安捷伦1100使用步骤

Agilent 1100型高效液相色谱仪操作规程

1. 开机

1.1开机前准备：流动相使用前必须过0.45μm的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶[棕色瓶]：为水相；B瓶：为有机相。超声去除瓶内液体中气泡。

1.2打开电脑，进入Windows XP界面。

1.3从上到下打开液相各部件电源开关。

1.4在打开液相主机电源5分钟内双击桌面“联机”图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：

——最上方为命令栏，依次为“文件、运行控制、仪器……”等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；

——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；

——中下部为动态监测信号；

——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

1.5从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。

2. 编辑参数及方法

2.1开始编辑完整方法：

从“方法”菜单中选择DEF-LC.M，再从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2.2方法信息：

在“方法注释”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。

2.3泵参数设定：

进入“泵参数”画面，在“流量”处输入流量，如1.0mL/min；在“溶剂B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在“插入”一行“时间表”，编辑梯度；输入保留时间；在“最大压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。

2.4 DAD检测器参数设定：

进入“DAD信号”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；

选择“停止时间”输入相应的停止分析时间；

在“光谱范围”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；“范围”：可选范围为190~950nm；

“步长”可选2.0nm；阀值：选择需要的灯；

“峰宽”（响应时间）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s；

Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm

单击OK，进入下一画面。

2.5进入“Signal Details”画面，单击OK，进入下一画面。

2.6进入“编辑积分事件”画面，单击OK，进入下一画面。

2.7进入“积分参数”画面，单击OK，进入下一画面。

2.8进入“Instrument curves”画面，单击OK，进入下一画面。

2.9进入“运行时间表”画面，选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”，单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。

2.10单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入文件名，单击OK。（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）

注：如果调用一个方法，则在“方法”菜单，选中“调用方法”，选方法名，单击OK。

2.11从菜单“视图”中选择“在线信号”，选中Window 1，然后单击“改变”钮，将所要绘图的信号双击即可移到右边的框中，点OK。（如同时检测二个信号，则重复该步骤。）

3. 运行样品

3.1单击泵图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。单击OK。

3.2手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。

3.3单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“泵参数”选项，进入泵编辑画面。设流量：5.0ml/min，“溶液A：100%”，单击OK。3.4开泵：直接点泵图标下面的泵开关小图标，或单击图标，出现参

数设定菜单，单击“泵控制”选项，选中“on”，单击OK。

3.5系统开始排液，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液（双击泵图标，设置“溶液B：100%”，确定），直到所有通道无气泡为止。（每个管线内液体约20ml，在2.0ml/min 的流速下，均需10min左右才能排完）

3.6单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“泵设置”选项，进入泵编辑画面。把“流量”改为0.5~1.0ml/min，单击OK。

3.7等待流速降下来后，关闭排液阀。

3.8待压力稳定后，从“仪器”菜单中选择“系统启动”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线，并可选择观察信号。

注：仪器运行过程，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，表明可以进行分析。（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“off”，再单击“Y es”，关闭输液泵和检测器氘灯）。

3.9单击最大化按钮，将online Plot窗口放大。待基线平稳后，点信号窗口的“平衡”，调至零点。

3.10等仪器Ready，从“运行控制”菜单中选择F5或“运行方法”。

3.11编辑样品信息：

从“运行控制”菜单中选择“Sample into”选项，选择“样品信息”，即打开了样品信息页面，输入操作者、数据存贮通道、样品名、进样瓶号、浓缩因子、稀释因子，“数据文件”中选择

“前缀”，在“前缀”框中输入批号或日期等，在“计数器”框中输

入计算器的起始位，仪器会自动命名。（“样品量”、“内标量”可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白，检查干扰峰的来源。）单击OK。

3.12进样分析：吸取一定量可直接进样的样品溶液，将进样阀逆时针旋转至“Load”档，将进样针从进样孔中水平插入，按进样器活塞将样品注入进样环后，立即将进样阀顺时针旋至“Inject”位置，与此同时，数据开始自动收集。进样过程要求“快、准、轻”。

3.13进样分析结束，点Close键退出样品分析。

（注意：检测完尽量要关DAD的灯，以保持灯的寿命。单击DAD 图标，出现参数设定菜单，单击control，选择关灯。）

4. 数据分析方法编辑（一般应在“脱机”状态下操作，在“联机”状态下系统过于繁忙容易死机。）

4.1从“视图”菜单中选“数据分析”进入数据分析画面。该页面最上方为命令栏，依次为“文件、Graphics，积分……”等。命令栏下为快捷操作图标，如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。4.2从“文件”菜单中选“Load signal”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“OK”，画面中即出现所调用的色谱图。

4.3做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。从“系列”Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间，单击OK，或选择“Use Ranges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。

4.4

积分

4.4.1

先调用所要分析的色谱图，从“积分”中选择“自动积分”，从“积分”中选择“积分结果”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。如积分结果不理想，再从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，如斜率、峰宽、最小峰面积、最低峰高等。

4.4.2

从“积分”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。

4.4.3

若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

4.4.4

完成后，单击左边的“ˇ”图标，将积分参数存入方法。

4.5打印报告：

4.5.1

从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”（右下角带叉的报告画面）图标，进入打印画面。

4.5.2

根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”（面积百分比），其它项不变。（如“Destination”

项下选择“Screen”；“Based On”选“Area”；“Sorted

By”选“Signal”；“Repirt Style”选“Short”；选择“Add chromatogram Output（打印色谱图）”；选择“With Calibrated Peaks”；选择“Portrait”；可根据需要选择“Size”）。

4.5.3

单击OK。

4.5.4

选择快捷操作的“报告预览”图标，可预览报告的全貌。从“Report”菜单中，选择“Print Report”，则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，则单击“Print”，即可进行报告的打印。最后，单击“close”退出此操作页面。

4.6定量分析

如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。

4.6.1一级校正表的建立：

在“Data Analysis”界面下，调用最低浓度的色谱图，在“栏“Calibration”下，选择“Ｎew Calibration Table”，选择“Automatic Setup Level”，并设校正级数为“1”，单击“ＯＫ”。在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内标峰进行标记。单击ＯＫ，工作站提示是否删除0浓度行，单击Y es。

4.6.2

二级校正表的建立：

调用第二个色谱图，在命令栏“Calibration”下，选择“Add Level”，设为“2”，单击“ＯＫ”，在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。（如需对校正表中的某些数据进行重新修正，可调用新的图谱，在命令栏“Calibration”下，选择“Recalibration”，并在校正表中输入校正级数，样品浓度。）此时，校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线，并进行线性回归。单击校正表中的“Print”，可进行打印。

5. 关机

5.1关机前，用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统（打开排液阀，调流速为5ml/min，冲洗约5 min，然后调流速为1ml/min，待流速降下来后，关闭排液阀，再冲洗冲洗约20 min）；然后用甲醇同法清洗20min，然后关泵。

注意：此方法适用于反相色谱柱，而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。

5.2清洗进样器：

将进样器扳至Load的位置，用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。

当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时扳动进样阀数次，每次数毫升。

5.3退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down）。

5.4关掉Agilent 1100电源开关。

6. 清理台面，按有关规定填写仪器作用记录。

1. 开机

1.1开机前准备：流动相使用前必须过0.45μm的滤膜（有机相的流

动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶[棕色瓶]：为水相；B瓶：为有机相。超声去除瓶内液体中气泡。

1.2打开电脑，进入Windows XP界面。

1.3从上到下打开液相各部件电源开关。

1.4在打开液相主机电源5分钟内双击桌面“联机”图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：

——最上方为命令栏，依次为“文件、运行控制、仪器……”等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；

——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；

——中下部为动态监测信号；

——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

1.5从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。

2. 编辑参数及方法

2.1开始编辑完整方法：

从“方法”菜单中选择DEF-LC.M，再从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击“确认”，进入下一画面。

2.2方法信息：

在“方法注释”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击“确认”，进入下一画面。

2.3泵参数设定：

进入“泵参数”画面，在“流量”处输入流量，如1.0mL/min；在“溶剂B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在“插入”一行“时间表”，编辑梯度；输入保留时间；在“最大压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击“确认”，进入下一画面。

2.4 VWD检测器参数设定：

进入“VWD信号”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择“停止时间”输入相应的停止分析时间。

2.5进入“信号细节”画面，单击“确认”，进入下一画面。

2.6进入“编辑积分事件”画面，单击“确认”，进入下一画面。2.7进入“积分参数”画面，单击“确认”，进入下一画面。

2.8进入“运行时间表”画面，选择“数据采集”和“标准数据分析”单击“确认”，完成参数设定，回到工作站画面。

2.9单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入文件名，单击“确认”。（路径：d\HPCHEM\1\methods\***）

2.10打开柱温箱电源，设置好柱温参数，预热30分钟。

3. 运行样品

3.1单击泵图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。单击“确认”。

3.2手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。

3.3单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“泵参数”选项，进入泵编辑画面。设流量：5.0ml/min，“溶液A：100%”，单击“确认”。

3.4开泵：直接点泵图标下面的泵开关小图标，或单击图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制”选项，选中“on”，单击“确认”。3.5系统开始排液，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液（双击泵图标，设置“溶液B：100%”，确定），直到所有通道无气泡为止。（每个管线内液体约20ml，在5.0ml/min 的流速下，均需6min左右才能排完）

3.6单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“泵设置”选项，进入泵编辑画面。把“流量”改为0.5~1.0ml/min，单击“确认”。

3.7等待流速降下来后，关闭排液阀。

3.8待压力稳定后，从“仪器”菜单中选择“系统启动”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线，并可选择观察信号。

3.9单击最大化按钮，将“联机”窗口放大。待基线平稳后，点信号窗口的“平衡”，调至零点。

3.10等仪器Ready，从“运行控制”菜单中选择F5或“运行方法”。

3.11编辑样品信息：

从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，选择“样品信息”，即打开了样品信息页面，输入操作者、数据存贮通道、样品名、进样瓶号、浓缩因子、稀释因子，“数据文件”中选择

“前缀”，在“前缀”框中输入批号或日期等，在“计数器”框中输

入计算器的起始位，仪器会自动命名，单击“确认”。

3.12进样分析：吸取一定量可直接进样的样品溶液，将进样阀逆时针旋转至“Load”档，将进样针从进样孔中水平插入，按进样器活塞将样品注入进样环后，立即将进样阀顺时针旋至“Inject”位置，与此同时，数据开始自动收集。

3.13估计色谱峰已经跑完，按F8停止数据采集，也可在方法编辑时设定数据采集时间。

4. 数据分析方法编辑

4.1从“视图”菜单中选“数据分析”进入数据分析画面。

4.2从“文件”菜单中选“调取数据”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“确认”，画面中即出现所调用的色谱图。

4.3做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。从“系列”Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间，单击OK，或选择“Use Ranges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。

4.4积分

4.4.1

先调用所要分析的色谱图，从“积分”中选择“自动积分”，从“积分”中选择“积分结果”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。如积分结果不理想，再从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输

入修改的参数，如斜率、峰宽、最小峰面积、最低峰高等。

4.4.2

单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。

4.4.3

若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

4.4.4

完成后，单击左边的“ˇ”图标，将积分参数存入方法。

4.5打印报告：选择快捷操作的“报告预览”图标，可预览报告的全貌。从“报告”菜单中，选择“打印报告”，则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，则单击“打印”，即可进行报告的打印。最后，单击“关闭”退出此操作页面。

4.6定量分析

如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。

4.6.1一级校正表的建立：

在“数据分析”界面下，调用最低浓度的色谱图，在“校正”栏下，选择“新建校正表”，选择“自动调整水平”，并设校正级数为“1”，单击“确认”。在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内标峰进行标记。单击“确定”，工作站提示是否删除0浓度行，单击“是”

。

4.6.2

二级校正表的建立：

调用第二个色谱图，在命令栏“校正”下，选择“添加水平”，设为“2”，单击“确认”，在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。（如需对校正表中的某些数据进行重新修正，可调用新的图谱，在命令栏“校正”下，选择“重新校准”，并在校正表中输入校正级数，样品浓度。）此时，校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线，并进行线性回归。单击校正表中的“打印”，可进行打印。

5.关机

5.1关机前，用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统（打开排液阀，调流速为5ml/min，冲洗约5 min，然后调流速为1ml/min，待流速降下来后，关闭排液阀，再冲洗冲洗约20 min）；然后用甲醇同法清洗20min。【此处需谨慎，要注意自己的柱子，有些是不能100%水进去的，不过既然以缓冲溶液为流动相，这种柱子应该耐水的。】注意：此方法适用于反相色谱柱，而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。

5.2清洗进样器：

将进样器扳至Load的位置，用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。

当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时扳动进样阀数次，每次数毫升。

5.3关闭GUI图标的Off图标关闭系统，然后退出化学工作站及其它

窗口，关闭计算机。

5.4自下而上关掉Agilent 1100各模块电源开关。

6.清理台面，按有关规定在《仪器设备使用档案》上做好记录。