天然药化讲义

一、实验目的：

1. 以芦丁为实例，学习黄铜类成分的提取分离方法

2. 掌握黄铜类成分的主要性质及黄铜苷的鉴定方法

3. 学习掌握纸层析法的应用

二、实验原理：

1.芦丁（芸香苷）为浅黄色粉末，或极细的针状结晶，含三个结晶水，难溶于乙酸乙酯、丙酮、不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂，易溶于碱溶液中呈黄色，酸化后又析出。故可用碱溶酸沉法提取分离。

2.槲皮素即芸香苷苷元，为黄色结晶。能溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇。可溶于冰醋酸、吡啶、乙酸乙酯、丙酮、甲醇，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿和水中。

3.盐酸-镁粉（锌粉）反应为鉴定黄酮类化合物最常用方法，属于颜色反应，大多数黄酮类化合物显橙色～蓝色，当?环上有OH或OCH3时，呈现颜色随之加深，其机制是因为生成阳碳离子的缘故

三、实验药材：槐米

四、实验器材与药品：

器材：500ml烧杯、1000ml抽滤瓶、布氏漏斗、喷瓶、药匙、尖头滴管、毛细管，定性滤纸、白瓷板、电吹风、培养皿、铅笔和直尺

药品：石灰乳（CaO）、浓盐酸、50%乙醇、镁粉、浓硫酸、蒸馏水、a-萘酚、正丁醇、醋酸、草酸、苯胺和2%葡萄糖、鼠李糖水溶液

五、实验方法和操作步骤：

1、芦丁的提取

槐米粗粉（20g）

置500ml烧杯中，加水300ml,在搅拌下加入石灰乳（CaO）（约0.5g）

调至pH6-9，加热至微沸10-15min，保持pH8-9，倾出上清液，过滤，滤渣

在加水200ml，重复提取一次，过滤，合并滤液

滤渣滤液（稍冷）

边搅拌边加入浓盐酸调pH4-5左右，放置过夜

抽滤，上清液倒掉

滤液

400-800ml蒸馏水中，加热（煮沸）使溶液

不溶物滤液

放置过夜，抽滤，水洗70-80℃干燥

精制芦丁（称重）

2、芦丁的测定

⑴盐酸镁粉反应

取自制芦丁少许，加50%乙醇2ml，加热使溶解，再加镁粉少量之后，

滴加浓盐酸，观察现象。

⑵盐酸锌粉反应

取自制芦丁少许，加50%乙醇2ml，加热使溶解，再加锌粉少量之后，

滴加浓盐酸，观察现象。

此反应对3-羟基黄酮（如槲皮素）不呈色，3-羟基与糖结合苷仍显色，依此可区别芦丁与槲皮素。

⑶浓硫酸反应

取自制芦丁少许，置于白色穴磁板上，滴加浓硫酸观察现象。待溶解后再加较多量水稀释后，再观察现象。

⑷Molish反应

取混合单糖的点样液，加乙醇1ml，再加等量体积a-萘酚试剂，沿管壁滴加浓硫酸（约20滴），观察两液间的变化。

3、芦丁的水解，槲皮素的检识

⑴取自制芦丁1克加入15ml冷水中，滴加浓硫酸20滴，之后加沸水85ml置于500ml圆底烧瓶中，加热微沸50～60min，开始加热约10分钟呈澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶，充分结晶后，在冷水上冲洗烧瓶，放冷后抽滤，用少量水洗三次，将所得槲皮素结晶放烘箱中，干燥。

⑵糖的检出—纸层析法（径向）

取上述除去槲皮素的水解滤液20ml，用Ba(OH)2细粉的饱和水溶液中和至pH7可以用滑石粉助滤，滤出生成的硫酸钡，滤液用蒸发皿浓缩至约1毫升，供纸层析点样。

六、实验结果：

1、盐酸镁粉反应：深红色

2、盐酸锌粉反应：粉红色

3、浓硫酸反应：加硫酸后显桔黄色，加水稀释，颜色变浅

4、Molish反应：棕红色环

七、分析与讨论：

1．提取芦丁时加CaO的目的？

2．苷键裂解的催化方法有哪些？

八、结论：

碱溶酸沉法提取芦丁，方法简单而经典，现象明显。芦丁水解制备槲皮素，利用的是酸催化水解，并对多糖液进行纸层析，结果较好。

九、注意事项：

1. 开始时温度可以适当的调高一下，这样易于以最短的时间达到微沸，但是一旦开始沸腾就要调低温度使浸有药材饮片的溶液保持微沸10-15min。

2.这里的压碎使指将药渣倒入研钵中用研锤压碎，而不能研磨，因为太细的话难于抽滤。

3．调PH时，直接将cao 粉末加入到已经加适量水的药渣中，调节是一定要遵

一、实验目的：

1.掌握季铵生物碱的一种提取分离方法及柱层析的应用

2.掌握生物碱的检识方法

3.熟练TLC的应用

二、实验原理：

1.小檗碱系季铵生物碱，其游离碱为黄色针状结晶，具有5.5结

晶水。Mp.145℃，在100℃干燥失去结晶水转为棕黄色。能缓缓

溶于冷水中（1：20，微溶于冷乙醇（1：100）易溶于热水和热

乙醇，微溶于丙酮、氯仿和苯，几乎不溶于石油醚。小檗碱与酸

结合成盐时失去一分子水，其硝酸盐和氯碘酸盐难溶于水，盐酸

盐微溶于冷水（1：500），较易溶于沸水，其硫酸盐、枸橼酸盐

在水中溶解度较大。小檗碱的盐类在水中的溶解度如下：

盐酸小檗碱1：500 硫酸小檗碱1：30

磷酸小檗碱1：15 枸橼酸小檗碱1：125

2.故利用小檗碱的盐酸盐微溶于冷水，较易溶于沸水的性质，采

用盐酸来提取分离小檗碱，用Al2O3 层析柱精制盐酸小檗碱。

3.用生物碱沉淀反应和TLC法来鉴定所得盐酸小檗碱。

三、实验药材：黄柏

四、实验器材与药品：

仪器：1000ml烧杯、脱脂棉、50×2.8cm的层析柱（带有活塞）、玻璃漏斗、量杯、试管、药匙、层析缸、尖头滴管、薄层板（硅胶G）、毛细管、铅

笔、直尺

试剂：浓硫酸、浓盐酸、氯化钠、氧化钙、无水乙醇、氧化铝、95%乙醇

碘化铋钾、磷钨酸，硅钨酸、氯仿、甲醇、氨水

五、实验方法和操作步骤：

1.工艺流程

黄柏粗粉（100g

）

加CaO调pH12以上，充分搅拌后静置。待

沉淀完全后将上清液过滤。（棉花）

液

加NaCL10--15%搅拌至溶后加浓HCL

调pH2-3（静态）静置过夜、后滤

称出粗品0.4g溶于15ml无水乙醇。

上AL2O3柱（60*2.8）

加0.5%H2SO4约800ml浸渍过夜，过滤（双层纱布）

2.工艺说明

氧化铝层析柱是最常见的层析方法，适用于亲脂性成分，广泛应用于生物碱、甾体化合物、强心苷、挥发油、内酯化合物等中草药成分的分离，它具有廉价、分离效果好、再生容易、活性易控制等优点。

①氧化铝吸附柱的制备：

取一根规格50×2.8（cm）的层析柱（配有活塞），层析管的下端铺一层松紧适宜、表面平整的脱脂棉，然后将此层析管垂直地固定于支架，管内加入一定体积95%乙醇，打开活塞，放出管内的乙醇，将脱脂棉和其下端内的空气充分赶尽，管内脱脂棉以上部分留下一定体积95%乙醇。

取中性层析氧化铝（100-200目）80g与100ml95%乙醇拌和，充分搅拌赶尽氧化铝中的气泡，打开活塞，将氧化铝缓缓沿玻璃棒不断加入层析管内，使氧化铝不断沉降，使柱完全沉降后表面平整，将氧化铝柱上溶剂放入接收瓶中，氧化铝表面上部留有少量溶剂，以避免空气进入进入氧化铝柱，然后在氧化铝柱上加一大小合适的圆形滤纸，将柱内氧化铝上部盖住后备用。在操作中应注意氧化铝加入速度不宜太快，否则将带入空气而破坏层析柱，在加入氧化铝过程中在层析柱管外轻轻予以振动，使氧化铝均匀下沉，并使其表面平整，有助于氧化铝带带出气泡的外溢。

②样品的加入：称取0.4g盐酸小檗碱粗晶加无水乙醇15ml，微热溶解（乙醇用量尽量小），放冷后过滤，将滤液沿玻璃棒轻轻倾于柱顶，勿使氧化铝柱面受到扰乱并避免样品溶液附着于层析柱管上端的壁上，打开活塞，令样品液刚好被吸附于柱顶，呈原始谱带。

③洗脱：柱内加入一定体积（约90ml）无水乙醇洗脱，氧化铝柱上依次呈现

出鲜黄色，桔黄色及棕色段，逐渐洗脱时彼此分离，无水乙醇洗脱出鲜黄色段为盐酸小檗碱（桔黄色及棕色段为其它成分，不再洗脱），洗脱过程中注意洗脱用溶剂的液面必须始终超过柱顶。否则空气泡进入而破坏层析柱。

④酸浸出液中含有树胶、甾醇类等杂质，呈粘稠状，此步较难过滤。在向粘稠状的滤液中加入CaO时，需将CaO预先调成稀糊，少量分次加入，同时充分搅拌，以防CaO粘集成团。

3、生物碱的检识

A.生物碱沉淀反应：取盐酸小檗碱粗晶品数mg，加适量蒸馏水加热溶解后，分置4个试管中，分别滴加下列各试剂2-3滴观察记录有无沉淀产生及颜色变化。

①碘化铋钾（Dragendorff试剂）

②磷钨酸（Wagner试剂）

B.盐酸小檗碱的薄层鉴定

①样品：柱层析分离出的鲜红色醇溶液

②对照品：盐酸小檗碱醇液

③吸附剂：硅胶G，湿法铺板，晾干后在105℃活化干燥30min-60min

④展开剂：氯仿：甲醇：氨水（14：4：0.7）

⑤显色：自然光下观察

⑥记录：绘出薄层层析图，计算Rf值

六、实验结果：

生物碱的沉淀反应：

碘化铋钾试剂：黄色沉淀

磷钨酸试剂：白色沉淀

七、分析与讨论：

氧化铝和硅胶均为极性吸附剂，有什么特点？

八、结论：

本次实验采用的是运用硫酸小檗碱的溶解度大，而盐酸小檗碱的溶解度小来制得盐酸小檗碱，并采用柱层析法纯化盐酸小檗，实验现象明显，结果理想。

九、注意事项：

1、每次调节pH值要充分搅拌

2、酸浸出液中含有树胶、甾醇类等杂质，呈粘稠状，此步较难过滤。在向粘稠状的滤液中加入CaO时，需将CaO预先调成稀糊，少量分次加入，同时充分搅拌，以防CaO粘集成团

3、装柱过程中氧化铝加入速度不宜过快，否则将带入空气破坏柱，乙醇用量要尽量少

一、实验目的：

1. 掌握水蒸气蒸馏法提取挥发油的方法。

2. 掌握挥发油的鉴定方法。

二、实验原理：

挥发油与水不相混溶，当受热后，二者的蒸气压和大气压相等时，溶液即开始沸腾，继续加热则挥发油可随水蒸气蒸馏出来。因此天然药物中挥发油成份可用蒸馏法提取。

挥发油所含成份比较复杂，构成挥发油的成份类型大体有萜类化合物、芳香族化合物、脂肪族化合物、其他类化合物。挥发油在常温下可自行挥发而不留任何痕迹，这是挥发油与脂肪油的本质区别。

三、实验药材：八角茴香

四、实验器材与药品：

仪器：电热套、500mL圆底烧瓶、挥发油测定器、冷凝管、展开缸

试剂：乙酸乙酯、石油醚、磷钼酸乙醇试剂、茴香醚标准品

五、实验方法和操作步骤：

1. 提取挥发油

称取八角茴香20g（精确至1％），捣碎，装入500ml烧瓶中加水250ml摇匀，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约3小时,至测定器中油量不再增加，停止加热,放置片刻,开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置15～20min以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算八角茴香中挥发油的含量（%）。

2. 定性分析

⑴CMC-Na硅胶板TLC鉴定

样品：提取所得挥发油

对照品：茴香醚的乙酸乙酯溶液（0.2→1ml）

展开剂：石油醚－乙酸乙酯（10：1）（展距：5 cm）

显色剂：磷钼酸乙醇溶液

⑵取挥发油两滴。加Liebermann试剂（醋酐－浓硫酸：20：1）1mL ，观察现

象。

⑶取滤纸一张，加挥发油一滴，观察挥发现象。

六、实验结果：

挥发油含量≥4％，挥发油在常温下可自行挥发而不留任何痕迹

七、分析与讨论：

1. 挥发油的提取方法油那些？

2、药典规定，本品含油须≥4％，请问本品是否合格？

八、结论：

本次试验比较简单，实验效果比较好

九、注意事项：

1、把八角茴香瓣成小块压开即可，不要压的太碎。

2、冷凝管连接前要事先试漏。

3、在水蒸气蒸馏开始之前，往挥发油测定器中加水至Z型管中水回流至烧瓶

为至，这样既可防止蒸馏提取挥发油过程中烧瓶中水量的减少；并防止挥发油被Z型管回流至烧瓶中。

4、这时不要让水温过高，因为这样会使挥发油在测定管中大量乳化，导致挥发

油分段，影响提取、读数；但也要保证冷凝管有液滴滴下；这样才能保证测定器可以收集到挥发油。

5、有的测定器不太标准，挥发油滴下后就直接在测定器可读刻度范围内，这时

可采取挥发油液柱上下液面刻度相减的方法得到挥发油的量；分取油层时要缓慢，要保证水油的彻底分离这样有利于下一步的鉴定。

6、由于挥发油的挥发性，故TLC展开的时间要尽量短，展距5cm即可满足鉴

别的需要。