基底膜六胺银染色液
基底膜六胺银染色液
简介：
基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过碘酸氧化，使基底膜内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。六胺银染色能清晰地显示基底膜，在肾病变中应用最多，常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、切片脱蜡至水洗。
2、切片入过碘酸溶液氧化。
3、自来水洗、蒸馏水洗。
4、入铁明矾溶液染色。
5、自来水洗、蒸馏水洗。
6、入配制好的六胺银工作液中，水浴染色大，切片呈烟草黄色或黑色为止。
7、入蒸馏水中清洗。
8、用氯化金溶液调色。
9、蒸馏水洗。 10、置于海波溶液。 11、自来水洗。 12、用淡绿溶液复染。 13、自来水洗。
编号 名称
DZ0050 6×50ml Storage
试剂(A): 过碘酸溶液 50ml 4℃ 避光
试剂(B): 铁明矾溶液 50ml RT
试剂(C):六胺银工作液
C1:六胺银原液 25ml 4℃ 避光 C2:硼酸钠溶液
25ml
RT
临用前，C1、C2等量混合即为六胺银工作液，即配即用。 试剂(D): 氯化金溶液 50ml 4℃ 避光
试剂(F): 淡绿溶液 50ml
RT 使用说明书
1份
14、95%乙醇开始脱水，二甲苯透明，中性树胶封封固。
染色结果：
肾小球囊基底膜、肾毛细血管球基底膜黑色
背景绿色
注意事项：
1、实验中所用玻璃器皿，应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净，烤干。
2、六胺银工作液配制后可放人温箱中预热。
3、配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。
4、氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
特殊染色部分
特殊染色部分 一．公共知识（相关理论）或新进展（学识水平） 1．A1型题 下述方法不属于特殊染色的是：（C） A：胶原纤维染色 B：弹力纤维染色 C：苏木素-伊红染色（HE） D：糖原染色 E：粘液染色 2．X型题 常见的肾活检标本切片的染色方法有：（ABC） A：HE染色 B：PAS染色 C：过碘酸六胺银染色 D：脂肪染色 E：V、G染色 二．专业知识（基础＋实践能力） 1．A1型题 Grocott六胺银染色法所染真菌的正确结果是：（A） A：菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核呈红色，背景淡绿色 B：菌丝和孢子呈红色，细胞核呈黑褐色，背景淡绿色 C：菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核呈淡绿色，背景黑褐色 D：菌丝和孢子呈红色，细胞核呈淡绿色，背景红色 E：菌丝和孢子呈淡绿色，细胞核呈红色，背景黑褐色 2．X型题 抗酸杆菌染色主要诊断什么病：（AB） A：结核病 B：麻风病 C：风湿病 D：肉芽肿 E：类风湿病 三．病案（实践能力） 1．A2型题 抗酸杆菌能与苯酚碱性复红结合成复合物，抵抗酸的脱色。常用的染色方法是Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法，其结果为：（A） A：抗酸杆菌呈红色，背景呈灰蓝色 B：抗酸杆菌呈灰蓝色，背景呈红色 C：抗酸杆菌呈绿色，背景呈灰蓝色 D：抗酸杆菌呈黑色，背景呈红色 E：抗酸杆菌呈灰蓝色，背景呈绿色
胶原纤维在HE染色中显示浅红色，粗细不等，难以与其它纤维区别。下述两种胶原纤维的特殊染色方法 （1）Van Gieson（VG）苦味酸-酸性品红法，胶原纤维的呈色是：（A） A：鲜红色 B：黑色 C：绿色 D：蓝色 E：黄色 （2）Masson三色法，其染色结果为：（C） A：胶原纤维呈绿色，细胞质等呈红色，胞核呈蓝褐色 B：胶原纤维呈黑色，细胞质等呈红色，胞核呈蓝褐色 C：胶原纤维呈蓝色，细胞质等呈红色，胞核呈蓝褐色 D：胶原纤维呈黑色，细胞质等呈绿色，胞核呈蓝褐色 E：胶原纤维呈绿色，细胞质等呈黑色，胞核呈蓝褐色 3．A4型题 弹力纤维又称弹性蛋白，强嗜酸性易与染色液中的碱基结合，呈平行排列且很紧密，经特殊染色容易辨认，地衣红染色法是一种比较简便快捷的方法 （1）地衣红染色液配法正确的是：（B） A：地衣红1g，无水乙醇99ml，浓盐酸1ml B：地衣红1g，70％乙醇99ml，浓盐酸1ml C：地衣红1g，丙酮99ml，浓盐酸1ml D：地衣红1g，二甲苯99ml，浓盐酸1ml E：地衣红1g，蒸馏水99ml，浓盐酸1ml （2）地衣红染色液浸染时间为：（A） A：3小时 B：8小时 C：12小时 D：24小时 E：4℃冰箱过夜 （3）地衣红染色液浸染后，正确的操作是（A） A：70％乙醇，95％乙醇，无水乙醇，二甲苯，树胶封固 B：二甲苯，树胶封固 C：水洗，无水乙醇，二甲苯，树胶封固 D：丙酮，二甲苯，树胶封固 E：风干，树胶封固 （4）弹力纤维呈现的颜色是：（C） A：黑色 B：蓝色 C：深棕红色 D：黄色 E：绿色
基底膜染色
基底膜染色 一、基底膜的结构 基底膜一般是由纤维的结缔组织，粘多糖和蛋白质所构成，电镜可分为三层，即中间层（电子密度较高的致密层）内层和外层（电子密度较低疏松层）。基底膜内主要含有IV形胶原蛋白，蛋白多糖和层粘连蛋白，这些物质的存在，给显示基底膜提供了物质基础。 二、显色的方法 (一)．六胺银法（Hexamine silver）Jones六胺银染色法的改良法 I．试剂的配制： A液：3%乌铬托品（hexamine） B液：5%硝酸银 C液：5%四硼酸钠（Sodium tetraborate） II．工作液的配制： 取A液12.5ml，加入B液2.5ml，混合在一起，此时可出现乳白色，搅拌片剂，即可消失，再加入2.5ml 的C液，再加入12.5ml的蒸馏水，即可使用。 操作方法： ①切片脱蜡至水。 ②1%的过碘酸氧化切片10min。 ③自来水洗，继入蒸馏水洗。 ④入工作液于60℃60~90min，于50℃120~180min ⑤蒸馏水洗。 ⑥用0.2%的氯化金水溶液调色1min。 ⑦自来水洗，蒸馏水洗。 ⑧5%硫代硫酸钠固定5min。 ⑨自来水流1~2min. ⑩用1%淡绿复染30secd。 ⑾脱水，透明，封固。 结果：基底膜呈出深黑色，背景呈现绿色。 (二)．AFOG法
试剂的配制：取苯胺蓝（aniline blue）0.5克溶于100ml的蒸馏水中，煮沸后冷却，再加入桔黄G1克，酸性品红1.5克，用HCC校正pH至1.9，即可使用。 ①切片脱蜡至水 ②AFOG液染色5min ③自来水洗，95%脱水多采染色 ④脱水，透明，封固。 结果：基底膜，胶原纤维显示不同程度的蓝色，红白球及背景呈桔黄色，管型蛋白呈鲜红色。 主要特点： 在一张切片上既可看到深黑色的基底膜和鲜红色的沉淀蛋白，又可看到蓝色的结缔组织，给予某些疾病的诊断和鉴别带来了方便。 三、临床应用： ①可以观察各种疾病的进展和损害程度。 ②对膜性肾病可显示增厚的基底膜。 ③可以观察某些肿瘤突破基底膜的情况。 ④可以对某些疾病作出预后的判断。 ⑤可用于卡氏肺囊虫肺炎的诊断。 四、注意事项 ①如应用于基底膜的染色，应在切片脱蜡后用苦味酸进行媒染。 ②切片浸染时间从染液达60℃算起。 ③浸染应以基底膜染色合适为标准。 ④浸染液一次性使用。 ⑤所用的常备液应于4℃冰箱中存放。 ⑥一切器皿须清洁液浸泡。 ⑦在六胺银液中的浸染，可用微波加热法。在银液中的浸染时间为1分钟左右。
尿酸盐染色液(Gomori六胺银法)
尿酸盐染色液(Gomori 六胺银法) 简介： 人体内嘌呤(核苷酸)代谢的分解产物是尿酸盐。大多数尿酸并非全部经由肾脏排除，有时以尿酸钠的形式存在于血液循环中。在痛风患者血液中尿酸钠含量较高，过高的尿酸钠易出现尿酸盐沉积，从而导致痛风石、滑膜炎、关节炎、肾结石等。大多数尿酸盐镜下可见针状结晶体互相平行排列。 Leagene 采用Gomori 六胺银法对尿酸盐染色，使尿酸盐结晶呈黑色，常用于辅助诊断尿酸盐所致的通风结节。由于尿酸盐易溶于水，而不易溶于乙醇，故固定时，应采用乙醇而不是福尔马林等固定液。 组成： 自备材料： 1、无水乙醇 2、蒸馏水 3、恒温箱 操作步骤(仅供参考)： 1、组织固定：固定于无水乙醇16h 或过夜。再经无水乙醇浸泡。 2、经二甲苯浸泡，常规浸蜡包埋。 3、切片，二甲苯脱蜡至无水乙醇。 4、提前配制好Gomori 六胺银溶液，并提前预热。切片浸入预热的Gomori 六胺银溶液(加盖)，并置于恒温箱孵育30min 。如有尿酸盐存在，切片呈黑色。 5、蒸馏水稍洗。 编号 名称 DS0010 4×50ml Storage 试剂(A): Gomori 六胺银溶液 A1:Gomori 六胺银A 25ml 4℃ 避光 A2:Gomori 六胺银B 25ml RT 临用前，按A1:A2 =1:1的比例配制试剂(A)，不宜提前配制。 试剂(B): 氯化金溶液 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 海波溶液 50ml RT 试剂(D): 伊红染色液 50ml RT 避光 试剂(E): Gomori 对照液 10ml RT 使用说明书 1份
6、浸入氯化金溶液处理。 7、自来水稍洗。 8、入海波溶液处理。 9、自来水冲洗。 10、伊红染色液淡染。 11、自来水稍洗。 12、常规脱水透明，中性树胶封固。 染色结果： 尿酸盐结晶黑色 背景淡红色 阴性对照： 取连续切片脱蜡后，先经Gomori对照孵育5min，用无水乙醇侵洗2次，入Gomori六胺银溶液。其余步骤同前，钙盐呈阴性。 注意事项： 1、尿酸盐易溶于水，组织固定必须用无水乙醇，切片入Gomori六胺银溶液前避免切片与 水接触。 2、如果用水浴锅代替恒温箱，温度应适当调节至48～50℃，否则切片易变黑。 3、组织内如果含有钙盐，易出现假阳性，应注意与针状的尿酸盐区分。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 相关： 编号名称 DC0032 Masson三色染色液 PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
仅供科研版本号：180524 六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法) 【产品组成】 【保存条件】 4℃，避光,6个月 【产品概述】 六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化，使真菌内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。海波可以固定并洗去未还原的银离子。 本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好，特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好，但必须淡染橙黄G。如需显示曲霉和白色念珠菌，可选用苏木素或者伊红复染，可看到真菌与周围组织的关系。 【使用方法】 1、组织固定于甲醛固定液中，常规脱水包埋。切片4um，脱蜡至水洗。 2、切片入氧化剂氧化20min。流水稍洗。 3、入漂白液处理1min，以除去氧化剂。 4、流水冲洗5min，蒸馏水浸洗2次，每次30s-60s。 5、切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中，加盖60℃恒温染色大约20～60min，切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。如有淡棕色菌体出现，应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅，直至显色理想。 6、入蒸馏水中清洗。 7、用氯化金溶液调色1～2min。蒸馏水洗1～2min。 8、置于海波溶液2min。流水冲洗5min。 9、滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。染色时间不能过长，否则将影响最终效果。 10、流水冲洗20s-60s。 11、常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.360docs.net/doc/704091679.html,/ 第1页
【染色结果】 【注意事项】 1、实验中所用玻璃器皿，应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净，烤干。 2、六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放人切片进行染色。如用水浴锅代替恒温箱，需将温度设定在48-50摄氏度，否则切片会很快变黑而难以掌握。一般建议在恒温箱中孵育染色。 3、在低倍镜检时，菌体不宜着色太黑，否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮，特别需注意菌体成堆的地方的显色。 4、配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。 5、氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。 6、橙黄G一定要淡染，时间不能过长。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 第2页 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.360docs.net/doc/704091679.html,/
病理学技术—特殊染色最最全总结
结缔组织染色法 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则 . Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B Mssson三色法 图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌 . 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞
二、胶原纤维染色法 . Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)
黄色：其他 三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）
黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 Gomori氏银氨液配制法 图表 G Gomori氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳 图表 H 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景
六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH） 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维（有时） 紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌 图表 J .磷钨酸苏木素法 图表 K .磷钨酸苏木素染色液 △早期心肌病变组织染色 染色法（1974年）
基底膜六胺银染色液使用说明书
基底膜六胺银染色液使用说明书 货号：G1790 规格：6×50ml/6×100ml 保存：4℃避光，3个月。 试剂盒组成： 名称6×50ml6×100ml Storage 试剂（A）氧化剂50ml100ml4℃避光试剂（B）铁明矾溶液50ml100ml RT 试剂（C）六胺银工作液C1：六胺银原液25ml50ml4℃避光C2：硼酸钠溶液25ml50ml RT 临用前，C1，C2等量混合即为六胺银工作液，现用现配。 试剂（D）氯化金溶液50ml100ml4℃避光 试剂（E）海波溶液50ml100ml RT 试剂（F）淡绿溶液50ml100ml RT 产品说明： 基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过氧化，使基底膜内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。六胺银染色能清晰地显示基底膜，在肾病变中应用最多，常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。 操作步骤(仅供参考)： 1.切片脱蜡至水洗。 2.切片入氧化剂氧化15min。 3.自来水洗、蒸馏水洗2min。 4.入铁明矾溶液染色10min。 5.自来水洗、蒸馏水洗2min。 6.入配制好的六胺银工作液中，60℃水浴染色大约25～30min，切片呈烟草黄色或黑色为止。 7.入蒸馏水中清洗。
8.用氯化金溶液调色1～2min。 9.蒸馏水洗2min。 10.置于海波溶液1min。 11.自来水洗。 12.用淡绿溶液复染1min。 13.自来水洗。 14.95%乙醇开始脱水，二甲苯透明，中性树胶封封固。 染色结果： 肾小球囊基底膜、肾毛细血管球基底膜黑色 背景绿色注意事项： 1.实验中所用玻璃器皿，应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净，烤干。 2.六胺银工作液配制后可放入温箱中预热3-5min（选做）。 3.配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。 4.氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。 5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
《表面工程学》课程考试大纲
《表面工程学》课程考试大纲
《表面工程学》课程考试大纲 一、该课程的基本内容 表面工程学复试内容包括表面工程技术的物理、化学基础、表面预处理工艺、表面淬火和表面形变强化技术、热扩渗、热喷涂、喷焊与堆焊技术、电镀和化学镀、转化膜与着色技术、涂装技术、气相沉积技术、高能束表面改性技术、表面微细加工技求等基本知识。 二、课程内容的基本要求 1.绪论 掌握表面工程学的定义和内涵、表面工程技术的特点与意义、表面工程技术的分类。 2.表面工程技术的物理、化学基础 掌握典型固体表面与界面和表面晶体结构、表面扩散、表面能及表面张力、固体表面的吸附；掌握金属腐蚀原理和防护技术；熟练掌握固体表面的润湿性、材料磨损原理及其耐磨性。 3.表面工程技术的预处理工艺与作业环境 掌握表面工程技术的预处理工艺。 4.表面淬火和表面形变强化技术 熟练掌握表面淬火技术的原理与特点；掌握感应加热淬火技术、火焰加热表面淬火技术、激光淬火、电子束淬火技术、电阻加热表面淬火技术、表面形变强化技术的原理；了解几种典型表面淬火工艺的特点。 5.热扩渗 熟练掌握热扩渗技术的基本原理；掌握热扩渗工艺的分类、气体热扩渗工艺、液体热扩渗、固体热扩渗、等离子体热扩渗；了解热扩渗的发展。 6.热喷涂、喷焊与堆焊技术 掌握热喷涂的原理、分类和特点；了解热喷焊工艺与特点、堆焊工艺及特点。 7.电镀和化学镀 熟练掌握电镀、化学镀的基本原理与工艺；掌握常用单金属电镀、合金电镀、复合镀技术；了解非金属电镀、电铸成型技术、电镀层的质量评价、电镀的发展趋势。 8.转化膜与着色技术 熟练掌握磷化、铬酸盐钝化膜；掌握转化膜的基本特性及用途、化学氧化、草酸盐钝化、电化学氧化、着色技术；了解转化膜与着色技术的发展趋势。 9.涂装技术 熟练掌握涂料的基本组成及其作用、涂料成膜机理、涂装材料；掌握涂装工艺与设备；了解涂膜质量评价、涂装技术的发展趋势。 10.气相沉积技术 熟练掌握物理气相沉积方法中蒸发镀、溅射镀和离子镀的原理及特点； 掌握各类化学气相沉积方法的原理及特点；了解分子束外延制膜方法。
常用染色液的配制
常用染色液的配制 1.吕氏（Loefflev）美蓝染色液 A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液 B液：10%KOH溶液 取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。 2.石炭酸复红染色液 A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、 配成A液。 B液：5%石炭酸溶液 取A液10ml、B液90ml混合即可。一般可将此溶液稀释5-10倍使用。 但稀释液易变质失效，一次不宜多配。 3.革兰氏（gram）染色液 （1）草酸铵结晶紫染液： A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液 B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液 取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。 （2）路哥氏（Lugol）碘液： 碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部 溶解后，加够水即成。 （3）95%酒精溶液 （4）蕃红（沙黄）复染液： 2.5%蕃红（Safranlne O）95%酒精溶液。 取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。 4.芽孢染色液 （1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。 （2）0.5%蕃红溶液。 （3）苯酚品红溶液 称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。 再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 （4）黑色素(nigrosin)溶液 10%黑色素溶液，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，
染色方法总结
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
附录一 染色液的配制 免费
附录一染色液的配制 1、吕氏（Loefflev）美蓝染色液 A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液 B液：10%KOH溶液 取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。 2、石炭酸复红染色液 A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液 B液：5%石炭酸溶液 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、配成A液。 取A液10ml、B液90ml混合即可。一般可将此溶液稀释5-10倍使用。但稀释液易变质失效，一次不宜多配。 3、革兰氏（gram）染色液 （1）草酸铵结晶紫染液： A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液 B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液 取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。 （2）路哥氏（Lugol）碘液： 碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部溶解后，加够水即成。 （3）95%酒精溶液 （4）沙黄（蕃红）复染液： 2.5%沙黄（Safranlne O）95%酒精溶液。 取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。 4、芽孢染色液 （1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。 （2）0.5%沙黄溶液。 5、荚膜染色液 将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，配成5%溶液，然后加入福尔马林（40%甲醛）0.5%(V/V)作防腐剂。 （2）沙黄染色液 与革兰氏染色液中的沙黄复染液相同。
6、鞭毛染色液 A液：单宁酸5.0g、FeC131.5g、蒸馏水100ml，福尔马林（15%）2.0ml、NaOH(1%)1.0ml。 配好后应当日使用，次日即效果差，第三日则不能使用。 B液：2%AgNO3溶液 待AgNO3溶解后，取出10ml备用。向其余的90ml AgNO3中滴入浓NH4OH，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将10ml德用的AgNOa溶液慢慢滴入。此时会出理薄雾，轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3溶液直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重，此染液可使用一周；如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 7、乳酸石炭酸棉蓝染色液 石炭酸2.0g、甘油40ml、乳酸（密度1.21）20ml、蒸馏水20ml、棉蓝（Cotton blue）0.05g 石炭酸在蒸馏水中加热溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,使其溶解即成。 8、富尔根氏（Feulgen）核染色液 （1）Schiff氏试剂：将1g碱性复红加于200ml煮沸的蒸馏水中，振荡5分钟，冷却至50℃左右过滤。加入1.0NHC120ml，摇匀。待冷至25℃时，加Na2S2O5（偏重亚硫酸钠）3g，摇匀后装在棕色瓶中，用黑纸包好，放于暗处过夜，此时试剂应为淡黄色（如为粉红色则不能用）。再用中性活性炭过滤，其滤液振荡1分钟后再过滤，滤液置于冷暗处备用。注意：过滤需在避光条件下进行。 在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。 （2）Schandium 固定液 取50ml升汞水溶液加95%酒精25ml。 B液：冰醋酸 取A液9ml加B液1ml，混匀后加热至60℃。 （3）亚硫酸水溶液 10%偏重亚硫酸钢水溶液5ml、1MHC115ml、蒸馏水100ml。 9、Albert氏异染颗粒染色液 A液：甲苯胺蓝0.15g、孔雀绿0.2g、95%酒精2ml、蒸馏水
基底膜六胺银染色液使用说明
基底膜六胺银染色液使用说明 产品简介: 基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过碘酸氧化，使基底膜内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更为清晰。海波溶液可以固定并洗去未还原的银离子。 六胺银染色能清晰地显示基底膜，在肾病变中应用最多，常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。 产品组成： 名称编号6x50ml6x100ml Storage 试剂（A）过碘酸溶液50ml100ml4℃避光 试剂（B）铁明矾溶液50ml100ml RT 试剂（C）六胺银工作液C1：六胺银原液25ml50ml4℃避光C2：硼酸钠溶液25ml50ml RT 临用前，C1，C2等量混合即为六胺银工作液，现用现配。 试剂（D）氯化金溶液50ml100ml4℃避光试剂（E）海波溶液50ml100ml RT 试剂（F）淡绿溶液50ml100ml RT 自备材料： 1、蒸馏水 2、系列乙醇
操作步骤（仅供参考） 1、切片脱蜡至水。 2、切片入过碘酸溶液氧化15min。 3、自来水洗，蒸馏水洗2min。 4、入铁明矾溶液染色10min。 5、自来水洗，蒸馏水洗2min。 6、入配置好的六胺银工作液中，60℃水浴染色大约25-30min，切片呈烟草黄色或黑色为止。 7、入蒸馏水中清洗。 8、用氯化金溶液调色1-2min。 9、蒸馏水洗2min。 10、置于海波溶液1min。 11、自来水洗。 12、用淡绿溶液复染1min。 13、自来水洗。 14、95%乙醇开始脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 肾小球囊基底膜、肾毛细血管球基底膜——黑色 背景——绿色 注意事项： 1、试验用玻璃器皿，应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净、烤干。 2、六胺银工作液配置后可放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放入切片进行染色。
肾活检病理组织染色
一、常规染色技术（HE 染色） 苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。 （一）需要试剂 ①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。 （二）具体染色步骤 1.切片常规脱蜡入水。 2.苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 4.氨水返蓝数秒。 5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。 6.1% 伊红染数秒，水洗。 7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。（三）注意事项 1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。 2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。 3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 二、特殊染色技术 （一）过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色） PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。 1.需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。 2.具体染色步骤 （1）切片常规脱蜡入水。 （2）入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗。 （3）入schiff 氏液染10 ～30 min，水洗。 （4）苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 （5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 （6）氨水返蓝数秒。 （7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。 （8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。 3.染色结果PAS 阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。 4.注意事项 （1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
染色剂配制
常用染色液的配制 1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。 B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。 制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。 2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液 碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。 3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL 4．沙黄（番红）染色液 2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。 此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。 5．0.1％美兰染色液 0.1g溶解于100mL蒸馏水中。 6．吕氏碱性美蓝色染色液 A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。 B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。 7．瑞氏染色液 瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。 8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用） 孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。 9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）
黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。 10．硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。 B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。 将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液 A：20％单宁（鞣酸）2.0mL；B：饱和钾明矾液(20%) 2.0mL；C：5％石炭酸2.0mL；D：碱性复红酒精（95％）饱和液1.5mL。 将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。 12．石炭酸复红染色液 A液:碱性复红0.3g，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。 先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。 13．乳酸石炭酸棉蓝染色液 石炭酸（苯酚）10g，乳酸（比重1.21）10mL，甘油20mL，棉蓝（苯胺蓝）0.21g，蒸馏水10mL。 将石炭酸加入蒸馏水中，加热溶解，再加入乳酸和甘油，最后加棉蓝。 附录Ⅴ：常用缓冲液的配制 1．pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）（20℃pH值7.0~7.1） 甲液：KH2PO4 34.0g，蒸馏水1000mL；乙液：K2HPO4 43.6g，蒸馏水1000mL。 甲液二份和乙液三份混合即可。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则
1.2. Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表B 1.2 Mssson三色法 图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌
1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图表D 4.Weigert间苯二酚法
二、胶原纤维染色法 2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他
3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维 红色：胞核（核固红复染） 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 3.2 Gomori氏银氨液配制法 图表G Gomori氏银氨液配制法
基底膜六胺银染色液
基底膜六胺银染色液 简介： 基底膜六胺银(methenamine silver)染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过碘酸氧化，使基底膜内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。六胺银染色能清晰地显示基底膜，在肾病变中应用最多，常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、切片脱蜡至水洗。 2、切片入过碘酸溶液氧化。 3、自来水洗、蒸馏水洗。 4、入铁明矾溶液染色。 5、自来水洗、蒸馏水洗。 6、入配制好的六胺银工作液中，水浴染色大，切片呈烟草黄色或黑色为止。 7、入蒸馏水中清洗。 8、用氯化金溶液调色。 9、蒸馏水洗。 10、置于海波溶液。 11、自来水洗。 12、用淡绿溶液复染。 13、自来水洗。 编号 名称 DZ0050 6×50ml Storage 试剂(A): 过碘酸溶液 50ml 4℃ 避光 试剂(B): 铁明矾溶液 50ml RT 试剂(C):六胺银工作液 C1:六胺银原液 25ml 4℃ 避光 C2:硼酸钠溶液 25ml RT 临用前，C1、C2等量混合即为六胺银工作液，即配即用。 试剂(D): 氯化金溶液 50ml 4℃ 避光 试剂(F): 淡绿溶液 50ml RT 使用说明书 1份
14、95%乙醇开始脱水，二甲苯透明，中性树胶封封固。 染色结果： 肾小球囊基底膜、肾毛细血管球基底膜黑色 背景绿色 注意事项： 1、实验中所用玻璃器皿，应预先放入洗液浸泡过并冲洗干净，烤干。 2、六胺银工作液配制后可放人温箱中预热。 3、配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。 4、氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
真菌 染色
、概 述 真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件．近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。 真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。 二、常见真菌的形态特征 真菌的大小差异悬殊，大者如碗口，不属微生物范畴，例如灵芝；小者肉眼看不到，只能用显微镜观察。真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单
细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。 三、真菌的基本结构 真菌由菌丝和孢子构成。孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。 四.真菌的染色方法 真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法（GMS）用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。这两种方法可显示大多数真菌，是最广泛最常用的染色方法。 近年来，有报道用网状纤维的染色方法（G-S）来显示真菌，特别是曲球菌的染色显示效果较佳。现对常见的几种真菌作以下三种染色方法进行探讨。 （一）六胺银染色方法(GMS) 1.操作方法： ⑴切片脱蜡至水。 ⑵8%铬酸水溶液氧化20分钟，自来水稍洗。
尿酸盐染色液(Gomori六胺银法)
尿酸盐染色液(Gomori六胺银法) 货号：G3030 规格：4×50ml 保存：4℃避光，3个月。 产品组成： 名称4×50ml Storage 试剂(A):Gomori六胺银溶液A1:Gomori六胺银A25ml4℃避光A2:Gomori六胺银B25ml RT 临用前，按A1:A2=1:1的比例配制试剂(A)，不宜提前配制。 试剂(B):氯化金溶液50ml4℃避光 试剂(C):海波溶液50ml RT 试剂(D):伊红染色液50ml RT避光 试剂(E):Gomori对照液10ml RT 产品简介： 人体内嘌呤(核苷酸)代谢的分解产物是尿酸盐。大多数尿酸并非全部经由肾脏排除，有时以尿酸钠的形式存在于血液循环中。在痛风患者血液中尿酸钠含量较高，过高的尿酸钠易出现尿酸盐沉积，从而导致痛风石、滑膜炎、关节炎、肾结石等。大多数尿酸盐镜下可见针状结晶体互相平行排列。 采用Gomori六胺银法对尿酸盐染色，使尿酸盐结晶呈黑色，常用于辅助诊断尿酸盐所致的痛风结节。由于尿酸盐易溶于水，而不易溶于乙醇，故固定时，应采用乙醇而不是福尔马林等固定液。 操作步骤(仅供参考)： 1.组织固定：固定于无水乙醇16h或过夜。再经无水乙醇浸泡3次，每次30min。 2.经二甲苯浸泡2次，每次20min，常规浸蜡包埋。 3.切片厚度5μm，二甲苯脱蜡至无水乙醇。 4.提前配制好Gomori六胺银溶液，并提前预热至58～60℃。切片浸入预热的Gomori六胺银溶液(加盖)， 并置于58～60℃恒温箱孵育30min。如有尿酸盐存在，切片呈黑色。 5.蒸馏水稍洗。 第1页，共2页
6.浸入氯化金溶液处理1min。 7.自来水稍洗。 8.入海波溶液处理5min。 9.自来水冲洗5min。 10.伊红染色液淡染30s。 11.自来水稍洗。 12.常规脱水透明，中性树胶封固。 染色结果： 尿酸盐结晶黑色 背景淡红色 阴性对照： 取连续切片脱蜡后，先经Gomori对照孵育5min，用无水乙醇浸洗2次，入Gomori六胺银溶液。其余步骤同前，钙盐呈阴性。 注意事项： 1、尿酸盐易溶于水，组织固定必须用无水乙醇，切片入Gomori六胺银溶液前避免切片与水接触。 2、如果用水浴锅代替恒温箱，温度应适当调节至48～50℃，否则切片易变黑。 3、组织内如果含有钙盐，易出现假阳性，应注意与针状的尿酸盐区分。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 第2页，共2页
GMS-六胺银-真菌
GMS –六胺银- GROCOTT'S改良法 目的：鉴别真菌。 原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。 对照：含有真菌的组织。由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。 固定：10%甲醛 技术：4-5m石蜡切片。 设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。 试剂： 2% 铬酸： 三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm 蒸馏水Distilled water 500.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。 1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite: 偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm 蒸馏水Distilled water 500.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 5% 硼砂： 四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，保存期6个月。 六胺银备用液： 3% 六亚甲基四胺Methenamine (四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml 5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml 混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。 警告：腐蚀性，可能致癌。 工作液： 六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml 蒸馏水Distilled water 25.0 ml 5% 硼砂Borax 2.5 ml 使用前新鲜配制，用后丢弃。 0.5%氯化金： 氯化金Gold chloride 0.5 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。 警告：避免接触和吸入。 0.2%亮绿： 亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml
肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良
号为鲜红色。本组实验对两种不同显色方法进行对比，结果示DAB显色操作比较简单，室温下即可显色，显色时间较快；显色后切片可用二甲苯透明，切片较干净，组织透明度较好；透明后用中性树胶封固，可较长时间保留切片，一般不会掉色；AEC显色颜色比较鲜艳，背景比较淡，敏感性和表达部位显色效果较好。相比之下，DAB显示的颜色比较暗，背景颜色比较重，敏感性和表达的部位不如AEC显色效果好；DAB有致癌性，使用时务必有防毒意识和防毒措施。而AEC显色需在37?烤箱中进行，不利于对显色结果进行判断；显色后不能用二甲苯进行透明处理，影响切片的透明度和清晰度；使用水溶性封片剂或甘油等封片不利于切片的长期保存，需及时观察、采集图像并进行统计学分析。两种显色剂和显色方法各有优缺点。 文献［1］报道DAB和AEC两种显色剂易受以下因素影响，如组织固定（固定液的温度、pH值和不同组织）、制片过程（浸蜡温度、包埋温度、烤片温度）、IHC染色过程（如抗原修复的方法、时间、温度、pH值，封闭内源性过氧化物酶的方法、步骤等）和ISH染色过程（如酶蛋白消化的时间、探针的敏感度）等，这些因素对染色结果影响很大。Graham等［2］研究发现使用氧化物酶组织化学的显色剂，可以使显色时间持续更久。 上述两种显色方法对IHC和ISH显色结果进行有效区别，若实验中仅采用其中一种方法时，DAB显色是首选，如果同时选用两种技术进行科学研究时，建议一种技术选用DAB显色，另一种技术选用AEC显色，因为DAB显色结果为棕黄色，EAC显色结果为红色，两种不同的显色颜色有利于操作人员进行视觉鉴别，避免混淆。在今后的工作中，我们建议实验操作人员要从习惯采用DAB显色逐步实践或过度到采用AEC显色，将更有利于环保和健康。 参考文献： ［1］熊正文，李春光，丁华野，等．影响免疫组化敏感性反应的因素分析及对策［J］．中国组织化学与细胞化学杂志，1999，8（2）： 236－9． ［2］Graham R C，Jr Karnowsky M J．The early stage of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney：ultrastructural cytochemistry by a new technique［J］．J Histochem Cytochem，1966，14（4）：291－ 302． 肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良 吕增华，张杨杨，朱玉红 关键词：肾穿刺活检；六胺银染色套染Masson染色法 中图分类号：R446文献标志码：B 文章编号：1001－7399（2012）11－1289－02 肾穿刺活检是目前诊断肾小球肾炎最可靠的手段，在肾脏穿刺活检病理诊断中，六胺银染色套染Masson染色［1］能精确显示病变肾小球内各种免疫复合物的形态与定位，对诊断肾小球疾病起着至关重要的作用。然而，此方法仍然存在制片时间长、染色效果不稳定等缺点，远不能满足临床需要。为此，本组实验对临床送检的120例肾脏穿刺标本，以传统的六胺银染色套染Masson染色方法为基础，在切片染色时间、方法和质量上进行了改进，现介绍如下。 1材料与方法 收稿日期：2012－07－12 作者单位：滨州医学院附属医院病理科，山东滨州256603 作者简介：吕增华，女，副主任技师。Tel：（0543）3256654，E-mail：bzlzh2010@163．com 张杨杨，女，技师，通讯作者。E-mail：zyy19871102@163． com 1．1组织来源及处理选取临床肾脏穿刺活检标本120例。所有组织均用PB-FA液（40%甲醛10ml、无水乙醇70 ml、0．01mol/L、pH7.2PBS溶液20ml）固定。脱水、透明、浸蜡、包埋（浸蜡和包埋用蜡系熔点60?，溶解过滤后使用）。整个过程在3h内完成。包埋时务必将组织拉平，所有组织须在同一个包埋面上，切片厚1μm，64?烤箱烤片30 40min。 1．2储存液的配制按照说明书将国药公司生产的粉装试剂配制成储存液，步骤如下：（1）3%六次甲基四胺（乌洛托品）水溶液；（2）5%硝酸银水溶液棕色瓶装；（3）0.2%氯化金水溶液，前3种储备液4?冰箱保存备用；（4）5%硼砂水溶液；（5）0.25%硫代硫酸钠水溶液，（4）和（5）室温保存备用；（6）Masson复合染液（酸性复红1g，丽春红2g，橙黄G2 g，0.25%醋酸300ml）；（7）0.1%固绿水溶液，（6）和（7）室温避光保存备用。 1．3染色步骤（1）切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；（2）擦干组织周围蒸馏水，滴加3%过碘酸水溶液20min，蒸馏水洗3次；（3）滴加预温的六胺银工作液，水浴60 65?染色20min左右（大号培养皿去盖先放入水浴锅预热，将组织切片放入培养皿，并滴加预温的六胺银工作液，在切片上加一塑料盖），镜下示肾小球基膜呈明显黑色，蒸馏水洗3次； · 9821 · 临床与实验病理学杂志J Clin Exp Pathol2012Nov；28（11）