： 抑制蛋白丝/苏氨酸磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶 产品储存： －20℃保存，一年有效。
产品介绍： 组织/细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，导致不同于正常生理状态的差异。因此，裂解后的Western blotting，免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、和蛋白激酶活性测定等实验常规要加入外源性蛋白磷酸酶抑制剂，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态。 本公司研制的蛋白磷酸酶抑制剂复合物以国际上主流配方改进而成，主要成份为5种独立的蛋白磷酸酶抑制剂（钒酸钠、氟化钠、钼酸钠、酒石酸钠、咪唑），每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白磷酸酶活性。该复合物优化的组成使其可以强烈抑制几乎所有重要的蛋白磷酸酶活性，包括蛋白丝/苏氨酸磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶以及ATP酶等。该复合物为100倍浓缩溶液，可直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中，均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化，从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。 操作步骤： 临用前室温溶解磷酸酶抑制剂复合物I (100×)，混匀，按照1：100比例加入到组织细胞裂解物中。 提示： ?避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存。 临用前加入，终浓度为1×，蛋白磷酸酶含量特别丰富的组织，可以用2-3×。 完
非小细胞肺癌EGFR酪氨酸激酶抑制剂的耐药机制及逆转
【摘要】晚期非小细胞肺癌（non-small-cell lung carcinoma，NSCLC）的治疗以含铂双药联合化疗为标准治疗方案，多项研究表明，化疗药物对于NSCLC的疗效已经进入平台期，因此，寻求新的治疗方式已迫在眉睫。表皮生长因子受体（EGFR）在40% 80%的NSCLC中过表达，通过干预EGFR酪氨酸激酶信号转导已成为治疗NSCLC的主要方式。临床应用的EGFR抑制剂主要有EGFR单克隆抗体（mon-oclonal antibody，MAb）及特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）。目前已证实EGFR-TKI的疗效肯定，但其原发性及继发性耐药是一个不容忽视的问题，且耐药机制复杂。文章对EGFR-TKI在临床中的应用，EGFR突变与TKI敏感性的关系，EGFR-TKI的耐药机制及逆转耐药的方法进行综述。 【关键词】非小细胞肺癌；EGFR；EGFR酪氨酸激酶抑制剂；耐药；耐药逆转 doi：10．3969/j．issn．1674－4136．2012．03．012 文章编号：1674P4136（2012）03－0164－05 表皮生长因子受体（EGFR）信号通路参与控制细胞的存活、增殖、血管生成、细胞迁移、细胞侵袭及转移等过程［1］，因此通过干预EGFR酪氨酸激酶信号转导已成为近年来肿瘤治疗的研究热点。EGFR 特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase in-hibitor，TKI）吉非替尼和厄洛替尼是治疗非小细胞肺癌（non-small-cell lung carcinoma，NSCLC）的小分子靶向药物。2004年，多个权威期刊发表了关于EGFR突变与TKI药物敏感性关系的研究，发现EGFR突变的患者对TKI药物有很好的反应性［2-3］，特别是具有19外显子密码子746 750的缺失突变，21外显子密码子858替代突变（L858）的患者对TKI高度敏感。尽管如此，原发性及继发性耐药仍是亟待解决的问题。到目前为止，很多关于耐药的机制被报道，如EGFR基因20外显子的插入突变及KRAS基因突变与原发性耐药有关；EGFR基因的二次突变，MET基因的扩增以及HGF基因的过表达与继发性耐药有关等。本文就EGFR靶向治疗药物的临床应用，耐药机制及相关解决方法进行综述。 1EGFR-TKI在NSCLC临床治疗中的应用 EGFR-TKI通过与细胞内酪氨酸激酶结构域上ATP位点竞争性结合，可逆性、选择性抑制与EGFR 相关的酪氨酸激酶活性及细胞内磷酸化过程，进而抑制EGFR下游的信号转导，从而阻断EGFR诱导的体外肿瘤细胞的生长，加速细胞凋亡、拮抗血管生成、抑制肿瘤转移、阻断肿瘤生长。 1．1吉非替尼 吉非替尼是最早用于治疗NSCLC的靶向药物之一，已有多项国际多中心临床研究证实吉非替尼治疗肺腺癌有效。IPASS研究是在东亚，对非吸烟或很少吸烟的患者进行吉非替尼与卡铂+紫杉醇联合化疗的对照实验，结果显示在所有患者中吉非替尼组比卡铂－紫杉醇组有更长的无疾病进展 · 461 ·中国肿瘤外科杂志2012年6月第4卷第3期Chin J Surg Onco，Jun．2012，Vol．4，No．3